臨床基因擴增檢驗的質(zhì)量保證第1頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月定義質(zhì)量保證(QualityAssurance,QA)

為一產(chǎn)品或服務滿足特定質(zhì)量要求提供充分可信性所必要的有計劃的和系統(tǒng)的措施。

室內(nèi)質(zhì)量控制（InternalQualityControl,IQC)由實驗室工作人員，采取一定的方法和步驟，連續(xù)評價本實驗室工作的可靠性程度，旨在監(jiān)測和控制本實驗室工作的精密度，提高本室常規(guī)工作中批內(nèi)、批間樣本檢驗的一致性，以確定測定結(jié)果是否可靠、可否發(fā)出報告的一項工作。

第2頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月定義室間質(zhì)量評價（ExternalQualityAssessment,EQA）為客觀比較一實驗室的測定結(jié)果與靶值的差異，由外單位機構(gòu)，采取一定的辦法，連續(xù)、客觀地評價實驗室的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)誤差并校正結(jié)果，使各實驗室之間的結(jié)果具有可比性。這是對實驗室操作和實驗方法的回顧性評價，而不是用來決定在實時的測定結(jié)果的可接受性。當EQA用來為執(zhí)業(yè)許可或?qū)嶒炇艺J證的目的而評價實驗室操作時，常描述為實驗室能力驗證（Proficiencytesting,PT）。在以前的文獻中，EQA常描述室間質(zhì)量控制。第3頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月定義批(Run)在相同條件下所獲得的一組測定。

均值（Mean）

標準差（Standarddeviation,SD或s)變異系數(shù)（Coefficientofvariation,CV）

第4頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月定義

準確度(Accuracy)待測物的測定值與其真值的一致性程度。準確度不能直接以數(shù)值表示，通常以不準確度來間接衡量。對一分析物重復多次測定，所得均值與其真值或參考靶值之間的差異亦即偏差即為測定的不準確度。

偏差(Bias)待測物的測定值與一可接受參考值之間的差異。第5頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月定義精密度(Precision)在一定條件下所獲得的獨立的測定結(jié)果之間的一致性程度。與準確度一樣，精密度同樣也是以不精密度來間接表示。測定不精密度的主要來源是隨機誤差，以標準差（SD）和/或變異系數(shù)（CV）具體表示。SD或CV越大，表示重復測定的離散度越大，精密度越差，反之則越好。第6頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月定義正態(tài)分布(Gaussiandistribution)當一質(zhì)控物用同一方法在不同的時間重復多次測定，當測定數(shù)據(jù)足夠多時，如以橫軸表示測定值，縱軸表示在大量測定中相應測定值的個數(shù)，則可得到一個兩頭低，中間高，中為所有測定值的均值，左右對稱的“鐘形”曲線，亦即正態(tài)分布，又稱高斯分布。

第7頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月定義正態(tài)分布的基本統(tǒng)計學含義可用均數(shù)（）、標準差（s）和概率來說明。第8頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月臨床基因擴增檢驗實驗室

常規(guī)測定步驟標本收集：選擇測定項目、標本收集和保存。實驗室測定：標本接收、貼標簽、樣本處理、核酸擴增、產(chǎn)物檢測、測定的有效性和臨床診療價值。報告和解釋：結(jié)果發(fā)出、結(jié)果解釋和臨床管理。第9頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月質(zhì)量保證、室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評之間的關系第10頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月臨床標本收集、運送、保存

及其質(zhì)量控制

標本收集標本保存標本運送第11頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月標本收集標本采集時間對擴增檢測結(jié)果的影響標本采集部位的準備標本的類型和采集量采樣質(zhì)量的評價采樣及運輸容器標本采集中的防污染

第12頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月標本采集時間對擴增檢測結(jié)果的影響在疾病發(fā)展過程中，標本采集過早或過晚都可能會給出假陰性結(jié)果。

第13頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月標本采集部位的準備血液標本采集分泌物標本:采集部位的清潔消毒可去掉污染的微生物或其它雜物,但應適度,過度清潔消毒有可能會去掉或破壞靶微生物,故標本采集部位的準備應由訓練有素的人員進行。第14頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月標本的類型和采集量標本的類型:血清(漿)、分泌物、痰、糞便、尿和腦脊液等。標本的采集量:應根據(jù)所測病原體而定。一般來說，如果標本的量對病原體培養(yǎng)夠用的話，則其量亦足以用于核酸提取及其后的擴增檢測。對于定量測定來說，對標本的收集要求更為精確。第15頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月采樣質(zhì)量的評價血清(漿)標本:溶血、脂血等；分泌物、痰：評價內(nèi)容包括細胞組成，所需類型細胞的數(shù)量和核酸總量。評價方法：包括肉眼觀察,顯微鏡下觀察和化學分析等。第16頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月采樣及運輸容器

標本的采集材料如棉簽應為一次性使用；采樣及運輸容器應為密閉的一次性無菌裝置；采樣所用的防腐劑、抗凝劑及相關試劑材料不應對核酸擴增及檢測過程造成干擾。第17頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月標本采集中的防污染

采集中要特別注意污染，防止混入操作者的頭發(fā)、表皮細胞、痰液等；如使用玻璃器皿，必須經(jīng)高壓滅菌，以使可能存在的RNase失活。第18頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月標本保存

靶核酸(尤其是RNA)易受核酸酶的作用而迅速降解，因此標本的保存對于核酸擴增測定的有效性極為重要。使用GITC作為穩(wěn)定劑保存標本，標本可在室溫下穩(wěn)定約7天。第19頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月標本保存臨床體液標本長期保存應在-70℃下。如為提取核酸后用于DNA擴增分析的樣本，可于10mmol/LTris,1mmol/LEDTA(pH7.5～8.0)緩沖液中4℃下保存。用于RNA擴增分析的樣本，則應于上述緩沖液中-80℃或液氮下保存。核酸的乙醇沉淀物則可于-20℃下保存。第20頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月標本運送

樣本一經(jīng)采集，則應盡可能快的送至檢測實驗室。樣本中如加入了適當?shù)姆€(wěn)定劑,如用于RNA測定加入GITC的血清(漿)樣本和用于DNA測定的EDTA抗凝血等,則可在室溫下運送或郵寄。實驗室應根據(jù)待測靶核酸的特性，對各種臨床樣本的運送條件作出相應的規(guī)定。第21頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月臨床基因擴增檢驗的室內(nèi)質(zhì)量控制測定前的質(zhì)量控制核酸樣本的制備及其質(zhì)量控制統(tǒng)計學質(zhì)量控制質(zhì)量控制的評價第22頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月測定前質(zhì)量控制實驗室設施、儀器設備及管理理想的試劑和操作方法人員培訓第23頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗室設施、儀器設備及管理臨床基因擴增檢驗實驗室應有充分合理的空間、良好的照明和空調(diào)設備；實驗室儀器設備應保養(yǎng)良好，實驗用品要達到相應的要求。加樣器的校準？帶濾塞吸頭的使用及質(zhì)檢？離心機？熱循環(huán)儀？水浴箱和/或恒溫干浴儀？酶標儀和洗板機？第24頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月基因擴增儀器設備的質(zhì)控第25頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月帶濾塞吸頭的使用及質(zhì)檢首先制備一個含1～2%甘油及色素（如甲基橙）的水溶液，如果吸頭的最大體積為100μl，則將加樣器吸取體積調(diào)至110～120μl，再套上吸頭后吸取上述有色液體。如果吸頭質(zhì)量好，則有色液體不應出現(xiàn)在濾塞之上，否則說明濾塞不嚴。

第26頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月帶濾塞吸頭的使用及質(zhì)檢用實驗來檢驗帶濾塞吸頭的質(zhì)量：先純化制備數(shù)份強陽性和數(shù)份陰性核酸標本，然后將加樣器吸取量設至擴增加樣所需的體積，使用待評價帶濾塞吸頭對一份強陽性樣本來回吸取10次（模擬10份陽性樣本的吸?。?，將最后一次的吸取液加至一含擴增反應液的管中，之后，換一個新吸頭，連續(xù)吸取10份陰性樣本分別至10個擴增反應管中，此過程重復3～5次，最后對每一管按所用試劑方法進行擴增檢測。強陽性樣本應為強陽性，陽性弱或出現(xiàn)陰性則說明吸頭可能含有擴增抑制物。所有陰性樣本應為陰性，出現(xiàn)陽性則表明吸頭不能有效地防止氣溶膠對加樣器的污染。

第27頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月核酸提取用離心管質(zhì)檢離心管PCR抑制物質(zhì)檢其他第28頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月擴增儀孔間溫度的重復性和均一性的檢測方法一是使用一種熱電偶探針、微伏轉(zhuǎn)換器和自動圖示記錄儀組成擴增加熱模塊孔內(nèi)溫度監(jiān)測記錄系統(tǒng)，當孔間溫度變異超出1℃時，其可測出來。具體做法是將裝有TE緩沖液并上加石蠟油的擴增反應管放置于擴增儀各孔中，熱電偶探針透過擴增反應管蓋插至緩沖液中，然后按程序進行一個常規(guī)的PCR擴增，加熱模塊如為96孔，則至少要測定12孔不同位置孔內(nèi)的溫度，在整個擴增過程中，可移動熱電偶探針至上述不同孔中監(jiān)測溫度，但每一孔內(nèi)溫度監(jiān)測至少要有一個擴增周期。第29頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月擴增儀孔間溫度的重復性和均一性的檢測方法第二種方法并非直接測定孔內(nèi)溫度，而是通過擴增功能來間接獲知孔間的均一性，即將加有一已知的含一定濃度的陽性質(zhì)控樣本的擴增反應管置于擴增儀各孔中按常規(guī)進行擴增檢測，觀察結(jié)果的一致性程度，如果有某一個或幾個孔結(jié)果有問題，則應確定這一個或幾個孔是否會重復性地得到假陰性結(jié)果，如果是，則表明相應孔的熱傳導有損壞。第30頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月理想的試劑和操作方法

試劑盒的質(zhì)檢定量測定的精密度是測定組成步驟的變異和的平方根(SD)=

上式中SDa、SDb、SDc是步驟a、b、c等（例如試劑準備、標本采集、核酸提取、擴增和產(chǎn)物檢測等）的標準差；第31頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月理想的試劑和操作方法改善測定精密度的措施必須首先著重在最不精密的步驟上，應對試劑準備、標本收集、核酸提取、測定方法和儀器操作寫出“標準操作程序”(SOP)第32頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月人員培訓

臨床基因擴增檢驗的操作主要是標本處理中的核酸提取步驟，這其中所涉及的又主要是加樣器的使用，盡管操作簡單，但由于均為微量操作，要獲得穩(wěn)定可靠的測定結(jié)果，操作人員需要一定的專業(yè)技術(shù)知識和經(jīng)驗.知其然又知其所以然。

第33頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月核酸樣本的制備、擴增檢測

及其質(zhì)量控制一般核酸提取試劑促使靶核酸從細胞內(nèi)釋出的原理核酸的分離純化靶核酸提取的質(zhì)量臨床標本及核酸提取中可能存在的抑制和干擾物質(zhì)核酸樣本制備及擴增檢測的質(zhì)控產(chǎn)物檢測的質(zhì)控第34頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月一般核酸提取試劑促使靶核酸從細胞內(nèi)釋出的原理靶核酸可以與宿主細胞整合，核內(nèi)游離及胞漿內(nèi)各種構(gòu)形存在于細胞內(nèi)，如測定的是病原微生物,則靶核酸存在于細菌、病毒、原蟲或真菌細胞內(nèi)，如果上述細胞破裂,則靶核酸亦可存在于細胞外。一般均使用去垢劑(如Triton-100)裂解細胞，用一種蛋白裂解酶(如蛋白酶K)消化結(jié)合于核酸的蛋白質(zhì)，從而將靶核酸從細胞內(nèi)釋放出來。第35頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月核酸的分離純化

核酸的分離純化就是要將蛋白、脂類等干擾核酸擴增的物質(zhì)去除。經(jīng)典方法硅吸附法對于商品核酸提取試劑盒，臨床實驗室在使用前，必須對其核酸提取純度和效率進行評價。第36頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月臨床標本及核酸提取中可能存在的抑制和干擾物質(zhì)

臨床標本中：血清或血漿中的血紅素及其代謝產(chǎn)物、痰中酸性多糖和糖蛋白成份、降解靶核酸的核酸酶等。核酸提取中：許多試劑如乙二胺四乙酸(EDTA)、去垢劑如十二烷基硫酸鹽(SDS)和chaotrope試劑如異硫氰酸胍和鹽酸胍等、酚、氯仿、乙醇等有機溶劑。第37頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月對臨床標本中可能存在的

抑制/干擾物的質(zhì)控措施質(zhì)控措施：采用內(nèi)質(zhì)控（internalcontrol,IC）（通常稱為內(nèi)標）的方法內(nèi)標有兩種,即競爭性的和非競爭性的內(nèi)標。第38頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月核酸提取及擴增有效性的質(zhì)控

已知弱陽性質(zhì)控樣本（基質(zhì)與待測標本相同）：至少帶1份，其最后的檢測結(jié)果，應是核酸提取和擴增檢測的有效性的綜合反映。已知陰性質(zhì)控樣本（基質(zhì)與待測標本相同）：至少帶1份，擴增測定的結(jié)果可以判斷核酸提取過程中是否發(fā)生污染。

第39頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月統(tǒng)計學質(zhì)量控制

理想的室內(nèi)質(zhì)控樣本的條件測定中質(zhì)控樣本的設置、數(shù)量及排列順序統(tǒng)計學質(zhì)控的特點統(tǒng)計質(zhì)控方法第40頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月理想的室內(nèi)質(zhì)控樣本的條件基質(zhì)與待測樣本一致；所含待測物濃度接近試驗的決定性水平；穩(wěn)定；靶值或預期結(jié)果已定；無已知的生物傳染危險性；單批可大量獲得；價廉第41頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月測定中質(zhì)控樣本的設置、數(shù)量及排列順序每次檢測究竟使用幾個質(zhì)控樣本并排在臨床標本中的哪個位置最為適宜？從理論上說，為最大可能地檢出實驗的隨機和系統(tǒng)誤差，應每隔幾份臨床標本插入1份質(zhì)控樣本，但考慮國內(nèi)目前的實際情況及成本效益，一般來說，如果臨床基因擴增檢驗的標本量不是特別大，定性測定有一份接近cut-off的弱陽性和一份陰性質(zhì)控樣本應可以滿足要求。而定量測定則要根據(jù)試驗的測定范圍，采用高、中、低三種濃度的質(zhì)控樣本。至于在測定中的排列順序，可排于標準品或校準品之后，臨床樣本之前。第42頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月臨床基因擴增檢驗室內(nèi)質(zhì)控的獨特性即監(jiān)測污染發(fā)生的陰性質(zhì)控的設置。

應該包括1份陰性原血清樣本、1份在標本核酸提取過程中帶入的一個空管和僅含擴增反應混合液的管。第43頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月陰性原血清質(zhì)控樣本的功能

監(jiān)測實驗室的以前擴增產(chǎn)物的污染；由實驗操作所致的標本間的交叉污染；擴增反應試劑的污染。

第44頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月在標本核酸提取過程中帶入的一個空管的功能基本功能與陰性原血清質(zhì)控樣本相同，但不同的是，其基質(zhì)為水，不含陰性原血清質(zhì)控樣本中可能有的擴增抑制物，因而對污染的反映更為靈敏不能取代原血清陰性樣本。第45頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月僅含擴增反應混合液的管的功能監(jiān)測擴增試劑是否發(fā)生污染，具有較強的污染鑒別性。如想鑒別實驗室是否發(fā)生污染，可將一個或多個空管打開靜置于標本制備區(qū)30～60分鐘，然后加入擴增反應混合液同時以水替代核酸樣本擴增，如為陽性，而上述僅含擴增反應混合液的管為陰性，則說明實驗室以前擴增產(chǎn)物的存在。

第46頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月統(tǒng)計學質(zhì)控的特點

檢驗誤差有兩類，一是系統(tǒng)誤差，一是隨機誤差。系統(tǒng)誤差通常表現(xiàn)為質(zhì)控物測定均值的漂移，是由操作者所使用的儀器設備、試劑、標準品或校準物出現(xiàn)問題而造成的，這種誤差可以通過前述的措施方法加以控制，是可以排除的。隨機誤差則表現(xiàn)為測定SD的增大，主要是由實驗操作人員的操作等隨機因素所致，其出現(xiàn)難以完全避免和控制。第47頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月統(tǒng)計學質(zhì)控的功能統(tǒng)計學質(zhì)控的功能就是發(fā)現(xiàn)誤差的產(chǎn)生及分析誤差產(chǎn)生的原因，采取措施予以避免。開展統(tǒng)計質(zhì)量控制前，應將可以控制的誤差產(chǎn)生因素盡可能地加以控制，這不但是做好室內(nèi)質(zhì)控的前提，也是保證常規(guī)檢驗工作質(zhì)量的先決條件。

第48頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月統(tǒng)計質(zhì)控方法

基線測定質(zhì)控規(guī)則的表達方式及定義Levey-Jennings質(zhì)控圖方法Levey-Jennings質(zhì)控圖結(jié)合Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法累積和(CUSUM)質(zhì)控方法“即刻法”質(zhì)控方法第49頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月基線測定最佳條件下的變異（Optimalconditionsvariance,OCV）和常規(guī)條件下的變異（Routineconditionsvariance,RCV）；當RCV與OCV接近，或小于2OCV時，則RCV是可以接受的。以上為批間變異。批內(nèi)變異的測定；室內(nèi)質(zhì)控物的測定準確度的評價。第50頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月臨床基因擴增檢驗IQC統(tǒng)計

計算問題可使用質(zhì)控樣本擴增后的拷貝數(shù)/ml或IU/ml來進行統(tǒng)計計算，也可用其對數(shù)值進行。由于基因擴增結(jié)果的原始數(shù)據(jù)通常很大，故使用其對數(shù)值來進行質(zhì)控統(tǒng)計分析可能要更為方便一些。

第51頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月質(zhì)控規(guī)則的表達方式及定義

質(zhì)控規(guī)則的表達方式質(zhì)控規(guī)則的功能常用質(zhì)控規(guī)則的符號及定義

第52頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月質(zhì)控規(guī)則的表達方式通常質(zhì)控規(guī)則以符號AL來表示，其中A為質(zhì)控測定中超出質(zhì)量控制限的測定值的個數(shù)，L為控制限，通常用均值或均值±1～3SD來表示。當質(zhì)控測定值超出控制限L時，即可將該批測定判為失控。常用的13S質(zhì)控規(guī)則，其中1為原式中的A，3s為原式中的L，表示均值±3s，其確切的含義為：在質(zhì)控測定值中，如果有一個測定值超出均值±3s范圍，即可將該批測定判為失控。第53頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月質(zhì)控規(guī)則的功能

簡單地說就是用于判斷測定批的失控還是在控。第54頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月常用質(zhì)控規(guī)則的符號及定義

符號

定義12S

一個質(zhì)控測定值超出±2s控制限。13S

一個質(zhì)控測定值超出±3s控制限。22S

兩個連續(xù)的質(zhì)控測定值同時超出+2s或－2s控制限。R4S

同一批測定中，兩個不同濃度質(zhì)控物的測定值之間的差值超出4s控制限。41S

四個連續(xù)的質(zhì)控測定值同時超出+1s或－1s控制限。7T

七個連續(xù)的質(zhì)控測定值呈現(xiàn)一個向上或向下的趨勢變化。10X

十個連續(xù)的質(zhì)控測定值同時處于均值（）的同一側(cè)。第55頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月Levey-Jennings質(zhì)控圖方法

也稱Shewhart質(zhì)控圖，是由美國的Shewhart于1924年首先提出，并用于工業(yè)產(chǎn)品的質(zhì)量控制。二十世紀五十年代初，Levey-Jennings將其引入臨床檢驗的質(zhì)量控制。經(jīng)Henry和Segalove的改良，即為目前常用的Levey-Jennings質(zhì)控圖。第56頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月Levey-Jennings質(zhì)控圖第57頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月第58頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月Levey-Jennings質(zhì)控圖

基本的統(tǒng)計學含義穩(wěn)定條件下，在20個IQC結(jié)果中不應有多于1個結(jié)果超過2SD（95.5%可信限）限度；在1000個測定結(jié)果中超過3SD（99.7%可信限）的結(jié)果不多于3個。如以±3s為失控限，假失控的概率為0.3%。第59頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月質(zhì)控圖的記錄質(zhì)控結(jié)果日期試劑質(zhì)控物批號和含量測定者姓名等。

第60頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月Levey-Jennings質(zhì)控圖方法的特點優(yōu)點：簡單明了缺點：以±2s為失控限，假失控的概率太高，通常不能接受。以±3s為失控限，假失控的概率低，但誤差檢出能力不強。第61頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月Levey-Jennings質(zhì)控圖結(jié)合Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法

Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法即是將前述的多個質(zhì)控規(guī)則同時應用進行質(zhì)控判斷的方法。最初常用的有六個質(zhì)控規(guī)則，即12S、13S、22S、R4S、41S和10X，其中12S規(guī)則作為告警規(guī)則。13S和R4S規(guī)則反映的是隨機誤差。22S、41S和10X反映的是系統(tǒng)誤差，系統(tǒng)誤差超出一定的程度，也可從13S和R4S規(guī)則反映出來。

第62頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法的特點在Levey-Jennings質(zhì)控圖方法的基礎上產(chǎn)生，具有Levey-Jennings質(zhì)控圖方法的優(yōu)點，可通過相似的質(zhì)控圖來進行分析。假失控和假告警概率低。誤差檢出能力增強。第63頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月累積和(CUSUM)質(zhì)控方法累積和(CUSUM)質(zhì)控方法于1977年由Westgard等提出,對系統(tǒng)誤差有較好的測出能力。

第64頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月常用的累積和(CUSUM)質(zhì)控規(guī)則

質(zhì)控規(guī)則起動累積和計算的閾值（k）質(zhì)控限（h）

±1.0s±2.7s±1.0s±3.0s±0.5s±5.1s第65頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月累積和(CUSUM)質(zhì)控圖第66頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月“即刻”質(zhì)控方法

“即刻法”的實質(zhì)是一種統(tǒng)計學方法,即Grubs異常值取舍法只要有3個以上的數(shù)據(jù)即可決定是否有異常值的存在。第67頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)的評價

IQC為一集體活動，除實際測定者外，還應有另外一人對測定數(shù)據(jù)進行質(zhì)檢。不能將IQC作為一個監(jiān)察方法，當發(fā)現(xiàn)一次測定未達到質(zhì)量標準時，應以建設性的而非批評的方式去探查失控的原因。除了將IQC數(shù)據(jù)作為日常質(zhì)控外，還應定期評價累積數(shù)據(jù)以監(jiān)測在測定操作中的長期變化趨勢。評價應定期進行。第68頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月弱陽性質(zhì)控樣本常見的失控原因

核酸提取中的隨機誤差。如核酸提取中的丟失、有機溶劑的去除不徹底、標本中擴增抑制物的殘留等。儀器的問題。如擴增儀孔間溫度的不均一性、孔內(nèi)溫度與所示溫度的不一致性等。試劑的問題。如Taq酶和/或逆轉(zhuǎn)錄酶的失活、探針的純度及標記效率和核酸提取試劑的效率等。第69頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月陰性質(zhì)控樣本的失控原因

主要為擴增產(chǎn)物的“污染”和/或臨床標本的核酸提取過程中發(fā)生的標本間的交叉“污染”.

第70頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月IQC的局限性在免疫測定中IQC可能測不出的誤差

測定前

測定中

測定后

樣本鑒定不對樣本吸取不對結(jié)果記錄錯誤

樣本貯存中變質(zhì)試劑加入不對此類誤差的發(fā)生率在不同的實驗室有所不同，一般要求小于

0.1%，且應均衡地分布于測定前、測定中和測定后的不同階段。

第71頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月影響臨床基因擴增檢驗結(jié)果的

最關鍵因素產(chǎn)物“污染”（Carry-over)測定人員的操作：標本混淆；貼錯標簽、核酸提取等試劑第72頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月避免基因擴增檢驗假陽性結(jié)果的措施嚴格的實驗室分區(qū)；使用帶“濾心”的吸頭；設立“陰性”質(zhì)控（與標本同時處理）；使用防“污染”（含UNG）的PCR試劑；臨床“假陽性”問題：病原微生物如結(jié)核桿菌經(jīng)藥物治療后已死亡，但PCR仍可為陽性，故治療結(jié)束后至少兩周內(nèi)不宜做PCR檢測。第73頁，課件共84頁，創(chuàng)作于2023年2月避免基因擴增檢驗假陰性結(jié)果的措施避免由于來自于標本的血紅蛋白、肝素、某些激素或來自標本處理中的去垢劑、有機溶劑的抑制作用的措施：純化核酸；標本重復雙份測定；稀釋標本。使用“內(nèi)質(zhì)控”（InternalControl,IC)以避免由于試劑、擴增