第33講基因工程[課程導(dǎo)學(xué)]課標(biāo)要求素養(yǎng)目標(biāo)1.概述基因工程是在遺傳學(xué)、微生物學(xué)、生物化學(xué)和分子生物學(xué)等學(xué)科基礎(chǔ)上發(fā)展而來(lái)的。2．闡明DNA重組技術(shù)的實(shí)現(xiàn)需要利用限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)、DNA連接酶和載體三種基本工具。3．闡明基因工程的基本操作程序主要包括目的基因的獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞和目的基因及其表達(dá)產(chǎn)物的檢測(cè)、鑒定等步驟。4．舉例說(shuō)明基因工程在農(nóng)牧、食品及醫(yī)藥等行業(yè)的廣泛應(yīng)用改善了人類(lèi)的生活品質(zhì)。5．概述人們根據(jù)基因工程原理，進(jìn)行蛋白質(zhì)設(shè)計(jì)和改造，可以獲得性狀和功能更符合人類(lèi)需求的蛋白質(zhì)。6．舉例說(shuō)明依據(jù)人類(lèi)需要對(duì)原有蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)進(jìn)行基因改造，生產(chǎn)目標(biāo)蛋白的過(guò)程。7．DNA的粗提取與鑒定。1.生命觀念：能結(jié)合生活或生產(chǎn)實(shí)例，舉例說(shuō)出基因工程的基本原理。能以系統(tǒng)思想、結(jié)構(gòu)與功能適應(yīng)觀、物質(zhì)與能量觀以及生物與環(huán)境統(tǒng)一觀等生命觀念為指導(dǎo)，綜合運(yùn)用科學(xué)、技術(shù)、工程和數(shù)學(xué)，設(shè)計(jì)方案，解決特定問(wèn)題，解釋基因工程的基本步驟原理。2．科學(xué)思維：能對(duì)基因工程的原理、技術(shù)、目的等開(kāi)展分析、討論和評(píng)價(jià)；能認(rèn)識(shí)基因工程對(duì)農(nóng)牧、食品及醫(yī)藥等行業(yè)的影響。3．科學(xué)探究：針對(duì)人類(lèi)生產(chǎn)或生活的某一需求，在基因工程中選取恰當(dāng)?shù)募夹g(shù)和方法，嘗試提出初步的工程構(gòu)想，并進(jìn)行簡(jiǎn)單的設(shè)計(jì)和制作。4．社會(huì)責(zé)任：基因工程和蛋白質(zhì)工程在生產(chǎn)實(shí)踐中的應(yīng)用?？键c(diǎn)一基因工程的操作工具1．基因工程的概念2．限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)3．DNA連接酶4．載體【考點(diǎn)速覽·診斷】(1)在構(gòu)建基因表達(dá)載體中需要使用的工具酶有限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶和運(yùn)載體[2020·全國(guó)卷Ⅲ，T38(1)改編](×)(2)若用家蠶作為表達(dá)基因A的受體，應(yīng)選昆蟲(chóng)病毒作為載體[2017·全國(guó)卷Ⅰ，T38(2)改編](√)(3)質(zhì)粒載體作為基因工程的工具，應(yīng)具備的基本條件有能自我復(fù)制、具有標(biāo)記基因、有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)[2016·全國(guó)卷Ⅰ，T40(1)改編](√)(4)基因工程中，某些噬菌體經(jīng)改造后可以作為載體，其DNA復(fù)制所需的原料來(lái)自受體細(xì)胞[2016·全國(guó)卷Ⅰ，T40(3)改編](√)【教材拾遺·拓展】1．(選修3P4“尋根問(wèn)底”改編)根據(jù)你所掌握的知識(shí)，分析限制酶存在于原核生物中的作用。提示：限制酶是細(xì)菌的一種防御性工具，當(dāng)外源DNA侵入時(shí)，細(xì)菌會(huì)利用限制酶將外源DNA切割掉，以保證自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA使之失效，從而達(dá)到保護(hù)自身的目的。2．(選修3P6“尋根問(wèn)底”改編)DNA連接酶和DNA聚合酶的作用相同嗎？試簡(jiǎn)要說(shuō)明。提示：不相同。DNA連接酶連接的是兩個(gè)DNA片段，而DNA聚合酶是將單個(gè)的脫氧核苷酸連接到DNA片段上。3．(選修3P6“旁欄思考”)想一想，具備什么條件才能充當(dāng)“分子運(yùn)輸車(chē)”？提示：能自我復(fù)制、有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)、有標(biāo)記基因及對(duì)受體細(xì)胞無(wú)害等。1．限制酶的選擇技巧(1)根據(jù)目的基因兩端的限制酶切割位點(diǎn)確定限制酶的種類(lèi)①應(yīng)選擇切割位點(diǎn)位于目的基因兩端的限制酶，如圖甲可選擇PstⅠ。②不能選擇切割位點(diǎn)位于目的基因內(nèi)部的限制酶，如圖甲不能選擇SmaⅠ。③為避免目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化和隨意連接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，如圖甲也可選擇PstⅠ和EcoRⅠ兩種限制酶(但要確保質(zhì)粒上也有這兩種酶的切割位點(diǎn)，如圖乙)。(2)根據(jù)質(zhì)粒的特點(diǎn)確定限制酶的種類(lèi)①所選限制酶要與切割目的基因的限制酶一致，以確保產(chǎn)生相同的黏性末端。②質(zhì)粒作為載體必須具備標(biāo)記基因等，所以所選擇的限制酶盡量不要破壞這些結(jié)構(gòu)，如圖乙中限制酶SmaⅠ會(huì)破壞標(biāo)記基因；如果所選酶的切割位點(diǎn)不是一個(gè)，則切割重組后可能丟失某些片段，若丟失的片段含復(fù)制起點(diǎn)區(qū)，則切割重組后的片段進(jìn)入受體細(xì)胞后不能進(jìn)行自主復(fù)制。2．載體上標(biāo)記基因的標(biāo)記原理載體上的標(biāo)記基因一般是一些抗生素的抗性基因。目的基因要轉(zhuǎn)入的受體細(xì)胞沒(méi)有抵抗相關(guān)抗生素的能力。當(dāng)含有抗生素抗性基因的載體進(jìn)入受體細(xì)胞后，抗性基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，使受體細(xì)胞能夠抵抗相應(yīng)抗生素，所以在受體細(xì)胞的培養(yǎng)體系中加入該種抗生素就可以篩選出轉(zhuǎn)入載體的受體細(xì)胞，原理如下圖所示：1．(2021·山東青島高三期末)青蒿素是有效的抗瘧疾藥物，但野生黃花蒿青蒿素產(chǎn)量低，為緩解青蒿素供應(yīng)不足的狀況，科學(xué)家將tms基因和tmr基因?qū)朦S花蒿的愈傷組織從而獲得了黃花蒿的冠癭組織，實(shí)驗(yàn)過(guò)程用到的部分結(jié)構(gòu)如下圖。請(qǐng)據(jù)圖回答問(wèn)題：(1)在構(gòu)建重組Ti質(zhì)粒的過(guò)程中常使用兩種能產(chǎn)生不同黏性末端的限制性核酸內(nèi)切酶對(duì)目的基因和Ti質(zhì)粒分別進(jìn)行切割，這樣做的好處有_________________________________________________________________________________________________________________________________。(2)將目的基因?qū)朦S花蒿愈傷組織前，先將目的基因?qū)氲睫r(nóng)桿菌，農(nóng)桿菌的作用是___________________________________________________________________________________________________________________________。(3)為了準(zhǔn)確鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因并將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái)，所選的Ti質(zhì)粒至少應(yīng)包含________種抗生素抗性基因，以便篩選和鑒別。(4)與愈傷組織相比，冠癭組織的生長(zhǎng)速度更快，原因可能是__________________________________________________________________________________________________________________________________。(5)艾弗里等人的肺炎雙球菌轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)為證明DNA是遺傳物質(zhì)做出了重要貢獻(xiàn)，也可以說(shuō)是基因工程的先導(dǎo)，如果說(shuō)他們的工作為基因工程理論的建立提供了啟示，那么，這一啟示是________________________________________________________________________________________________________________。解析：(1)在構(gòu)建重組Ti質(zhì)粒的過(guò)程中常使用兩種能產(chǎn)生不同黏性末端的限制性核酸內(nèi)切酶對(duì)目的基因和Ti質(zhì)粒分別進(jìn)行切割，可以避免目的基因和Ti質(zhì)粒的自身連接成環(huán)和反向連接(可使目的基因定向插入Ti質(zhì)粒)。(2)將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞時(shí)，常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，是因?yàn)檗r(nóng)桿菌可感染植物并將目的基因轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞中。(3)圖中插入了2個(gè)目的基因，為了準(zhǔn)確鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，并將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái)，所選的Ti質(zhì)粒至少應(yīng)包含2種抗生素抗性基因，以便篩選和鑒別。(4)據(jù)Ti質(zhì)粒圖示可知，Ti質(zhì)粒中的tms基因和tmr基因編碼產(chǎn)物控制合成了生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素，促進(jìn)了冠癭組織的生長(zhǎng)，因此與愈傷組織相比，冠癭組織的生長(zhǎng)速度更快。(5)肺炎雙球菌轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中，S型菌的DNA進(jìn)入R型菌中并能表達(dá)，說(shuō)明DNA可以從一種生物個(gè)體轉(zhuǎn)移到另一種生物個(gè)體，為基因工程理論的建立提供了啟示。答案：(1)可以避免目的基因和Ti質(zhì)粒的自身連接成環(huán)和反向連接(可使目的基因定向插入Ti質(zhì)粒)(2)農(nóng)桿菌可感染植物并將目的基因轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞中(3)2(4)tms基因和tmr基因編碼產(chǎn)物控制合成了生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素，促進(jìn)了冠癭組織的生長(zhǎng)(5)DNA可以從一種生物個(gè)體轉(zhuǎn)移到另一種生物個(gè)體2．(2021·廣東汕頭高三月考)菊花很美，但其害蟲(chóng)較多，利用基因工程培育抗蟲(chóng)菊花是害蟲(chóng)防治的有效手段。胰蛋白酶抑制劑能干擾昆蟲(chóng)的代謝，引起昆蟲(chóng)死亡，但對(duì)人體無(wú)害。科學(xué)家將馬鈴薯胰蛋白酶抑制劑基因(Pin-Ⅱ)通過(guò)農(nóng)桿菌導(dǎo)入菊花細(xì)胞，培育成了抗蟲(chóng)菊花。圖1表示含目的基因的DNA分子，圖2表示質(zhì)粒，圖中Ampr表示氨芐青霉素抗性基因，Neor表示新霉素抗性基因，復(fù)制原點(diǎn)是質(zhì)粒DNA復(fù)制的起點(diǎn)，使其能在受體細(xì)胞中存在和遺傳。箭頭表示識(shí)別序列完全不同的4種限制酶的酶切位點(diǎn)。請(qǐng)回答下列有關(guān)問(wèn)題：(1)上述基因工程中，受體細(xì)胞是____________，屬于________(填“動(dòng)物”“植物”或“微生物”)基因工程。(2)為使目的基因與質(zhì)粒高效重組，最好選用____________________(限制酶)作用于含目的基因的DNA和質(zhì)粒，然后在____________________的作用下形成重組質(zhì)粒。(3)用農(nóng)桿菌感染時(shí)，應(yīng)優(yōu)先選用菊花________(填“受傷的”或“完好的”)葉片與含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌共同培養(yǎng)，選用這種葉片的理由是___________________________________________________________________________________________________________________________________。成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的細(xì)胞會(huì)表現(xiàn)為_(kāi)_______________________________。(4)用轉(zhuǎn)基因菊花葉片喂養(yǎng)某種菊花害蟲(chóng)，發(fā)現(xiàn)害蟲(chóng)死亡率顯著增加。試從分子水平寫(xiě)出轉(zhuǎn)基因菊花和非轉(zhuǎn)基因菊花葉片細(xì)胞的不同點(diǎn)：____________________________________________________________________。解析：(1)該基因工程需要將胰蛋白酶抑制劑基因?qū)刖栈?xì)胞，使菊花具有抗蟲(chóng)性，所以受體細(xì)胞是菊花細(xì)胞，屬于植物基因工程。(2)目的基因的兩端含有EcoRⅠ、Tth111Ⅰ、PstⅠ三種限制酶的酶切位點(diǎn)，為了避免目的基因自身環(huán)化，不能只用EcoRⅠ這一種限制酶進(jìn)行切割，若用EcoRⅠ和Tth111Ⅰ切割目的基因，相應(yīng)的在對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行切割時(shí)會(huì)將復(fù)制原點(diǎn)切去，因此，為使目的基因與質(zhì)粒高效重組，最好選用EcoRⅠ和PstⅠ作用于含目的基因的DNA和質(zhì)粒，然后在DNA連接酶的作用下形成重組質(zhì)粒。(3)用農(nóng)桿菌感染時(shí)，應(yīng)優(yōu)先選用菊花受傷的葉片與含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌共同培養(yǎng)，選用這種葉片的理由是葉片傷口處的細(xì)胞釋放出大量酚類(lèi)化合物，可吸引農(nóng)桿菌移向這些細(xì)胞。重組質(zhì)粒構(gòu)建過(guò)程中用EcoRⅠ和PstⅠ進(jìn)行切割，PstⅠ會(huì)破壞氨芐青霉素抗性基因，因此質(zhì)粒上保留完整的標(biāo)記基因是新霉素抗性基因，據(jù)此可知成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的細(xì)胞會(huì)表現(xiàn)為不抗氨芐青霉素，抗新霉素。(4)題意顯示用轉(zhuǎn)基因菊花葉片喂養(yǎng)某種菊花害蟲(chóng)，發(fā)現(xiàn)害蟲(chóng)死亡率顯著增加，說(shuō)明轉(zhuǎn)基因菊花葉片中的目的基因成功表達(dá)出來(lái)胰蛋白酶抑制劑，進(jìn)而干擾昆蟲(chóng)代謝，引起昆蟲(chóng)死亡，因此，從分子水平可知轉(zhuǎn)基因菊花和非轉(zhuǎn)基因菊花葉片細(xì)胞的不同點(diǎn)是轉(zhuǎn)基因菊花葉片細(xì)胞中含有胰蛋白酶抑制劑基因、胰蛋白酶抑制劑的mRNA、胰蛋白酶抑制劑。答案：(1)菊花細(xì)胞植物(2)EcoRⅠ和PstⅠDNA連接酶(3)受傷的葉片傷口處的細(xì)胞釋放出大量酚類(lèi)化合物，可吸引農(nóng)桿菌移向這些細(xì)胞不抗氨芐青霉素，抗新霉素(4)轉(zhuǎn)基因菊花葉片細(xì)胞中含有胰蛋白酶抑制劑基因、胰蛋白酶抑制劑的mRNA、胰蛋白酶抑制劑四類(lèi)受體細(xì)胞的篩選與判定當(dāng)用相應(yīng)的限制酶切割了目的基因與載體后，可將二者混合，加入DNA連接酶進(jìn)行連接反應(yīng)，用得到的混合物直接轉(zhuǎn)化受體細(xì)胞，其結(jié)果有如下四種：上述四類(lèi)受體細(xì)胞中通過(guò)“標(biāo)記基因”(制備的培養(yǎng)基)可區(qū)分出(1)(2)與(3)(4)，而通過(guò)DNA分子雜交技術(shù)，可進(jìn)一步區(qū)分(3)與(4)?？键c(diǎn)二基因工程的基本操作1．目的基因的獲取(1)目的基因：主要指編碼蛋白質(zhì)的基因，也可以是一些具有調(diào)控作用的因子。(2)獲取方法2．基因表達(dá)載體的構(gòu)建——基因工程的核心[提醒](1)啟動(dòng)子≠起始密碼子，終止子≠終止密碼子①啟動(dòng)子：一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的首端。它是RNA聚合酶識(shí)別、結(jié)合的部位。②終止子：一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的尾端。作用是使轉(zhuǎn)錄過(guò)程停止。③起始密碼子和終止密碼子位于mRNA上，分別控制翻譯過(guò)程的啟動(dòng)和終止。(2)標(biāo)記基因：一般為抗生素抗性基因或熒光基因等，其作用是鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因(目的基因是否導(dǎo)入成功)，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái)。3．將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞項(xiàng)目植物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞微生物細(xì)胞常用方法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法顯微注射法轉(zhuǎn)化法受體細(xì)胞體細(xì)胞或受精卵受精卵原核細(xì)胞過(guò)程將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA上→導(dǎo)入農(nóng)桿菌→侵染植物細(xì)胞→整合到受體細(xì)胞中染色體的DNA上→表達(dá)Ca2＋處理細(xì)胞→感受態(tài)細(xì)胞→重組表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合→感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子【考點(diǎn)速覽·診斷】(1)基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得?；蛭膸?kù)包括基因組文庫(kù)和cDNA文庫(kù)[2019·全國(guó)卷Ⅰ，T38(1)改編](√)(2)在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是加熱至90～95℃[2019·全國(guó)卷Ⅰ，T38(2)改編](√)(3)目前在PCR反應(yīng)中使用Taq酶而不使用大腸桿菌DNA聚合酶的主要原因是Taq酶熱穩(wěn)定性高，而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下會(huì)失活[2019·全國(guó)卷Ⅰ，T38(3)改編](√)(4)若要獲得蛋白質(zhì)Y的基因，可從人的T細(xì)胞中提取DNA作為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶催化下合成cDNA，再利用PCR技術(shù)在體外擴(kuò)增獲得大量Y的基因[2019·海南卷，T31(1)改編](×)(5)將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用的方法是顯微注射法[2019·海南卷，T31(2)改編](×)(6)若要檢測(cè)基因A是否翻譯出蛋白A，可用的檢測(cè)物質(zhì)是蛋白A的基因[2017·全國(guó)卷Ⅰ，T38(4)改編](×)【教材拾遺·拓展】1．(選修3P8“求異思維”改編)mRNA反轉(zhuǎn)錄形成cDNA過(guò)程大致的步驟有哪三步？提示：第一步，mRNA在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下形成RNA－DNA雜交分子；第二步，在核酸酶的作用下將RNA－DNA雜交分子中的RNA水解掉，形成單鏈DNA；第三步，以單鏈DNA為模板，在DNA聚合酶的作用下形成雙鏈DNA。2．(選修3P15圖1－15改編)轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉培育過(guò)程中，檢測(cè)目的基因是否成功表達(dá)的常見(jiàn)方法有哪兩種？提示：抗原—抗體雜交法、用棉葉飼喂棉鈴蟲(chóng)。1．基因組文庫(kù)與部分基因文庫(kù)的比較項(xiàng)目基因組文庫(kù)部分基因文庫(kù)(cDNA文庫(kù))構(gòu)建基因文庫(kù)的過(guò)程其他區(qū)別①含某種生物全部基因；②有啟動(dòng)子、內(nèi)含子；③部分可與其他生物進(jìn)行基因交流①含該種生物“部分”基因；②無(wú)啟動(dòng)子、內(nèi)含子；③均可與其他生物進(jìn)行基因交流技術(shù)(1)原理：DNA雙鏈復(fù)制。eq\x(\a\al(雙鏈,DNA))eq\o(,\s\up7(加熱，雙螺旋結(jié)構(gòu)解體),\s\do5(緩慢冷卻，分離的DNA鏈重新結(jié)合))eq\x(\a\al(單鏈,DNA))(2)PCR反應(yīng)過(guò)程過(guò)程說(shuō)明圖解變性當(dāng)溫度上升到90℃以上時(shí)，雙鏈DNA解聚為單鏈復(fù)性溫度下降到50℃左右，兩種引物通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)與兩條單鏈DNA結(jié)合延伸72℃左右時(shí)，Taq酶有最大活性，可使DNA新鏈由5′端向3′端延伸(3)結(jié)果：上述三步反應(yīng)完成后，一個(gè)DNA分子就變成了兩個(gè)DNA分子，隨著重復(fù)次數(shù)的增多，DNA分子就以2n的指數(shù)形式增加。PCR的反應(yīng)過(guò)程都是在PCR擴(kuò)增儀中完成的。(4)關(guān)于引物(5)循環(huán)圖示與規(guī)律循環(huán)次數(shù)123nDNA分子數(shù)2482n含引物A(或B)的DNA分子數(shù)1372n－1同時(shí)含引物A、B的DNA分子數(shù)0＝21－22＝22－26＝23－22n－2共消耗的引物數(shù)量2＝21＋1－26＝22＋1－214＝23＋1－22n＋1－2注：第三輪循環(huán)后，開(kāi)始出現(xiàn)雙鏈等長(zhǎng)的目的基因片段。3．基因工程操作過(guò)程中易出現(xiàn)的錯(cuò)誤(1)目的基因的插入位點(diǎn)不是隨意的：基因表達(dá)需要啟動(dòng)子與終止子的調(diào)控，所以目的基因應(yīng)插入到啟動(dòng)子與終止子之間的部位。(2)基因工程操作過(guò)程中只有第三步(將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞)沒(méi)有堿基互補(bǔ)配對(duì)的現(xiàn)象：第一步存在逆轉(zhuǎn)錄法獲得DNA，第二步存在黏性末端連接現(xiàn)象，第四步存在檢測(cè)分子水平雜交。(3)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法原理：農(nóng)桿菌易感染植物細(xì)胞，并將其Ti質(zhì)粒上的T-DNA轉(zhuǎn)移并整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上。(4)目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程，稱(chēng)為轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)化的實(shí)質(zhì)是目的基因整合到受體細(xì)胞染色體的基因組中。(5)標(biāo)記基因的種類(lèi)和作用：常見(jiàn)的標(biāo)記基因有抗生素抗性基因、發(fā)光基因(表達(dá)產(chǎn)物為帶顏色的物質(zhì))等，標(biāo)記基因的作用——篩選、檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞。(6)受體細(xì)胞的選擇：受體細(xì)胞常用植物受精卵或體細(xì)胞(經(jīng)組織培養(yǎng))、動(dòng)物受精卵(一般不用體細(xì)胞)、微生物(大腸桿菌、酵母菌)等。要合成糖蛋白、有生物活性的胰島素則必須用真核生物，如酵母菌(需內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體的加工、分泌)；一般不用支原體，原因是它營(yíng)寄生生活，無(wú)細(xì)胞核，也沒(méi)有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體等細(xì)胞器，不能合成蛋白質(zhì)；一定不能用哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞，原因是它無(wú)細(xì)胞核，也沒(méi)有核糖體等細(xì)胞器，不能合成蛋白質(zhì)。1．(2021·廣東揭陽(yáng)高三月考)乙肝病毒表面有T1蛋白和T2蛋白，免疫接種實(shí)驗(yàn)表明這兩種蛋白質(zhì)都可引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的免疫反應(yīng)?？蒲腥藛T用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法培育出轉(zhuǎn)基因番茄，用于生產(chǎn)可口服的乙肝病毒疫苗，為預(yù)防乙肝開(kāi)辟了一條新途徑?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)T1蛋白和T2蛋白進(jìn)入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的腸道后，會(huì)被實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小腸黏膜上的一種M細(xì)胞當(dāng)作________處理，進(jìn)而引發(fā)一系列的免疫反應(yīng)，最終產(chǎn)生相應(yīng)的___________________________________________________________________________________________________________________________，使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物獲得了對(duì)乙肝病毒的免疫能力。(2)構(gòu)建基因表達(dá)載體是基因工程的核心，其目的是_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________。構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)，需要選擇果實(shí)特異性啟動(dòng)子，其目的是___________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)用轉(zhuǎn)基因番茄生產(chǎn)可口服的乙肝病毒疫苗(含T1蛋白)，若要檢測(cè)目的基因是否翻譯出T1蛋白，可用的檢測(cè)物質(zhì)是____________________(填“T1蛋白的基因”或“T1蛋白的抗體”)，該檢測(cè)方法稱(chēng)為_(kāi)___________________。(4)獲得轉(zhuǎn)基因番茄植株后，已確定該植株所結(jié)番茄中含有T2蛋白，此后還要對(duì)T2蛋白的功能進(jìn)行個(gè)體水平的鑒定，方法是_________________________________________________________________________________________。解析：(1)T1蛋白和T2蛋白是乙肝病毒表面的蛋白質(zhì)，進(jìn)入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的腸道后，會(huì)被當(dāng)作抗原處理，進(jìn)而引發(fā)一系列的免疫反應(yīng)，最終產(chǎn)生相應(yīng)的記憶細(xì)胞和抗體。(2)構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。要想使目的基因在番茄果實(shí)細(xì)胞中特異性表達(dá)，在構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)，需要選擇果實(shí)特異性啟動(dòng)子。(3)用轉(zhuǎn)基因番茄生產(chǎn)可口服的乙肝病毒疫苗(含T1蛋白)，若要檢測(cè)目的基因是否翻譯出T1蛋白，可用T1蛋白的抗體進(jìn)行抗原—抗體雜交。(4)乙肝病毒表面有T1蛋白和T2蛋白，免疫接種實(shí)驗(yàn)表明這兩種蛋白質(zhì)都可引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的免疫反應(yīng)。在已確定該轉(zhuǎn)基因番茄植株所結(jié)番茄中含有T2蛋白的前提下，進(jìn)行個(gè)體水平的鑒定方法是用轉(zhuǎn)基因番茄植株生產(chǎn)的T2蛋白對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行免疫接種實(shí)驗(yàn)(或用轉(zhuǎn)基因番茄植株的果實(shí)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行口服免疫)。答案：(1)抗原抗體和記憶細(xì)胞(2)使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用使目的基因在番茄果實(shí)細(xì)胞中特異性表達(dá)(3)T1蛋白的抗體抗原—抗體雜交(4)用轉(zhuǎn)基因番茄植株生產(chǎn)的T2蛋白對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行免疫接種實(shí)驗(yàn)(或用轉(zhuǎn)基因番茄植株的果實(shí)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行口服免疫)2．(2021·江蘇南京高三一調(diào))乳腺炎和口蹄疫分別是由細(xì)菌和病毒引起的危害奶牛養(yǎng)殖業(yè)的兩種嚴(yán)重疾病。研究者利用生物技術(shù)培育出轉(zhuǎn)牛乳鐵蛋白肽(抗細(xì)菌)和干擾素(抗病毒)基因的雙轉(zhuǎn)基因奶牛品種。下圖1為基因表達(dá)載體，圖2為培育流程。請(qǐng)據(jù)圖回答問(wèn)題：(1)構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)需要用到的工具酶是________________________。(2)基因表達(dá)過(guò)程包括________________，圖1中一般能同時(shí)表達(dá)的基因是__________________________________________。新霉素抗性基因的作用是______________________________________________。(3)圖2中研究者可利用________________技術(shù)篩選出干擾素基因成功表達(dá)的胚胎進(jìn)行移植。(4)若利用PCR技術(shù)增加目的基因的數(shù)量，由圖3可知，A、B、C、D四種單鏈DNA片段中應(yīng)選取________作為引物(DNA復(fù)制子鏈的延伸方向5′→3′)。若上圖所示基因復(fù)制2次，則共需要這兩種引物各________個(gè)；PCR程序中“適溫延伸”中的適溫是________酶的最適溫度。解析：(1)構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)需要用到的工具酶是限制酶和DNA連接酶。(2)基因表達(dá)過(guò)程包括轉(zhuǎn)錄和翻譯，據(jù)圖可知，干擾素基因和新霉素抗性基因均位于相同的啟動(dòng)子和終止子之間，可同時(shí)轉(zhuǎn)錄。新霉素抗性基因的作用是便于篩選出含有目的基因的細(xì)胞。(3)干擾素基因可在牛全身細(xì)胞表達(dá)，因此篩選胚胎時(shí)可利用抗原—抗體雜交技術(shù)篩選出干擾素基因成功表達(dá)的胚胎。(4)若利用PCR技術(shù)增加目的基因的數(shù)量，由圖3可知，DNA復(fù)制只能從5′到3′，因此構(gòu)建前利用PCR技術(shù)擴(kuò)增干擾素基因時(shí)，A、B、C、D四種單鏈DNA片段中應(yīng)選取B和C作為引物。若題圖所示基因復(fù)制2次，則共需要這兩種引物各3個(gè)；PCR程序中“適溫延伸”中的適溫是Taq(熱穩(wěn)定DNA聚合)酶的最適溫度。答案：(1)限制酶和DNA連接酶(2)轉(zhuǎn)錄和翻譯干擾素基因和新霉素抗性基因便于篩選出含有目的基因的細(xì)胞(3)抗原—抗體雜交(4)B和C3Taq(熱穩(wěn)定DNA聚合)篩選出含有目的基因的受體細(xì)胞的方法(1)原理：將目的基因插入含有兩種抗生素抗性基因的載體時(shí)，如果插入某種抗生素抗性基因內(nèi)部，則會(huì)導(dǎo)致該抗生素抗性基因失活。如圖，目的基因插入了四環(huán)素抗性基因內(nèi)部，則四環(huán)素抗性基因失活。(2)被轉(zhuǎn)化的細(xì)菌有三種：含環(huán)狀目的基因的細(xì)菌、含重組質(zhì)粒的細(xì)菌、含質(zhì)粒的細(xì)菌。(3)篩選方法：將混合處理后的細(xì)菌先放在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，能生長(zhǎng)的是含重組質(zhì)粒的細(xì)菌和含質(zhì)粒的細(xì)菌，如圖1、2、3、4、5菌落，再利用無(wú)菌的絨布影印到含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上，如圖能生長(zhǎng)的菌落為2、3、4，則在含四環(huán)素培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)的即為含有目的基因的菌落，如圖1、5菌落。最后，可在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上挑取1、5菌落進(jìn)行培養(yǎng)?？键c(diǎn)三基因工程的應(yīng)用與蛋白質(zhì)工程1．基因工程的應(yīng)用(1)(2)(3)(4)2．蛋白質(zhì)工程[提醒]基因工程不會(huì)導(dǎo)致受體細(xì)胞或生物產(chǎn)生“新基因”或“新蛋白質(zhì)”基因工程的實(shí)質(zhì)是“基因重組”，它是將外源基因?qū)胧荏w細(xì)胞，使該基因在受體細(xì)胞中表達(dá)——由于“外源基因”是自然界已存在的“現(xiàn)成”基因，故基因工程并未產(chǎn)生新基因，因此目的基因表達(dá)時(shí)也未產(chǎn)生新蛋白質(zhì)，基因工程只不過(guò)是讓受體細(xì)胞(或生物)實(shí)現(xiàn)了“外源基因的表達(dá)”?！究键c(diǎn)速覽·診斷】(1)Bt毒蛋白基因來(lái)源于蘇云金芽孢桿菌，對(duì)哺乳動(dòng)物有毒害作用(×)(2)乳腺生物反應(yīng)器是將藥用蛋白基因?qū)雱?dòng)物的乳腺細(xì)胞中(×)(3)用基因工程的方法，使外源基因得到高效表達(dá)的菌類(lèi)一般稱(chēng)為基因工程菌(√)(4)將蛋白質(zhì)Y的第6位氨基酸甲改變?yōu)榘被嵋铱商岣咂錈岱€(wěn)定性，這屬于蛋白質(zhì)工程[2019·海南卷，T31(3)改編](√)(5)為延長(zhǎng)干擾素保存時(shí)間，需要替換氨基酸；為提高玉米中賴(lài)氨酸含量，需要在蛋白質(zhì)中加入賴(lài)氨酸(×)(6)由大腸桿菌工程菌獲得的人干擾素可直接應(yīng)用(×)(7)蛋白質(zhì)工程是在分子水平上對(duì)蛋白質(zhì)分子直接進(jìn)行操作，定向改造分子的結(jié)構(gòu)(×)【教材拾遺·拓展】1．(選修3P27“異想天開(kāi)”改編)到目前為止還沒(méi)有生產(chǎn)出人類(lèi)需要的蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)的原因是什么？提示：蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)非常復(fù)雜，人們對(duì)蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)及其在生物體內(nèi)如何行使功能知之甚少。2．(選修3P26“旁欄思考”改編)對(duì)天然蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，你認(rèn)為應(yīng)該直接對(duì)蛋白質(zhì)分子進(jìn)行操作，還是通過(guò)對(duì)基因的操作來(lái)實(shí)現(xiàn)？原因是什么？提示：通過(guò)對(duì)基因的操作來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)天然蛋白質(zhì)的改造。原因是任何蛋白質(zhì)都是由基因編碼的，改造了基因即對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行了改造，而且改造過(guò)的基因可以遺傳下去。如果對(duì)蛋白質(zhì)直接進(jìn)行改造，即使改造成功了，被改造過(guò)的蛋白質(zhì)分子還是無(wú)法遺傳。1．基因治療≠基因診斷項(xiàng)目原理操作過(guò)程進(jìn)展基因治療基因表達(dá)將正?；?qū)胗谢蛉毕莸募?xì)胞中，以表達(dá)出正常性狀來(lái)治療(疾病)臨床試驗(yàn)基因診斷堿基互補(bǔ)配對(duì)制作特定DNA探針與病人樣品DNA混合，分析雜交帶情況臨床應(yīng)用系項(xiàng)目區(qū)別與聯(lián)系蛋白質(zhì)工程基因工程區(qū)別過(guò)程預(yù)期蛋白質(zhì)功能→設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列→找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列獲取目的基因→構(gòu)建基因表達(dá)載體→將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞→目的基因的檢測(cè)與鑒定實(shí)質(zhì)定向改造或生產(chǎn)人類(lèi)所需的蛋白質(zhì)定向改造生物的遺傳特性，以獲得人類(lèi)所需的類(lèi)型或生物產(chǎn)品結(jié)果可生產(chǎn)自然界沒(méi)有的蛋白質(zhì)只能生產(chǎn)自然界已有的蛋白質(zhì)聯(lián)系①蛋白質(zhì)工程是在基因工程的基礎(chǔ)上延伸出來(lái)的第二代基因工程；②基因工程中所利用的某些酶需要通過(guò)蛋白質(zhì)工程進(jìn)行修飾、改造1．(2021·深圳高三檢測(cè))果膠酶是應(yīng)用于果酒生產(chǎn)的重要酶制劑之一，它廣泛存在于細(xì)菌、酵母菌等多種微生物細(xì)胞中。某枯草桿菌含果膠酯酶基因，某釀酒酵母中含有多聚半乳糖醛酸酶基因。研究者利用基因工程技術(shù)實(shí)現(xiàn)了果膠酯酶基因在釀酒酵母中表達(dá)，克服了細(xì)菌作為外源基因表達(dá)系統(tǒng)的缺點(diǎn)，并且使多種有利特性集中在同一菌株，過(guò)程如下圖。回答下列問(wèn)題：(1)細(xì)菌因繁殖快、細(xì)胞內(nèi)存在易于分離的質(zhì)粒等優(yōu)點(diǎn)，是最早用于外源蛋白生產(chǎn)的“工廠”，其缺點(diǎn)是沒(méi)有________________________(填細(xì)胞器名稱(chēng))，因而不具有對(duì)蛋白質(zhì)加工修飾的功能。(2)①過(guò)程獲得的目的基因是______________________。該基因除了利用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增外，還可以從基因文庫(kù)中獲取。基因文庫(kù)包括基因組文庫(kù)和cDNA文庫(kù)，其中________________含有某種生物的全部基因，且具有內(nèi)含子。(3)②過(guò)程重組表達(dá)載體除了含有目的基因外，還必須有啟動(dòng)子、________和____________等。啟動(dòng)子是________________識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動(dòng)DNA轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得目的蛋白。(4)現(xiàn)利用目的基因制成放射性探針，如何利用此探針檢測(cè)目的基因是否成功導(dǎo)入釀酒酵母？__________________________________________________________________________________________________________。解析：(1)細(xì)菌為原核生物，是最早用于外源蛋白生產(chǎn)的“工廠”，其缺點(diǎn)是沒(méi)有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，因而不具有對(duì)蛋白質(zhì)加工修飾的功能。(2)根據(jù)題干可知，目的基因是果膠酯酶基因。該基因除了利用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增外，還可以從基因文庫(kù)中獲取?；蛭膸?kù)包括基因組文庫(kù)和cDNA文庫(kù)，其中基因組文庫(kù)含有某種生物的全部基因，且具有內(nèi)含子。(3)為順利表達(dá)目的基因，重組表達(dá)載體除了含有目的基因外，還必須有啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位。(4)基因探針是指用放射性同位素或熒光分子標(biāo)記的DNA單鏈，利用堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，將探針與提取的釀酒酵母DNA雜交，如果檢測(cè)到雜交帶，則目的基因?qū)氤晒?。答案?1)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體(2)果膠酯酶基因基因組文庫(kù)(3)終止子標(biāo)記基因RNA聚合酶(4)將探針與提取的釀酒酵母DNA雜交，如果檢測(cè)到雜交帶，則目的基因?qū)氤晒?．(2021·海南?？诟呷?前不久，某生物公司的百白破疫苗檢驗(yàn)不符合規(guī)定。為生產(chǎn)高效價(jià)疫苗和簡(jiǎn)化計(jì)劃免疫程序，科學(xué)家研制出基因工程乙肝—百白破(rHB—DTP)四聯(lián)疫苗，經(jīng)各項(xiàng)檢測(cè)均通過(guò)rHB—DTP四聯(lián)疫苗制檢規(guī)程的要求。其有效成分是乙肝病毒表面抗原、百日咳桿菌、白喉?xiàng)U菌和破傷風(fēng)桿菌的四種類(lèi)毒素。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)為獲取百日咳桿菌類(lèi)毒素的基因，可從百日咳桿菌的細(xì)胞中提取對(duì)應(yīng)mRNA，再合成雙鏈cDNA片段，獲得的cDNA片段與百日咳桿菌中該基因堿基序列________(填“相同”或“不同”)。(2)由于乙肝病毒表面抗原的基因序列比較小，且序列已知，獲得目的基因可采用______________________，然后通過(guò)PCR技術(shù)大量擴(kuò)增，此技術(shù)的前提是________________________________________________。(3)把目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞時(shí)，科學(xué)家采用了改造后的腺病毒作為載體，寫(xiě)出你認(rèn)為科學(xué)家選它的理由：__________________________________________(寫(xiě)出2點(diǎn))。(4)研究發(fā)現(xiàn)，如果將白喉?xiàng)U菌類(lèi)毒素20位和24位的氨基酸改變?yōu)榘腚装彼?，免疫效果更好，?qǐng)寫(xiě)出此種技術(shù)的基本流程：___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(5)實(shí)驗(yàn)證明，一定時(shí)間內(nèi)間隔注射該疫苗3次效果更好，其主要原因是體內(nèi)產(chǎn)生的__________細(xì)胞數(shù)量增多；當(dāng)同種抗原再次侵入人體時(shí)二次免疫的特點(diǎn)是_________________________________________________________________________________________________________________________________。解析：(1)由mRNA合成cDNA的過(guò)程屬于逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程，因此獲得的cDNA片段只包含基因的編碼區(qū)，沒(méi)有非編碼區(qū)，與百日咳桿菌中該基因堿基序列不同。(2)可通過(guò)化學(xué)方法人工合成(人工化學(xué)合成)序列較小且已知的基因片段；通過(guò)PCR技術(shù)大量擴(kuò)增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便合成引物。(3)改造后的腺病毒具有能自主復(fù)制、有多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)、有標(biāo)記基因、對(duì)宿主細(xì)胞無(wú)害等特點(diǎn)，故可用作載體。(4)將白喉?xiàng)U菌類(lèi)毒素20位和24位的氨基酸改變?yōu)榘腚装彼釋儆诘鞍踪|(zhì)工程的范疇，故其基本流程是從預(yù)期蛋白質(zhì)功能出發(fā)→設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列→找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列。(5)一定時(shí)間內(nèi)間隔注射該疫苗3次效果更好，其主要原因是體內(nèi)產(chǎn)生的記憶細(xì)胞數(shù)量增多；當(dāng)同種抗原再次侵入人體時(shí)二次免疫的特點(diǎn)是短時(shí)間內(nèi)迅速產(chǎn)生大量的抗體和記憶細(xì)胞，免疫預(yù)防作用更強(qiáng)。答案：(1)不同(2)化學(xué)方法人工合成(人工化學(xué)合成)要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便合成引物(3)能自主復(fù)制、有多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)、有標(biāo)記基因、對(duì)宿主細(xì)胞無(wú)害(寫(xiě)出2點(diǎn)即可)(4)從預(yù)期蛋白質(zhì)功能出發(fā)→設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列→找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列(5)記憶短時(shí)間內(nèi)迅速產(chǎn)生大量的抗體和記憶細(xì)胞，免疫預(yù)防作用更強(qiáng)考點(diǎn)四DNA的粗提取與鑒定1．實(shí)驗(yàn)原理(1)DNA與蛋白質(zhì)在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同項(xiàng)目溶解規(guī)律2mol/LNaCl溶液0.14mol/LNaCl溶液DNA溶解析出蛋白質(zhì)NaCl溶液物質(zhì)的量濃度從2mol/L逐漸降低的過(guò)程中，蛋白質(zhì)溶解度逐漸增大部分發(fā)生鹽析沉淀溶解(2)DNA不溶于酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)則溶于酒精，利用這一原理可將DNA與蛋白質(zhì)進(jìn)一步分離。(3)DNA與二苯胺沸水浴加熱，呈藍(lán)色。2．操作流程材料的選?。哼x用DNA含量相對(duì)較高的生物組織破碎細(xì)胞(以雞血為例)：雞血細(xì)胞→加蒸餾水→用玻璃棒攪拌→用紗布過(guò)濾→收集濾液去除雜質(zhì)：利用DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，通過(guò)控制NaCl溶液的濃度去除雜質(zhì)DNA的析出：將處理后的溶液過(guò)濾，加入與濾液體積相等的、冷卻的體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精溶液DNA的鑒定：在溶有DNA的溶液中加入二苯胺試劑，混合均勻后將試管置于沸水中加熱5min，溶液變成藍(lán)色Ｋ【教材拾遺·拓展】1．(選修1P55“旁欄思考”)加入蒸餾水能使雞血細(xì)胞破裂的原因是什么？提示：蒸餾水對(duì)于雞血細(xì)胞來(lái)說(shuō)是一種低滲液體，水分可以大量進(jìn)入血細(xì)胞內(nèi)，使血細(xì)胞脹裂。2．(選修1P55“旁欄思考”)加入洗滌劑和食鹽的作用分別是什么？提示：洗滌劑是一些離子去污劑，能溶解細(xì)胞膜，有利于DNA的釋放；食鹽的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。DNA的粗提取與鑒定中的“2、4、4”加蒸餾水2次①加到血細(xì)胞中，使血細(xì)胞吸水破裂；②加到含DNA的2mol/L的NaCl溶液中，使NaCl溶液的物質(zhì)的量濃度下降到0.14mol/L，使DNA析出用紗布過(guò)濾4次①過(guò)濾血細(xì)胞破裂液，得到含細(xì)胞核物質(zhì)的濾液；②過(guò)濾溶有DNA的2mol/L的NaCl溶液，取濾液；③濾取0.14mol/L的NaCl溶液中析出的DNA(黏稠物)；④過(guò)濾溶有DNA的2mol/L的NaCl溶液用NaCl溶液4次①加2mol/L的NaCl溶液，溶解提取的細(xì)胞核物質(zhì)；②用0.14mol/L的NaCl溶液使DNA析出；③用2mol/L的NaCl溶液，溶解濾取的DNA黏稠物；④用2mol/L的NaCl溶液，溶解絲狀物用于鑒定DNA1．下圖為“D