ThisSOPisstrictlyconfidential.AnyuseandcopyunauthorizedbySLPharmaisforbidden.僅限北京世橋生物制藥有限公司內(nèi)部使用。未經(jīng)授權(quán)，不得使用或拷貝。起草人起草日期頒發(fā)部門質(zhì)量管理部審核人審核日期批準(zhǔn)人批準(zhǔn)日期生效日期分發(fā)清單研發(fā)部[]質(zhì)量管理部[]綜合管理部[]生產(chǎn)管理部[]市場銷售部[]財(cái)務(wù)部[]1.目的為保證無菌試驗(yàn)更加準(zhǔn)確可靠。2.范圍車間環(huán)境檢測和血清原料、成品無菌檢測用培養(yǎng)基的靈敏度測定。3.職責(zé)3.1.質(zhì)量管理部：負(fù)責(zé)本規(guī)程的起草。3.2.質(zhì)量管理部檢驗(yàn)人員：負(fù)責(zé)本規(guī)程的操作。3.3.總經(jīng)理：負(fù)責(zé)本規(guī)程的審批。4.定義無5.引用標(biāo)準(zhǔn)《中華人民共和國藥典》四部2015版。6.材料6.1.材料準(zhǔn)備：6.1.1.標(biāo)準(zhǔn)陽性菌種：購置藥品檢定所菌種保藏中心冷凍干燥菌株，傳代次數(shù)不得超過5代（從菌種保存中心獲得的干燥菌種為0代）包括：金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003]、銅綠假單胞菌[CMCC（B）10104]、枯草芽胞桿菌[CMCC（B）63501]、生胞梭菌[CMCC（B）64941]、白色念珠菌[CMCC（F）98001]、黑曲霉菌[CMCC（F）98003]。6.1.2硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基、胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基。6.1.3pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9﹪氯化鈉溶液6.2儀器設(shè)備20～25℃培養(yǎng)箱，30～35℃培養(yǎng)箱6.3.器械、用具6.3.1.滅菌2ml移液管6.3.2滅菌中試管7.流程圖無8.內(nèi)容8.1.菌液制備：8.1.1接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽胞桿菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中。8.1.2接種生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，30～35℃培養(yǎng)18～24小時(shí)；8.1.3接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上，20～25℃培養(yǎng)24～48小時(shí)8.1.4上述培養(yǎng)物用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9﹪氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)小于100CFU（菌落形成單位）的菌懸液。8.1.5接種黑曲霉菌新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基上20～25℃培養(yǎng)5～7天。加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫，然后采用適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，用含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含孢子數(shù)小于100cfu的孢子懸液。8.1.6菌懸液在室溫下放置應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用，若保存于2～8℃可在24小時(shí)內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液可保存在2～8℃，在驗(yàn)證過的貯存期使用。8.2.培養(yǎng)基接種：8.2.1取每管裝量12ml的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基7支，分別接種小于100CFU的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接種，作為空白對照，置30～35℃培養(yǎng)3天；8.2.2取每管裝量為9ml的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基7支，分別接種小于100CFU的枯草芽胞桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另一支不接種，作為空白對照，置20～25℃培養(yǎng)5天。逐日觀察結(jié)果。8.3.結(jié)果判定空白對照管應(yīng)無菌生長，若加菌的培養(yǎng)基管均生長良好，判該培養(yǎng)基的靈敏度檢查符合規(guī)定。9.注意事項(xiàng)9.1．各類培養(yǎng)基必須在效期內(nèi)。9.2每次制備的無菌檢查用培