ICS67.080DB13B31河北省地方標(biāo)準(zhǔn)DB13/T2867—2018草莓組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程河北省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布DB13/T2867—2018前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由河北農(nóng)業(yè)大學(xué)提出。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：師校欣、杜國(guó)強(qiáng)、高儀、楊麗麗、王莉、王燕霞、劉婉君、李寶鑫、張瑩。IDB13/T2867—2018草莓組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了草莓組織培養(yǎng)快速繁殖過(guò)程中的術(shù)語(yǔ)和定義、培養(yǎng)基制備、組培室消毒滅菌、草莓組培苗生產(chǎn)、組培苗質(zhì)量要求等方面的技術(shù)規(guī)程。本標(biāo)準(zhǔn)適用于草莓組織培養(yǎng)繁殖苗木。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB28232LY/T1882NY/T2306NY/T3032臭氧發(fā)生器安全與衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程草莓脫毒種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程DB13/T2596蘋果組培苗繁育技術(shù)規(guī)程3術(shù)語(yǔ)和定義LY/T1882-2010、NY/T2306-2013、DB13/T2596-2017中界定的以及下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文采集外植體并對(duì)其進(jìn)行表面滅菌后接種，將其置于適宜的培養(yǎng)條件下，啟動(dòng)生長(zhǎng)、獲得最初的無(wú)41DB13/T2867—20184.1培養(yǎng)基配方4.1.1基本培養(yǎng)基采用MS培養(yǎng)基，具體成分見(jiàn)附錄A中的表A.1。4.1.2初代及繼代培養(yǎng)培養(yǎng)基：MS+6-BA0.5mg/L～2.0mg/L+IBA0.02mg/L～0.5mg/L（或NAA0.02mg/L～0.1mg/L）+蔗糖25g/L～30g/L+固化劑（能使培養(yǎng)基凝固的最低用量，視固化劑種類確定）。4.1.3生根培養(yǎng)基：1/2MS（或MS）+IBA0.05mg/L～0.5mg/L（或NAA0.05mg/L～0.1mg/L）+IAA0.0mg/L～0.5mg/L+蔗糖15g/L～25g/L+固化劑（同4.1.2）。4.1.4不同草莓品種組織培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基中蔗糖濃度及生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的種類和濃度可根據(jù)以上配方適當(dāng)調(diào)整。紅顏、甜查理、石莓7號(hào)、全明星、寶交早生等草莓品種適宜的繼代培養(yǎng)基為MS+6-BA0.5mg/L+IBA0.15mg/L+蔗糖30g/L+固化劑（同4.1.2）；生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.15mg/L+蔗糖25g/L+固化劑（同4.1.2）。為降低成本，蔗糖可用等量食用白砂糖代替。4.1.5為促進(jìn)繼代苗生長(zhǎng)，繼代培養(yǎng)基中可添加0.2mg/L～0.5mg/L的GA3，為促進(jìn)試管苗生根和根系發(fā)育，生根培養(yǎng)基中可添加0.5g/L～3g/L活性炭。4.2培養(yǎng)基母液及培養(yǎng)基配制按DB13/T2596執(zhí)行。5組培室消毒滅菌見(jiàn)附錄B。6選擇品種純正、性狀穩(wěn)定、生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲病毒危害和機(jī)械損傷的植株，在5～9月采集約2cm在超凈工作臺(tái)上去掉外層苞葉，用2%～5%次氯酸鈉溶液，滅菌時(shí)間8min～12min；或用0.1%氯化汞溶液，滅菌時(shí)間6min～10min。滅菌時(shí)間視外植體的潔凈程度適當(dāng)調(diào)整。滅菌期間多次晃動(dòng)滅菌容器，以保證外植體與滅菌劑充分接觸。滅菌完成后，外植體用無(wú)菌水沖洗3～5遍。2DB13/T2867—2018逐層剝?nèi)デo尖外面的葉片，切取0.5mm～5mm莖尖（利用莖尖培養(yǎng)脫除病毒時(shí)，應(yīng)剝?nèi)?.2mm～0.5mm的莖尖分生組織）接入培養(yǎng)基，每瓶接1～3個(gè)外植體，分布均勻，封好瓶口后，注明品種代號(hào)、接種人員及日期等，放至培養(yǎng)室培養(yǎng)。6.3繼代培養(yǎng)6.3.1將初代或繼代培養(yǎng)誘導(dǎo)出的叢生芽苗，去除基部愈傷組織及生長(zhǎng)不良的組織，切分成2～4株一簇的小芽叢，接入繼代培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)室培養(yǎng)。6.3.2接種數(shù)量根據(jù)培養(yǎng)容器的大小決定，要求材料擺布均勻，間距1.0cm～2.0cm。6.3.3培養(yǎng)3～6周，分化生長(zhǎng)的苗叢生長(zhǎng)緩慢至停長(zhǎng)時(shí)，及時(shí)進(jìn)行繼代轉(zhuǎn)接。6.4生根培養(yǎng)將高度大于2cm的繼代叢生苗切分成單株接入生根培養(yǎng)基，接種數(shù)量參見(jiàn)6.3.2。培養(yǎng)條件6.5外植體初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)各階段的接種材料均放至培養(yǎng)室培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為，溫度：（25±2）℃，光照強(qiáng)度：1500Lx～2000Lx，光/暗周期：14h～16h/8h～10h，生根階段可適當(dāng)增加光照強(qiáng)度（至5000Lx）。6.6試管苗移栽6.6.1溫室過(guò)渡移栽按DB13/T2596執(zhí)行。將溫室過(guò)渡移栽2個(gè)多月的健壯組培苗帶基質(zhì)土坨移栽至田間，栽植時(shí)幼苗當(dāng)年的短縮莖頂脫毒方法及病毒檢測(cè)方法按NY/T3032執(zhí)行。經(jīng)病毒檢測(cè)確認(rèn)脫除了病毒的材料進(jìn)行組織培養(yǎng)繁殖可按照本標(biāo)準(zhǔn)6.1～6.6執(zhí)行。7每株具有4片以上葉片，短縮莖粗0.5cm以上；6cm以上的不定根不少于6條；無(wú)病蟲危害癥狀，無(wú)3DB13/T2867—2018附錄A（規(guī)范性附錄）MS基本培養(yǎng)基配方表A.1MS培養(yǎng)基成分及母液配制表配方規(guī)定量配制1L母液用量（g）母液種類及倍數(shù)試劑（mg/L）KNO3NH4NO3190095165037082.518.58.5大量元素50×MgSO4?7H2OKH2PO4170鈣元素CaCl2?2H2O4402250×Na2?EDTA?2H2OFeSO4?7H2OVB137.327.80.13.732.780.010.050.050.2鐵元素100×甘氨酸4DB13/T2867—2018附錄B（資料性附錄）組培室消毒滅菌工作細(xì)則B.1接種室消毒滅菌工作細(xì)則B.1.1按照每15m配置1根30w紫外燈的標(biāo)準(zhǔn)，每天用紫外燈照射殺菌1h，每周用臭氧發(fā)生器消2毒2～3次，臭氧濃度應(yīng)≥20mg/m，作用時(shí)間應(yīng)≥30min（按GB28232執(zhí)行）。殺菌時(shí)切勿進(jìn)3入，注意安全。其余按DB13/T2596執(zhí)行。B.2培養(yǎng)室