1、1實(shí)驗(yàn)01-1 植物組織中自由水和束縛水含量的測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)原理 將植物組織浸入高濃度（低水勢(shì)）蔗糖溶液中并達(dá)到平衡后，自由水可全部擴(kuò)散到外部糖液中，導(dǎo)致外部糖液的質(zhì)量增加，同時(shí)濃度降低。用濃度降低了的糖液的質(zhì)量減去原來高濃度糖液的質(zhì)量即得到來自植物組織中的自由水的質(zhì)量。 以植物組織的總含水量減去自由水含量，便可得到束縛水的含量。2二、材料、設(shè)備與試劑（一 ）實(shí)驗(yàn)材料 油菜 （二）設(shè)備 打孔器；移液器；手持測(cè)糖儀等。（三）試劑 蔗糖溶液（60g/100g） 3三、實(shí)驗(yàn)步驟（一）植物組織總含水量的測(cè)定油菜葉片的總含水量：87.00%（已由實(shí)驗(yàn)員提前完成）。 測(cè)定方法（烘干法）：將葉圓片置105烘箱

2、中烘15min以殺死植物組織細(xì)胞，再于8090下烘至恒定質(zhì)量 后，計(jì)算總含水量（%）。4 (1) 取帶密封皮頭的干燥注射器于電子天平上準(zhǔn)確稱質(zhì)量：W1。 (2) 用打孔器打取小葉圓片50片(植物材料的選取同上)，裝入注射器中，帶皮頭稱質(zhì)量為W2。 (3) 用注射器吸入約5mL蔗糖溶液，帶上密封皮頭再準(zhǔn)確稱質(zhì)量為W3。 (4) 抽拉注射器進(jìn)行減壓處理1小時(shí)。 (5)手持測(cè)糖儀分別測(cè)定蔗糖原液濃度（C1）和注射器中糖液濃度（C2）。（二）植物組織中自由水含量的測(cè)定5自由水的含量(%)= 四、結(jié)果計(jì)算植物組織中束縛水的含量(%) = 組織總含水量 組織中自由水含量6注意事項(xiàng)： 1. 清洗植物組織后應(yīng)

3、注意用吸水紙擦干其表面的游離水分。 2. 植物組織與外部溶液之間達(dá)到充分平衡。7實(shí)驗(yàn)01-2 植物組織水勢(shì)的測(cè)定（小液流法） 一、實(shí)驗(yàn)原理 將植物組織分別放在一系列濃度遞增的溶液中，當(dāng)找到某一濃度的溶液與植物組織之間水分保持動(dòng)態(tài)平衡時(shí)，則可認(rèn)為該溶液的水勢(shì)（滲透勢(shì)）等于植物組織的水勢(shì)。 由于溶液濃度是已知的，可以根據(jù)公式計(jì)算出溶液的滲透勢(shì)()，即代表植物組織的水勢(shì)(w)。 8二、材料、設(shè)備與試劑（一 ）實(shí)驗(yàn)材料 油菜 （二）設(shè)備 打孔器；青霉素小瓶；帶橡皮管的注射針頭等。（三）試劑 1. 0.05mol/kg、0.10mol/kg、0.15mol/kg、0.20mol/kg、0.25mol/k

4、g、0.30mol/kg蔗糖溶液。 2. 甲烯藍(lán)粉末。9三、實(shí)驗(yàn)步驟 1. 甲、乙小瓶溶液準(zhǔn)備 10三、實(shí)驗(yàn)步驟 2. 用打孔器打取小圓片約50片，混合均勻。分別夾入5-8個(gè)小圓片到藍(lán)色的糖液瓶中(甲組)。蓋上瓶塞，并使葉圓片全部浸沒于溶液中。放置約20-30min，應(yīng)經(jīng)常搖動(dòng)小瓶。 11四、結(jié)果計(jì)算 1. 判斷和計(jì)算等滲溶液的濃度 2. 將求得的等滲濃度值代入如下公式： w = -iCRT 3. 經(jīng)一定時(shí)間后，用注射針頭吸取各瓶藍(lán)色糖液少許，將針頭插入對(duì)應(yīng)濃度的無色糖液中部，小心地放出少量液流，觀察藍(lán)色液流的升降動(dòng)向（用待測(cè)濃度清洗針頭)。 12注意事項(xiàng)： 1. 葉片表面不能有游離水分。 2

5、. 植物組織與外液之間達(dá)到平衡。 3. 往乙組溶液（白色）中釋放藍(lán)色液流時(shí)，不可震動(dòng)小瓶。 根系活力的測(cè)定(TTC法) 植物生理生化教研室 曾漢來 2012.03.12一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康腍2O無機(jī)鹽提供合成所需能量;合成氨基酸和植物激素（ABA、CTK、GA等）根的生長情況和活力水平直接影響地上部的生長測(cè)定根系活力，為植物生長狀況、營養(yǎng)供應(yīng)研究提供依據(jù)。理解植物根系活力的內(nèi)涵掌握TTC法測(cè)根系活力的原理與方法二、實(shí)驗(yàn)原理氯化三苯基四氮唑（TTC）的標(biāo)準(zhǔn)氧化電位為80mV的氧化還原物質(zhì)，獲得H的能力強(qiáng)。溶于水為無色溶液，還原后即生成紅色而不溶于水的三苯基甲腙 （TTF）。 生成的TTF比較穩(wěn)定，不會(huì)被

6、空氣中的氧自動(dòng)氧化，可用分光光度法定量測(cè)定。TTCTTF根系活力脫氫酶活性丙二酸碘乙酸琥珀酸延胡索酸蘋果酸 促進(jìn)抑制（無色，溶于水）（紅色，不溶于水）三、實(shí)驗(yàn)材料水培或砂培小麥、玉米等植物根系。四、實(shí)驗(yàn)步驟制作TTC標(biāo)準(zhǔn)曲線吸取不同量的 TTC加入10mL容量瓶Na2S2O4TTC全部還原乙酸乙酯乙酸乙酯定容0.25mL0.50mL1.00mL1.50mL2.00mLTTC含量（g）2550100150200乙酸乙酯作參比，測(cè)定485nm下光密度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線四、實(shí)驗(yàn)步驟測(cè)定根系活力0.2-0.3g根尖樣品(2-3cm長)0.4TTC、磷酸緩沖液各5ml 根充分浸沒于溶液中37下暗保溫40-

7、60min加入1mol/L硫酸2ml取出根吸干水分與34ml乙酸乙酯在研缽內(nèi)磨碎紅色提取液移入試管且用乙酸乙酯定容到10ml空白試驗(yàn)作參比測(cè)485nm下吸光度空白實(shí)驗(yàn)：根樣品先加硫酸，其他操作相同。查標(biāo)準(zhǔn)曲線，TTC還原量(mg)五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果TTC還原能力（mg/g(根鮮重)/h）四氮唑還原量（mg）根重（g）時(shí)間(h)六、思考題1.植物的根系活力與地上部分的關(guān)系?2.本實(shí)驗(yàn)中為什么要用磷酸緩沖液和37處理？3.測(cè)定根系活力時(shí)最好選擇根的哪個(gè)部位？為什么？ 4.本實(shí)驗(yàn)的根系活力指標(biāo)的實(shí)質(zhì)是什么？5.對(duì)TTC的特性及顯色反應(yīng)原理要清楚。環(huán)境因素對(duì)光合作用的影響 植物生理生化教研室 曾漢來 201

8、2.03.12實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠^察體驗(yàn)光照強(qiáng)度、溫度和二氧化碳濃度對(duì)光合作用強(qiáng)度（速率）的影響。實(shí)驗(yàn)原理多種酶參與上表皮下表皮植物本身：光合器官發(fā)育狀況、發(fā)育時(shí)期外因：光照強(qiáng)度、光質(zhì)等CO2濃度溫度水影響光合作用的因素礦質(zhì)元素病蟲、污染等植物光合作用強(qiáng)度受光強(qiáng)、二氧化碳濃度、溫度等環(huán)境條件的影響；以植物葉片為材料時(shí)利用減壓滲入法排除細(xì)胞間隙空氣，充以水分，可使葉片沉于水中；光合作用放出氧氣，O2在水中溶解度很小，而在細(xì)胞間和葉表面積累，結(jié)果使原來下沉的葉片上浮，根據(jù)上浮時(shí)間長短即能比較光合作用強(qiáng)弱。實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)材料和試劑 材料: 小白菜健壯、葉齡相同的新鮮成熟葉片無CO2水：冷開水（少CO2）飽和CO

9、2水：0.5% NaHCO3水制備二氧化碳飽和水還可以這樣作：實(shí)驗(yàn)步驟1.選取健壯、葉齡相同的新鮮成熟葉片,用直徑為1cm的打孔器(避開葉脈)打下小圓片50片。 置于注射器中,加水減壓，至圓片全部下沉為止,在燒杯中用水進(jìn)行檢查，選下沉葉圓片放在暗處備用。？減壓減壓取理效果2.取4只錐形瓶編號(hào),其中1號(hào)加40ml冷開水,2、3、4號(hào)加入40mlNaHCO3水。各放入10個(gè)葉圓片（快速?。?。按如下處理： 瓶號(hào) 光照 溫度 二氧化碳 放置位置 1 強(qiáng) 室溫 - 燈光下 2 弱 室溫 + 室內(nèi)避光 3 強(qiáng) 低溫 + 燈光下冰盤中 4 強(qiáng) 室溫 + 燈光下實(shí)驗(yàn)結(jié)果小圓片開始上浮結(jié)果記錄： 4號(hào)瓶中小圓片

10、全部上浮時(shí)（約5-8min)，統(tǒng)計(jì)其它各處理小圓片上浮數(shù)量， 或某一定時(shí)間內(nèi)各處理上浮的小圓片個(gè)數(shù)。結(jié)論與分析比較不同條件下光合作用的強(qiáng)弱。根據(jù)結(jié)果分析光強(qiáng)、溫度和二氧化碳對(duì)光合作用的影響。實(shí)驗(yàn)3-1 紅外線CO2氣體分析儀（CB-1101）法測(cè)定植物光合速率一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康睦斫庵参锕夂纤俣葴y(cè)定的方法掌握紅外線CO2分析儀測(cè)定植物光合速率的原理了解紅外線CO2分析儀的操作方法本實(shí)驗(yàn)利用CO2的變化來測(cè)定。二、實(shí)驗(yàn)原理 許多由異原子組成的氣體分子對(duì)紅外線都有特異的吸收帶。CO2的紅外吸收帶有四處，其吸收峰分別在2.69m、2.77m、4.26m和14.99m處，其中只有4.26m的吸收帶不與H2O的

11、吸收帶重疊，紅外儀內(nèi)設(shè)置僅讓4.26m紅外光通過的濾光片，當(dāng)該波長的紅外光經(jīng)過含有CO2的氣體時(shí)，能量就因CO2的吸收而降低，降低的多少與CO2的濃度有關(guān)，并服從朗伯-比爾定律。分別供給紅外儀含與不含CO2的氣體，紅外儀的檢測(cè)器便可通過檢測(cè)紅外光能量的變化而輸出反映CO2濃度的電訊號(hào)。采用開放式氣路系統(tǒng)：該系統(tǒng)用雙氣室IRGA,以氣泵為動(dòng)力，將流經(jīng)同化室前的空氣（參比氣）泵入一個(gè)氣室，流經(jīng)同化室后的空氣（樣本氣）泵入另一個(gè)氣室（分析氣室），最后將氣體排空，由儀器指示參比氣和樣本氣的CO2濃度差，根據(jù)流量、同化室中葉片的面積，求出葉片的光合速率。泵流量計(jì)進(jìn)氣樣品IRGA（C2）參比IRGA (C

12、1)葉室參比室排氣植物材料：小白菜或者甘藍(lán)型油菜儀器：CB-1101紅外線CO2氣體分析儀三、材料與主要儀器CB-1101CB-1101操作面板及氣路圖四、實(shí)驗(yàn)步驟1、儀器組裝及調(diào)零：，打開電源預(yù)熱5 min打開氣泵開關(guān)用堿石灰管分別連接面板上的“OUT”和“IN”。利用CO2調(diào)零調(diào)試儀器。2、樣品測(cè)定：將葉片正確放入葉室，并封閉葉室。 打開開路開關(guān)按下初測(cè)按鈕待數(shù)值穩(wěn)定后按下測(cè)終按鈕待數(shù)值穩(wěn)定后按下完成按鈕記錄測(cè)定結(jié)果【需要記錄起始CO2濃度C1、測(cè)定完成后CO2濃度C2，葉面溫度t，氣體流速V】五、原始記錄 V， C1， C2， S ，t V為氣體流速，單位 L/min; C1，C2為測(cè)定

13、啟始和反應(yīng)完成后的CO2濃度，單位 L/L；S為光合測(cè)定的葉面積，單位為m2，本實(shí)驗(yàn)固定為6.510-4 m2 ；P為氣壓，單位 bar；t為同化室葉片表面溫度，單位。 S六、結(jié)果計(jì)算Pn-凈光合速率（單位為molm-2s-1）七、分析討論1、測(cè)定時(shí)為何需要從高空采氣？2、計(jì)算的結(jié)果為凈光合速率，為什么？3、本方法是否可以用于測(cè)定植物的呼吸速率，如果要測(cè)定呼吸速率操作過程中應(yīng)注意什么？4、如果要測(cè)定植物的實(shí)際光合速率，應(yīng)如何操作？5、結(jié)合自已的植物光合速率結(jié)果進(jìn)行分析討論。 實(shí)驗(yàn)3-2 葉綠素含量的測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?、?shí)驗(yàn)原理1、吸光度具有加和性：混和溶液在某一波長下的吸光度為各組分在該波長下

14、吸光度之和。不同組分在某波長下具有不同的吸光系數(shù)。2、葉綠素在紅光區(qū)具有最大吸收峰，但在不同溶劑下有不同的最大吸收峰波長 在95%乙醇中，葉綠素a和葉綠素b的最大吸收峰的波長分別為665 nm和649nm，兩者的濃度可根據(jù)以下方程組計(jì)算求得： Ca=13.95A6656.88A649 Cb=24.96A6497.32A665三、實(shí)驗(yàn)材料與儀器實(shí)驗(yàn)材料：小白菜葉片或油菜葉片主要儀器：分光光度計(jì)四、實(shí)驗(yàn)步驟稱取葉片0.050.1g，剪碎或撕碎后放入10mL刻度試管中，加入56mL 95%乙醇，置80水浴鍋中，至組織完全變白，取出冷卻。用95%乙醇定容至10mL，搖勻。以95%乙醇為空白，在波長66

15、5nm、649nm下測(cè)定吸光度。五、原始數(shù)據(jù)記錄 A665， A649， W， V六、結(jié)果計(jì)算Ca (mg/L) = 13.95A665 6.88A649 Cb (mg/L) = 24.96A649 7.32A665 葉綠素總濃度(mg/L) = Ca + Cb 葉綠素的比值 = Ca Cb葉綠素的含量 (mg/g) 七、分析討論1、結(jié)合葉綠素的比值和葉綠素的含量進(jìn)行分析討論。2、葉綠素在藍(lán)光區(qū)也有吸收峰，為何不用藍(lán)光波長進(jìn)行比色測(cè)定？實(shí)驗(yàn)4-1 微量定容測(cè)壓法測(cè)定植物的呼吸速率一、原理: 1. 在密閉、定溫及固定體積的系統(tǒng)中，當(dāng)氣體被吸收時(shí)，氣體分子減少，壓力降低。相反，當(dāng)產(chǎn)生氣體時(shí)，壓力上

16、升。壓力的變化可以用微量檢壓計(jì)測(cè)出，并可據(jù)此計(jì)算氣體吸收或釋放的數(shù)量。因此，微量檢壓計(jì)可用以研究呼吸作用、光合作用及與O2、CO2及其它氣體交換相關(guān)的反應(yīng)如某些酶的活性等。一、原理: 2. 由于在呼吸過程中吸收氧氣和產(chǎn)生二氧化碳是同時(shí)進(jìn)行的，所以從壓力計(jì)上所觀察到的壓力變化是氧的吸收量和二氧化碳釋放量的總結(jié)果。若在反應(yīng)瓶中加入堿液（如氫氧化鉀），呼吸時(shí)所產(chǎn)生的二氧化碳被堿吸收，則可由壓力的變化計(jì)算出氧的吸收量。 二、材料、儀器設(shè)備及試劑（一）材料：萌發(fā)的小麥種子。（二）儀器設(shè)備：1. 瓦布格呼吸計(jì)（微量呼吸檢壓計(jì)）；2. 移液管；3. 量筒；4. 小鑷子；5.橡皮筋；6.吸水紙二、材料、儀器設(shè)

17、備及試劑（三）試劑：1. 20KOH；2. 凡士林；3. Brodie氏溶液：NaCl 23g，牛膽酸鈉5g，溶于500ml水中，另加少許染料（酸性品紅）使溶液染色，并加數(shù)滴濃麝香草酚乙醇溶液作為防腐劑。三、實(shí)驗(yàn)步驟（一）種子吸氧量的測(cè)定（測(cè)壓計(jì)用） 1.種子處理：取發(fā)芽小麥種子6-8粒，用吸水紙將種子表面水分吸干，稱其鮮重（W）。用排水法測(cè)定其體積（V種子）：取10ml量筒，內(nèi)盛約5ml的水，將種子充分放入量筒內(nèi)，二次水分體積之差即為種子體積。將種子取出，再次用吸水紙吸干附在種子外表的水分，將種子放入反應(yīng)瓶的底部，并往反應(yīng)瓶底部加入0.5ml水。三、實(shí)驗(yàn)步驟2.反應(yīng)瓶及壓力計(jì)處理：在中央小槽

18、內(nèi)加入20KOH 0.2ml，用以吸收CO2。為了增大吸收CO2的能力，可將1cm2cm濾紙折疊后插入中央小槽內(nèi)，并在中央小槽口上涂少量凡士林，防止堿液逸出。 側(cè)管的玻璃棒涂以凡士林后塞緊。壓力計(jì)口亦涂上凡士林和反應(yīng)瓶連接，轉(zhuǎn)動(dòng)反應(yīng)瓶，使封口凡士林呈透明為止，然后用橡皮筋將反應(yīng)瓶固定在壓力計(jì)上。 三、實(shí)驗(yàn)步驟3.壓力計(jì)及反應(yīng)瓶與水槽間溫度的平衡：將壓力計(jì)固定在水槽上，并打開壓力計(jì)活塞。設(shè)置恒溫水槽溫度，啟動(dòng)水槽攪拌裝置并啟動(dòng)轉(zhuǎn)盤振蕩，使壓力計(jì)平衡1015min。在此過程中要注意檢查反應(yīng)瓶是否漏氣。三、實(shí)驗(yàn)步驟4.測(cè)定與讀數(shù)：當(dāng)反應(yīng)瓶內(nèi)溫度與水槽溫度平衡后，停止振蕩，將壓力計(jì)上的活塞關(guān)閉并重新開

19、始振蕩，記錄開始時(shí)間。每隔15min記錄壓力計(jì)左側(cè)毛細(xì)管Brodie液面高度（ h ）。讀數(shù)時(shí)暫停振蕩，并將壓力計(jì)的右管液面調(diào)至150mm處，記錄左管液面高度，共計(jì)四次（共1h）。三、實(shí)驗(yàn)步驟（二）空白實(shí)驗(yàn)與測(cè)壓計(jì)壓力值校正 由于壓力計(jì)左管口與大氣相通，實(shí)驗(yàn)時(shí)室內(nèi)氣壓或水槽溫度微小變化對(duì)讀數(shù)均有影響，為此，必須進(jìn)行校正。 校正方法：反應(yīng)瓶中除不加種子外，其他處理、測(cè)定及讀數(shù)與測(cè)壓計(jì)完全相同（即空白實(shí)驗(yàn)，作溫壓計(jì)用）；由測(cè)壓計(jì)讀數(shù)與溫壓計(jì)讀數(shù)的差值求得測(cè)壓計(jì)的實(shí)際壓力值（校正值）。四、結(jié)果計(jì)算（一）反應(yīng)瓶常數(shù)（k， l /mm）計(jì)算： 其中，VgV總VfV種子 (l) V總：反應(yīng)瓶（至連接的壓力

20、計(jì)右側(cè)臂150mm處）的總體積（可根據(jù)反應(yīng)瓶出廠編號(hào)查知）； Vf ：反應(yīng)瓶中液體體積（本實(shí)驗(yàn)中包括加入的KOH和水的體積）； V種子：實(shí)驗(yàn)所用種子體積； T：實(shí)驗(yàn)體系的絕對(duì)溫度； ：壓力為1atm、溫度為T時(shí)氣體（本實(shí)驗(yàn)為O2）的溶解度（可查表獲知）； P0：以Brodie液表示的標(biāo)準(zhǔn)壓力（約為10000mm）。四、結(jié)果計(jì)算（二）呼吸速率計(jì)算：（樣品耗氧的）呼吸速率（l/gh） h K/ Wt。 其中， hK為根據(jù)實(shí)際壓力差值（h，mm）求出的氧氣的吸收量（l）；W為鮮樣品質(zhì)量（g）；t為反應(yīng)時(shí)間（h）五、分析討論主要注意事項(xiàng)：1. 操作中切勿對(duì)種子造成物理或化學(xué)損傷；2. 壓力計(jì)為精密玻璃

21、儀器，須防止損壞；3. 壓力計(jì)與反應(yīng)瓶編號(hào)要配套一致；4. 壓力計(jì)及反應(yīng)瓶必需保證氣密性良好；5. 壓力計(jì)讀數(shù)時(shí)應(yīng)暫停振蕩，且不可將活塞打開，也不可將壓力計(jì)從水槽上卸下。思考題：1.本實(shí)驗(yàn)中為什么要設(shè)計(jì)溫壓計(jì)？2.反應(yīng)瓶常數(shù)k與哪些因素有關(guān)？本實(shí)驗(yàn)是如何滿足其條件的？實(shí)驗(yàn)4-2 小籃子法（廣口瓶法）測(cè)定植物呼吸速率一、原理 植物呼吸時(shí)會(huì)放出CO2，一定量的植物樣品在單位時(shí)間內(nèi)放出CO2的數(shù)量，即可作為該樣品的呼吸速率。 植物呼吸過程中放出的CO2可用氫氧化鋇溶液吸收，呼吸過程結(jié)束后用已知濃度的草酸溶液滴定剩余的堿液，從空白和樣品二者消耗草酸溶液之差即可計(jì)算出呼吸過程中釋放的CO2的量。 二、材

22、料、設(shè)備儀器及試劑（一）材料：發(fā)芽的小麥種子。（二）儀器設(shè)備：1.呼吸測(cè)定裝置；2.天平；3.鐘表；4.酸式及堿式滴定管；5.溫度計(jì) （三）試劑：1） 0.05mol/L 左右的Ba(OH)2：Ba(OH)2 8.6g溶于1000ml蒸餾水中；2） 144 mol/L 草酸溶液：準(zhǔn)確稱取重結(jié)晶的H2C2O42H2O 2.8651g溶于蒸餾水中并定容至1000ml（每ml相當(dāng)于1mg CO2）；3） 酚酞指示劑：1g酚酞溶于100ml 95乙醇中，貯于滴瓶中。 三、實(shí)驗(yàn)步驟 1. 取500ml廣口瓶一個(gè)，瓶口用打有三孔的橡皮塞塞緊，一孔插一盛堿石灰的干燥管，使呼吸過程中能進(jìn)入無CO2的空氣，一孔

23、插溫度計(jì)，另一孔直徑約1cm，供滴定用，平時(shí)用一小橡皮塞塞緊，瓶塞下面掛一鐵絲紗小籃，以便裝植物樣品，整個(gè)裝置即為廣口瓶呼吸測(cè)定裝置。三、實(shí)驗(yàn)步驟 2. 向廣口瓶內(nèi)加入0.05mol/L 的Ba(OH)2溶液20ml，立即塞緊橡皮塞（不帶小籃），充分搖動(dòng)廣口瓶2min，使瓶內(nèi)CO2全部被吸收，拔出小橡皮塞，加入酚酞指示劑2滴后搖勻，把滴定管插入孔中，用標(biāo)準(zhǔn)草酸溶液進(jìn)行空白滴定，直到紅色剛剛消失為止。記錄滴定所用草酸的量（V0，ml） 三、實(shí)驗(yàn)步驟 3. 倒出瓶中廢液，用無CO2的蒸餾水（煮沸過的）洗凈后，重加上述Ba(OH)2溶液20ml。稱取5g左右的發(fā)芽小麥種子（稱前須擦干種子表面水分），

24、裝入小籃子中，掛于橡皮塞下，塞緊瓶塞并開始記錄時(shí)間，經(jīng)過2030min，其間輕輕搖動(dòng)數(shù)次（以破壞溶液表面的BaCO3薄膜，利于充分吸收CO2）。到預(yù)訂時(shí)間后，打開塞子，將裝有植物材料的小籃子迅速取出，向瓶內(nèi)加入2滴酚酞指示劑，立即塞緊塞子，搖勻后用草酸滴定，方法如前。記錄滴定所用草酸的量（Vs，ml）。四、結(jié)果計(jì)算 樣品的呼吸速率（mg CO2/gh） （V0Vs）1/(Wt) 式中， V0 ：空白滴定用去的草酸量（ml）； Vs ：樣品滴定用去的草酸量（ml）；W：樣品鮮重（g）；t：測(cè)定時(shí)間（h）。1表示滴定所用每毫升144mol/L 的草酸相當(dāng)于1mgCO2。 五、分析討論主要注意事項(xiàng)：

25、1. 操作過程中應(yīng)防止實(shí)驗(yàn)人員口中呼出的氣體進(jìn)入廣口瓶；2. 應(yīng)避免對(duì)植物材料造成理化損傷；3. 搖動(dòng)廣口瓶時(shí)應(yīng)小心，防止小籃子掉入堿液中。思考題：在本實(shí)驗(yàn)中要準(zhǔn)確測(cè)定呼吸速率，還需要注意哪些方面的問題？77實(shí)驗(yàn)05-01 植物種子生命力的快速測(cè)定 在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，種子是最基本的生產(chǎn)資料，只有具有生命力的種子才能發(fā)芽、成苗。因此，測(cè)定種子的生命力特別是種子活力是生產(chǎn)中最為關(guān)心的問題之一。78 TTC法 一、實(shí)驗(yàn)原理 TTC(2,3,5-三苯基氯化四氮唑)的氧化態(tài)是無色的，可被氫還原成不溶于水的紅色三苯甲腙(TTF)： 應(yīng)用TTC溶液浸泡種子，使之滲入種胚細(xì)胞內(nèi)，如果種胚具有生命力，其中的脫氫酶就

26、可以將TTC作為受氫體使之還原成為三苯甲腙而呈紅色，根據(jù)種胚著色情況可鑒定種子的生命力。 79二、材料、設(shè)備與試劑（一 ）實(shí)驗(yàn)材料 小麥、玉米種子 （二）設(shè)備 1. 小燒杯；2. 刀片；3. 鑷子；4. 溫箱（三）試劑 0.5 g/100mL TTC溶液 80三、實(shí)驗(yàn)步驟1. 溫水(約30)浸種26h，使種子充分吸脹。2. 隨機(jī)取種子10粒，沿種胚中央準(zhǔn)確切開，取其一半備用。3. 將準(zhǔn)備好的種子浸于TTC試劑中，于恒溫箱(3035)中保溫30min。4. 倒出TTC溶液，清水將種子沖洗12次，觀察種胚被染色的情況。凡種胚全部或大部分被染成紅色的即為具有生命力的種子；種胚不被染色的為死種子。81

27、 根據(jù)種胚的染色情況判斷種子活力并統(tǒng)計(jì)死活種子的百分率。五、注意事項(xiàng)染色結(jié)束后要立即進(jìn)行鑒定，因放久會(huì)褪色。四、結(jié)果記錄與分析82 染料染色法 一、實(shí)驗(yàn)原理 有生命力的種子胚細(xì)胞的原生質(zhì)膜具有半透性，有選擇吸收外界物質(zhì)的能力，染料一般不能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，胚部不染色；喪失生命力的種子，其胚部細(xì)胞原生質(zhì)膜喪失了選擇吸收能力，染料可自由進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)使胚部染色。因此，可根據(jù)種子胚部是否被染色來判斷種子的生命力。83二、材料、設(shè)備與試劑（一 ）實(shí)驗(yàn)材料 小麥、玉米種子 （二）設(shè)備 1. 小燒杯；2. 刀片；3. 鑷子。（三）試劑 5%紅墨水 84三、實(shí)驗(yàn)步驟1. 將上試驗(yàn)準(zhǔn)備好的另一半種子浸于紅墨水中，室溫放

28、置5min。2. 倒出紅墨水，清水將種子沖洗12次，觀察種胚被染色的情況。85 根據(jù)種胚的染色情況判斷種子活力并統(tǒng)計(jì)死活種子的百分率。五、注意事項(xiàng) 染料的濃度要適當(dāng)，染色時(shí)間不能太長(如用紅墨水染色，只需510min即可)，否則不易區(qū)別染色與否。 四、結(jié)果記錄與分析86實(shí)驗(yàn)05-02 谷物淀粉含量測(cè)定（旋光法） 淀粉不僅是重要的營養(yǎng)物質(zhì)，也是重要的工業(yè)原料之一。測(cè)定淀粉含量對(duì)于鑒定農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)和改進(jìn)農(nóng)業(yè)技術(shù)具有重要意義。87一、實(shí)驗(yàn)原理 淀粉在鹽酸的作用下可水解成葡萄糖，葡萄糖具有旋光性，根據(jù)旋光性的大小可計(jì)算出淀粉含量。二、材料、設(shè)備與試劑（一 ）材料 小麥面粉 （二）設(shè)備 旋光儀、 天平、

29、水浴鍋、 容量瓶、試管等（三）試劑 1.12%HCl；30%硫酸鋅；15%亞鐵氰化鉀 88三、實(shí)驗(yàn)步驟1. 稱取樣品2.5 g于大試管中，取40 mL HCl，先加少量將樣品調(diào)成糊狀，再用剩余HCl將管壁樣品顆粒洗下。2. 將大試管置于沸水浴中反應(yīng)15 min后取出，迅速冷卻至室溫。3. 將樣品完全轉(zhuǎn)入100 mL容量瓶 加入1 mL硫酸鋅，搖勻加1 mL亞鐵氰化鉀，搖勻用蒸餾水定容至刻度，搖勻 干濾紙過濾，收集濾液。4. 測(cè)定：儀器預(yù)熱10 min；調(diào)零；測(cè)定樣品液。89 ：樣品旋光度； ：小麥面粉比旋光度（+182.7）； L：測(cè)定管長度（dm）； W：樣品質(zhì)量（g）四、結(jié)果計(jì)算90 五、

30、注意事項(xiàng) 1、面粉水解時(shí)從水浴沸騰開始計(jì)時(shí)，以保證淀粉被充分水解；必要時(shí)，可以KI-I2試劑檢測(cè)淀粉是否水解完全； 2、定容時(shí)如溶液中泡沫較多，可加1-2滴乙醇消除泡沫。 91實(shí)驗(yàn)6-1 脯氨酸含量的測(cè)定一、目的二、原理 當(dāng)用磺基水楊酸提取植物樣品時(shí)，脯氨酸便游離于磺基水楊酸的溶液中。加入酸性茚三酮加熱處理后，溶液即成紅色，再用甲苯處理，則色素全部轉(zhuǎn)移至甲苯中，色素的深淺即表示脯氨酸含量的高低。在520 nm 波長下比色，用回歸方程計(jì)算出脯氨酸含量。 三、材料、儀器設(shè)備及試劑1、材料 常溫和40處理的水稻幼苗。2、儀器設(shè)備 722型分光光度計(jì)、大試管、帶塞刻度試管、移液管。3、試劑 2.5%酸

31、性茚三酮溶液、3%磺基水楊酸、冰醋酸、甲苯。AB3%磺基水楊酸5 mL實(shí)驗(yàn)流程冰醋酸酸性茚三酮AB 吸取上清2 mL分別稱取0.5 g冷卻加4ml甲苯再次煮沸30minA520水稻幼苗A、常溫處理B、40處理處理30 min沸水浴10 min后，冷卻。各吸取2 mL各吸取2 mL四、實(shí)驗(yàn)步驟1、脯氨酸含量的回歸方程： A520 = 0.021X0.028 ( X：Pro含量 ， g )2、準(zhǔn)確稱取不同處理的水稻幼苗（室溫和 40處理30 min）葉片各0.5 g，分別置于大試管中。然后，分別加入3%磺基水楊酸溶液5 mL，在沸水浴中提取10 min（注意：提取過程中需經(jīng)常搖動(dòng)），冷卻。3、用移液管吸取2 mL提取液于另一干凈的帶塞刻度試管中，分別加入2 mL冰醋酸、2 mL酸性茚三酮試劑，在沸水浴中準(zhǔn)確加熱30 min，溶液即呈紅色。4、冷卻至室溫后，加入4 mL甲苯，搖蕩30s。靜置片刻，取上層脯氨酸紅色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯為空白對(duì)照，測(cè)定 A520。五、原始數(shù)據(jù) W、A520 、VT、VS六、 結(jié)果計(jì)算 脯氨酸含量（mg/g）= X VT W VS 106 1000 七、分析討論1、測(cè)定脯氨酸含量的意義。2、兩次沸水浴處理的作用有何不同？八、注意事項(xiàng)1、試管