標準解讀

《DB32/T 3802-2020 南美白對蝦肝腸胞蟲巢式聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)檢測方法》是一項地方標準，由江蘇省市場監(jiān)督管理局發(fā)布，旨在規(guī)范南美白對蝦（Litopenaeus vannamei）中肝腸胞蟲（Enterocytozoon hepatopenaei, EHP）的巢式聚合酶鏈式反應(yīng)（Nested PCR）檢測流程。該標準適用于水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域內(nèi)對南美白對蝦進行EHP感染情況監(jiān)測時使用。

標準首先定義了相關(guān)術(shù)語和定義，包括但不限于南美白對蝦、肝腸胞蟲以及巢式PCR技術(shù)等關(guān)鍵概念。接著詳細描述了實驗所需材料與試劑，如DNA提取試劑盒、特定引物序列等，并指出了這些材料的質(zhì)量要求及來源信息。

對于樣品采集部分，《DB32/T 3802-2020》給出了具體指導(dǎo)原則，包括采樣部位的選擇、樣本保存條件等細節(jié)。此外，還特別強調(diào)了在處理生物樣品過程中應(yīng)遵循的安全操作規(guī)程，以確保人員健康不受威脅。

在核心的操作步驟上，本標準分步介紹了從組織樣本到最終結(jié)果判定的整個過程。這包括了DNA的提取方法、第一次PCR擴增條件設(shè)置、第二次PCR擴增前的產(chǎn)物稀釋比例、電泳分析參數(shù)設(shè)定等內(nèi)容。每一步驟都附有詳細的參數(shù)說明和技術(shù)要點提示，幫助實驗室工作人員準確執(zhí)行。

最后，《DB32/T 3802-2020》還提供了質(zhì)量控制方面的建議，比如通過設(shè)立陽性對照、陰性對照來驗證實驗系統(tǒng)的可靠性；同時推薦定期參加外部質(zhì)控項目或與其他實驗室進行比對測試，以持續(xù)改進檢測水平。

此標準為南美白對蝦養(yǎng)殖業(yè)提供了一套科學(xué)合理、操作性強的EHP檢測方案，有助于提高疾病防控能力，保障水產(chǎn)品質(zhì)量安全。


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  • 現(xiàn)行
  • 正在執(zhí)行有效
  • 2020-05-25 頒布
  • 2020-06-25 實施
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文檔簡介

ICS65150

B51.

江蘇省地方標準

DB32/T3802—2020

南美白對蝦肝腸胞蟲巢式

聚合酶鏈式反應(yīng)PCR檢測方法

()

DetectionofEnterocytozoonhepatopenaeiinLitopenaeusvannameibynestedPCR

2020-05-25發(fā)布2020-06-25實施

江蘇省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB32/T3802—2020

前言

本標準按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由江蘇省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口

。

本標準起草單位江蘇省海洋水產(chǎn)研究所

:。

本標準主要起草人萬夕和沈輝喬毅史文軍王李寶黎慧蔣葛成婕范賢平

:、、、、、、、、。

Ⅰ

DB32/T3802—2020

南美白對蝦肝腸胞蟲巢式

聚合酶鏈式反應(yīng)PCR檢測方法

()

1范圍

本標準規(guī)定了南美白對蝦Litopenaeusvannamei肝腸胞蟲Enterocytozoonhepatopenaei

()(,EHP)

巢式聚合酶鏈式反應(yīng)檢測方法的原理試劑材料儀器設(shè)備操作步驟

(polymeraswchainreation,PCR)、、、

和結(jié)果判定

。

本標準適用于南美白對蝦樣品中肝腸孢蟲帶蟲情況的高靈敏定性檢測

。

其他環(huán)境生物和餌料生物以及非生物樣品中肝腸胞蟲帶蟲情況檢測可參照此方法

,。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

對蝦傳染性皮下及造血組織壞死病毒檢測法

GB/T25878—2010(IHHNV)PCR

斑節(jié)對蝦桿狀病毒病診斷規(guī)程第部分檢測法

SC/T7202.2—20072:PCR

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件

。

31

.

肝腸胞蟲Enterocytozoonhepatopenaei

一種感染對蝦肝胰腺腸道等器官的微孢子蟲可致南美白對蝦生長緩慢養(yǎng)殖產(chǎn)量嚴重下降

、,,。

4技術(shù)原理

南美白對蝦肝腸胞蟲巢式聚合酶鏈式反應(yīng)檢測方法是以樣品為模板針對其胞壁蛋

(PCR)DNA,

白基因設(shè)計兩對特異性巢式寡核苷酸序列為引物在四種脫氧核糖苷三磷酸存在下利用聚合酶

,,DNA

的合成作用經(jīng)過先后兩步數(shù)十次變性退火和延伸的反應(yīng)循環(huán)使模板上介于兩對引物間的片

,、,DNA

段得到特異性巢式擴增通過電泳檢測擴增片段是否存在

,。

5試劑材料

51在分析中僅使用確認為分析純的化學(xué)試劑

.。

52實驗用水為無菌蒸餾水或超純水

.。

53無水乙醇

.

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