槐耳浸膏的實(shí)驗(yàn)研究及臨床應(yīng)用進(jìn)展【摘要】槐耳顆粒目前在臨床腫瘤治療中運(yùn)用較為廣泛。全文對(duì)槐耳的菌質(zhì)制備、化學(xué)研究、作用機(jī)制、藥理及毒理研究、臨床應(yīng)用等方面作一綜述，旨在為槐耳的進(jìn)一步研究提供幫助。

【關(guān)鍵詞】槐耳浸膏實(shí)驗(yàn)研究臨床應(yīng)用

槐耳是我國(guó)民間重要的藥用真菌。其學(xué)名為trametesrobiniophilamurr，中藥名為槐栓菌[1]。它是生長(zhǎng)在槐及洋槐、青檀等樹干上的高等真菌子實(shí)體。按Ainsworth等1973年真菌分類系統(tǒng)，屬于真菌門Eumycota，擔(dān)子菌亞門Bisidiomycotina，層菌綱Hymenomycetes，非褶菌目Aphyllophorales，多孔菌科Polyporaceae，栓菌屬Trametes?，F(xiàn)代不少文獻(xiàn)誤認(rèn)為它是槐樹上的黑木耳，以致對(duì)其認(rèn)識(shí)較為混亂。經(jīng)考證：槐耳的入藥史最早可追溯到公元3世紀(jì)葛洪的《肘后方》到明朝的《本草綱目》等有關(guān)草本均有記載。其別名有“槐菌”、“槐蛾”、“槐雞”、“槐鵝”等。現(xiàn)已確證槐耳就是槐栓菌。它味苦辛，性平無毒，有“治風(fēng)”、“破血”、“益力”的功效。

1槐耳菌質(zhì)的制備

由于槐耳的生長(zhǎng)條件要求嚴(yán)格，生長(zhǎng)周期很長(zhǎng)，生物效應(yīng)較低，難以滿足藥用需要。目前已采用固體發(fā)酵工藝來生產(chǎn)槐耳菌質(zhì)，即藥用真菌在農(nóng)副產(chǎn)品組成的固體營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)上生長(zhǎng)，分解基質(zhì)，吸取營(yíng)養(yǎng)，生長(zhǎng)菌體供藥用。在0~100天的發(fā)酵過程中，隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，基質(zhì)轉(zhuǎn)化為菌質(zhì)，產(chǎn)品中多糖含量迅速下降，蛋白質(zhì)含量逐步上升。當(dāng)發(fā)酵周期達(dá)45天左右時(shí)，多糖與蛋白質(zhì)含量漸趨穩(wěn)定，這時(shí)期菌質(zhì)中提取成分的抑瘤率最高，也是菌質(zhì)中槐耳菌絲體由營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)轉(zhuǎn)向生殖生長(zhǎng)的階段?，F(xiàn)已知道多糖蛋白是槐耳菌質(zhì)的重要有效成分，因此測(cè)定多糖與蛋白質(zhì)的含量可作為發(fā)酵質(zhì)量的監(jiān)控指標(biāo)和判定菌質(zhì)的發(fā)酵終點(diǎn)，也是藥品的重要質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。近來也有作者改用雙向發(fā)酵工程來生產(chǎn)菌質(zhì)。即由以往僅用富含碳、氮等營(yíng)養(yǎng)的農(nóng)副產(chǎn)品作為營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)，改為采用具有一定活性成分的中藥材作為藥性基質(zhì)，它既能提供真菌成長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)，又因真菌的酶而被改變組織成分，從而產(chǎn)生新的性味功能。實(shí)驗(yàn)證實(shí)：由黃芪作為基質(zhì)發(fā)酵槐耳菌而產(chǎn)生的菌質(zhì)，其藥效明顯超過槐耳菌質(zhì)。

2槐耳的基礎(chǔ)研究

化學(xué)研究

槐耳菌質(zhì)得精致槐耳多糖蛋白，簡(jiǎn)稱PS-T。經(jīng)小鼠肉瘤S180抑瘤試驗(yàn)，抑瘤率達(dá)40%~47%，說明PS-T具有抗癌活性，是槐耳菌質(zhì)和槐耳清膏的有效作用部位。

槐耳多糖蛋白是一種棕褐色粉末，沒有明顯的熔點(diǎn)，在280℃時(shí)變黑，易溶于熱水，稍溶于低濃度乙醇，不溶于高濃度乙醇、丙酮、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇等有機(jī)溶劑。其水溶液透明呈黏稠狀，pH值為，無旋光性。經(jīng)高效液相色譜和電泳分析表明其主成分基本為均一多糖，并由光譜和氣相層析方法證明槐耳多糖為一蛋白結(jié)合雜多糖，其具體組成為：6種單糖和18種氨基酸。該多糖蛋白的分子量為30000，其多糖分子糖苷鍵構(gòu)型主要為β型[7~10]。

作用機(jī)制

促進(jìn)巨噬細(xì)胞功能

槐耳多糖蛋白能激活巨噬細(xì)胞，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬功能，使之直接殺傷腫瘤細(xì)胞并處理、遞呈腫瘤抗原，進(jìn)而激活T細(xì)胞產(chǎn)生抗腫瘤效應(yīng)。巨噬細(xì)胞還可釋放TNF-α、IL-1、IFN-α等細(xì)胞因子來調(diào)節(jié)抗腫瘤效應(yīng)。經(jīng)槐耳多糖蛋白作用后的小鼠，其血清中溶菌酶活性也明顯增加[11]。

誘導(dǎo)細(xì)胞因子

槐耳多糖蛋白能明顯誘生α、γ干擾素，對(duì)α干擾素促進(jìn)NK細(xì)胞活性有協(xié)同作用，后者又可產(chǎn)生IFN-γ、IL-2等。IL-2可刺激T、B淋巴細(xì)胞增殖活化。活化的巨噬細(xì)胞也可產(chǎn)生IFN-α、IL-1、CSF等細(xì)胞因子。在這些細(xì)胞因子的協(xié)同作用下增強(qiáng)T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞等對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷能力[6，11]。

促進(jìn)細(xì)胞免疫功能

槐耳多糖蛋白對(duì)臍血EaRF(活性花環(huán))及GVHR有增強(qiáng)作用。另外在干擾素尤其是IFN-γ的協(xié)同作用下可使NK細(xì)胞活性增強(qiáng)，提高CTL對(duì)腫瘤的殺傷作用。陳慎寶等[11]用槐耳多糖給小鼠腹腔注射，10天后取血測(cè)定淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率均高于生理鹽水對(duì)照組。陸鵬等[12]應(yīng)用二乙基亞硝胺制備大鼠肝癌模型，同時(shí)給大鼠灌服槐耳浸膏，20周后取肝用免疫組化檢測(cè)IL-2R陽性細(xì)胞，證明槐耳浸膏能增加肝內(nèi)IL-2R陽性細(xì)胞數(shù)，從而增強(qiáng)體內(nèi)細(xì)胞免疫功能。

提高體液免疫作用

陳慎寶等[11]通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明槐耳多糖蛋白可明顯提高機(jī)體產(chǎn)生抗體的水平。在特異性抗體的作用下，可增加吞噬細(xì)胞的調(diào)理吞噬作用及發(fā)揮ADCC作用，進(jìn)而殺傷、吞噬或溶解腫瘤細(xì)胞。

抑制腫瘤血管生成

陳大興等[13]用不同濃度的槐耳浸膏作用于人胎臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞，觀察其對(duì)細(xì)胞的增殖能力、遷移能力、附壁能力及血管生成的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)槐耳浸膏≥2mg/ml時(shí)可顯著降低腫瘤組織的血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖能力，減少血管形成，抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移、黏附，從而降低腫瘤組織中的微血管密度。許戈良等[14]觀察了槐耳浸膏對(duì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖和分化成血管能力的影響。結(jié)果顯示：槐耳浸膏在濃度為/L～10g/L時(shí)能明顯抑制VEGF誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞增殖，呈量效關(guān)系。它阻止內(nèi)皮細(xì)胞由S期進(jìn)入G2/M期。在濃度為1g/L時(shí)可抑制內(nèi)皮細(xì)胞體外分化成管樣結(jié)構(gòu)，濃度為10g/L時(shí)則完全阻斷內(nèi)皮細(xì)胞體外分化成管樣結(jié)構(gòu)的能力，說明槐耳浸膏對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞體外構(gòu)建新生血管具有抑制作用。

誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡

臨床實(shí)踐及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)已證明槐耳浸膏能抑制多種腫瘤細(xì)胞的增殖。誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡是其發(fā)揮這一作用的途徑之一。周進(jìn)等[15]采用不同濃度的槐耳浸膏與人胰腺癌細(xì)胞Panc-1共同培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)槐耳浸膏能明顯抑制Panc-1的生長(zhǎng)，細(xì)胞周期阻滯主要在G1期。槐耳浸膏在濃度為/ml、作用時(shí)間36h時(shí)達(dá)到凋亡高峰，凋亡率達(dá)15%～20%。細(xì)胞免疫組化進(jìn)一步證實(shí)槐耳浸膏能上調(diào)凋亡基因Caspase-3的表達(dá)。程若川等[16]將不同濃度的槐耳浸膏與人直腸癌HR8348細(xì)胞共同培養(yǎng)36h，結(jié)果顯示細(xì)胞凋亡指數(shù)隨槐耳浸膏濃度的增加而增加，當(dāng)濃度為/ml時(shí)達(dá)到最大?；倍嘟Mbcl-2、bcl-xl、bak、p53蛋白表達(dá)較空白對(duì)照組明顯增強(qiáng)，而bax變化不明顯。槐耳浸膏組bak/bcl-2和bak/bcl-xl比值顯著大于空白對(duì)照組。另外有作者分別觀察了槐耳浸膏誘導(dǎo)人肺腺癌細(xì)胞A549、食管癌細(xì)胞、Molt-4細(xì)胞的凋亡作用，證明槐耳浸膏對(duì)這些腫瘤細(xì)胞均有明顯誘導(dǎo)凋亡的作用[17~19]。

逆轉(zhuǎn)耐藥細(xì)胞株

槐耳浸膏能逆轉(zhuǎn)部分耐藥細(xì)胞株，同時(shí)對(duì)化療亦有增敏作用。張玉寶等[20]觀察了槐耳浸膏在乳腺癌綜合治療中的作用并探討了其相應(yīng)的機(jī)制。結(jié)果提示：/ml劑量的槐耳顆粒能顯著降低化療藥物ADM對(duì)人乳腺癌耐藥細(xì)胞株MCF-7/A的IC50，與逆轉(zhuǎn)前耐藥細(xì)胞株MCF-7/A的IC50相比，差異有顯著性，其逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為，耐藥倍數(shù)為。人乳腺癌敏感細(xì)胞株MCF-7/S無MDR-1mRNA表達(dá)，低毒劑量和非細(xì)胞毒性劑量的槐耳顆粒可使MCF-7/A細(xì)胞的耐藥基因MDR-1表達(dá)水平下調(diào)。說明槐耳顆粒逆轉(zhuǎn)MCF-7/A耐藥性的機(jī)制是通過下調(diào)耐藥基因MDR-1的表達(dá)水平來實(shí)現(xiàn)的[20]。黃濤等探討了槐耳浸膏對(duì)耐順鉑的人肺腺癌細(xì)胞A549DDP化療敏感性的逆轉(zhuǎn)作用及其機(jī)制，結(jié)果表明槐耳浸膏對(duì)A549和A549DDP的細(xì)胞毒性作用相似，并可致凋亡。經(jīng)槐耳浸膏作用后A549及A549DDP的順鉑IC50均呈下降趨勢(shì)，并與槐耳浸膏有劑量依賴性。給予1mg/ml槐耳浸膏作用40h后再經(jīng)相應(yīng)順鉑作用的A549和A549DDP細(xì)胞凋亡的發(fā)生率差異無顯著性，但較同劑量的順鉑單獨(dú)作用于A549和A549DDP凋亡率有極顯著性差異。說明槐耳浸膏可逆轉(zhuǎn)人肺腺癌細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性，提高順鉑對(duì)A549DDP化療的敏感性[21]。

其他

槐耳還能促進(jìn)小鼠脾細(xì)胞DNA的合成，提高血清中血紅蛋白的含量，說明它對(duì)造血細(xì)胞有一定的促進(jìn)作用。陳莉等在鼠肝癌模型制備早期給小鼠灌服槐耳清膏發(fā)現(xiàn)具有顯著的防癌作用，癌變率顯著性降低，在癌形成與發(fā)展過程中灌服槐耳清膏也有顯著的抑癌效應(yīng)，可減輕癌變的病理變化?；倍甯噙€能通過抑制肝硬化來干預(yù)癌的形成，其療效與療程呈正相關(guān)[22]。

藥理及毒理研究

藥理

槐耳浸膏灌胃藥效最佳劑量在小鼠為1500mg/kg。研究顯示對(duì)小鼠肉瘤S180抑瘤率達(dá)46%，對(duì)腹水型S180生命延長(zhǎng)率為38%。粗多糖及PS-T灌胃及腹腔給藥也同樣有明顯的抑瘤和延長(zhǎng)生命的作用。多糖靜脈給藥對(duì)犬血壓、心電圖、心率和對(duì)麻醉后的呼吸頻率均無明顯影響。對(duì)兔呼吸系統(tǒng)、大鼠神經(jīng)系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)也未見異常[23]。

毒理

大劑量槐耳浸膏給小鼠、大鼠灌胃均未能測(cè)出LD50，且在觀察期間均未引起動(dòng)物死亡。大鼠按人臨床用藥量的倍、倍、95倍灌胃90天，家兔各劑量組連續(xù)給藥半年，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生長(zhǎng)正常，生化指標(biāo)、血象無異常，也未見藥物引起的病理改變,特殊毒理如誘變?cè)囼?yàn)和微核與染色體畸變等試驗(yàn)均為陰性反應(yīng)。

3槐耳的臨床應(yīng)用

槐耳顆粒治療肝癌

蔣梅等應(yīng)用槐耳顆粒治療中晚期原發(fā)性肝癌98例，所有病例均服藥1個(gè)月以上，最長(zhǎng)服藥時(shí)間38個(gè)月。治療期間停用其他抗癌藥物。結(jié)果顯示腫瘤完全緩解0例，部分緩解2例，無變化24例，病變進(jìn)展72例。瘤體穩(wěn)定率為%。Ⅱ期患者中6個(gè)月、1年、3年生存率分別為%、%、%。Ⅲ期患者中6個(gè)月、1年、3年生存率分別為%、%、%。AFP陽性病例中穩(wěn)定及下降率為%。槐耳顆粒對(duì)患者的疼痛、納呆、失眠癥狀均有不同程度的改善[24]。郭添勝等[25]比較了槐耳顆粒聯(lián)合肝動(dòng)脈化療栓塞術(shù)及單用肝動(dòng)脈化療栓塞術(shù)治療原發(fā)性肝癌的近期療效，發(fā)現(xiàn)兩者差異無顯著性，聯(lián)合組在肝功能改善、人體功能狀況評(píng)分改善、減少粒細(xì)胞下降率、改善食欲下降較單純組好。

槐耳顆粒治療乳腺癌

鐘少文等[26]將62例Ⅳ期乳腺癌病人分為兩組：治療組29例，連服槐耳顆粒3個(gè)月。對(duì)照組33例，以CTX+THP+5-Fu化療，每3周為1個(gè)療程，共4個(gè)療程。結(jié)果表明治療組不僅在中醫(yī)證候、生存質(zhì)量的改善方面優(yōu)于對(duì)照組，在中位生存時(shí)間上也優(yōu)于后者。另外槐耳浸膏聯(lián)合化療治療乳腺癌不僅可以提高化療療效，減輕毒副反應(yīng)，還可提高乳腺癌患者的IgG、IgA、IgM水平，促進(jìn)機(jī)體的免疫功能[27，28]。

槐耳顆粒治療消化道惡性腫瘤

鄧艾平等[29]將74例有化療指征的消化道惡性腫瘤患者隨機(jī)分為兩組，分別給予槐耳顆粒聯(lián)合化療和單用化療。觀察患者在治療后的療效和生活質(zhì)量的改變。結(jié)果前者治療后總有效率為%，生活質(zhì)量狀況Karnofsky評(píng)分提高及穩(wěn)定者占%；后者總有效率為%，生活質(zhì)量狀況Karnofsky評(píng)分提高及穩(wěn)定者占%。兩者差異有顯著性。槐耳顆粒聯(lián)合化療治療大腸癌、胃癌術(shù)后患者，同樣具有減輕不良反應(yīng)，提高生存率的作用，并能促進(jìn)機(jī)體的細(xì)胞免疫功能[30，31]。

槐耳顆粒治療慢性乙肝

槐耳多糖蛋白對(duì)小鼠血清干擾素誘生作用非常明顯。對(duì)感染鴨肝炎病毒的實(shí)驗(yàn)鴨使用該藥后可使其血清HBV-DNA水平明顯下降。唐保元等[32]用槐耳顆粒治療慢性乙肝病毒感染者20例，結(jié)果HBeAg陰轉(zhuǎn)6例，其中3例HBeAb轉(zhuǎn)為陽性，1例在HBeAg轉(zhuǎn)為HBeAb時(shí)HBsAg陰轉(zhuǎn)，提示槐耳對(duì)慢性乙肝有較好療效。

目前槐耳顆粒已在臨床上得到較為廣泛應(yīng)用，涉及以腫瘤疾病為主的多項(xiàng)領(lǐng)域，并已取得了許多獨(dú)到的療效?，F(xiàn)有的基礎(chǔ)理論研究已為槐耳顆粒抑制腫瘤提供了部分理論依據(jù)。隨著實(shí)驗(yàn)研究的不斷深入，尤其是細(xì)胞生物學(xué)及分子生物學(xué)技術(shù)的運(yùn)用，槐耳抑制腫瘤的機(jī)制必將會(huì)被人們揭開。

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