標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 25887-2010 奶牛脊椎畸形綜合征檢測(cè) PCR-RFLP法》是一項(xiàng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，專門用于指導(dǎo)通過PCR-RFLP（聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性）技術(shù)來檢測(cè)奶牛是否攜帶脊椎畸形綜合征相關(guān)的遺傳變異。該標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了從樣本采集到結(jié)果分析的一系列步驟和技術(shù)要求，確保檢測(cè)過程的準(zhǔn)確性和可靠性。

首先，在樣品采集方面，標(biāo)準(zhǔn)明確了采集對(duì)象應(yīng)為待測(cè)奶牛的血液或組織樣本，并且對(duì)樣本保存條件提出了具體要求，以保證DNA的質(zhì)量和完整性，這對(duì)于后續(xù)的PCR擴(kuò)增至關(guān)重要。

接著是DNA提取環(huán)節(jié)，標(biāo)準(zhǔn)推薦使用酚/氯仿抽提法或其他有效方法從生物材料中提取基因組DNA。得到的DNA需經(jīng)過定量測(cè)定后稀釋至適當(dāng)濃度，以便于進(jìn)行下一步的PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)。

對(duì)于PCR反應(yīng)體系構(gòu)建及條件設(shè)置，本標(biāo)準(zhǔn)提供了詳細(xì)的指南，包括引物設(shè)計(jì)原則、退火溫度選擇等關(guān)鍵參數(shù)，這些都是為了能夠特異性地?cái)U(kuò)增出與脊椎畸形綜合征相關(guān)聯(lián)的目標(biāo)片段。

完成PCR擴(kuò)增之后，將產(chǎn)物進(jìn)行RFLP分析。這一步驟涉及到使用特定的限制性內(nèi)切酶切割PCR產(chǎn)物，然后通過凝膠電泳分離不同大小的DNA片段。根據(jù)酶切圖譜可以判斷個(gè)體是否存在導(dǎo)致脊椎畸形綜合征的突變位點(diǎn)。

最后，在結(jié)果判讀階段，標(biāo)準(zhǔn)給出了陽性、陰性以及雜合子狀態(tài)的具體定義，并強(qiáng)調(diào)了重復(fù)實(shí)驗(yàn)的重要性，以提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。


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....

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  • 2011-01-10 頒布
  • 2011-06-01 實(shí)施
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GB/T 25887-2010奶牛脊椎畸形綜合征檢測(cè)PCR-RFLP法_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

ICS6502030

B43..

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T25887—2010

奶牛脊椎畸形綜合征檢測(cè)PCR-RFLP法

MethodofPCR-RFLPfordetectingcomplexvertebralmalformationindairycattle

2011-01-10發(fā)布2011-06-01實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T25887—2010

前言

本標(biāo)準(zhǔn)的附錄為規(guī)范性附錄附錄附錄為資料性附錄

B,A、C。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部提出

。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口

。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位華中農(nóng)業(yè)大學(xué)

:。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人張淑君楊利國(guó)李翔胡修忠劉文舉宋利軍

:、、、、、。

Ⅰ

GB/T25887—2010

奶牛脊椎畸形綜合征檢測(cè)PCR-RFLP法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了奶牛脊椎畸形綜合征的檢測(cè)技術(shù)

PCR-RFLP。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于奶牛脊椎畸形綜合征的檢測(cè)與診斷

。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款凡是注日期的引用文件其隨后所有

。,

的修改單不包括勘誤的內(nèi)容或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)然而鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究

(),,

是否可使用這些文件的最新版本凡是不注日期的引用文件其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)

。,。

分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T6682

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)

。

31

.

奶牛脊椎畸形綜合征complexvertebralmalformationindairycattleCVM

;

奶牛的一種常染色體隱性遺傳病主要表現(xiàn)為母牛流產(chǎn)胎兒早期死亡出生后不久死亡患病犢牛

,、、,

主要癥狀表現(xiàn)為頸短脊椎畸形心臟畸形腿部畸形系部呈現(xiàn)對(duì)稱的內(nèi)向僵直等

:、、、、。

32

.

SLC35A3基因SLC35A3gene

定位于牛第號(hào)染色體上在基因序列數(shù)據(jù)庫(kù)中的登錄號(hào)為全長(zhǎng)

3,(GenBank)AY160683,14901bp,

為由個(gè)外顯子和個(gè)內(nèi)含子組成該基因編碼核糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白與脊柱發(fā)育有關(guān)是奶牛

mRNA981bp,76,,,

脊椎畸形綜合征的致病基因

。

33

.

限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性restrictionfragmentlengthpolymorphismRFLP

,

檢測(cè)用限制性內(nèi)切酶酶切后形成的特定片段的大小因此凡是可以引起酶切位點(diǎn)變

DNADNA。

異的突變?nèi)琰c(diǎn)突變新產(chǎn)生和去除酶切位點(diǎn)和一段的重新組織如插入和缺失造成酶切位點(diǎn)間

()DNA(

的長(zhǎng)度發(fā)生變化等均可導(dǎo)致的產(chǎn)生

)RFLP。

4原理

基因第四外顯子中第位堿基由突變?yōu)闀r(shí)其對(duì)應(yīng)編碼的氨基酸由纈氨酸改變

SLC35A3559GT,

為苯丙氨酸導(dǎo)致奶牛脊椎畸形綜合征的發(fā)生采用技術(shù)檢測(cè)牛樣本基因組變異即

,。PCR-RFLPDNA,

采用技術(shù)擴(kuò)增基因片段限制性內(nèi)切酶消化擴(kuò)增產(chǎn)物電泳檢測(cè)酶切產(chǎn)物對(duì)

PCRSLC35A3,PCR,,

基因進(jìn)行分型根據(jù)基因型判定奶牛是否攜帶脊椎畸形綜合征的致病基因

SLC35A3,。

5擴(kuò)增SLC35A3基因片段的引入酶切位

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