ICS07.100.30C53中華人民共和國國家標準GB/T：19915.6—2005豬源鏈球菌通用熒光PCR檢測方法Methodofthereal-timePCRforthedetectionofSireptococcussuis2005-09-27發(fā)布2005-11-01實施中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布中國國家標準化管理委員會

GB/T19915.6-2005前本標準的附錄A是規(guī)范性附錄·附錄B是資料性附錄。本標準由國家標準化管理委員會提出。本標準由全國動物防疫標準化技術(shù)委員會歸口本標準起草單位：中華人民共和國北京出入境檢驗檢疫局、中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。本標準主要起草人：張鶴曉、宋立、高志強、寧宜寶、周琦、喬彩霞、楊承槐、吳丹、谷強本標準系首次發(fā)布的國家標準

GB/T19915.6—2005豬源鏈球菌通用熒光PCR檢測方法1范圍本標準規(guī)定了豬源鏈球菌通用熒光PCR檢測方法本標準適用于增菌培養(yǎng)物、疑似病料及生豬執(zhí)子、豬組織樣品中豬源鏈球菌的檢測規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勒誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本適用于本標準。GB/T19438.1—2004禽流感病毒通用熒光RT-PCR檢測方法縮略語本標準采用下列縮略語：熒光PCR熒光聚合酶鏈式反應(yīng)C值每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號量達到設(shè)定的閩值時所經(jīng)歷的循環(huán)圈數(shù)DNA脫氧核糖核酸TagDNA聚合酶PBS磷酸鹽緩沖生理鹽水原理采用TagMan方法.在比對豬源鏈球菌16SrDNA基因序列的基礎(chǔ)上.設(shè)計針對該基因的特異性引物和特異性的熒光雙標記探針進行配對。探針5"端標記FAM熒光素為報告熒光基團(用R表示）3"端標記TAMRA熒光素為渾滅熒光基團(用Q表示）,它在近距離內(nèi)能吸收5°端熒光基團發(fā)出的熒光信號。PCR反應(yīng)進入退火階段時,引物和探針同時與目的基因片段結(jié)合，此時探針上R基團發(fā)出的熒光信號被Q基團所吸收.儀器檢測不到熒光信號;而反應(yīng)進行到延伸階段時.Taq酶的5"→3"的外切核酸酶功能將探針降解。這樣探針上的R基團游離出來,所發(fā)出的熒光不再為Q所吸收而被檢測儀所接收。隨著PCR反應(yīng)的循環(huán)進行,PCR產(chǎn)物與熒光信號的增長呈現(xiàn)對應(yīng)關(guān)系。5豬源鏈球菌通用熒光PCR檢測實驗室的標準化設(shè)置與管理豬源鏈球菌通用熒光PCR檢測實驗室的標準化設(shè)貿(mào)與管理見GB/T19438.1—2004中附錄C。試劑和材料6.1除另有說明.所用試劑均為分析純。6.1.1無水乙醇：-20℃預(yù)冷6.1.275%乙醇;用新開啟的無水乙醇和無DNA酶的滅菌純化水