微生物檢驗的質(zhì)量控制微生物檢驗的質(zhì)量控制1第一節(jié)室內(nèi)質(zhì)量控制

（一）人員與組織管理經(jīng)過廣泛的基礎(chǔ)訓(xùn)練教育，包括微生物學(xué)、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)臨床醫(yī)學(xué)知識的學(xué)習(xí)，專業(yè)化的實驗技能培訓(xùn)。參加醫(yī)務(wù)人員的繼續(xù)教育。配有一名經(jīng)嚴(yán)格訓(xùn)練并長期從事于微生物檢驗的技術(shù)人員，全面負(fù)責(zé)實驗室的工作。第一節(jié)室內(nèi)質(zhì)量控制（一）人員與組織管理2（二）操作手冊包括：①各級人員的職責(zé)和權(quán)限；②實驗室安全措施；③標(biāo)本采集和處理指南；④本室開展的檢驗項目及最低鑒定要求；⑤培養(yǎng)基和試劑的配制方法；⑥質(zhì)量控制方案；⑦常用參考數(shù)據(jù)；⑧其他制度。（二）操作手冊包括：3（三）培養(yǎng)基的質(zhì)量控制培養(yǎng)基是分離培養(yǎng)微生物的必需品。培養(yǎng)基質(zhì)量的好壞，直接關(guān)系到分離培養(yǎng)的成敗。目前大多數(shù)實驗室都使用干粉培養(yǎng)基配制或使用成品培養(yǎng)基。對來自著名的微生物培養(yǎng)基生產(chǎn)公司的培養(yǎng)基，質(zhì)量比較穩(wěn)定。只要按照說明書的要求貯存，在有效期內(nèi)使用可獲得滿意效果。（三）培養(yǎng)基的質(zhì)量控制培養(yǎng)基是分離培養(yǎng)微生物的必需品。培4測定羊血瓊脂平板的性能

培養(yǎng)基質(zhì)控菌株判定標(biāo)準(zhǔn)生長試驗金黃色葡萄球菌ATCC25923生長溶血反應(yīng)肺炎鏈球菌ATCC19615生長，α溶血化膿性鏈球菌ATCC6305生長，β溶血桿菌肽敏感（紙片法）化膿性鏈球菌ATCC6305＞10mm，敏感B群鏈球菌＜10mm，耐藥測定羊血瓊脂平板的性能培養(yǎng)基質(zhì)控菌株判定標(biāo)準(zhǔn)生長試驗金黃色5（四）試劑、抗血清和染色液質(zhì)量控制1．試劑及染色液注明配制日期，有效日期及貯存條件。測試同時進行陽性和陰性對照試驗。（四）試劑、抗血清和染色液質(zhì)量控制1．試劑及染色液注明配制日62．抗血清的質(zhì)量控制來源可靠，根據(jù)使用說明使用與保存。凍干制品還應(yīng)注明配成水溶液的日期?？寡鍛?yīng)澄清。第一次使用時，應(yīng)用已知菌效價和特異性進行測定。合格者方可使用。2．抗血清的質(zhì)量控制來源可靠，7

（五）抗生素與抗生素紙片

抗菌藥物敏感試驗是臨床進行抗菌治療的指導(dǎo)性實驗，其結(jié)果的正確性直接關(guān)系到抗菌治療的成敗。常用有紙片法和稀釋法，保證結(jié)果的準(zhǔn)確性極為重要。

（五）抗生素與抗生素紙片抗菌藥物敏感試驗是臨床進行抗8舉例：紙片法質(zhì)量控制①培養(yǎng)基：應(yīng)使用合格的MH瓊脂，應(yīng)使用標(biāo)準(zhǔn)菌株、已知藥敏紙片和標(biāo)準(zhǔn)方法進行測試，符合要求才可使用。②菌懸液濃度標(biāo)準(zhǔn)：為1.5×108CFU／ml。舉例：紙片法質(zhì)量控制①培養(yǎng)基：應(yīng)使用合格的MH瓊脂，9③含藥紙片應(yīng)冷凍保存，－20℃可保存一年。新購紙片用標(biāo)準(zhǔn)菌株和培養(yǎng)基，用標(biāo)準(zhǔn)方法測定，符合要求方可使用。③含藥紙片應(yīng)冷凍保存，－20℃10④實驗過程及結(jié)果測量：菌懸液應(yīng)在15min內(nèi)接種至平板，平放3min，然后將藥物紙片貼到平板上，100mm的平皿不超過5張，置35℃孵育18h，測量精確度1／10mm。⑤質(zhì)控菌株有：金黃色葡萄球菌ATCC25923；大腸埃希菌ATCC25922等。④實驗過程及結(jié)果測量：菌懸液應(yīng)11⑥抑菌環(huán)的質(zhì)控范圍：在20個試驗結(jié)果中只能有1個結(jié)果超出所列的范圍。⑦質(zhì)控測定次數(shù)：每批新的MH瓊脂和含藥紙片必須用質(zhì)控菌株進行檢測30日，30個抑菌環(huán)直徑只有少于3個結(jié)果超出范圍。達到要求后，每周檢測一次。⑥抑菌環(huán)的質(zhì)控范圍：在20個試驗12（六）儀器

1．高壓滅菌器和干熱滅菌器最好在滅菌器裝上溫度記錄裝置，以保證整個滅菌過程中保持合適的溫度。為了保證滅菌的徹底，可用生物指示劑嗜熱脂肪芽胞桿菌ATCC7953監(jiān)視滅菌效果。（六）儀器1．高壓滅菌器和干熱滅菌器最好132．培養(yǎng)箱、冰箱、水浴箱應(yīng)在每日工作開始和結(jié)束時記錄溫度。3．二氧化碳培養(yǎng)箱每天檢查CO2含量。4．厭氧罐或厭氧箱美籃為指示劑，無氧時應(yīng)無色。2．培養(yǎng)箱、冰箱、水浴箱應(yīng)在每145．生物安全柜更換濾網(wǎng)由專門技術(shù)人員進行。6．細(xì)菌培養(yǎng)儀對每批培養(yǎng)瓶進行生長試驗。保證在有效期內(nèi)使用。7．微生物鑒定儀應(yīng)及時更新系統(tǒng)操作軟件，使之能識別最新認(rèn)識的微生物。5．生物安全柜更換濾網(wǎng)由專門15（七）標(biāo)本檢驗過程的質(zhì)量控制微生物學(xué)實驗室除了上述儀器、試劑、人員等進行質(zhì)量控制外，還應(yīng)對標(biāo)本檢驗過程中涉及的每個環(huán)節(jié)進行全程質(zhì)量控制。包括從標(biāo)本采集，直接涂片檢查，分離培養(yǎng)到鑒定的全過程。使用自動化鑒定儀或編碼方式鑒定，必須進行核對以防錯誤。（七）標(biāo)本檢驗過程的質(zhì)量控制微生物學(xué)實驗室除了上述儀器、試16（八）室內(nèi)全面質(zhì)量控制實驗室人員要對以上各項的質(zhì)量控制內(nèi)容進行全面實施。由個人負(fù)責(zé)全面的質(zhì)量控制，自我核對，定期與參考實驗室核對并接受考評。（八）室內(nèi)全面質(zhì)量控制實驗室人員要對以上各項的質(zhì)量17（九）標(biāo)準(zhǔn)菌株的來源和保存l．標(biāo)準(zhǔn)菌株的來源標(biāo)準(zhǔn)菌株是指具有典型的、穩(wěn)定的生理生化特征，并被國際社會所認(rèn)可的菌株。來源于專門的機構(gòu)，如衛(wèi)生部藥物生物制品鑒定所菌種保藏中心。（九）標(biāo)準(zhǔn)菌株的來源和保存l．標(biāo)準(zhǔn)菌株的來源標(biāo)準(zhǔn)菌株是182．標(biāo)準(zhǔn)菌株的保存（l）一般保存法：將菌種于半固體培養(yǎng)基中，35℃培養(yǎng)18h時后封蓋無菌石蠟油，置4℃保存。2．標(biāo)準(zhǔn)菌株的保存（l）一般保存法：將菌種于半固體培19（2）冷凍干燥法：是最可靠的菌種保藏方法，它具有不改變菌種性狀和保存時間長等優(yōu)點，但需有專門的冷凍干燥設(shè)備。（2）冷凍干燥法：是最可靠的菌種20

第二節(jié)空間質(zhì)量控制（一）機構(gòu)

我國負(fù)責(zé)臨床微生物學(xué)實驗室質(zhì)量控制的部門是各級臨床檢驗中心和參考實驗室，負(fù)責(zé)定期或不定期地通過各項熟練程度考核和盲點試驗檢查各實驗室的工作質(zhì)量和水平，進行總結(jié)和評估。各級實驗室可同時接受國內(nèi)、國際多個質(zhì)量控制機構(gòu)或參考實驗室的質(zhì)量評價。第二節(jié)空間質(zhì)量控制（一）機構(gòu)21（二）一般性檢查項目

包括有否制定各種制度及其執(zhí)行情況。1．培養(yǎng)基和試劑的配制記錄、培養(yǎng)基的保存方法、滅菌質(zhì)量、有效期。2．室內(nèi)全面質(zhì)量控制的建立，室內(nèi)工作人員的熟練程度的考核和盲點試驗的進行情況，細(xì)菌檢驗的操作手冊及操作的規(guī)范性。3．設(shè)備的操作卡，操作人員的操作水平，設(shè)備的使用保養(yǎng)、維修記錄。（二）一般性檢查項目包括有否制定各種制度及其執(zhí)行情22（三）熟練程度的考核由質(zhì)控管理機構(gòu)（檢驗中心或參考實驗室）發(fā)放模擬標(biāo)本或菌種，接收的實驗室知道菌株的來源、檢驗的內(nèi)容和時間。實驗室完成鑒定后在規(guī)定時間內(nèi)將結(jié)果反饋至檢驗中心或參考實驗室，進行評價。（三）熟練程度的考核由質(zhì)控管理機構(gòu)（檢驗中心或參考實23分析結(jié)果錯誤的原因，提供有關(guān)的教育資料或舉辦學(xué)習(xí)班，不斷培養(yǎng)和訓(xùn)練技術(shù)人員，提高了解決類似問題的技術(shù)水平。但受試實驗室通常對這些菌株特別重視，采用超過常規(guī)操作標(biāo)準(zhǔn)的方法進行鑒定，使上報結(jié)果不能準(zhǔn)確反映實驗室的真實水平。分析結(jié)果錯誤的原因，提供有關(guān)的24（四）盲點試驗為了準(zhǔn)確反映受控實驗室日常處理臨床標(biāo)本的實際水平及能力，較好的方法是進行未知標(biāo)本的盲點質(zhì)量控制。由質(zhì)控管理機構(gòu)將模擬標(biāo)本混入臨床普通標(biāo)本，送人實驗室進行常規(guī)測定。（四）盲點試驗為了準(zhǔn)確反映受控實驗室日常處理25實驗室主管及實驗操作者不知道哪一個標(biāo)本是來自質(zhì)控機構(gòu)的。實驗結(jié)果由質(zhì)控管理機構(gòu)負(fù)責(zé)收回，進行評價。實驗室主管及實驗操作者不知道26（五）質(zhì)控結(jié)果的分析與評價質(zhì)控管理機構(gòu)對每次質(zhì)控結(jié)果進行統(tǒng)計分析，將每一實驗室的結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)進行比較。根據(jù)參加的規(guī)模和鑒定的正確數(shù)，計算鑒定正確率及所有參加實驗室的平均分，以及每個實驗室的得分。（五）質(zhì)控結(jié)果的分析與評價質(zhì)控管理機構(gòu)對每次質(zhì)控結(jié)果進27世界衛(wèi)生組織對每一個正確的鑒定得3分；部分正確但可以接受的鑒定結(jié)果得2分；鑒定結(jié)果部分錯誤得1分；完全錯誤的0分。世界衛(wèi)生組織對每一個正確的鑒28英國國家微生物學(xué)質(zhì)量控制實驗室的計算公式為：標(biāo)本鑒定正確數(shù)－平均實驗室正確數(shù)/實驗室平均正確數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)差

英國國家微生物學(xué)質(zhì)量控制實驗室29高于平均值得正分，低于平均值得負(fù)分。如果得分低于－1．96，則表示水平差，需進行學(xué)習(xí)和幫助。高于平均值得正分，低于平均30此課件下載可自行編輯修改，僅供參考！

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（一）人員與組織管理經(jīng)過廣泛的基礎(chǔ)訓(xùn)練教育，包括微生物學(xué)、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)臨床醫(yī)學(xué)知識的學(xué)習(xí)，專業(yè)化的實驗技能培訓(xùn)。參加醫(yī)務(wù)人員的繼續(xù)教育。配有一名經(jīng)嚴(yán)格訓(xùn)練并長期從事于微生物檢驗的技術(shù)人員，全面負(fù)責(zé)實驗室的工作。第一節(jié)室內(nèi)質(zhì)量控制（一）人員與組織管理33（二）操作手冊包括：①各級人員的職責(zé)和權(quán)限；②實驗室安全措施；③標(biāo)本采集和處理指南；④本室開展的檢驗項目及最低鑒定要求；⑤培養(yǎng)基和試劑的配制方法；⑥質(zhì)量控制方案；⑦常用參考數(shù)據(jù)；⑧其他制度。（二）操作手冊包括：34（三）培養(yǎng)基的質(zhì)量控制培養(yǎng)基是分離培養(yǎng)微生物的必需品。培養(yǎng)基質(zhì)量的好壞，直接關(guān)系到分離培養(yǎng)的成敗。目前大多數(shù)實驗室都使用干粉培養(yǎng)基配制或使用成品培養(yǎng)基。對來自著名的微生物培養(yǎng)基生產(chǎn)公司的培養(yǎng)基，質(zhì)量比較穩(wěn)定。只要按照說明書的要求貯存，在有效期內(nèi)使用可獲得滿意效果。（三）培養(yǎng)基的質(zhì)量控制培養(yǎng)基是分離培養(yǎng)微生物的必需品。培35測定羊血瓊脂平板的性能

培養(yǎng)基質(zhì)控菌株判定標(biāo)準(zhǔn)生長試驗金黃色葡萄球菌ATCC25923生長溶血反應(yīng)肺炎鏈球菌ATCC19615生長，α溶血化膿性鏈球菌ATCC6305生長，β溶血桿菌肽敏感（紙片法）化膿性鏈球菌ATCC6305＞10mm，敏感B群鏈球菌＜10mm，耐藥測定羊血瓊脂平板的性能培養(yǎng)基質(zhì)控菌株判定標(biāo)準(zhǔn)生長試驗金黃色36（四）試劑、抗血清和染色液質(zhì)量控制1．試劑及染色液注明配制日期，有效日期及貯存條件。測試同時進行陽性和陰性對照試驗。（四）試劑、抗血清和染色液質(zhì)量控制1．試劑及染色液注明配制日372．抗血清的質(zhì)量控制來源可靠，根據(jù)使用說明使用與保存。凍干制品還應(yīng)注明配成水溶液的日期。抗血清應(yīng)澄清。第一次使用時，應(yīng)用已知菌效價和特異性進行測定。合格者方可使用。2．抗血清的質(zhì)量控制來源可靠，38

（五）抗生素與抗生素紙片

抗菌藥物敏感試驗是臨床進行抗菌治療的指導(dǎo)性實驗，其結(jié)果的正確性直接關(guān)系到抗菌治療的成敗。常用有紙片法和稀釋法，保證結(jié)果的準(zhǔn)確性極為重要。

（五）抗生素與抗生素紙片抗菌藥物敏感試驗是臨床進行抗39舉例：紙片法質(zhì)量控制①培養(yǎng)基：應(yīng)使用合格的MH瓊脂，應(yīng)使用標(biāo)準(zhǔn)菌株、已知藥敏紙片和標(biāo)準(zhǔn)方法進行測試，符合要求才可使用。②菌懸液濃度標(biāo)準(zhǔn)：為1.5×108CFU／ml。舉例：紙片法質(zhì)量控制①培養(yǎng)基：應(yīng)使用合格的MH瓊脂，40③含藥紙片應(yīng)冷凍保存，－20℃可保存一年。新購紙片用標(biāo)準(zhǔn)菌株和培養(yǎng)基，用標(biāo)準(zhǔn)方法測定，符合要求方可使用。③含藥紙片應(yīng)冷凍保存，－20℃41④實驗過程及結(jié)果測量：菌懸液應(yīng)在15min內(nèi)接種至平板，平放3min，然后將藥物紙片貼到平板上，100mm的平皿不超過5張，置35℃孵育18h，測量精確度1／10mm。⑤質(zhì)控菌株有：金黃色葡萄球菌ATCC25923；大腸埃希菌ATCC25922等。④實驗過程及結(jié)果測量：菌懸液應(yīng)42⑥抑菌環(huán)的質(zhì)控范圍：在20個試驗結(jié)果中只能有1個結(jié)果超出所列的范圍。⑦質(zhì)控測定次數(shù)：每批新的MH瓊脂和含藥紙片必須用質(zhì)控菌株進行檢測30日，30個抑菌環(huán)直徑只有少于3個結(jié)果超出范圍。達到要求后，每周檢測一次。⑥抑菌環(huán)的質(zhì)控范圍：在20個試驗43（六）儀器

1．高壓滅菌器和干熱滅菌器最好在滅菌器裝上溫度記錄裝置，以保證整個滅菌過程中保持合適的溫度。為了保證滅菌的徹底，可用生物指示劑嗜熱脂肪芽胞桿菌ATCC7953監(jiān)視滅菌效果。（六）儀器1．高壓滅菌器和干熱滅菌器最好442．培養(yǎng)箱、冰箱、水浴箱應(yīng)在每日工作開始和結(jié)束時記錄溫度。3．二氧化碳培養(yǎng)箱每天檢查CO2含量。4．厭氧罐或厭氧箱美籃為指示劑，無氧時應(yīng)無色。2．培養(yǎng)箱、冰箱、水浴箱應(yīng)在每455．生物安全柜更換濾網(wǎng)由專門技術(shù)人員進行。6．細(xì)菌培養(yǎng)儀對每批培養(yǎng)瓶進行生長試驗。保證在有效期內(nèi)使用。7．微生物鑒定儀應(yīng)及時更新系統(tǒng)操作軟件，使之能識別最新認(rèn)識的微生物。5．生物安全柜更換濾網(wǎng)由專門46（七）標(biāo)本檢驗過程的質(zhì)量控制微生物學(xué)實驗室除了上述儀器、試劑、人員等進行質(zhì)量控制外，還應(yīng)對標(biāo)本檢驗過程中涉及的每個環(huán)節(jié)進行全程質(zhì)量控制。包括從標(biāo)本采集，直接涂片檢查，分離培養(yǎng)到鑒定的全過程。使用自動化鑒定儀或編碼方式鑒定，必須進行核對以防錯誤。（七）標(biāo)本檢驗過程的質(zhì)量控制微生物學(xué)實驗室除了上述儀器、試47（八）室內(nèi)全面質(zhì)量控制實驗室人員要對以上各項的質(zhì)量控制內(nèi)容進行全面實施。由個人負(fù)責(zé)全面的質(zhì)量控制，自我核對，定期與參考實驗室核對并接受考評。（八）室內(nèi)全面質(zhì)量控制實驗室人員要對以上各項的質(zhì)量48（九）標(biāo)準(zhǔn)菌株的來源和保存l．標(biāo)準(zhǔn)菌株的來源標(biāo)準(zhǔn)菌株是指具有典型的、穩(wěn)定的生理生化特征，并被國際社會所認(rèn)可的菌株。來源于專門的機構(gòu)，如衛(wèi)生部藥物生物制品鑒定所菌種保藏中心。（九）標(biāo)準(zhǔn)菌株的來源和保存l．標(biāo)準(zhǔn)菌株的來源標(biāo)準(zhǔn)菌株是492．標(biāo)準(zhǔn)菌株的保存（l）一般保存法：將菌種于半固體培養(yǎng)基中，35℃培養(yǎng)18h時后封蓋無菌石蠟油，置4℃保存。2．標(biāo)準(zhǔn)菌株的保存（l）一般保存法：將菌種于半固體培50（2）冷凍干燥法：是最可靠的菌種保藏方法，它具有不改變菌種性狀和保存時間長等優(yōu)點，但需有專門的冷凍干燥設(shè)備。（2）冷凍干燥法：是最可靠的菌種51

第二節(jié)空間質(zhì)量控制（一）機構(gòu)

我國負(fù)責(zé)臨床微生物學(xué)實驗室質(zhì)量控制的部門是各級臨床檢驗中心和參考實驗室，負(fù)責(zé)定期或不定期地通過各項熟練程度考核和盲點試驗檢查各實驗室的工作質(zhì)量和水平，進行總結(jié)和評估。各級實驗室可同時接受國內(nèi)、國際多個質(zhì)量控制機構(gòu)或參考實驗室的質(zhì)量評價。第二節(jié)空間質(zhì)量控制（一）機構(gòu)52（二）一般性檢查項目

包括有否制定各種制度及其執(zhí)行情況。1．培養(yǎng)基和試劑的配制記錄、培養(yǎng)基的保存方法、滅菌質(zhì)量、有效期。2．室內(nèi)全面質(zhì)量控制的建立，室內(nèi)工作人員的熟練程度的考核和盲點試驗的進行情況，細(xì)菌檢驗的操作手冊及操作的規(guī)范性。3．設(shè)備的操作卡，操作人員的操作水平，設(shè)備的使用保養(yǎng)、維修記錄。（二）一般性檢查項目包括有否制定各種制度及其執(zhí)行情53（三）熟練程度的考核由質(zhì)控管理機構(gòu)（檢驗中心或參考實驗室）發(fā)放模擬標(biāo)本或菌種，接收的實驗室知道菌株的來源、檢驗的內(nèi)容和時間。實驗室完成鑒定后在規(guī)定時間內(nèi)將結(jié)果反饋至檢驗中心或參考實驗室，進行評價。