標(biāo)準(zhǔn)解讀

《DB31/T 955-2015 豬圓環(huán)病毒2a/2b亞型實時熒光PCR檢測和分型方法》是一項地方標(biāo)準(zhǔn)，由上海市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布，旨在提供一套標(biāo)準(zhǔn)化的豬圓環(huán)病毒（PCV）2a與2b亞型的檢測及分型流程。該標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了從樣本采集到結(jié)果分析的一系列操作步驟，確保實驗過程的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。

首先，在樣本準(zhǔn)備階段，標(biāo)準(zhǔn)指出了適用的樣本類型包括但不限于血液、組織液等，并明確了樣本保存條件以及運輸要求，以保證樣本質(zhì)量不受影響。接著，對于核酸提取部分，提供了推薦使用的商業(yè)化試劑盒或自制試劑方案，強調(diào)了操作過程中需要注意的關(guān)鍵點，如避免交叉污染等。

在引物設(shè)計方面，《DB31/T 955-2015》給出了針對PCV2a和PCV2b特異性區(qū)域設(shè)計的引物序列，同時建議使用內(nèi)部對照來監(jiān)控反應(yīng)體系的有效性。此外，還列出了適用于此實驗的最佳反應(yīng)條件參數(shù)，包括退火溫度、循環(huán)次數(shù)等，以指導(dǎo)實驗室人員進行優(yōu)化設(shè)置。

關(guān)于熒光探針的選擇，標(biāo)準(zhǔn)推薦了幾種市場上常見的熒光標(biāo)記物質(zhì)，并對其性能進行了比較說明，幫助使用者根據(jù)實際情況做出合適的選擇。同時，也提到了如何通過調(diào)整熒光通道來提高檢測靈敏度和特異性。


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  • 已被新標(biāo)準(zhǔn)代替，建議下載現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)DB31/T 955-2022
  • 2015-12-11 頒布
  • 2016-03-01 實施
?正版授權(quán)
DB31/T 955-2015豬圓環(huán)病毒2a/2b亞型實時熒光PCR檢測和分型方法_第1頁
DB31/T 955-2015豬圓環(huán)病毒2a/2b亞型實時熒光PCR檢測和分型方法_第2頁
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文檔簡介

ICS6502030

B42..

備案號49129—2016

:

上海市地方標(biāo)準(zhǔn)

DB31/T955—2015

豬圓環(huán)病毒2a/2b亞型實時熒光PCR

檢測和分型方法

Methodofthereal-timePCRforthedetectionandgenotypeof

porcinecircovirussubtype2a/2b

2015-12-11發(fā)布2016-03-01實施

上海市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布

DB31/T955—2015

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由上海市畜牧獸醫(yī)辦公室提出

。

本標(biāo)準(zhǔn)由上海市畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口

。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位上海市動物疫病預(yù)防控制中心

:。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人劉佩紅周錦萍王建劉健鞠厚斌葛菲菲楊德全李鑫楊顯超徐鋒

:、、、、、、、、、。

Ⅰ

DB31/T955—2015

豬圓環(huán)病毒2a/2b亞型實時熒光PCR

檢測和分型方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬圓環(huán)病毒亞型實時熒光檢測和分型方法

2a/2bPCR。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬圓環(huán)病毒型的檢測和豬圓環(huán)病毒亞型的分型

22a/2b。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

GB/T6682

基因檢驗實驗室技術(shù)要求

SN/T1193

3縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

31Ct值

.

熒光信號量達到設(shè)定的閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)

cyclethresholdvalue,。

32PCV-2

.

豬圓環(huán)病毒型

porcinecircovirustype2,2。

33PCV-2a

.

豬圓環(huán)病毒亞型

porcinecircovirussubtype2a,2a。

34PCV-2b

.

豬圓環(huán)病毒亞型

porcinecircovirussubtype2b,2b。

4原理

本方法是根據(jù)的兩個不同亞型和的序列設(shè)計能同時擴增這兩種

PCV-2PCV-2aPCV-2bORF2,

亞型的引物和并設(shè)計了能分別檢測兩種亞型的熒光探針和其中僅能

C1C2,TypeATypeB,TypeA

檢測僅能檢測建立了二重實時熒光檢測方法

PCV-2a,TypeBPCV-2b,PCR。

5設(shè)備和器材

51多通道熒光儀至少包括可檢測和

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