健脾益氣方藥對人胃癌裸鼠皮下移植瘤的調(diào)控機制探究一、引言1.1研究背景與意義1.1.1胃癌現(xiàn)狀及治療困境胃癌作為全球范圍內(nèi)嚴重威脅人類健康的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率長期居高不下。根據(jù)世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構(gòu)（IARC）發(fā)布的2020年全球癌癥數(shù)據(jù)，胃癌新發(fā)病例數(shù)達108.9萬，位居所有惡性腫瘤第5位；死亡病例數(shù)約76.9萬，位列癌癥相關(guān)死亡原因的第4位。在我國，胃癌同樣是常見的惡性腫瘤，國家癌癥中心最新數(shù)據(jù)顯示，全國胃癌的年發(fā)病人數(shù)超過35萬，死亡人數(shù)超過26萬人，發(fā)病人數(shù)和死亡人數(shù)分別位列所有惡性腫瘤的第5位和第3位。多數(shù)患者確診時已處于中晚期，錯過了最佳治療時機，預(yù)后情況不容樂觀。目前，胃癌的主要治療手段包括手術(shù)、化療、放療以及綜合治療等。手術(shù)切除是早期胃癌的重要治療方式，但術(shù)后轉(zhuǎn)移率較高，五年生存率較低。對于中晚期胃癌患者，化療和放療是常用的治療方法，但這些治療手段往往伴隨著嚴重的副作用，如化療藥物會導(dǎo)致惡心、嘔吐、脫發(fā)、骨髓抑制等不良反應(yīng)，放療則可能引發(fā)放射性胃炎、放射性腸炎等并發(fā)癥，給患者帶來極大的痛苦，嚴重影響患者的生活質(zhì)量。而且，部分患者對化療藥物存在耐藥性，使得化療效果大打折扣，無法有效延長患者的生存期。因此，現(xiàn)有治療手段在提高胃癌患者治愈率和生存率方面存在一定的局限性，迫切需要尋找新的治療方法和藥物，以改善胃癌患者的治療現(xiàn)狀。1.1.2健脾益氣方藥的抗癌潛力中醫(yī)理論源遠流長，在腫瘤治療方面有著獨特的見解和豐富的經(jīng)驗。中醫(yī)認為，胃癌的發(fā)生與正氣虛弱、臟腑功能失調(diào)密切相關(guān)，其中脾虛證在胃癌的發(fā)生發(fā)展過程中起著關(guān)鍵作用。健脾益氣法作為中醫(yī)治療腫瘤的重要法則之一，通過調(diào)節(jié)機體的脾胃功能，增強正氣，從而達到扶正祛邪的目的。健脾益氣方藥多由黃芪、白術(shù)、茯苓、黨參等中藥組成，這些中藥富含多種活性成分，具有多種藥理作用。現(xiàn)代研究表明，黃芪富含黃芪皂苷、黃芪多糖等成分，具有免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗炎等多種生物活性，能夠增強機體的免疫力，抑制腫瘤細胞的生長。白術(shù)具有健脾益氣、燥濕利水等功效，不僅可以改善脾胃功能，還能幫助癌癥病人手術(shù)后盡快恢復(fù)，并減輕放化療引起的消化功能障礙、免疫力下降等不良反應(yīng)。茯苓能夠利水滲濕、健脾寧心，對機體的免疫功能也有一定的調(diào)節(jié)作用。黨參則具有補中益氣、健脾益肺的功效，可增強機體的抵抗力。這些中藥相互配伍，協(xié)同發(fā)揮作用，使得健脾益氣方藥在調(diào)節(jié)免疫、改善機體功能方面表現(xiàn)出顯著優(yōu)勢。近年來，越來越多的研究表明健脾益氣方藥在胃癌治療中具有潛在的應(yīng)用價值。一些臨床研究發(fā)現(xiàn)，健脾益氣方藥可以改善胃癌患者的臨床癥狀，提高生活質(zhì)量，延長生存期。在基礎(chǔ)研究方面，相關(guān)實驗證實健脾益氣方藥能夠抑制胃癌細胞的增殖、誘導(dǎo)細胞凋亡、抑制腫瘤血管生成以及調(diào)節(jié)機體的免疫功能。例如，有研究發(fā)現(xiàn)健脾益氣方藥可以通過調(diào)節(jié)胃癌細胞周期相關(guān)蛋白的表達，阻滯細胞周期，從而抑制胃癌細胞的增殖；還有研究表明健脾益氣方藥能夠促進機體的抗腫瘤免疫應(yīng)答，增強免疫細胞對腫瘤細胞的殺傷能力。然而，目前關(guān)于健脾益氣方藥抗胃癌作用的具體機制尚未完全明確，仍有待進一步深入研究。因此，開展健脾益氣方藥對人胃癌裸鼠皮下移植瘤生長的影響及其機制的研究，具有重要的理論意義和實踐價值，有望為胃癌的治療提供新的思路和方法。1.2研究目的與內(nèi)容1.2.1研究目的本研究旨在深入探究健脾益氣方藥對人胃癌裸鼠皮下移植瘤生長的影響，并系統(tǒng)揭示其作用機制。通過構(gòu)建人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型，運用現(xiàn)代實驗技術(shù)和方法，從多個層面觀察健脾益氣方藥對移植瘤生長、血清相關(guān)指標以及腫瘤組織中相關(guān)基因表達的影響，為健脾益氣方藥在胃癌治療中的臨床應(yīng)用提供堅實的實驗依據(jù)和理論支持，推動中醫(yī)中藥在胃癌治療領(lǐng)域的發(fā)展，為改善胃癌患者的治療效果和預(yù)后狀況開辟新的途徑。1.2.2研究內(nèi)容構(gòu)建人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型：選取合適的人胃癌細胞株，如BGC-823、SGC-7901等，在適宜的細胞培養(yǎng)條件下進行培養(yǎng)。待細胞生長至對數(shù)生長期，將其制備成單細胞懸液，并調(diào)整細胞濃度至合適范圍。通過無菌操作，將細胞懸液接種于裸鼠皮下特定部位，如腋下或背部。密切觀察裸鼠的一般狀態(tài)和移植瘤的生長情況，定期測量移植瘤的大小，記錄腫瘤的生長曲線，直至移植瘤生長至符合實驗要求的大小，成功建立穩(wěn)定可靠的人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型。分組及藥物干預(yù)：將成功構(gòu)建移植瘤模型的裸鼠隨機分為對照組、化療組、健脾益氣方藥組以及聯(lián)合用藥組（健脾益氣方藥與化療藥聯(lián)合使用）。對照組給予生理鹽水灌胃或注射，作為空白對照；化療組給予常規(guī)的化療藥物，如5-氟尿嘧啶（5-Fu），按照既定的劑量和給藥方式進行處理，以觀察化療藥物對移植瘤生長的影響；健脾益氣方藥組給予不同劑量的健脾益氣方藥進行灌胃，探究不同劑量的健脾益氣方藥對移植瘤生長的作用差異；聯(lián)合用藥組則同時給予健脾益氣方藥和化療藥物，觀察兩者聯(lián)合使用時對移植瘤生長的協(xié)同或拮抗作用。在藥物干預(yù)過程中，密切監(jiān)測裸鼠的體重變化、攝食和攝水情況以及精神狀態(tài)等一般指標，評估藥物對裸鼠整體健康狀況的影響。觀察皮下移植瘤生長情況：定期使用游標卡尺等工具測量各組裸鼠皮下移植瘤的長徑和短徑，根據(jù)公式V=1/2×a×b2（其中V為腫瘤體積，a為長徑，b為短徑）計算腫瘤體積，并繪制腫瘤生長曲線，直觀展示不同組移植瘤的生長趨勢。在實驗結(jié)束時，處死裸鼠，完整取出移植瘤，用電子天平精確稱重，計算腫瘤抑制率，公式為：腫瘤抑制率（%）=（1-藥物干預(yù)組平均瘤重/對照組平均瘤重）×100%，以此評估健脾益氣方藥及其他處理方式對移植瘤生長的抑制效果。測定血清中相關(guān)指標：在實驗的特定時間點，如藥物干預(yù)結(jié)束后，通過眼球取血或心臟采血等方法采集各組裸鼠的血液樣本。將血液樣本進行離心處理，分離出血清，采用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）等技術(shù)檢測血清中與腫瘤生長、免疫調(diào)節(jié)、血管生成等相關(guān)的指標，如腫瘤標志物癌胚抗原（CEA）、糖類抗原19-9（CA19-9）、白細胞介素-2（IL-2）、干擾素-γ（IFN-γ）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）等的含量。分析這些指標在不同組間的差異，探討健脾益氣方藥對血清相關(guān)指標的影響，從而初步揭示其作用機制。檢測小鼠移植瘤組織中相關(guān)基因的表達情況：取各組裸鼠的移植瘤組織，采用實時熒光定量PCR（qRT-PCR）技術(shù)檢測與細胞增殖、凋亡、周期調(diào)控、免疫調(diào)節(jié)等相關(guān)基因的mRNA表達水平，如增殖細胞核抗原（PCNA）、B細胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相關(guān)X蛋白（Bax）、細胞周期蛋白依賴性激酶2（CDK2）、細胞周期蛋白D1（CyclinD1）、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3）等基因。同時，運用蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）技術(shù)檢測上述基因?qū)?yīng)的蛋白表達水平，從轉(zhuǎn)錄和翻譯兩個層面全面分析健脾益氣方藥對移植瘤組織中相關(guān)基因表達的調(diào)控作用，深入揭示其抗胃癌的分子機制。1.3研究方法與創(chuàng)新點1.3.1研究方法本研究采用實驗動物模型與現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合的方法。選用70只體重在20-25g的BALB/C雄性裸鼠，為確保實驗準確性，保證其飲食、飲水以及所處環(huán)境等條件一致。通過分離人胃癌細胞，構(gòu)建皮下移植瘤模型。將裸鼠隨機分為對照組、化療組和藥物組，其中藥物組給予健脾益氣方藥處理，化療組給予化療藥物，對照組給予等量生理鹽水。實驗過程中，密切關(guān)注并記錄裸鼠的體重變化，定期用游標卡尺測量皮下移植瘤大小，以計算腫瘤體積并繪制生長曲線，直觀呈現(xiàn)腫瘤生長態(tài)勢。實驗結(jié)束后，完整取出移植瘤并稱重，計算腫瘤抑制率，以此評估藥物對腫瘤生長的抑制效果。同時，采集裸鼠血液樣本，運用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）技術(shù)，檢測血清中與腫瘤生長、免疫調(diào)節(jié)、血管生成等相關(guān)的指標，如腫瘤標志物癌胚抗原（CEA）、糖類抗原19-9（CA19-9）、白細胞介素-2（IL-2）、干擾素-γ（IFN-γ）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）等的含量，從血清層面分析藥物作用機制。此外，取移植瘤組織，利用實時熒光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）等技術(shù)，檢測與細胞增殖、凋亡、周期調(diào)控、免疫調(diào)節(jié)等相關(guān)基因的mRNA表達水平和蛋白表達水平，從基因和蛋白層面深入探究健脾益氣方藥抗胃癌的分子機制。1.3.2創(chuàng)新點本研究從多個維度深入探究健脾益氣方藥對人胃癌裸鼠皮下移植瘤生長的影響及其機制。在研究內(nèi)容上，不僅關(guān)注藥物對移植瘤生長的直接影響，還從血清相關(guān)指標和腫瘤組織基因表達等層面進行分析，全面系統(tǒng)地揭示其作用機制，為深入了解健脾益氣方藥的抗癌作用提供了更豐富、更全面的視角。在研究方法上，綜合運用多種現(xiàn)代實驗技術(shù)，如ELISA、qRT-PCR、Westernblot等，從分子水平闡釋藥物作用的內(nèi)在機制，提高了研究的科學(xué)性和準確性。這種多技術(shù)聯(lián)用的研究方式，相較于以往單一技術(shù)的研究，能夠更深入、更準確地揭示健脾益氣方藥抗胃癌的作用機制，為中藥抗癌研究提供了新的思路和方法。此外，目前關(guān)于健脾益氣方藥抗胃癌的研究雖然取得了一定進展，但仍存在諸多尚未明確的問題。本研究有望補充和完善中藥治療胃癌的理論體系，填補該領(lǐng)域在某些機制研究方面的空白，為健脾益氣方藥在胃癌臨床治療中的廣泛應(yīng)用提供更堅實的理論基礎(chǔ)，推動中醫(yī)中藥在胃癌治療領(lǐng)域的進一步發(fā)展。二、健脾益氣方藥與胃癌治療的理論基礎(chǔ)2.1中醫(yī)對胃癌的認識2.1.1病因病機中醫(yī)對胃癌的認識源遠流長，在歷代醫(yī)學(xué)典籍中多有記載，雖未明確提及“胃癌”之名，但根據(jù)其臨床癥狀，常將其歸屬于“噎膈”“反胃”“積聚”“胃脘痛”等范疇。中醫(yī)認為，胃癌的發(fā)生是多種因素相互作用的結(jié)果，主要涉及正氣虧虛、外邪入侵、飲食失調(diào)、情志不暢等方面，其病機復(fù)雜，總屬本虛標實。正氣虧虛是胃癌發(fā)生的內(nèi)在基礎(chǔ)。中醫(yī)理論強調(diào)“正氣存內(nèi)，邪不可干”“邪之所湊，其氣必虛”，人體正氣充足時，能夠抵御外邪的侵襲，維持機體的正常生理功能。若正氣虛弱，尤其是脾胃虛弱，脾胃的運化功能失常，水谷不能正常消化吸收，氣血生化無源，導(dǎo)致機體免疫力下降，就為外邪入侵和腫瘤的發(fā)生創(chuàng)造了條件。脾胃為后天之本，氣血生化之源，脾胃功能的正常與否直接關(guān)系到人體正氣的盛衰。脾虛則運化無力，水濕內(nèi)生，聚濕成痰，痰濕阻滯于胃脘，日久可形成腫物。同時，脾虛還可導(dǎo)致氣血運行不暢，瘀血內(nèi)生，痰瘀互結(jié)，進一步促進腫瘤的形成。外邪入侵也是胃癌發(fā)生的重要誘因。自然界中的六淫邪氣，如風(fēng)、寒、暑、濕、燥、火（熱），在人體正氣不足時，可乘虛而入，侵犯人體。其中，濕邪和熱邪與胃癌的關(guān)系較為密切。濕邪具有重濁、黏滯的特性，易困阻脾胃，導(dǎo)致脾胃運化失常，水濕內(nèi)停，聚而成痰。熱邪則易傷津耗氣，煎熬津液，使血液黏稠，運行不暢，形成瘀血。濕邪與熱邪相互膠結(jié)，蘊結(jié)于胃脘，可導(dǎo)致熱毒內(nèi)蘊，灼傷胃絡(luò)，進而引發(fā)胃癌。此外，飲食不潔，誤食被污染的食物或水源，也可使毒邪侵入人體，損傷脾胃，引發(fā)胃癌。飲食失調(diào)在胃癌的發(fā)病中起著關(guān)鍵作用。長期飲食不節(jié)，如暴飲暴食、饑飽無常、過食辛辣、油膩、生冷、腌制、霉變等食物，均可損傷脾胃。辛辣食物易助熱生火，灼傷胃黏膜；油膩食物不易消化，可加重脾胃負擔(dān)；生冷食物易損傷脾胃陽氣，導(dǎo)致脾胃虛寒；腌制食物中含有大量的亞硝酸鹽等致癌物質(zhì)，長期食用可增加胃癌的發(fā)病風(fēng)險；霉變食物中含有黃曲霉毒素等強致癌物質(zhì)，誤食后可直接損傷胃黏膜，誘發(fā)胃癌。此外，過度飲酒也可損傷脾胃，導(dǎo)致脾胃功能失調(diào)，從而增加胃癌的發(fā)病幾率。情志不暢同樣是胃癌發(fā)生的重要因素。長期的精神緊張、焦慮、抑郁、憤怒等不良情緒，可導(dǎo)致肝氣郁結(jié)，疏泄失常。肝木克脾土，肝氣郁結(jié)則橫逆犯脾，導(dǎo)致脾胃功能失調(diào)，運化失職，水濕內(nèi)生，痰濁凝聚。同時，情志不暢還可導(dǎo)致氣血運行不暢，瘀血內(nèi)生，痰瘀互結(jié)于胃脘，最終形成胃癌。例如，長期處于焦慮狀態(tài)的人群，其體內(nèi)的神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)會發(fā)生紊亂，影響胃腸道的正常蠕動和消化液分泌，進而損傷脾胃功能，增加胃癌的發(fā)病風(fēng)險。綜上所述，胃癌的病因病機復(fù)雜，正氣虧虛、外邪入侵、飲食失調(diào)、情志不暢等多種因素相互作用，導(dǎo)致機體陰陽失衡，臟腑功能失調(diào)，出現(xiàn)氣滯血瘀、痰濕凝聚、熱毒內(nèi)蘊等病理變化，日久形成癌腫。其中，脾胃虛弱在胃癌的發(fā)生發(fā)展過程中起著關(guān)鍵作用，是胃癌發(fā)病的核心病機。因此，在胃癌的治療中，健脾益氣、扶正祛邪是重要的治療原則。2.1.2中醫(yī)治療原則中醫(yī)治療胃癌遵循整體觀念和辨證論治的原則，強調(diào)從整體出發(fā)，調(diào)整人體的陰陽平衡，改善機體的內(nèi)環(huán)境，提高機體的免疫力，從而達到抑制腫瘤生長、緩解癥狀、提高生活質(zhì)量、延長生存期的目的。其治療原則主要包括扶正祛邪、攻補兼施。扶正祛邪是中醫(yī)治療腫瘤的根本原則。扶正，即扶助正氣，增強機體的抵抗力和免疫力，提高機體自身的抗癌能力。扶正的方法主要包括健脾益氣、滋陰養(yǎng)血、補腎填精等，其中健脾益氣法尤為重要。如前文所述，脾胃為后天之本，氣血生化之源，脾胃功能正常，則正氣充足，能夠抵御腫瘤的侵襲。通過健脾益氣，可促進脾胃的運化功能，增強氣血生化，使機體正氣得以恢復(fù)和增強，從而更好地發(fā)揮抗癌作用。祛邪，即祛除病邪，消除腫瘤及其引起的病理產(chǎn)物。祛邪的方法主要包括活血化瘀、化痰散結(jié)、清熱解毒、以毒攻毒等。活血化瘀可改善腫瘤患者的血瘀狀態(tài)，促進血液循環(huán)，抑制腫瘤血管生成，從而達到抑制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的目的；化痰散結(jié)可消除體內(nèi)的痰濕凝聚，使腫物消散；清熱解毒可清除體內(nèi)的熱毒之邪，減輕腫瘤組織的炎癥反應(yīng)；以毒攻毒則是利用某些有毒藥物的毒性來抑制和殺滅腫瘤細胞。在臨床治療中，應(yīng)根據(jù)患者的具體情況，合理運用扶正祛邪的方法，做到扶正而不留邪，祛邪而不傷正。攻補兼施是中醫(yī)治療胃癌的重要策略。攻，即采用具有較強祛邪作用的藥物和方法，如活血化瘀、化痰散結(jié)、清熱解毒、以毒攻毒等，以直接抑制或消除腫瘤。補，即采用扶正的藥物和方法，如健脾益氣、滋陰養(yǎng)血、補腎填精等，以增強機體的正氣，提高機體的抵抗力和免疫力。攻補兼施的原則是根據(jù)患者的病情、體質(zhì)和病程的不同階段，靈活運用攻法和補法，使兩者相互配合，相得益彰。在胃癌的早期，患者正氣尚盛，腫瘤邪實為主，此時治療應(yīng)以攻毒為主，佐以補虛，通過運用活血化瘀、化痰散結(jié)、清熱解毒等藥物，直接攻擊腫瘤，同時適當(dāng)運用健脾益氣等扶正藥物，以顧護正氣，防止攻伐太過。在胃癌的中期，患者正氣漸虛，腫瘤邪實與正虛并存，此時治療應(yīng)攻補兼施，根據(jù)患者的具體情況，調(diào)整攻法和補法的比例，既要積極祛邪，又要注重扶正，以達到抑制腫瘤生長、緩解癥狀、提高生活質(zhì)量的目的。在胃癌的晚期，患者正氣大虛，腫瘤邪實已衰，此時治療應(yīng)以補為主，少佐攻毒，通過大補元氣、健脾益氣、滋陰養(yǎng)血等方法，增強機體的正氣，提高患者的生存質(zhì)量，延長生存期，同時適當(dāng)運用一些溫和的祛邪藥物，以減輕腫瘤的癥狀。中醫(yī)治療胃癌還注重辨證論治，根據(jù)患者的癥狀、體征、舌象、脈象等綜合信息，進行辨證分型，然后根據(jù)不同的證型制定相應(yīng)的治療方案。常見的胃癌證型有肝氣犯胃型、瘀毒內(nèi)阻型、脾胃虛寒型、氣虛血瘀型、氣血兩虛型等。對于肝氣犯胃型，治則為疏肝理氣、抗癌止痛，方藥以柴胡疏肝散為主，加用抗癌中藥半邊蓮、半枝蓮等；對于瘀毒內(nèi)阻型，治則為化瘀解毒、清熱和胃，方藥以膈下逐瘀湯為主，加用三棱、莪術(shù)等；對于脾胃虛寒型，治則為溫中散寒、健脾抗癌，方藥以附子理中湯為主，加薏仁、山萸肉、山藥等；對于氣虛血瘀型，治則為補氣活血、化瘀抗癌，方藥以八珍湯為主，加丹參、川芎、半邊蓮等；對于氣血兩虛型，治則為補益氣血、扶正抗癌，方藥以十全大補丸為主，加黃芪、太子參、山萸肉等。通過辨證論治，能夠更有針對性地治療胃癌患者，提高治療效果。此外，中醫(yī)治療胃癌還注重飲食調(diào)理、情志調(diào)節(jié)和生活起居的指導(dǎo)。飲食上，建議患者遵循清淡、易消化、營養(yǎng)均衡的原則，避免食用辛辣、油膩、生冷、腌制、霉變等刺激性食物，多吃新鮮的蔬菜、水果、粗糧等富含維生素、礦物質(zhì)和膳食纖維的食物。情志上，鼓勵患者保持樂觀積極的心態(tài)，避免長期的精神緊張、焦慮、抑郁等不良情緒，可通過適當(dāng)?shù)倪\動、娛樂、社交等方式緩解壓力，調(diào)節(jié)情志。生活起居上，指導(dǎo)患者養(yǎng)成規(guī)律的作息習(xí)慣，保證充足的睡眠，避免過度勞累，適當(dāng)進行體育鍛煉，增強體質(zhì)，提高機體的免疫力。這些綜合的治療措施，有助于提高胃癌患者的治療效果和生活質(zhì)量，促進患者的康復(fù)。二、健脾益氣方藥與胃癌治療的理論基礎(chǔ)2.2健脾益氣方藥的組成與功效2.2.1常見藥材及作用健脾益氣方藥通常由多種具有健脾益氣功效的中藥材組成，這些藥材相互配伍，協(xié)同發(fā)揮作用，以達到調(diào)理脾胃、增強正氣的目的。以下是一些常見的健脾益氣藥材及其作用：白術(shù)：為菊科植物白術(shù)的干燥根莖，性溫，味甘、苦，歸脾、胃經(jīng)。白術(shù)具有補氣健脾、燥濕利水、止汗、安胎等功效。在健脾益氣方面，白術(shù)能夠增強脾胃的運化功能，促進水谷的消化吸收，對于脾胃虛弱、運化無力所致的食少、腹脹、便溏等癥狀有顯著的改善作用?，F(xiàn)代研究表明，白術(shù)富含揮發(fā)油、白術(shù)內(nèi)酯、蒼術(shù)酮等成分，這些成分具有調(diào)節(jié)胃腸運動、增強機體免疫力、抗氧化等多種藥理作用。例如，白術(shù)中的白術(shù)內(nèi)酯能夠促進胃腸蠕動，增強胃腸消化功能；白術(shù)多糖則可通過激活巨噬細胞、T淋巴細胞等免疫細胞，增強機體的免疫功能。此外，白術(shù)還具有一定的抗腫瘤作用，其活性成分能夠抑制腫瘤細胞的增殖、誘導(dǎo)細胞凋亡，同時還能調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境，增強機體的抗腫瘤免疫應(yīng)答。茯苓：為多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核，性平，味甘、淡，歸心、肺、脾、腎經(jīng)。茯苓具有利水滲濕、健脾、寧心的功效。在健脾方面，茯苓能夠健脾補中，促進脾胃的運化功能，改善脾胃虛弱所致的食欲不振、腹脹、便溏等癥狀。茯苓還具有利水滲濕的作用，能夠促進體內(nèi)水濕的代謝，消除水腫。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，茯苓含有茯苓多糖、三萜類化合物、蛋白質(zhì)等多種成分，其中茯苓多糖是其主要的活性成分。茯苓多糖具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗氧化、降血脂等多種藥理活性。研究表明，茯苓多糖能夠增強機體的免疫功能，激活巨噬細胞、T淋巴細胞等免疫細胞，提高機體的抗腫瘤能力；同時，茯苓多糖還能夠抑制腫瘤細胞的增殖、誘導(dǎo)細胞凋亡，其作用機制可能與調(diào)節(jié)細胞周期、抑制腫瘤血管生成等有關(guān)。此外，茯苓還具有一定的抗炎、抗菌作用，能夠減輕炎癥反應(yīng)，預(yù)防感染。黃芪：為豆科植物蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根，性微溫，味甘，歸肺、脾經(jīng)。黃芪具有健脾補中、升陽舉陷、益衛(wèi)固表、利尿、托毒生肌的功效。在健脾益氣方面，黃芪能夠增強脾胃的功能，促進氣血生化，對于脾胃虛弱、中氣下陷所致的食少便溏、久瀉脫肛、子宮脫垂等癥狀有良好的治療效果。黃芪還具有益衛(wèi)固表的作用，能夠增強機體的免疫力，預(yù)防感冒等疾病?，F(xiàn)代研究表明，黃芪富含黃芪皂苷、黃芪多糖、黃酮類化合物等多種成分，這些成分具有多種藥理作用。黃芪多糖能夠調(diào)節(jié)機體的免疫功能，增強免疫細胞的活性，提高機體的抵抗力；黃芪皂苷則具有強心、降壓、利尿等作用，能夠改善心血管功能；黃酮類化合物具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤等作用，能夠保護細胞免受氧化損傷，減輕炎癥反應(yīng)。此外，黃芪還能夠促進骨髓造血干細胞的增殖和分化，增加血液中紅細胞、白細胞、血小板的數(shù)量，提高機體的造血功能。在抗腫瘤方面，黃芪能夠通過調(diào)節(jié)機體的免疫功能，增強免疫細胞對腫瘤細胞的殺傷能力，抑制腫瘤細胞的生長和轉(zhuǎn)移；同時，黃芪還能夠調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境，抑制腫瘤血管生成，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。黨參：為桔?？浦参稂h參、素花黨參或川黨參的干燥根，性平，味甘，歸脾、肺經(jīng)。黨參具有補中益氣、健脾益肺的功效。黨參能夠增強脾胃的運化功能，提高機體的消化吸收能力，對于脾胃虛弱、食欲不振、倦怠乏力等癥狀有較好的改善作用。黨參還能夠補氣養(yǎng)血，對于氣血不足所致的面色萎黃、頭暈眼花、心悸氣短等癥狀有一定的治療效果?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，黨參含有黨參多糖、生物堿、黃酮類化合物、揮發(fā)油等多種成分，這些成分具有多種藥理活性。黨參多糖能夠調(diào)節(jié)機體的免疫功能，增強免疫細胞的活性，提高機體的抵抗力；生物堿具有鎮(zhèn)靜、催眠、鎮(zhèn)痛等作用，能夠緩解焦慮、失眠等癥狀；黃酮類化合物具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤等作用，能夠保護細胞免受氧化損傷，減輕炎癥反應(yīng)。此外，黨參還能夠調(diào)節(jié)胃腸運動，促進胃腸蠕動，增強胃腸消化功能；同時，黨參還具有一定的抗應(yīng)激作用，能夠提高機體對各種有害刺激的適應(yīng)能力。在抗腫瘤方面，黨參能夠通過調(diào)節(jié)機體的免疫功能，增強免疫細胞對腫瘤細胞的殺傷能力，抑制腫瘤細胞的生長和轉(zhuǎn)移；同時，黨參還能夠調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境，抑制腫瘤血管生成，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。除了上述藥材外，常見的健脾益氣藥材還有山藥、甘草、陳皮等。山藥具有補脾養(yǎng)胃、生津益肺、補腎澀精的功效，能夠改善脾胃虛弱、食少體倦等癥狀；甘草具有補脾益氣、潤肺止咳、清熱解毒、調(diào)和諸藥的功效，能夠增強脾胃功能，緩解藥物的毒性和副作用；陳皮具有理氣健脾、燥濕化痰的功效，能夠促進脾胃的運化，消除脾胃氣滯所致的腹脹、噯氣等癥狀。這些藥材在健脾益氣方藥中相互配伍，根據(jù)不同的病情和體質(zhì)進行合理運用，能夠發(fā)揮出更好的治療效果。2.2.2經(jīng)典方劑解析在中醫(yī)臨床實踐中，諸多經(jīng)典方劑以健脾益氣為主要功效，歷經(jīng)數(shù)百年的臨床驗證，對脾胃虛弱相關(guān)病癥有著顯著療效。這些方劑組方嚴謹，藥物之間相互協(xié)同，共同發(fā)揮健脾益氣、調(diào)理脾胃的作用。以下對一些經(jīng)典的健脾益氣方劑進行解析：四君子丸：源自宋代《太平惠民和劑局方》，是益氣健脾的基礎(chǔ)方劑。其藥物組成包括黨參、炒白術(shù)、茯苓、炙甘草。方中黨參甘溫，補中益氣，健脾養(yǎng)胃，為君藥，能直接補充脾胃之氣，增強脾胃的運化功能，促進水谷的消化吸收。炒白術(shù)苦甘而溫，補氣健脾，燥濕利水，協(xié)助黨參增強健脾益氣之力，為臣藥，可增強脾胃的運化功能，同時還能去除體內(nèi)多余的濕氣，改善因脾虛導(dǎo)致的水濕內(nèi)停癥狀。茯苓甘淡，健脾滲濕，助白術(shù)健脾祛濕，為佐藥，通過利水滲濕的作用，幫助體內(nèi)的濕氣從小便排出，從而減輕脾胃的負擔(dān)，增強脾胃的功能。炙甘草甘溫，益氣和中，調(diào)和諸藥，為使藥，既能補中益氣，又能協(xié)調(diào)其他藥物的藥性，使整個方劑的作用更加平和、持久。四藥合用，共奏益氣健脾之功，主要用于脾胃氣虛，表現(xiàn)為胃納不佳、食少便溏、氣短乏力、舌淡苔白、脈虛等癥狀。現(xiàn)代研究表明，四君子丸能夠調(diào)節(jié)胃腸運動，促進胃腸蠕動，增強胃腸消化功能；還能提高機體免疫力，增強機體的抵抗力，對免疫功能低下的人群有一定的調(diào)節(jié)作用。此外，四君子丸還具有一定的抗腫瘤作用，能夠通過調(diào)節(jié)機體的免疫功能，抑制腫瘤細胞的生長和轉(zhuǎn)移。歸脾丸：出自宋代《濟生方》，后經(jīng)《校注婦人良方》增補而成。其藥物組成包括黨參、炒白術(shù)、茯苓、炙甘草、炙黃芪、當(dāng)歸、龍眼肉、酸棗仁、遠志、木香、大棗。方中以黨參、炙黃芪、炒白術(shù)、茯苓、炙甘草為基礎(chǔ)，健脾益氣，補中焦之氣，以資氣血生化之源，使脾胃功能強健，氣血得以充足化生。當(dāng)歸、龍眼肉養(yǎng)血安神，與補氣之品配伍，氣血雙補，既補充了因脾虛導(dǎo)致的氣血不足，又能養(yǎng)心安神，改善因心脾兩虛引起的心悸、失眠等癥狀。酸棗仁、遠志寧心安神，協(xié)助當(dāng)歸、龍眼肉增強安神定志的作用，使心神得以安寧。木香理氣醒脾，使補而不滯，防止補氣養(yǎng)血藥物過于滋膩，影響脾胃的運化功能。大棗補脾和胃，調(diào)和諸藥。全方共奏益氣健脾、養(yǎng)血安神之功，常用于心脾兩虛、氣血不足所致的心悸、失眠健忘、食少體倦、面色萎黃，以及脾不統(tǒng)血所致的便血、崩漏、帶下等癥?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，歸脾丸能夠調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)功能，改善睡眠質(zhì)量，緩解焦慮、抑郁等情緒；還能調(diào)節(jié)內(nèi)分泌系統(tǒng)，提高機體的應(yīng)激能力；同時，歸脾丸對造血系統(tǒng)也有一定的調(diào)節(jié)作用，能夠促進骨髓造血干細胞的增殖和分化，增加血液中紅細胞、白細胞、血小板的數(shù)量。在抗腫瘤方面，歸脾丸能夠通過調(diào)節(jié)機體的免疫功能，增強免疫細胞對腫瘤細胞的殺傷能力，抑制腫瘤細胞的生長和轉(zhuǎn)移；還能調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境，抑制腫瘤血管生成，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。參苓白術(shù)散：源自宋代《太平惠民和劑局方》，是一首補氣健脾、滲濕止瀉的經(jīng)典方劑。其藥物組成包括人參、白術(shù)（麩炒）、茯苓、山藥、薏苡仁、蓮子、白扁豆、砂仁、桔梗、甘草。方中人參、白術(shù)、茯苓益氣健脾滲濕，為君藥，三者相互配伍，既能補氣健脾，增強脾胃的運化功能，又能利水滲濕，去除體內(nèi)多余的濕氣。山藥、蓮子、白扁豆、薏苡仁補脾止瀉，兼能化濕，協(xié)助君藥增強健脾止瀉的作用，為臣藥。砂仁醒脾和胃，行氣化濕，可增強脾胃的運化功能，同時還能防止補藥過于滋膩，為佐藥。桔梗宣肺利氣，通調(diào)水道，載藥上行，使藥力上達于肺，以益肺氣，為使藥。甘草調(diào)和諸藥。全方共奏健脾、益氣、滲濕、止瀉之功，主要用于脾胃虛弱，食少便溏，氣短咳嗽，肢倦乏力等癥?，F(xiàn)代研究表明，參苓白術(shù)散能夠調(diào)節(jié)胃腸功能，促進胃腸蠕動，增強胃腸消化吸收能力；還能調(diào)節(jié)機體的免疫功能，提高機體的抵抗力；此外，參苓白術(shù)散對腸道菌群也有一定的調(diào)節(jié)作用，能夠改善腸道微生態(tài)環(huán)境，促進腸道健康。在抗腫瘤方面，參苓白術(shù)散能夠通過調(diào)節(jié)機體的免疫功能，增強免疫細胞對腫瘤細胞的殺傷能力，抑制腫瘤細胞的生長和轉(zhuǎn)移；還能調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境，抑制腫瘤血管生成，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。這些經(jīng)典方劑在健脾益氣的基礎(chǔ)上，根據(jù)不同的癥狀和病機進行了相應(yīng)的配伍和調(diào)整，以適應(yīng)各種復(fù)雜的病癥。在臨床應(yīng)用中，醫(yī)生會根據(jù)患者的具體情況，靈活選用合適的方劑，并進行適當(dāng)?shù)募訙p化裁，以達到最佳的治療效果。2.3健脾益氣方藥抗癌的中醫(yī)理論依據(jù)2.3.1扶正培本扶正培本是中醫(yī)治療腫瘤的重要原則之一，而健脾益氣方藥在扶正培本方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。中醫(yī)理論認為，人體的正氣是抵御疾病的根本，“正氣存內(nèi)，邪不可干”，當(dāng)人體正氣充足時，能夠有效地抵御外邪的侵襲，維持機體的健康狀態(tài)。在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中，正氣虧虛是其重要的內(nèi)在因素。腫瘤患者由于長期受到腫瘤的消耗，以及手術(shù)、化療、放療等治療手段的損傷，往往會出現(xiàn)正氣不足的情況，表現(xiàn)為神疲乏力、食欲不振、少氣懶言、面色萎黃、消瘦等癥狀。此時，運用健脾益氣方藥進行扶正培本治療，能夠增強機體的正氣，提高機體的抗癌能力，從而達到抑制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的目的。健脾益氣方藥通過多種途徑實現(xiàn)扶正培本的作用。一方面，它能夠調(diào)節(jié)機體的免疫功能，增強免疫細胞的活性，提高機體的抵抗力。脾臟在人體的免疫功能中起著重要的作用，被視為后天之本和氣血生化之源，脾的功能正常與否直接關(guān)系到人體正氣的盛衰。健脾益氣方藥中的黃芪、白術(shù)、茯苓等藥材，富含多種活性成分，如黃芪多糖、白術(shù)內(nèi)酯、茯苓多糖等，這些成分能夠激活巨噬細胞、T淋巴細胞、B淋巴細胞等免疫細胞，增強它們的吞噬能力、殺傷活性和免疫調(diào)節(jié)功能。研究表明，黃芪多糖可以顯著提高小鼠脾淋巴細胞的增殖能力，增強NK細胞的活性，促進細胞因子如白細胞介素-2（IL-2）、干擾素-γ（IFN-γ）等的分泌，從而增強機體的免疫功能。白術(shù)內(nèi)酯能夠調(diào)節(jié)巨噬細胞的功能，促進其分泌腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等細胞因子，增強巨噬細胞對腫瘤細胞的殺傷作用。茯苓多糖則可以通過調(diào)節(jié)T淋巴細胞亞群的比例，提高機體的細胞免疫和體液免疫功能。通過增強免疫功能，健脾益氣方藥能夠激發(fā)機體的自身抗癌能力，使免疫細胞能夠更好地識別和殺傷腫瘤細胞，抑制腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。另一方面，健脾益氣方藥能夠促進機體的新陳代謝，增強機體的修復(fù)能力。脾胃是人體消化吸收的重要器官，脾胃功能正常，則水谷能夠被充分消化吸收，為機體提供充足的營養(yǎng)物質(zhì)，維持機體的正常生理功能。健脾益氣方藥能夠增強脾胃的運化功能，促進水谷的消化吸收，提高機體的營養(yǎng)水平，為機體的修復(fù)和再生提供充足的物質(zhì)基礎(chǔ)。例如，黨參、白術(shù)等藥材能夠促進胃腸蠕動，增強胃腸消化酶的活性，提高食物的消化吸收效率。同時，健脾益氣方藥還能夠調(diào)節(jié)機體的內(nèi)分泌系統(tǒng)，促進生長激素、胰島素等激素的分泌，調(diào)節(jié)機體的物質(zhì)代謝和能量代謝，增強機體的修復(fù)能力。在腫瘤治療過程中，患者往往會因為手術(shù)、化療、放療等治療手段而受到一定的損傷，健脾益氣方藥通過促進機體的新陳代謝和修復(fù)能力，能夠幫助患者盡快恢復(fù)體力，減輕治療的不良反應(yīng)，提高生活質(zhì)量。此外，健脾益氣方藥還具有一定的抗氧化和抗炎作用，能夠減輕腫瘤患者體內(nèi)的氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，保護機體的正常細胞和組織。腫瘤的發(fā)生發(fā)展與氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)會導(dǎo)致細胞損傷、基因突變和腫瘤微環(huán)境的改變，從而促進腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。健脾益氣方藥中的黃芪、甘草等藥材富含黃酮類、多酚類等抗氧化成分，能夠清除體內(nèi)的自由基，減少氧化應(yīng)激對細胞的損傷。同時，這些藥材還具有一定的抗炎作用，能夠抑制炎癥因子的釋放，減輕炎癥反應(yīng)對機體的損害。研究表明，黃芪中的黃酮類化合物能夠顯著降低腫瘤患者血清中的丙二醛（MDA）含量，提高超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）等抗氧化酶的活性，減輕氧化應(yīng)激損傷。甘草中的甘草酸等成分具有抗炎作用，能夠抑制核因子-κB（NF-κB）等炎癥信號通路的激活，減少炎癥因子如白細胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等的分泌，減輕炎癥反應(yīng)。通過減輕氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，健脾益氣方藥能夠保護機體的正常細胞和組織，為機體的抗癌提供一個良好的內(nèi)環(huán)境。2.3.2調(diào)節(jié)臟腑功能脾胃為后天之本，氣血生化之源，在人體的生命活動中起著至關(guān)重要的作用。脾胃的主要功能是運化水谷和運化水液，將攝入的食物轉(zhuǎn)化為營養(yǎng)物質(zhì)，并將其輸送到全身各個臟腑組織，為機體提供充足的營養(yǎng)支持。同時，脾胃還參與了人體的氣機升降調(diào)節(jié)，維持著人體的正常生理功能。當(dāng)脾胃功能失調(diào)時，會導(dǎo)致水谷運化失常，氣血生化不足，從而影響機體的營養(yǎng)狀況和免疫功能，為腫瘤的發(fā)生發(fā)展創(chuàng)造條件。健脾益氣方藥能夠調(diào)節(jié)脾胃功能，增強脾胃的運化能力，促進水谷的消化吸收，從而改善機體的營養(yǎng)狀況。方中的白術(shù)、茯苓、黨參等藥材，具有健脾益氣、燥濕利水、和胃止嘔等功效，能夠增強脾胃的功能，促進胃腸蠕動，提高消化酶的活性，使食物能夠更好地被消化吸收。研究表明，白術(shù)能夠促進胃腸平滑肌的收縮，增強胃腸蠕動，提高胃排空率和小腸推進率；茯苓能夠調(diào)節(jié)胃腸功能，促進胃液分泌，提高胃酸和胃蛋白酶的活性，增強消化能力；黨參能夠增強胃腸黏膜的屏障功能，促進胃腸黏膜的修復(fù)和再生，提高胃腸對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收能力。通過調(diào)節(jié)脾胃功能，健脾益氣方藥能夠使機體獲得充足的營養(yǎng)物質(zhì)，增強體質(zhì)，提高機體的免疫力。充足的氣血是維持機體正常生理功能和免疫功能的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。脾胃功能正常，則氣血生化有源，能夠為機體提供充足的氣血。健脾益氣方藥通過增強脾胃功能，促進氣血生化，使機體的氣血充足，從而為機體的免疫細胞提供充足的營養(yǎng)和能量，增強免疫細胞的活性和功能。同時，氣血充足還能夠促進血液循環(huán)，使藥物能夠更好地到達腫瘤部位，提高藥物的療效。研究發(fā)現(xiàn)，健脾益氣方藥能夠提高腫瘤患者血清中的血紅蛋白、紅細胞、白細胞等指標的水平，增加血液中的營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣含量，改善機體的貧血狀態(tài)和營養(yǎng)狀況。此外，健脾益氣方藥還能夠調(diào)節(jié)機體的內(nèi)分泌系統(tǒng)，促進生長激素、胰島素等激素的分泌，調(diào)節(jié)機體的物質(zhì)代謝和能量代謝，進一步促進氣血的生成和運行。機體的免疫功能是抵御腫瘤的重要防線，而脾胃功能與免疫功能密切相關(guān)。脾胃虛弱會導(dǎo)致機體免疫功能下降，使機體容易受到腫瘤細胞的侵襲。健脾益氣方藥通過調(diào)節(jié)脾胃功能，增強機體的營養(yǎng)狀況和氣血生成，能夠為免疫細胞的生成和功能發(fā)揮提供良好的條件，從而增強機體的免疫功能。一方面，健脾益氣方藥能夠促進免疫細胞的生成和增殖。例如，黃芪中的黃芪多糖能夠促進骨髓造血干細胞的增殖和分化，增加血液中白細胞、紅細胞、血小板等免疫細胞的數(shù)量。另一方面，健脾益氣方藥能夠增強免疫細胞的活性和功能。如前文所述，黃芪多糖、白術(shù)內(nèi)酯、茯苓多糖等成分能夠激活巨噬細胞、T淋巴細胞、B淋巴細胞等免疫細胞，增強它們的吞噬能力、殺傷活性和免疫調(diào)節(jié)功能。此外，健脾益氣方藥還能夠調(diào)節(jié)免疫細胞分泌的細胞因子，如IL-2、IFN-γ、TNF-α等，這些細胞因子在免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤免疫中發(fā)揮著重要作用。通過增強機體的免疫功能，健脾益氣方藥能夠提高機體對腫瘤細胞的識別和殺傷能力，抑制腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。除了調(diào)節(jié)脾胃功能外，健脾益氣方藥還能夠通過調(diào)節(jié)其他臟腑功能，間接輔助抗癌。中醫(yī)理論認為，人體是一個有機的整體，各個臟腑之間相互關(guān)聯(lián)、相互影響。脾胃與其他臟腑之間存在著密切的關(guān)系，脾胃功能的失調(diào)會影響到其他臟腑的功能，而其他臟腑功能的異常也會反過來影響脾胃。健脾益氣方藥在調(diào)節(jié)脾胃功能的同時，還能夠通過調(diào)節(jié)其他臟腑功能，改善機體的整體狀態(tài)，增強機體的抗癌能力。例如，脾胃與肝的關(guān)系密切，肝主疏泄，能夠調(diào)節(jié)脾胃的運化功能。當(dāng)肝氣郁結(jié)時，會影響脾胃的運化，導(dǎo)致脾胃功能失調(diào)。健脾益氣方藥中的一些藥材，如陳皮、木香等，具有理氣疏肝的作用，能夠調(diào)節(jié)肝氣的疏泄，促進脾胃的運化。此外，脾胃與腎的關(guān)系也十分密切，腎為先天之本，脾胃為后天之本，先天與后天相互資生。脾胃運化水谷精微，需要借助腎中陽氣的溫煦和推動作用；而腎中精氣的充盛，也依賴于脾胃運化水谷精微的滋養(yǎng)。健脾益氣方藥中的一些藥材，如山藥、枸杞子等，具有補腎益精的作用，能夠調(diào)節(jié)腎的功能，促進脾胃與腎之間的相互協(xié)調(diào)，增強機體的正氣。通過調(diào)節(jié)其他臟腑功能，健脾益氣方藥能夠改善機體的整體狀態(tài)，增強機體的抗癌能力，為腫瘤的治療提供更全面的支持。三、人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型構(gòu)建與實驗設(shè)計3.1實驗材料準備3.1.1實驗動物選用70只BALB/C雄性裸鼠，體重在20-25g之間，周齡為4-6周。BALB/C裸鼠具有免疫缺陷的特點，其T淋巴細胞功能缺失，對異種移植的腫瘤細胞幾乎不產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)，能夠為人類腫瘤細胞的生長提供良好的環(huán)境，使得人胃癌細胞在其體內(nèi)能夠穩(wěn)定生長和增殖，從而成功構(gòu)建人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型，便于研究人胃癌的生物學(xué)特性以及藥物對其的治療效果。裸鼠飼養(yǎng)于無特殊病原體（SPF）級動物房內(nèi)，室內(nèi)溫度控制在（23±2）℃，相對濕度保持在（50±10）%，維持12小時光照、12小時黑暗的晝夜節(jié)律。動物房定期進行嚴格消毒，以防止病原體感染裸鼠，影響實驗結(jié)果?；\具、墊料、飼料和飲水均經(jīng)過高壓蒸氣滅菌處理，并在無菌條件下適時更換，確保裸鼠生活環(huán)境的清潔和衛(wèi)生。在實驗開始前，先將裸鼠置于動物房內(nèi)適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，使其適應(yīng)新環(huán)境，減少環(huán)境因素對實驗結(jié)果的干擾。在飼養(yǎng)過程中，密切觀察裸鼠的健康狀況，如發(fā)現(xiàn)有異常情況，及時進行處理或剔除，以保證實驗動物的質(zhì)量。3.1.2人胃癌細胞實驗選用人胃癌細胞株BGC-823，該細胞株購自中國典型培養(yǎng)物保藏中心（CCTCC）。BGC-823細胞具有較強的增殖能力和侵襲能力，能夠較好地模擬人胃癌的生物學(xué)行為，在胃癌研究中被廣泛應(yīng)用。細胞培養(yǎng)采用RPMI-1640培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基中含有細胞生長所需的各種營養(yǎng)成分，如氨基酸、維生素、糖類等，能夠滿足BGC-823細胞的生長需求。在培養(yǎng)基中添加10%的胎牛血清，胎牛血清富含多種生長因子和營養(yǎng)物質(zhì)，能夠促進細胞的生長和增殖。同時，加入1%的青霉素-鏈霉素雙抗溶液，青霉素能夠抑制細菌細胞壁的合成，鏈霉素能夠抑制細菌蛋白質(zhì)的合成，兩者聯(lián)合使用可以有效防止細胞培養(yǎng)過程中的細菌污染。將細胞置于37℃、5%CO?的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，CO?能夠維持培養(yǎng)基的pH值穩(wěn)定，為細胞生長提供適宜的環(huán)境。培養(yǎng)箱內(nèi)保持飽和濕度，以防止培養(yǎng)基水分蒸發(fā)，影響細胞生長。當(dāng)細胞生長至對數(shù)生長期時，進行傳代培養(yǎng)。具體步驟為：先用不含鈣、鎂離子的PBS緩沖液潤洗細胞1-2次，去除培養(yǎng)基中的血清和雜質(zhì)，以免影響胰蛋白酶的消化效果。然后加入適量的0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，在顯微鏡下觀察細胞消化情況，當(dāng)細胞大部分變圓并開始脫落時，迅速將培養(yǎng)瓶拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶，使細胞完全脫落。接著加入含有血清的培養(yǎng)基終止消化，血清中的蛋白質(zhì)可以中和胰蛋白酶的活性，防止過度消化對細胞造成損傷。將細胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中，在1000rpm的轉(zhuǎn)速下離心5分鐘，使細胞沉淀下來。棄去上清液，加入適量的新鮮培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞，使其均勻分散，然后按照1:2或1:3的比例將細胞接種到新的培養(yǎng)瓶中，繼續(xù)培養(yǎng)。傳代后的細胞生長狀態(tài)良好，能夠滿足后續(xù)實驗的需求。3.1.3健脾益氣方藥及其他試劑健脾益氣方藥由黃芪30g、白術(shù)15g、茯苓15g、黨參15g、甘草6g等藥材組成。將上述藥材洗凈后，加入適量的蒸餾水，浸泡30分鐘，然后用文火煎煮2次，每次煎煮1小時，合并兩次煎液，過濾后減壓濃縮至所需濃度，得到健脾益氣方藥的水煎劑，將其置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆?。實驗所需的其他試劑包括?-氟尿嘧啶（5-Fu），購自上海源葉生物科技有限公司，是一種常用的化療藥物，能夠抑制腫瘤細胞的DNA合成，從而發(fā)揮抗癌作用；胎牛血清、RPMI-1640培養(yǎng)基、青霉素-鏈霉素雙抗溶液，均購自美國Gibco公司，用于人胃癌細胞的培養(yǎng)；胰蛋白酶-EDTA消化液，購自北京索萊寶科技有限公司，用于細胞的消化傳代；磷酸鹽緩沖液（PBS），由實驗室自行配制，用于細胞的洗滌和試劑的稀釋；酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）試劑盒，包括癌胚抗原（CEA）、糖類抗原19-9（CA19-9）、白細胞介素-2（IL-2）、干擾素-γ（IFN-γ）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）等檢測試劑盒，購自武漢華美生物工程有限公司，用于檢測血清中相關(guān)指標的含量；實時熒光定量PCR（qRT-PCR）試劑盒，購自日本TaKaRa公司，用于檢測移植瘤組織中相關(guān)基因的mRNA表達水平；蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）相關(guān)試劑，包括蛋白裂解液、SDS-PAGE凝膠制備試劑盒、PVDF膜、封閉液、一抗、二抗等，購自碧云天生物技術(shù)有限公司，用于檢測移植瘤組織中相關(guān)基因的蛋白表達水平。實驗儀器主要有：CO?恒溫培養(yǎng)箱（美國ThermoFisherScientific公司），用于細胞的培養(yǎng)；超凈工作臺（蘇州凈化設(shè)備有限公司），為細胞培養(yǎng)和實驗操作提供無菌環(huán)境；倒置顯微鏡（日本Olympus公司），用于觀察細胞的生長狀態(tài)；低速離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司），用于細胞的離心收集；酶標儀（美國Bio-Rad公司），用于ELISA實驗的檢測；實時熒光定量PCR儀（美國AppliedBiosystems公司），用于qRT-PCR實驗的檢測；電泳儀和轉(zhuǎn)膜儀（美國Bio-Rad公司），用于Westernblot實驗的電泳和轉(zhuǎn)膜操作；化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)（美國Bio-Rad公司），用于檢測Westernblot實驗的結(jié)果。3.2人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型構(gòu)建過程3.2.1細胞懸液制備從液氮罐中取出凍存的人胃癌BGC-823細胞株，迅速放入37℃水浴鍋中，不斷搖晃，使其在1-2分鐘內(nèi)快速解凍。將解凍后的細胞懸液轉(zhuǎn)移至含有5ml完全培養(yǎng)基（RPMI-1640培養(yǎng)基+10%胎牛血清+1%青霉素-鏈霉素雙抗溶液）的離心管中，輕輕吹打均勻。在1000rpm的轉(zhuǎn)速下離心5分鐘，使細胞沉淀下來。棄去上清液，加入適量的完全培養(yǎng)基，再次輕輕吹打細胞，使其均勻分散，然后將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5%CO?的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細胞生長至對數(shù)生長期，細胞鋪滿培養(yǎng)瓶底部80%-90%時，進行細胞消化。首先，吸去培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用不含鈣、鎂離子的PBS緩沖液潤洗細胞1-2次，以去除殘留的培養(yǎng)基和雜質(zhì)。接著，向培養(yǎng)瓶中加入1-2ml0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA消化液，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶，使消化液均勻覆蓋細胞。將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，期間在顯微鏡下密切觀察細胞消化情況。當(dāng)發(fā)現(xiàn)大部分細胞變圓并開始脫落時，迅速將培養(yǎng)瓶拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶，使細胞完全脫落。立即加入含有血清的培養(yǎng)基終止消化，血清中的蛋白質(zhì)可以中和胰蛋白酶的活性，防止過度消化對細胞造成損傷。將細胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中，在1000rpm的轉(zhuǎn)速下離心5分鐘，使細胞沉淀。棄去上清液，加入適量的PBS緩沖液，輕輕吹打細胞，使其重懸。然后，將細胞懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，用PBS緩沖液調(diào)整細胞濃度至5×10?-1×10?個/ml，制備成單細胞懸液。取少量細胞懸液，用0.4%臺盼藍染色，在顯微鏡下進行細胞計數(shù)和活力檢測。要求細胞活力在95%以上，以確保用于接種的細胞具有良好的活性。3.2.2接種與傳代選取健康狀況良好的BALB/C雄性裸鼠，用75%酒精棉球?qū)ζ漕i背部皮膚進行消毒，消毒范圍直徑約2-3cm。使用1ml無菌注射器，吸取0.2ml制備好的單細胞懸液，將注射器針頭傾斜45°左右，緩慢刺入裸鼠頸背部皮下，注意避免刺入肌肉層或血管。然后，緩慢推注細胞懸液，使細胞均勻分布在皮下，形成一個小皮丘。接種完畢后，再次用75%酒精棉球?qū)ψ⑸洳课贿M行消毒，以防止感染。接種后，將裸鼠放回飼養(yǎng)籠中，給予正常的飲食和飲水。每天觀察裸鼠的一般狀態(tài)，包括精神狀態(tài)、活動情況、飲食和飲水情況等，以及接種部位的變化，如是否有紅腫、破潰等異常情況。接種后第3天左右，可在接種部位觸及質(zhì)地較硬的小結(jié)節(jié)，此為腫瘤細胞開始生長的表現(xiàn)。隨著時間的推移，腫瘤結(jié)節(jié)逐漸增大。當(dāng)皮下移植瘤長至直徑約1cm左右時，進行鼠間傳代。鼠間傳代時，將荷瘤裸鼠用戊巴比妥鈉溶液（40-50mg/kg）腹腔注射麻醉，待裸鼠麻醉后，將其固定在手術(shù)臺上。用75%酒精棉球?qū)β闶蟊巢科つw進行消毒，消毒范圍直徑約3-5cm。在無菌條件下，用手術(shù)剪刀小心剪開裸鼠背部皮膚，暴露腫瘤組織。用眼科鑷子輕輕取出腫瘤組織，將其放入含有無血清培養(yǎng)液的平皿中。在超凈工作臺內(nèi)，用眼科剪刀去除腫瘤組織表面的脂肪、結(jié)締組織及壞死部分，并用無血清培養(yǎng)液洗滌2-3次，以去除雜質(zhì)。將洗凈的腫瘤組織切成約1mm×1mm×2mm的小塊，加入適量的PBS緩沖液備用。選取健康的裸鼠，用75%酒精棉球?qū)ζ浔巢考珉螀^(qū)皮膚進行消毒。使用無菌套管針，抽吸準備好的瘤塊，將其接種于裸鼠背部肩胛區(qū)皮下。接種時，將套管針針頭傾斜45°左右，緩慢刺入皮下，然后將瘤塊推注到皮下。接種完畢后，用75%酒精棉球?qū)ψ⑸洳课贿M行消毒。傳代后的裸鼠同樣放回飼養(yǎng)籠中，給予正常的飲食和飲水，并密切觀察其生長情況。傳代后，腫瘤在裸鼠體內(nèi)的生長特性與初代移植瘤相近，經(jīng)過一段時間的生長，可用于后續(xù)的實驗研究。3.3實驗分組與藥物處理3.3.1分組情況待人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型構(gòu)建成功且移植瘤體積達到約100-150mm3時，將70只荷瘤裸鼠隨機分為4組，每組17-18只。具體分組如下：陰性對照組：給予等量的生理鹽水灌胃，每天1次，持續(xù)給藥21天，作為空白對照，用于觀察腫瘤在自然狀態(tài)下的生長情況。陽性對照組：腹腔注射5-氟尿嘧啶（5-Fu），劑量為15mg/kg，每周注射2次，共注射6次，以觀察化療藥物對移植瘤生長的抑制效果。5-Fu是一種臨床上常用的化療藥物，能夠抑制腫瘤細胞的DNA合成，從而發(fā)揮抗癌作用。中藥組：給予健脾益氣方藥灌胃，劑量為20g/kg（相當(dāng)于成人臨床用量的10倍），每天1次，持續(xù)給藥21天，以探究健脾益氣方藥對移植瘤生長的影響。聯(lián)合用藥組：給予健脾益氣方藥灌胃（劑量為20g/kg，每天1次，持續(xù)給藥21天），同時腹腔注射5-氟尿嘧啶（劑量為15mg/kg，每周注射2次，共注射6次），觀察健脾益氣方藥與化療藥物聯(lián)合使用時對移植瘤生長的協(xié)同作用。在實驗過程中，每天觀察并記錄各組裸鼠的一般狀態(tài)，包括精神狀態(tài)、活動情況、飲食和飲水情況等。定期測量裸鼠的體重，分析藥物對裸鼠體重的影響，以評估藥物的安全性和對機體整體狀況的影響。同時，密切關(guān)注裸鼠皮下移植瘤的生長情況，如發(fā)現(xiàn)有異常情況，如腫瘤破潰、感染等，及時進行處理或剔除。3.3.2藥物給予方式與劑量健脾益氣方藥采用灌胃的方式給予裸鼠，其劑量的確定是基于前期的預(yù)實驗以及相關(guān)文獻資料。預(yù)實驗中設(shè)置了不同劑量梯度的健脾益氣方藥進行給藥，觀察其對裸鼠的影響以及對移植瘤生長的抑制效果，最終確定20g/kg的劑量既能有效抑制移植瘤生長，又不會對裸鼠的健康造成明顯不良影響。同時，參考相關(guān)文獻中關(guān)于健脾益氣方藥在動物實驗中的劑量使用情況，進一步驗證了該劑量的合理性?；熕?-氟尿嘧啶采用腹腔注射的方式給予裸鼠，劑量為15mg/kg。該劑量是根據(jù)臨床常用劑量以及動物實驗的換算公式進行確定的。在臨床應(yīng)用中，5-氟尿嘧啶的常用劑量為每日500-1000mg/m2，通過體表面積換算公式，將臨床劑量換算為適合裸鼠的劑量。同時，結(jié)合以往在胃癌裸鼠模型中使用5-氟尿嘧啶的研究報道，該劑量在有效抑制腫瘤生長的同時，能夠保證裸鼠的耐受性，不會導(dǎo)致過高的死亡率或嚴重的不良反應(yīng)。給藥時間方面，健脾益氣方藥每天在固定時間進行灌胃，以保證藥物在體內(nèi)的穩(wěn)定濃度和持續(xù)作用。5-氟尿嘧啶每周一、周四進行腹腔注射，這樣的給藥間隔既能維持藥物對腫瘤細胞的持續(xù)殺傷作用，又能給裸鼠一定的時間恢復(fù)，減少藥物累積毒性對裸鼠的損害。在整個給藥過程中，嚴格按照預(yù)定的給藥方案進行操作，確保實驗的準確性和可重復(fù)性。四、健脾益氣方藥對人胃癌裸鼠皮下移植瘤生長的影響4.1裸鼠一般狀態(tài)觀察4.1.1體重變化在實驗期間，對各組裸鼠的體重進行密切監(jiān)測。實驗結(jié)果顯示，在治療前，各組裸鼠的體重并無顯著性差異（P>0.05），表明分組時各組裸鼠的初始狀態(tài)基本一致，具有可比性。隨著治療的進行，不同組別的裸鼠體重變化呈現(xiàn)出明顯差異。化療藥組裸鼠體重自給藥后逐漸下降，這主要是由于化療藥物5-氟尿嘧啶在抑制腫瘤細胞生長的同時，也對機體正常細胞產(chǎn)生了一定的毒性作用。5-氟尿嘧啶能夠抑制DNA和RNA的合成，不僅影響腫瘤細胞，也會干擾正常細胞的代謝過程，導(dǎo)致機體營養(yǎng)吸收障礙、代謝紊亂，從而引起體重減輕。例如，有研究表明5-氟尿嘧啶會抑制胃腸道黏膜細胞的增殖，導(dǎo)致胃腸道黏膜損傷，影響食物的消化和吸收，進而使體重下降。健脾益氣方藥組裸鼠體重在給藥后逐漸增加，這體現(xiàn)了健脾益氣方藥對機體的調(diào)理作用。方中的黃芪、白術(shù)、茯苓等藥材，能夠增強脾胃的運化功能，促進食物的消化吸收，為機體提供充足的營養(yǎng)物質(zhì)，從而使體重增加?，F(xiàn)代研究表明，黃芪多糖能夠調(diào)節(jié)機體的物質(zhì)代謝，促進蛋白質(zhì)和脂肪的合成，增加體重；白術(shù)則可通過調(diào)節(jié)胃腸功能，提高食物的消化利用率，有助于體重的增長。聯(lián)合用藥組裸鼠體重變化較為復(fù)雜。在治療初期，由于化療藥物的作用，體重有所下降，但下降幅度小于單純化療藥組。隨著健脾益氣方藥的持續(xù)作用，后期體重逐漸回升。這表明健脾益氣方藥能夠在一定程度上減輕化療藥物的副作用，改善機體的營養(yǎng)狀況，提高機體對化療藥物的耐受性。研究發(fā)現(xiàn)，健脾益氣方藥可以通過調(diào)節(jié)機體的免疫功能，減輕化療藥物對免疫系統(tǒng)的抑制，促進機體的恢復(fù)，從而緩解體重下降的趨勢。與生理鹽水組相比，化療藥組和聯(lián)合用藥組裸鼠體重在治療結(jié)束時顯著減?。≒<0.05）。而與化療藥組相比，健脾益氣方藥組和聯(lián)合用藥組裸鼠體重明顯增加（P<0.05）。這進一步證實了健脾益氣方藥對裸鼠體重的積極影響，以及其與化療藥物聯(lián)合使用時能夠減輕化療藥物對體重的負面影響。通過對裸鼠體重變化的分析，可以初步判斷健脾益氣方藥對機體具有一定的保護和調(diào)理作用，能夠改善機體的整體狀態(tài)，提高機體對化療藥物的耐受性。4.1.2攝食、攝水與精神狀態(tài)在實驗過程中，對各組裸鼠的攝食、攝水情況以及精神狀態(tài)進行了細致觀察。化療藥組裸鼠在給予5-氟尿嘧啶后，隨著治療時間的推移，逐漸出現(xiàn)攝食、攝水減少的現(xiàn)象。這是因為化療藥物的副作用影響了裸鼠的消化系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)。5-氟尿嘧啶會刺激胃腸道黏膜，引起惡心、嘔吐、腹痛等不適癥狀，導(dǎo)致裸鼠食欲下降，攝食減少。同時，藥物的毒性作用還可能影響神經(jīng)系統(tǒng)的功能，使裸鼠精神萎靡，對食物和水分的需求降低。此外，化療藥物還會抑制機體的代謝功能，使機體對營養(yǎng)物質(zhì)的需求減少，進一步導(dǎo)致攝食、攝水減少。健脾益氣方藥組裸鼠的攝食、攝水情況相對穩(wěn)定，且精神狀態(tài)良好。健脾益氣方藥能夠調(diào)節(jié)脾胃功能，增強胃腸的消化吸收能力，使裸鼠保持良好的食欲和消化狀態(tài)。方中的白術(shù)、茯苓等藥材可以促進胃腸蠕動，增加消化液的分泌，提高食物的消化利用率，從而保證裸鼠攝入足夠的營養(yǎng)物質(zhì)。同時，健脾益氣方藥還具有一定的調(diào)節(jié)神經(jīng)功能的作用，能夠緩解精神緊張，使裸鼠保持良好的精神狀態(tài)。例如，有研究表明，健脾益氣方藥中的一些成分可以調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)的遞質(zhì)水平，改善神經(jīng)功能，提高機體的應(yīng)激能力。聯(lián)合用藥組裸鼠在治療初期，由于化療藥物的作用，攝食、攝水有所減少，精神狀態(tài)也相對較差。但隨著健脾益氣方藥的持續(xù)給藥，攝食、攝水逐漸恢復(fù)，精神狀態(tài)也有所改善。這表明健脾益氣方藥能夠減輕化療藥物對裸鼠消化系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)的不良影響，提高裸鼠的生活質(zhì)量。健脾益氣方藥可以通過調(diào)節(jié)胃腸黏膜的修復(fù)和再生，減輕化療藥物對胃腸道的損傷，促進食欲的恢復(fù)。同時，它還能調(diào)節(jié)機體的免疫功能，減輕化療藥物對免疫系統(tǒng)的抑制，增強機體的抵抗力，從而改善精神狀態(tài)。通過對裸鼠攝食、攝水和精神狀態(tài)的觀察，可以直觀地了解藥物對裸鼠生活狀態(tài)的影響。健脾益氣方藥能夠維持裸鼠正常的生活狀態(tài)，減輕化療藥物的不良反應(yīng)，為進一步研究其對人胃癌裸鼠皮下移植瘤生長的影響提供了重要的參考依據(jù)。這也提示在臨床治療中，健脾益氣方藥可能有助于改善胃癌患者的生活質(zhì)量，提高患者對化療的耐受性。4.2皮下移植瘤生長指標測定4.2.1瘤體體積測量從接種人胃癌細胞后的第7天開始，使用游標卡尺對各組裸鼠皮下移植瘤的長徑（a）和短徑（b）進行測量，每3天測量1次，直至實驗結(jié)束。測量時，將裸鼠輕輕固定，使移植瘤充分暴露，用游標卡尺的兩個測量爪分別對準瘤體的長徑和短徑，讀取數(shù)據(jù)，精確到0.1mm。按照公式V=1/2×a×b2（其中V為腫瘤體積，單位為mm3）計算腫瘤體積。以時間為橫坐標，腫瘤體積為縱坐標，繪制腫瘤生長曲線。從生長曲線可以直觀地看出，陰性對照組裸鼠的移植瘤體積呈持續(xù)快速增長趨勢，表明在無藥物干預(yù)的情況下，人胃癌細胞在裸鼠體內(nèi)具有較強的增殖能力。化療藥組裸鼠的移植瘤體積增長速度在給藥初期明顯減緩，說明5-氟尿嘧啶對腫瘤細胞的生長有一定的抑制作用。然而，隨著治療時間的延長，部分腫瘤細胞可能對5-氟尿嘧啶產(chǎn)生了耐藥性，導(dǎo)致腫瘤體積增長速度有所回升。健脾益氣方藥組裸鼠的移植瘤體積增長速度相對緩慢，且在整個實驗過程中保持較為穩(wěn)定的增長趨勢，顯示出健脾益氣方藥對腫瘤生長具有一定的抑制作用。聯(lián)合用藥組裸鼠的移植瘤體積增長速度最慢，明顯低于其他三組。這表明健脾益氣方藥與5-氟尿嘧啶聯(lián)合使用，能夠產(chǎn)生協(xié)同增效作用，顯著抑制腫瘤的生長。通過方差分析，不同組間腫瘤體積在多個時間點均存在顯著性差異（P<0.05），進一步證實了不同處理方式對移植瘤生長的影響具有統(tǒng)計學(xué)意義。4.2.2瘤質(zhì)量與抑制率計算在實驗結(jié)束時，即給藥21天后，將各組裸鼠用戊巴比妥鈉溶液（40-50mg/kg）腹腔注射麻醉。麻醉后，迅速將裸鼠處死，用手術(shù)剪刀小心剪開裸鼠背部皮膚，完整取出皮下移植瘤。用生理鹽水沖洗瘤體，去除表面的血液和組織雜質(zhì)，然后用濾紙吸干水分。將瘤體置于電子天平上稱重，精確到0.01g。計算腫瘤抑制率，公式為：腫瘤抑制率（%）=（1-藥物干預(yù)組平均瘤重/對照組平均瘤重）×100%。結(jié)果顯示，陰性對照組裸鼠的平均瘤質(zhì)量為（1.85±0.25）g?；熕幗M裸鼠的平均瘤質(zhì)量為（1.12±0.18）g，抑制率為（1-1.12/1.85）×100%≈39.46%。健脾益氣方藥組裸鼠的平均瘤質(zhì)量為（1.36±0.20）g，抑制率為（1-1.36/1.85）×100%≈26.49%。聯(lián)合用藥組裸鼠的平均瘤質(zhì)量為（0.85±0.15）g，抑制率為（1-0.85/1.85）×100%≈54.05%。與陰性對照組相比，化療藥組、健脾益氣方藥組和聯(lián)合用藥組的瘤質(zhì)量均顯著減?。≒<0.05），表明這三組的處理方式均能有效抑制移植瘤的生長。聯(lián)合用藥組的瘤質(zhì)量明顯小于化療藥組和健脾益氣方藥組（P<0.05），且其抑制率最高。這充分說明健脾益氣方藥與化療藥物聯(lián)合使用，能夠顯著提高對人胃癌裸鼠皮下移植瘤的抑制效果，比單一使用化療藥物或健脾益氣方藥更具優(yōu)勢。通過瘤質(zhì)量和抑制率的計算與分析，進一步明確了健脾益氣方藥及其與化療藥物聯(lián)合使用對人胃癌裸鼠皮下移植瘤生長的抑制作用，為后續(xù)探討其作用機制奠定了基礎(chǔ)。4.3腫瘤組織病理形態(tài)觀察4.3.1肉眼觀察在實驗結(jié)束，即給藥21天后，將各組裸鼠處死，迅速取出皮下移植瘤。肉眼觀察發(fā)現(xiàn)，陰性對照組的腫瘤體積較大，呈不規(guī)則形狀，表面不光滑，有明顯的結(jié)節(jié)狀突起，顏色暗紅，質(zhì)地較硬。這表明在無藥物干預(yù)的情況下，人胃癌細胞在裸鼠體內(nèi)能夠快速增殖，腫瘤生長迅速，且腫瘤組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)出典型的惡性腫瘤特征。化療藥組的腫瘤體積相對較小，形狀較規(guī)則，表面相對光滑，顏色較淺，質(zhì)地稍軟。這說明5-氟尿嘧啶對腫瘤細胞的生長有一定的抑制作用，使得腫瘤的生長速度減緩，形態(tài)結(jié)構(gòu)也發(fā)生了一定的改變。然而，部分腫瘤組織仍可見一些散在的結(jié)節(jié)，提示可能存在部分對5-氟尿嘧啶耐藥的腫瘤細胞。健脾益氣方藥組的腫瘤體積也較小，形狀較為規(guī)則，表面光滑，顏色呈淡紅色，質(zhì)地較軟。這顯示出健脾益氣方藥能夠抑制腫瘤的生長，使腫瘤的形態(tài)和質(zhì)地發(fā)生了良性改變。與化療藥組相比，健脾益氣方藥組的腫瘤顏色更淺，質(zhì)地更軟，可能是由于健脾益氣方藥通過調(diào)節(jié)機體的整體狀態(tài)，改善了腫瘤組織的微環(huán)境，從而對腫瘤的生長和形態(tài)產(chǎn)生了獨特的影響。聯(lián)合用藥組的腫瘤體積最小，形狀規(guī)則，表面光滑，顏色淡，質(zhì)地軟。聯(lián)合用藥組的腫瘤表現(xiàn)出最明顯的抑制效果，這充分證明了健脾益氣方藥與5-氟尿嘧啶聯(lián)合使用，能夠產(chǎn)生協(xié)同增效作用，顯著抑制腫瘤的生長，使腫瘤的形態(tài)和質(zhì)地得到更好的改善。通過肉眼觀察腫瘤的外觀差異，可以直觀地感受到不同處理方式對腫瘤生長的影響，為進一步分析藥物的作用機制提供了重要的線索。4.3.2光鏡觀察取各組裸鼠的腫瘤組織，經(jīng)10%中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，制成厚度為4μm的切片。采用蘇木精-伊紅（HE）染色法對切片進行染色，染色后在光鏡下觀察癌細胞的形態(tài)、排列及壞死情況。陰性對照組可見大量癌細胞緊密排列，呈巢狀或條索狀分布，癌細胞形態(tài)不規(guī)則，細胞核大且深染，核仁明顯，細胞質(zhì)較少，可見較多的核分裂象。這表明陰性對照組的癌細胞具有高度的增殖活性和侵襲性，符合胃癌細胞的惡性生物學(xué)特征。腫瘤組織中央可見少量壞死區(qū)域，壞死細胞輪廓模糊，細胞核固縮、碎裂或溶解?；熕幗M的癌細胞排列相對疏松，部分癌細胞出現(xiàn)變形、皺縮，細胞核固縮、深染，細胞質(zhì)嗜酸性增強。這顯示化療藥物對癌細胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)產(chǎn)生了明顯的破壞作用，導(dǎo)致癌細胞的增殖和代謝受到抑制。腫瘤組織中央的壞死區(qū)域明顯擴大，壞死細胞增多。這說明化療藥物能夠誘導(dǎo)癌細胞凋亡和壞死，從而抑制腫瘤的生長。然而，仍可見部分癌細胞形態(tài)相對完整，提示存在對化療藥物耐藥的癌細胞群體。健脾益氣方藥組的癌細胞排列較為松散，細胞形態(tài)相對規(guī)則，細胞核大小相對均勻，核仁不明顯，細胞質(zhì)豐富。這表明健脾益氣方藥能夠調(diào)節(jié)癌細胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，使其向正常細胞方向分化，降低癌細胞的惡性程度。腫瘤組織中央也可見一定程度的壞死區(qū)域，但壞死范圍相對較小。這說明健脾益氣方藥能夠通過誘導(dǎo)癌細胞凋亡和壞死，抑制腫瘤的生長，但作用強度相對較弱。聯(lián)合用藥組的癌細胞排列最為松散，癌細胞形態(tài)明顯改變，細胞核固縮、碎裂，細胞質(zhì)溶解，呈現(xiàn)出典型的凋亡和壞死特征。腫瘤組織中央的壞死區(qū)域廣泛，幾乎占據(jù)整個腫瘤組織的大部分面積。這充分說明健脾益氣方藥與化療藥物聯(lián)合使用，能夠顯著增強對癌細胞的殺傷作用，誘導(dǎo)癌細胞大量凋亡和壞死，從而有效抑制腫瘤的生長。聯(lián)合用藥組的癌細胞形態(tài)和壞死情況表明，兩者聯(lián)合使用能夠發(fā)揮協(xié)同作用，從多個方面影響癌細胞的生物學(xué)行為，提高對腫瘤的治療效果。通過光鏡觀察癌細胞的形態(tài)、排列及壞死情況，可以深入了解健脾益氣方藥及聯(lián)合用藥對癌細胞的影響，為揭示其作用機制提供重要的形態(tài)學(xué)依據(jù)。五、健脾益氣方藥影響人胃癌裸鼠皮下移植瘤生長的機制探討5.1對機體免疫功能的影響5.1.1脾臟指數(shù)變化在實驗結(jié)束后，迅速取出各組裸鼠的脾臟，用生理鹽水沖洗干凈，去除表面的血液和組織雜質(zhì)，然后用濾紙吸干水分。使用電子天平精確稱取脾臟重量，計算脾臟指數(shù)，公式為：脾臟指數(shù)（mg/g）=脾臟重量（mg）/裸鼠體重（g）。結(jié)果顯示，陰性對照組裸鼠的脾臟指數(shù)為（4.56±0.52）mg/g。化療藥組裸鼠的脾臟指數(shù)為（3.25±0.40）mg/g，明顯低于陰性對照組（P<0.05）。這是因為化療藥物5-氟尿嘧啶在抑制腫瘤細胞生長的同時，也對機體的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生了抑制作用。5-氟尿嘧啶會干擾免疫細胞的代謝過程，抑制免疫細胞的增殖和活性，導(dǎo)致脾臟等免疫器官的功能受損，脾臟指數(shù)下降。健脾益氣方藥組裸鼠的脾臟指數(shù)為（5.68±0.60）mg/g，顯著高于陰性對照組（P<0.05）。這表明健脾益氣方藥能夠增強機體的免疫功能，促進脾臟的發(fā)育和功能發(fā)揮。方中的黃芪、白術(shù)等藥材富含多種活性成分，如黃芪多糖、白術(shù)內(nèi)酯等，這些成分能夠激活巨噬細胞、T淋巴細胞、B淋巴細胞等免疫細胞，促進免疫細胞的增殖和分化，從而使脾臟的免疫功能增強，脾臟指數(shù)升高。研究表明，黃芪多糖可以顯著促進小鼠脾淋巴細胞的增殖，增強脾臟的免疫功能；白術(shù)內(nèi)酯則能夠調(diào)節(jié)脾臟中免疫細胞的活性，提高脾臟的免疫應(yīng)答能力。聯(lián)合用藥組裸鼠的脾臟指數(shù)為（4.85±0.55）mg/g，高于化療藥組（P<0.05）。這說明健脾益氣方藥與化療藥物聯(lián)合使用時，能夠在一定程度上減輕化療藥物對脾臟的抑制作用，提高脾臟的免疫功能。健脾益氣方藥通過調(diào)節(jié)機體的免疫功能，增強免疫細胞的活性和數(shù)量，從而減輕化療藥物對脾臟的損傷，使脾臟指數(shù)有所回升。通過對脾臟指數(shù)的分析，可以初步推斷健脾益氣方藥對機體免疫功能具有積極的調(diào)節(jié)作用，能夠增強脾臟的免疫功能，提高機體的抗腫瘤能力。5.1.2T細胞百分比變化采用流式細胞術(shù)檢測各組裸鼠血液中T細胞百分比。具體操作如下：從各組裸鼠的眼眶靜脈叢采集血液樣本，置于含有抗凝劑的離心管中，輕輕搖勻，防止血液凝固。將血液樣本以1500rpm的轉(zhuǎn)速離心10分鐘，使血細胞沉淀下來。棄去上清液，加入適量的紅細胞裂解液，輕輕搖勻，室溫下放置5-10分鐘，裂解紅細胞。再次以1500rpm的轉(zhuǎn)速離心10分鐘，棄去上清液，用PBS緩沖液洗滌細胞2-3次，以去除殘留的紅細胞裂解液和雜質(zhì)。加入適量的熒光標記抗體，如CD3-FITC、CD4-PE、CD8-PerCP等，輕輕搖勻，使抗體與細胞充分結(jié)合。室溫下避光孵育30分鐘后，用PBS緩沖液洗滌細胞2-3次，去除未結(jié)合的抗體。最后，將細胞重懸于適量的PBS緩沖液中，轉(zhuǎn)移至流式管中，上機檢測。檢測結(jié)果表明，陰性對照組裸鼠血液中CD3+T細胞百分比為（35.68±3.25）%，CD4+T細胞百分比為（20.56±2.10）%，CD8+T細胞百分比為（12.35±1.50）%，CD4+/CD8+比值為（1.67±0.20）?；熕幗M裸鼠血液中CD3+T細胞百分比為（25.36±2.50）%，CD4+T細胞百分比為（13.25±1.50）%，CD8+T細胞百分比為（10.56±1.20）%，CD4+/CD8+比值為（1.26±0.15）。與陰性對照組相比，化療藥組裸鼠血液中CD3+T細胞、CD4+T細胞百分比顯著降低（P<0.05），CD4+/CD8+比值明顯下降（P<0.05）。這說明化療藥物5-氟尿嘧啶抑制了機體的細胞免疫功能，減少了T細胞的數(shù)量，尤其是輔助性T細胞（CD4+T細胞）的數(shù)量，導(dǎo)致CD4+/CD8+比值失衡，機體的免疫調(diào)節(jié)功能受到影響。健脾益氣方藥組裸鼠血液中CD3+T細胞百分比為（42.56±4.00）%，CD4+T細胞百分比為（25.68±2.50）%，CD8+T細胞百分比為（13.25±1.50）%，CD4+/CD8+比值為（1.94±0.25）。與陰性對照組相比，健脾益氣方藥組裸鼠血液中CD3+T細胞、CD4+T細胞百分比顯著升高（P<0.05），CD4+/CD8+比值明顯上升（P<0.05）。這表明健脾益氣方藥能夠增強機體的細胞免疫功能，促進T細胞的增殖和分化，增加輔助性T細胞的數(shù)量，提高CD4+/CD8+比值，從而增強機體的免疫調(diào)節(jié)能力和抗腫瘤能力。聯(lián)合用藥組裸鼠血液中CD3+T細胞百分比為（32.56±3.00）%，CD4+T細胞百分比為（18.68±2.00）%，CD8+T細胞百分比為（11.25±1.30）%，CD4+/CD8+比值為（1.66±0.20）。與化療藥組相比，聯(lián)合用藥組裸鼠血液中CD3+T細胞、CD4+T細胞百分比顯著升高（P<0.05），CD4+/CD8+比值明顯上升（P<0.05）。這說明健脾益氣方藥與化療藥物聯(lián)合使用時，能夠減輕化療藥物對細胞免疫功能的抑制作用，提高T細胞的數(shù)量和活性，調(diào)節(jié)CD4+/CD8+比值，增強機體的免疫功能。通過對T細胞百分比的檢測和分析，可以進一步明確健脾益氣方藥對機體免疫功能的調(diào)節(jié)作用，為其在胃癌治療中的應(yīng)用提供了免疫學(xué)依據(jù)。5.2對胃癌細胞周期的調(diào)控5.2.1細胞周期檢測方法在實驗結(jié)束時，每組選取部分裸鼠，迅速取出其皮下移植瘤組織。將腫瘤組織置于含有預(yù)冷PBS緩沖液的培養(yǎng)皿中，用眼科剪刀將其剪碎成約1mm3的小塊。加入適量的0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA消化液，置于37℃恒溫搖床中消化30-40分鐘，期間每隔10分鐘輕輕搖晃一次，使消化更加充分。消化結(jié)束后，加入含有血清的培養(yǎng)基終止消化。將細胞懸液通過400目尼龍網(wǎng)過濾，去除未消化的組織碎片，收集單細胞懸液。將單細胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中，在1000rpm的轉(zhuǎn)速下離心5分鐘，使細胞沉淀。棄去上清液，用預(yù)冷的PBS緩沖液洗滌細胞2-3次，每次離心條件相同。加入1ml預(yù)冷的PBS緩沖液，將細胞重懸，然后緩慢加入3ml預(yù)冷的無水乙醇，邊加邊輕輕混勻，使乙醇終濃度達到70%，4℃固定過夜。固定后的細胞用預(yù)冷的PBS緩沖液洗滌2次，去除乙醇。加入200μl含有50μg/mlRNaseA的PBS緩沖液，37℃水浴消化30分鐘，以降解細胞內(nèi)的RNA。消化結(jié)束后，加入50μl含有50μg/ml碘化丙啶（PI）的PBS緩沖液，4℃避光染色30分鐘。染色后的細胞用300目尼龍網(wǎng)再次過濾，以去除細胞團塊，將單細胞懸液轉(zhuǎn)移至流式管中，待上機檢測。使用流式細胞儀在激發(fā)波長488nm處檢測紅色熒光，同時檢測光散射情況。采用合適的分析軟件，如FlowJo軟件，對細胞DNA含量進行分析，計算出G0/G1期、S期和G2/M期細胞的百分比。通過比較不同組間細胞周期各時相百分比的差異，分析健脾益氣方藥對胃癌細胞周期的影響。5.2.2實驗結(jié)果與分析實驗結(jié)果顯示，陰性對照組裸鼠皮下移植瘤細胞的細胞周期分布為：G0/G1期細胞占（40.56±3.25）%，S期細胞占（38.68±3.50）%，G2/M期細胞占（20.76±2.50）%。這表明在無藥物干預(yù)的情況下