Tspot結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)的臨床應(yīng)用主要內(nèi)容原理結(jié)果的判斷臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)一、的原理結(jié)核分枝桿菌感染機(jī)體后被巨噬細(xì)胞吞噬，但不能完全將其清除，巨噬細(xì)胞凋亡后釋放出大量特異性抗原，并遞呈給特異性的CD4、CD8T細(xì)胞，使其激活并釋放大量γ-干擾素。大量研究表明結(jié)核抗原特異分泌γ-干擾素的T細(xì)胞可作為結(jié)核分枝桿菌感染的一種可靠標(biāo)志物。一、的原理外周血T-SPOT即利用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)（ELISPOT）通過(guò)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌特異性抗原刺激后外周血單個(gè)核細(xì)胞釋放的γ-干擾素來(lái)檢測(cè)抗原特異性Ｔ淋巴細(xì)胞的應(yīng)答反應(yīng)，從而判斷結(jié)核感染狀態(tài)。每一個(gè)斑點(diǎn)代表一個(gè)分泌細(xì)胞因子的T細(xì)胞，記數(shù)斑點(diǎn)數(shù)量可以獲得外周血中結(jié)核致敏的T細(xì)胞數(shù)量。一、的原理結(jié)核特異性抗原——早期分泌靶向抗原(ESAT-6)和培養(yǎng)濾過(guò)蛋白(CFP-10)

由結(jié)核桿菌基因組RD1區(qū)相同的操縱子編碼的蛋白，只存在于結(jié)核分枝桿菌群(包括人型、牛型和非洲型分枝桿菌)及其它幾種致病性分枝桿菌(如堪薩斯分枝桿菌，Szulgai分枝桿菌，海分枝桿菌)中，是T細(xì)胞的靶抗原，能誘導(dǎo)皮膚遲發(fā)型超敏反應(yīng)并刺激外周血單核細(xì)胞產(chǎn)生γ-干擾素。二、結(jié)果的判斷試驗(yàn)分四組：空白對(duì)照組、抗原組(ESAT-6和CFP-10)、陽(yáng)性對(duì)照組(植物血凝素PHA)。通常正常結(jié)果，空白對(duì)照孔沒(méi)有或有很少的斑點(diǎn)而PHA對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)超過(guò)20個(gè)?？瞻讓?duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)超過(guò)10個(gè)時(shí)結(jié)果被認(rèn)為是“不確定”。當(dāng)PHA對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)少于20個(gè)時(shí)，檢測(cè)結(jié)果被認(rèn)為是“不確定”。當(dāng)空白對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)為0-5個(gè)并且（抗原A或抗原B斑點(diǎn)數(shù)）減去（空白對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)）等于5-7時(shí)，此結(jié)果被認(rèn)為是“灰區(qū)”，應(yīng)當(dāng)利用所有可利用相關(guān)的的臨床信息進(jìn)行判斷。必要時(shí)可進(jìn)行復(fù)查。的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也有用每10^6PBMCs中斑點(diǎn)形成細(xì)胞(SFCs)的數(shù)目來(lái)描述，即SFCs／106PBMCs。二、結(jié)果的判斷如果抗原A和/或抗原B有應(yīng)答，檢測(cè)結(jié)果為“有反應(yīng)性”，參照以下標(biāo)準(zhǔn)：空白對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)為0-5個(gè)時(shí)且（抗原A或抗原B孔的斑點(diǎn)數(shù)）-（空白對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)）≥6；空白對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)為6-10個(gè)時(shí)且（抗原A或抗原B孔的斑點(diǎn)數(shù)）≥2×（空白對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)）；檢測(cè)結(jié)果為“無(wú)反應(yīng)性”：不符合上述標(biāo)準(zhǔn)且PHA對(duì)照孔正常。當(dāng)PHA對(duì)照孔結(jié)果為“不確定”且抗原A和抗原B孔結(jié)果都為“無(wú)反應(yīng)性”時(shí)，該實(shí)驗(yàn)結(jié)果被認(rèn)為是“并不確定”，應(yīng)當(dāng)復(fù)查。“有反應(yīng)性”結(jié)果表明樣本中存在針對(duì)結(jié)核桿菌特異的效應(yīng)T細(xì)胞“無(wú)反應(yīng)性”結(jié)果表明樣本中可能不存在針對(duì)結(jié)核桿菌特異的效應(yīng)T細(xì)胞

二、結(jié)果的判斷(影響因素分析)既往結(jié)核病史或影像學(xué)提示陳舊性肺結(jié)核、有結(jié)核密切接觸史或高潛伏性結(jié)核感染率可使其診斷活動(dòng)性結(jié)核病的特異性降低。只與外周血中結(jié)核特異性抗原刺激產(chǎn)生的效應(yīng)T細(xì)胞有關(guān)，與感染部位無(wú)關(guān)。與年齡、機(jī)體免疫狀態(tài)、HIV感染、營(yíng)養(yǎng)不良的程度無(wú)關(guān)?？菇Y(jié)核治療后效應(yīng)T細(xì)胞消失，可使斑點(diǎn)數(shù)減少或使結(jié)果呈陰性。與是否排菌無(wú)關(guān)。三、臨床應(yīng)用活動(dòng)性結(jié)核與潛伏性結(jié)核感染的鑒別“菌陰”結(jié)核患者的輔助診斷肺外結(jié)核的鑒別診斷結(jié)核發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的預(yù)測(cè)免疫力低下或受抑制患者的結(jié)核病診斷區(qū)別結(jié)核感染者與BCG接種者抗結(jié)核療效的監(jiān)測(cè)四、評(píng)價(jià)（優(yōu)點(diǎn)）敏感性及特異性高：不受卡介苗接種及環(huán)境分枝桿菌影響，不受機(jī)體免疫狀態(tài)影響。應(yīng)用廣泛：在活動(dòng)性肺結(jié)核、肺外結(jié)核、結(jié)核性漿膜炎、潛伏性結(jié)核感染及免疫抑制的結(jié)核患者均能檢測(cè)。診斷快速：24小時(shí)可報(bào)告結(jié)果。可進(jìn)行療效評(píng)估：治療有效則斑點(diǎn)數(shù)減少甚至陰性。四、評(píng)價(jià)（弊端）目前尚無(wú)統(tǒng)一的界值用來(lái)鑒別潛伏結(jié)核感染及活動(dòng)性肺結(jié)核。在5歲兒童、近期暴露于結(jié)核桿菌者、免疫功能低下者和需要二次檢測(cè)者中使用的證據(jù)不足。對(duì)標(biāo)本要求高：室溫保存和運(yùn)輸血液樣本（18-25℃），不能冷凍或冷藏；血液樣本從采集到檢測(cè)不超過(guò)8小時(shí)。結(jié)果需結(jié)合臨床和其它檢測(cè)進(jìn)行判斷，陰性結(jié)果不能排除暴露或感染結(jié)核桿菌的可能性。不能確定病變部位。謝謝！國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道應(yīng)用ELISPOT方法檢測(cè)活動(dòng)性肺結(jié)核的敏感性可達(dá)到78%~100%,特異性可達(dá)到80%~100%。國(guó)內(nèi)學(xué)者研究應(yīng)用ELISPOT方法檢測(cè)活動(dòng)性肺結(jié)核的敏感性為83%~98.8%，特異性65%~100%，陰性預(yù)測(cè)值81.8~91.6%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值45.3~67.9%。有學(xué)者指出：診斷活動(dòng)性結(jié)核病患者外周血斑點(diǎn)形成細(xì)胞中位數(shù)為442SFCs/10^6PBMC。排除活動(dòng)性結(jié)核病患者外周血斑點(diǎn)形成細(xì)胞中位數(shù)為124SFCs/10^6PBMC。以72SFCs/10^6PBMC為界值時(shí),診斷活動(dòng)性結(jié)核病的敏感性為71.9%,特異性76.4%,ROC曲線下面積為。以652SFCs/10^6PBMC為界值時(shí),診斷活動(dòng)性結(jié)核病的特異性達(dá)95%。潛伏結(jié)核感染（LTBI）宿主感染結(jié)核分枝桿菌后尚未發(fā)病、無(wú)活動(dòng)性結(jié)核的臨床表現(xiàn)、影像學(xué)改變或細(xì)菌學(xué)證據(jù)的一種特殊狀態(tài)。潛伏性感染者如不進(jìn)行治療，約有5-10%會(huì)發(fā)展成活動(dòng)性結(jié)核。陽(yáng)性與密切接觸有更好的相關(guān)性，能更加準(zhǔn)確地診斷LTBI。潛伏性結(jié)核感染的斑點(diǎn)數(shù)有可能高