基因工程(jīyīngōngchéng)藥物

——促紅細胞生成素（EPO）

第一頁，共十八頁。EPO的概念EPO的用途及其療效EPO的純化歷史及工藝流程EPO的銷售情情況及其前景第二頁，共十八頁。什么(shénme)是EPO？EPO：是促紅細胞生成素（Erythropoietin）的英文簡稱。促紅細胞生成素：最初是從腎臟中分離出來能刺激前體紅細胞增生、分化的一種細胞因子。人體血液中的促紅細胞生成素：是由腎臟和肝臟分泌(fēnmì)的一種激素樣物質，能夠促進紅細胞生成。它與其受體(EPO-R)結合后共同介導缺氧的生理反應。第三頁，共十八頁。EPO的用途(yòngtú)醫(yī)療用途：增加紅血球的數(shù)目，用于貧血、組織斷離、早產兒，用在癌學和血液學方面。體育用途(興奮劑)：增加訓練耐力和訓練負荷(fùhè)，屬于國際奧委會規(guī)定的違禁藥物。在2008年北京奧運會中第一例的興奮劑。第四頁，共十八頁。EPO的療效(liáoxiào)1、腎性貧血患者EPO水平較低，在進行治療過程中，往往通過注射EPO來提高體內EPO水平進行治療，從而幫助(bāngzhù)病人增加紅細胞數(shù)量，此時EPO水平有所上升。2、其他貧血如缺鐵性貧血、巨細胞性貧血患者EPO水平不降低，但也可以使用EPO治療，此時濃度也會有所升高。3、再生障礙性貧血和骨髓造血功能不全患者EPO水平升高。第五頁，共十八頁。EPO的純化(chúnhuà)歷史1、Miyake的七步法：純化步驟太多，對設備及操作要求也較高，不適合工業(yè)生產的特點。2、Spivik利用凝集素親和層析純化EPO：由于凝集素親和層析凝膠易被雜蛋白不可逆吸附，使得分離效果降低，成本增高，也不利于大規(guī)模生產。3、近年來則利用三步層析(cénɡxī)法三步純化基本流程等。第六頁，共十八頁。EPO的工藝流程(ɡōnɡyìliúchénɡ)

——①三步層析法1、染料配基親和層析(cénɡxī)→反相疏水層析(cénɡxī)→離子交換層析(cénɡxī);2、染料配基親和層析→反相疏水層析→分子篩層析;3、反相疏水層析→離子交換層析→分子篩層析。第七頁，共十八頁。EPO的工藝流程(ɡōnɡyìliúchénɡ)

——②三步純化基本流程第一步：反相柱色譜樣品濃縮(nónɡsuō)約96.7%透析第二步：DEAE-離子交換色譜第三步：分子篩色譜

總回收率〉30%比活1.5*108U/g蛋白第八頁，共十八頁。第一步：反相色譜C6反相柱（2cm*2cm）（創(chuàng)新生物技術(jìshù)公司）流程：上樣50ml/min（柱結合量約5mg蛋白/ml介質)去離子水平衡至檢測基線

10%~80%乙醇胍線性梯度洗脫檢測并收集含EPO主峰ELISA測定結果：60%乙醇-1mol/L鹽酸胍洗出EPO第九頁，共十八頁。透析透析液：10倍體積的10mmol/LTris.HCl(pH7.5)-2%蔗糖緩沖液透析次數(shù)(cìshù)：2時間：5~6h第十頁，共十八頁。第二步：離子交換(lízǐjiāohuàn)柱DEAE型離子交換柱流程：10mmol/LTris.HCl(pH7.5)緩沖液平上樣20ml/min（柱結合量20mg/ml）10mmol/LTris.HCl(pH7.5)緩沖液平衡至基線添加NaCl入緩沖液，進行截狀梯度洗脫（NaCl濃度(nóngdù)分別為：50，70，125mmol/L）結果：ELISA檢測盒表明75mmol/L洗脫峰中含EPO第十一頁，共十八頁。第三步：分子篩色譜(sèpǔ)SephacrylS-200色譜分析流程：上樣體積(tǐjī)80ml流速2ml/min流動相20mmol/L檸檬酸鈉-100mmol/LNaCl緩沖液結果：收集的rHuEPO保留時間約為45min比活性約為1.5*108U/g蛋白；純度〉98%（SDS檢測）免疫原性檢測：Westernblot第十二頁，共十八頁。EPO的銷售(xiāoshòu)情況重組促紅細胞生成素，也稱超級“重磅炸彈”基因藥物。1985年科學家應用基因重組技術，在實驗室獲得重組人EPO（rhEPO），1989年安進（Amgen）公司的第一個基因重組藥物Epogen獲得FDA的批準，適應癥為慢性腎功能衰竭導致的貧血、惡性腫瘤或化療導致的貧血、失血后貧血等，其市場(shìchǎng)表現(xiàn)不俗，1999年銷售值達到17.6億美元，2000年19.6億美元，2002年22.6億美元，2003年24.4億美元，成為名副其實的“重磅炸彈”基因藥物。

第十三頁，共十八頁。安進（Amgen）開發(fā)的用于治療惡性貧血癥的第二代促紅細胞生成素新產品Arnesp2001年得到FDA的批準，Arnesp2002年初正式(zhèngshì)上市。Arnesp：是一種“高糖基化”促紅素產品。其促進紅細胞生成的能力大大優(yōu)于第一代EPO（促紅細胞生成素）產品。第一年上市即大獲全勝，贏得開們紅，Arnesp2002年全年銷售額為4.2億美元，2003年全年銷售額為15.4億美元。估計在今后3年內，Arnesp將創(chuàng)造10億~15億美元的市場銷售額并奪取現(xiàn)有EPO生產商的部分市場，其市場前景不可估量。第十四頁，共十八頁。2001年，EPO（包括(bāokuò)Arnesp）的全球銷售額達21.1億美元，2002年達26.8億美元，2003年全世界EPO的年銷售額超過50億美元。創(chuàng)下生物工程藥品單個品種之最，是當今最成功的基因工程藥物。強生（Johnson&Johnson）公司的促紅細胞生成素Procrit/Eprex更是表現(xiàn)不俗，2001年銷售額34.42億美元，2002年銷售額42.69億美元，2003年銷售收入達到39.84億美元。

第十五頁，共十八頁。目前，國內已有10多家單位獲準生產紅細胞生成素。沈陽三生和上海麒麟鯤鵬（中國）生物藥業(yè)的產品在國內醫(yī)院的銷售額獨領風騷，2001年EPO的國內醫(yī)院銷售總額約為47449萬元，2002年為49508萬元，2003年上半年為28606萬元。估計國內的年市場容量在20到30億元左右，但目前年銷售額只有區(qū)區(qū)(qūqū)5億元左右。綜上所述，EPO的市場前景非常可觀。EPO的市場前景第十六頁，共十八頁。THANKYOU!第十七頁，共十八頁。內容(nèiróng)總結基因工程藥物

——促紅細胞生成