生物技術(shù)制藥人員職業(yè)技能鑒定經(jīng)典試題含答案工種：生物技術(shù)制藥人員等級(jí)：中級(jí)時(shí)間：120分鐘滿(mǎn)分：100分一、單項(xiàng)選擇題（每題1分，共20分）1.生物技術(shù)制藥中，最常用的基因表達(dá)載體是（）。A.病毒載體B.質(zhì)粒載體C.噬菌體載體D.真核表達(dá)載體2.下列哪種酶主要用于PCR反應(yīng)中DNA的擴(kuò)增？（）A.DNA連接酶B.DNA聚合酶C.限制性?xún)?nèi)切酶D.轉(zhuǎn)錄酶3.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，最常用的培養(yǎng)基添加物是（）。A.胰島素B.胎牛血清C.酶抑制劑D.碳酸鈣4.下列哪種方法可用于檢測(cè)蛋白質(zhì)的純度？（）A.凝膠電泳B.紫外分光光度法C.薄層色譜D.免疫印跡5.生物反應(yīng)器中，最關(guān)鍵的參數(shù)是（）。A.溫度B.pH值C.溶解氧D.壓力6.下列哪種方法可用于去除細(xì)胞培養(yǎng)液中的細(xì)胞碎片？（）A.超濾B.離心C.過(guò)濾D.吸附7.重組蛋白的純化通常采用（）。A.層析技術(shù)B.電泳技術(shù)C.免疫沉淀D.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)8.下列哪種緩沖液常用于蛋白質(zhì)結(jié)晶實(shí)驗(yàn)？（）A.Tris-HClB.PBSC.甘氨酸緩沖液D.MOPS9.下列哪種方法可用于檢測(cè)基因的表達(dá)水平？（）A.RT-PCRB.WesternBlotC.ELISAD.流式細(xì)胞術(shù)10.生物技術(shù)制藥中，最常用的滅菌方法是（）。A.離子輻射B.熱壓滅菌C.紫外線(xiàn)照射D.化學(xué)滅菌11.下列哪種方法可用于檢測(cè)細(xì)胞毒性？（）A.MTT法B.LDH釋放實(shí)驗(yàn)C.細(xì)胞計(jì)數(shù)D.蛋白質(zhì)印跡12.下列哪種方法可用于提高抗體效價(jià)？（）A.純化抗原B.增加抗原劑量C.優(yōu)化免疫途徑D.以上都是13.下列哪種酶可用于DNA的切割？（）A.DNA連接酶B.DNA聚合酶C.限制性?xún)?nèi)切酶D.轉(zhuǎn)錄酶14.下列哪種方法可用于檢測(cè)細(xì)胞增殖？（）A.CCK-8法B.AlamarBlue法C.細(xì)胞凋亡檢測(cè)D.以上都是15.下列哪種方法可用于提高蛋白質(zhì)表達(dá)量？（）A.優(yōu)化表達(dá)載體B.調(diào)控誘導(dǎo)條件C.增加培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)D.以上都是16.下列哪種方法可用于檢測(cè)細(xì)胞凋亡？（）A.TUNEL法B.流式細(xì)胞術(shù)C.Caspase活性檢測(cè)D.以上都是17.下列哪種緩沖液常用于酶活性測(cè)定？（）A.Tris-HClB.MOPSC.磷酸緩沖液（PBS）D.以上都是18.下列哪種方法可用于檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧水平？（）A.DCFH-DA探針B.H2DCF-DA探針C.FACS分析D.以上都是19.下列哪種方法可用于提高重組蛋白的折疊效率？（）A.優(yōu)化表達(dá)條件B.包涵體復(fù)性C.體外轉(zhuǎn)錄翻譯D.以上都是20.下列哪種方法可用于檢測(cè)細(xì)胞膜完整性？（）A.LDH釋放實(shí)驗(yàn)B.MTT法C.細(xì)胞計(jì)數(shù)D.蛋白質(zhì)印跡二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共10分）1.下列哪些是常用的基因表達(dá)載體？（）A.病毒載體B.質(zhì)粒載體C.噬菌體載體D.真核表達(dá)載體2.下列哪些方法可用于蛋白質(zhì)純化？（）A.層析技術(shù)B.電泳技術(shù)C.免疫沉淀D.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)3.下列哪些是生物反應(yīng)器中的關(guān)鍵參數(shù)？（）A.溫度B.pH值C.溶解氧D.壓力4.下列哪些方法可用于檢測(cè)細(xì)胞毒性？（）A.MTT法B.LDH釋放實(shí)驗(yàn)C.細(xì)胞計(jì)數(shù)D.蛋白質(zhì)印跡5.下列哪些方法可用于提高抗體效價(jià)？（）A.純化抗原B.增加抗原劑量C.優(yōu)化免疫途徑D.以上都是三、判斷題（每題1分，共10分）1.PCR反應(yīng)中，引物是DNA的擴(kuò)增所必需的。（）2.胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中必不可少的添加物。（）3.凝膠電泳可用于檢測(cè)蛋白質(zhì)的純度。（）4.生物反應(yīng)器中，最關(guān)鍵的參數(shù)是溫度。（）5.超濾可用于去除細(xì)胞培養(yǎng)液中的細(xì)胞碎片。（）6.層析技術(shù)是重組蛋白純化的常用方法。（）7.RT-PCR可用于檢測(cè)基因的表達(dá)水平。（）8.熱壓滅菌是生物技術(shù)制藥中常用的滅菌方法。（）9.MTT法可用于檢測(cè)細(xì)胞毒性。（）10.細(xì)胞凋亡檢測(cè)是常用的細(xì)胞毒性檢測(cè)方法。（）四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共20分）1.簡(jiǎn)述PCR反應(yīng)的基本原理。2.簡(jiǎn)述細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中常用的培養(yǎng)基成分及其作用。3.簡(jiǎn)述蛋白質(zhì)純化的基本步驟。4.簡(jiǎn)述生物反應(yīng)器中常用的參數(shù)及其控制方法。五、論述題（每題10分，共20分）1.論述重組蛋白表達(dá)的主要方法及其優(yōu)缺點(diǎn)。2.論述細(xì)胞毒性檢測(cè)的方法及其意義。答案及解析一、單項(xiàng)選擇題1.B解析：質(zhì)粒載體是生物技術(shù)制藥中最常用的基因表達(dá)載體，因其易于操作和改造。2.B解析：DNA聚合酶是PCR反應(yīng)中DNA擴(kuò)增的關(guān)鍵酶，負(fù)責(zé)合成新的DNA鏈。3.B解析：胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中常用的添加物，提供必需的激素、生長(zhǎng)因子和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。4.A解析：凝膠電泳是檢測(cè)蛋白質(zhì)純度的常用方法，可通過(guò)條帶數(shù)量和亮度判斷純度。5.C解析：溶解氧是生物反應(yīng)器中最重要的參數(shù)之一，直接影響細(xì)胞代謝和產(chǎn)物合成。6.B解析：離心是去除細(xì)胞培養(yǎng)液中細(xì)胞碎片的常用方法，通過(guò)離心力分離固體和液體。7.A解析：層析技術(shù)是重組蛋白純化的常用方法，包括離子交換層析、凝膠過(guò)濾層析等。8.C解析：甘氨酸緩沖液常用于蛋白質(zhì)結(jié)晶實(shí)驗(yàn)，因其pH值范圍廣且穩(wěn)定性好。9.A解析：RT-PCR是檢測(cè)基因表達(dá)水平的常用方法，通過(guò)反轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增mRNA。10.B解析：熱壓滅菌是生物技術(shù)制藥中常用的滅菌方法，有效殺滅細(xì)菌和病毒。11.A解析：MTT法是檢測(cè)細(xì)胞毒性的常用方法，通過(guò)細(xì)胞代謝活性判斷細(xì)胞毒性。12.D解析：提高抗體效價(jià)的常用方法包括純化抗原、增加抗原劑量和優(yōu)化免疫途徑。13.C解析：限制性?xún)?nèi)切酶是DNA切割的常用酶，通過(guò)識(shí)別特定序列切割DNA。14.D解析：檢測(cè)細(xì)胞增殖的方法包括CCK-8法、AlamarBlue法和細(xì)胞凋亡檢測(cè)。15.D解析：提高蛋白質(zhì)表達(dá)量的方法包括優(yōu)化表達(dá)載體、調(diào)控誘導(dǎo)條件和增加培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)。16.D解析：檢測(cè)細(xì)胞凋亡的方法包括TUNEL法、流式細(xì)胞術(shù)和Caspase活性檢測(cè)。17.D解析：酶活性測(cè)定常用的緩沖液包括Tris-HCl、MOPS和磷酸緩沖液（PBS）。18.D解析：檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧水平的方法包括DCFH-DA探針、FACS分析和流式細(xì)胞術(shù)。19.D解析：提高重組蛋白折疊效率的方法包括優(yōu)化表達(dá)條件、包涵體復(fù)性和體外轉(zhuǎn)錄翻譯。20.A解析：檢測(cè)細(xì)胞膜完整性的常用方法包括LDH釋放實(shí)驗(yàn)和MTT法。二、多項(xiàng)選擇題1.ABCD解析：常用的基因表達(dá)載體包括病毒載體、質(zhì)粒載體、噬菌體載體和真核表達(dá)載體。2.AC解析：蛋白質(zhì)純化的常用方法包括層析技術(shù)和免疫沉淀，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)不用于純化。3.ABCD解析：生物反應(yīng)器中的關(guān)鍵參數(shù)包括溫度、pH值、溶解氧和壓力。4.AB解析：檢測(cè)細(xì)胞毒性的常用方法包括MTT法和LDH釋放實(shí)驗(yàn)。5.D解析：提高抗體效價(jià)的常用方法包括純化抗原、增加抗原劑量和優(yōu)化免疫途徑。三、判斷題1.√2.√3.√4.×5.√6.√7.√8.√9.√10.√四、簡(jiǎn)答題1.PCR反應(yīng)的基本原理PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）是一種在體外擴(kuò)增特定DNA片段的技術(shù)，基本原理包括：-變性：高溫（95℃）使DNA雙鏈分離為單鏈。-退火：低溫（55-65℃）使引物與目標(biāo)DNA序列結(jié)合。-延伸：中溫（72℃）使DNA聚合酶（如Taq酶）合成新的DNA鏈。通過(guò)循環(huán)上述步驟，目標(biāo)DNA片段呈指數(shù)級(jí)擴(kuò)增。2.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中常用的培養(yǎng)基成分及其作用-基礎(chǔ)鹽：提供必需的離子（如Na+,K+,Ca2+）。-氨基酸：提供蛋白質(zhì)合成原料（如甘氨酸、谷氨酰胺）。-維生素：參與代謝和細(xì)胞生長(zhǎng)（如B族維生素）。-胎牛血清：提供生長(zhǎng)因子、激素和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。-糖類(lèi)：提供能量（如葡萄糖）。3.蛋白質(zhì)純化的基本步驟-粗提：通過(guò)離心或過(guò)濾去除細(xì)胞碎片。-層析：利用離子交換、凝膠過(guò)濾或親和層析分離目標(biāo)蛋白。-濃縮：通過(guò)超濾或透析濃縮蛋白溶液。-檢測(cè)：通過(guò)SDS或WesternBlot驗(yàn)證純度。4.生物反應(yīng)器中常用的參數(shù)及其控制方法-溫度：通過(guò)加熱/冷卻系統(tǒng)控制，維持最佳生長(zhǎng)溫度。-pH值：通過(guò)酸/堿泵調(diào)節(jié)，維持最佳pH范圍。-溶解氧：通過(guò)通氣或攪拌增加氧氣供應(yīng)。-壓力：通過(guò)壓力傳感器和控制系統(tǒng)維持穩(wěn)定。五、論述題1.重組蛋白表達(dá)的主要方法及其優(yōu)缺點(diǎn)-原核表達(dá)系統(tǒng)（如E.coli）：-優(yōu)點(diǎn)：高效、成本低、表達(dá)量高。-缺點(diǎn)：可能產(chǎn)生錯(cuò)誤折疊蛋白，需優(yōu)化折疊條件。-真核表達(dá)系統(tǒng)（如CHO細(xì)胞）：-優(yōu)點(diǎn)：可正確折疊和糖基化，適合分泌表達(dá)。-缺點(diǎn)