食品中細(xì)菌總數(shù)的測定第一頁，共十一頁，編輯于2023年，星期四三、實驗方法1、檢驗程序菌落總數(shù)檢驗程序：檢樣→做成幾個適當(dāng)倍數(shù)的稀釋液→選擇2-3個適宜稀釋度各以1ml之量分別入滅菌平皿內(nèi)→每皿內(nèi)加入460C適量營養(yǎng)瓊脂→菌落數(shù)→報告第二頁，共十一頁，編輯于2023年，星期四2、檢樣稀釋及培養(yǎng)（1）以無菌操作，將檢樣25g（或25ml）剪碎以后，放于含有225ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(nèi)（瓶內(nèi)預(yù)先置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠）或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨做成1：10的均勻稀釋液。固體檢樣在加入稀釋液后，最好置滅菌均質(zhì)器中以8000r/min~100000r/min的速度處理1min，做成1：10的均勻稀釋液。（2）用1ml滅菌吸管吸取1：10稀釋液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml滅菌生理鹽水或其他稀釋的試管內(nèi)（注意吸管尖端不要觸及管內(nèi)稀釋液，下同），振搖試管混合均勻，做成1：100的稀釋液。（3）另取1ml的滅菌吸管，按上項操作順序作10倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一次，即換用1支1ml滅菌吸管。第三頁，共十一頁，編輯于2023年，星期四（4）根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)z樣污染情況的估計，選擇2~3個適宜稀釋度，分別在作10倍遞增稀釋的同時，即以吸取該稀釋度的吸管移1ml稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每個稀釋度作兩個平皿。（5）稀釋液移入平皿后，應(yīng)及時將涼至460C營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基[可放置在（（46±1）0C）水浴鍋內(nèi)保溫]注入平皿15ml~20mL，并轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻，同時將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1ml稀釋液（不含樣品）的滅菌平皿內(nèi)作空白對照。（6）等瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置（36±1）0C恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)（48±2）h取出，計算平板內(nèi)菌落數(shù)目乘以倍數(shù)，即得1g（1mL）樣品所含菌落總數(shù)。

第四頁，共十一頁，編輯于2023年，星期四3、菌落計算方法（1）菌落計數(shù)方法做平板菌落計數(shù)時，可用肉眼觀查，必要時用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平板的菌落數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)。（2）菌落計數(shù)的報告①平板菌落數(shù)的選擇選取菌落數(shù)在30～300之間的平板作為菌落總數(shù)測定標(biāo)準(zhǔn)。一個稀釋度使用兩個平板，應(yīng)采用兩個平板平均數(shù)，其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)，若片狀菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個平板后乘2以代表全皿菌落數(shù)。平皿內(nèi)如有鏈狀菌落生長時（菌落之間無明顯界線），若僅有一條鏈，可視為一個菌落數(shù)；如果有不同來源的幾條鏈，則應(yīng)將每條鏈作為一個菌落計。

第五頁，共十一頁，編輯于2023年，星期四②稀釋度的選擇應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30～300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報告之。若有兩上稀釋度，其生長的菌落數(shù)均在30～300之間，則視兩者之比如何來決定。若其比值小于或等于2，應(yīng)報告其平均數(shù)；若大于2則報告其中較小的數(shù)字。若所有稀釋度平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。若所有稀釋度均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報告之。第六頁，共十一頁，編輯于2023年，星期四

若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30～300之間，其中一部分大于300或小于30時，則以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。③菌落數(shù)的報告菌落數(shù)在100以內(nèi)時，按其實有數(shù)報告，大于100時，采用二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入方法計算。為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)，也可用10的指數(shù)來表示。思考題及實驗作業(yè)第七頁，共十一頁，編輯于2023年，星期四第八