2025/7/2第六章

高效液相色譜分析法一、高效液相色譜儀HPLC二、高效液相色譜法的特點(diǎn)featureofHPLC三、流程及主要部件generalprocessandmainassemblyofHPLC第二節(jié)

高效液相色譜儀器highperformanceliquidchromatographinstrumentofHPLC2025/7/2高效液相色譜儀1——Agilent安捷倫

2025/7/2高效液相色譜儀2

——島津

2025/7/22025/7/2高效液相色譜儀3——Waters沃特世2025/7/2一、高效液相色譜法的特點(diǎn)

特點(diǎn)：高速、高效、高靈敏度；適用范圍：高沸點(diǎn)、熱不穩(wěn)定有機(jī)及生化試樣的高效分離分析方法。您輕松完成實(shí)驗(yàn)室分析工作從LC-16開始…02-7月-257Essentia始于科技終于簡便泵單元自動進(jìn)樣器在線脫氣機(jī)溶劑托盤紫外檢測器柱溫箱手持控制器2025/7/2二、流程及主要部件

processandmainassemblyofHPLC(一)流程

高效液相色譜儀：高壓輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)、記錄系統(tǒng)等五大部分組成。2025/7/22025/7/22025/7/2(二)主要組成部分

1.

高壓輸液系統(tǒng)

高壓輸液系統(tǒng)由溶劑（流動相）貯存器、高壓泵、梯度洗脫裝置和壓力表等組成。（1）溶劑貯存器：溶劑貯存器容量一般為1~2L，用來貯存足夠數(shù)量、符合要求的流動相溶劑；2025/7/2流動相類別按極性：極性、弱極性、非極性；按使用方式：固定組成洗脫（等度洗脫）和梯度洗脫。常用溶劑：甲醇、乙腈、水、己烷、丙酮、乙醇、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯等。

2025/7/2流動相的過濾經(jīng)0.45μm的微孔濾膜過濾，再脫氣15min。流動相過濾裝置：真空過濾、在線過濾真空過濾裝置0.45μm的濾膜（有機(jī)相、水相）流動相（溶劑）2025/7/2流動相的脫氣流動相脫氣裝置：超聲波脫氣、在線真空脫氣超聲波脫氣2025/7/2在線真空脫氣排氣閥2025/7/2在線真空脫氣排氣閥2025/7/2（2）高壓輸液泵：關(guān)鍵部件之一作用：將溶劑貯存器中的流動相以高壓形式連續(xù)不斷地送入液路系統(tǒng)，使樣品在色譜柱中完成分離過程。由于液相色譜所用色譜柱內(nèi)徑較細(xì)，固定相粒度很小，因此，對流動相的阻力較大，為了使流動相能較快地流過色譜柱，就需要高壓泵注入流動相。對泵的要求：輸出壓力高、流量范圍大、流量穩(wěn)定、無脈動、耐腐蝕等特性，流量精度和重復(fù)性為0.5%左右，還應(yīng)密封性好。2025/7/2流動相組成：改變流動相的組成，流動相的極性改變，改善分離效果。2025/7/2

在選擇溶劑時，溶劑的極性是選擇的重要依據(jù)。常用溶劑的極性順序：水(最大)>甲酰胺>乙腈>甲醇>乙醇>丙醇>丙酮>二氧六環(huán)>四氫呋喃>甲乙酮>正丁醇>乙酸乙酯>乙醚>異丙醚>二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>甲苯>CCl4

>CS2>環(huán)己烷>己烷2025/7/2(3)梯度洗脫裝置梯度洗脫：將兩種或兩種以上不同的溶劑按一定比例混合，作為流動相，使流動相的極性、pH或離子強(qiáng)度相應(yīng)地變化，達(dá)到提高分離效果，縮短分析時間的目的。2025/7/2梯度洗脫：實(shí)質(zhì)：通過不斷地變化流動相的組成，來調(diào)整混合樣品中各組分的分配比k值，使所有組分都以最佳k值通過色譜柱。

作用：相當(dāng)于氣相色譜中的程序升溫；所不同的是，在梯度洗脫中組分k值的變化是通過改變流動相的極性、pH和離子強(qiáng)度來實(shí)現(xiàn)的，而不是借改變溫度（溫度程序）來達(dá)到。2025/7/22025/7/22.進(jìn)樣系統(tǒng)

作用：把分析試樣有效地送入色譜柱進(jìn)行分離。流路中為高壓力工作狀態(tài)，通常使用耐高壓的六通閥進(jìn)樣裝置：2025/7/2六通閥進(jìn)樣

1.六通閥進(jìn)樣器：用于固定體積進(jìn)樣。右旋60度進(jìn)樣。進(jìn)樣系統(tǒng)2025/7/2六通閥進(jìn)樣示意圖

1.六通閥進(jìn)樣器：用于固定體積進(jìn)樣。右旋60度進(jìn)樣。進(jìn)樣系統(tǒng)2025/7/2微量注射器（進(jìn)樣針）：類似于氣相色譜進(jìn)樣針，只是其針頭為平頭，以免扎破六通閥管路。

1.六通閥進(jìn)樣器：用于固定體積進(jìn)樣。右旋60度進(jìn)樣。進(jìn)樣系統(tǒng)2025/7/2

2.自動進(jìn)樣器進(jìn)樣系統(tǒng)2025/7/2液相色譜儀（自動進(jìn)樣器）自動進(jìn)樣器2025/7/22025/7/23.分離系統(tǒng)

包括色譜柱、恒溫器和連接管等部件。

液相色譜的色譜柱一般用內(nèi)部拋光的不銹鋼制成。其內(nèi)徑為2~6mm，柱長為10~50cm，柱形多為直形，內(nèi)部充滿固定相微粒。

柱溫：一般為室溫或接近室溫。

趨勢：減小填料粒度和柱徑，以提高柱效。2025/7/22025/7/24.檢測器

檢測器是液相色譜儀的關(guān)鍵部件之一。(1)對檢測器的要求：靈敏度高，重復(fù)性好、線性范圍寬以及對溫度和流動相流量的變化不敏感等。(2)兩種類型的檢測器：

①選擇型檢測器：僅對被分離組分的物理或物理化學(xué)特性有響應(yīng)。如紫外、熒光等；

②通用型檢測器：對試樣組分和洗脫液總的物理和化學(xué)性質(zhì)響應(yīng)。如示差折光檢測器等。2025/7/2（3）常用的檢測器：a.紫外檢測器（UVD）

應(yīng)用最廣，對大部分有機(jī)化合物有響應(yīng)。特點(diǎn)：

靈敏度高；線形范圍高；

對流動相的流速和溫度變化不敏感；波長可選，易于操作；可用于梯度洗脫。2025/7/2光電二極管陣列檢測器（PDAD）

紫外檢測器的重要進(jìn)展；光電二極管陣列檢測器：1024個二極管陣列，記錄全紫外波段上的色譜信號，計(jì)算機(jī)快速處理，三維立體譜圖，可以得到待測組分的光譜定性信息。2025/7/2光電二極管陣列檢測器2025/7/22025/7/2

除紫外檢測器之外應(yīng)用最多的檢測器；可連續(xù)檢測參比池和樣品池之間的折光指數(shù)差值。差值與濃度呈正比；

優(yōu)點(diǎn)：通用型檢測器（每種物質(zhì)具有不同的折光指數(shù)）；缺點(diǎn)：靈敏度低、對溫度敏感、不能用于梯度洗脫；b.示差折光檢測器

（differentialrefractiveindexdetector，RID）2025/7/2c.熒光檢測器

（fluorescencedetector,FD）待測組分發(fā)射的熒光強(qiáng)度與組分的濃度成正比。

高靈敏度、高選擇性的濃度性檢測器；對多環(huán)芳烴，維生素B、黃曲霉素、卟啉類化合物、農(nóng)藥、藥物、氨基酸等有響應(yīng)；2025/7/22025/7/2請選擇內(nèi)容第二節(jié)高效液相色譜的特點(diǎn)與儀器featureandinstrumentofHPLC第三節(jié)主要分離類型與基本原理basicprincipleandmainseparatingtype第三節(jié)固定相與流動相stationaryphaseandmobilephase

第四節(jié)影響分離的因素與操作條件選擇factorsinfluencedseparationandchoiceofoperationcondition第五節(jié)離子色譜法ionchromatograph第六節(jié)超臨界流體色譜supercriticalfluidchromatograph結(jié)束2025/7/2六通閥進(jìn)樣器：用于固定體積進(jìn)樣。進(jìn)樣系統(tǒng)六通閥進(jìn)