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ICSC T/CACM1326.29—TechnicalcodeofpracticeforcryopreservationofDipterocarpusturbinatusGaertn.f. 中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)T/CACMT/CACM1326.29—目前 范 附錄A(規(guī)范性附錄)TTC/磷酸鹽緩沖液的配制和保存方 前——T/CACM ——T/CACM ——T/CACM ——T/CACM ——T/CACM ——T/CACM ——T/CACM ——T/CACM ——T/CACM ——T/CACM GB/T1.1—20091部分:標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫》給出的規(guī)則起草。T/CACMT/CACM1326.29—GB/T3543.6GB/T3543.7羯布羅香12cm~15cm3cm1種子超低溫保存seedof月下旬~6月上旬,花萼變?yōu)樽厣珪r(shí)即可采收,成熟期較短,于一周內(nèi)采收完,去除果翅,取挑選發(fā)育飽滿、均勻、健康的種子,置于10℃冰箱中保存?zhèn)溆茫ù娣艜r(shí)間不超過(guò)15d)。切羯布羅香種子活力以種子生活力為判別標(biāo)準(zhǔn)。按照GB/T3543.7中的2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)法檢測(cè)種子生活力。隨機(jī)抽取30粒種子,剝?nèi)ネ鈱臃N皮,沿種脊小心將種子分成2爿后放培養(yǎng)皿內(nèi),內(nèi)側(cè)面向下,滴入TTC溶液浸沒(méi)種子,室溫(25℃)避光放置4h后觀察染色結(jié)果。TTCA90
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×100%?????????????????(1)12h~26h50%~60%
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×100%……….30015mL管(每管2粒種子)中,迅速投入液氮中保存。24h10402min取出5管解凍后的種子,按照5.1活力檢測(cè)方法進(jìn)行超低溫保存后的初始生活力檢測(cè)。當(dāng)種子生活力≥60%時(shí)視為保存成功。將剩下5管解凍后的羯布羅香種胚,播種到MS固體培養(yǎng)基中,溫度28℃~30℃,濕度70%~85%條件下培養(yǎng)。羯布羅香種胚出芽周期大概10d~20d。附錄TTC1.00g100mL1TTCpH6.5~7.54溶液I:9.08g磷酸二氫鉀溶于1L無(wú)菌水中;II:35.81g1LI﹕II2﹕350(2)[MLiHsi-wen,LiJie,PeterS.Ashton.Dipterocarpaceae[M]//FloraOfChinaBeijing:SciencePress/St.Louis:MissouriBotanicalGardenPress.2007.13:48.國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草(第三冊(cè))[M].上
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