1、第七章發(fā)酵生產(chǎn)染菌與防治緒論緒論發(fā)酵染菌指在發(fā)酵過程中除了生產(chǎn)菌以外，還有其它微發(fā)酵染菌指在發(fā)酵過程中除了生產(chǎn)菌以外，還有其它微生物浸入發(fā)酵系統(tǒng)生長繁殖，影響了純種培養(yǎng)過程。據(jù)報道內(nèi)青生物浸入發(fā)酵系統(tǒng)生長繁殖，影響了純種培養(yǎng)過程。據(jù)報道內(nèi)青霉素發(fā)酵染菌率為霉素發(fā)酵染菌率為2%2%，鏈霉素、紅霉素、四環(huán)素發(fā)酵的染菌率為，鏈霉素、紅霉素、四環(huán)素發(fā)酵的染菌率為5%5%，谷氨酸發(fā)酵噬菌體感染率為，谷氨酸發(fā)酵噬菌體感染率為1%2%1%2%。 染菌對發(fā)酵過程有重大的影響，進而影響到發(fā)酵產(chǎn)率、提取率染菌對發(fā)酵過程有重大的影響，進而影響到發(fā)酵產(chǎn)率、提取率、得率、產(chǎn)品質(zhì)量、三廢處理等。、得率、產(chǎn)品質(zhì)量、三廢處理

2、等。在現(xiàn)有的科學(xué)技術(shù)條件下要做到完全不染菌是不可能在現(xiàn)有的科學(xué)技術(shù)條件下要做到完全不染菌是不可能。目前要做的是要提高生產(chǎn)技術(shù)水平，強化生產(chǎn)過程管理，防。目前要做的是要提高生產(chǎn)技術(shù)水平，強化生產(chǎn)過程管理，防止發(fā)酵染菌的發(fā)生。如發(fā)生染菌，應(yīng)盡快找出污染的原因，并止發(fā)酵染菌的發(fā)生。如發(fā)生染菌，應(yīng)盡快找出污染的原因，并采取相應(yīng)的有效措施，把發(fā)酵染菌造成的損失降低到最小。采取相應(yīng)的有效措施，把發(fā)酵染菌造成的損失降低到最小。1、染菌對發(fā)酵的影響 種子染菌 發(fā)酵染菌 (發(fā)酵前、中中、后）2、染菌檢查判斷 鏡檢 肉湯培養(yǎng) 平板/斜面培養(yǎng)3、染菌原因分析、染菌原因分析 菌體生長緩慢 種子培養(yǎng)異常 菌絲結(jié)團 泡沫

3、多n異常現(xiàn)象 代謝不正常n 發(fā)酵異常 菌體生長差 PH過高或過低 溶解氧異常 菌濃過高或過低4、常見染菌類型、常見染菌類型n青霉素青霉素 細(xì)短產(chǎn)氣桿菌、粗大產(chǎn)氣桿菌n鏈霉素鏈霉素 細(xì)短桿菌、假單孢桿菌、產(chǎn)氣桿菌、 粗大產(chǎn)氣桿菌n四環(huán)素四環(huán)素 雙球菌、芽孢桿菌、夾膜桿菌n檸檬酸檸檬酸 青霉菌n谷氨酸谷氨酸 噬菌體n酒類發(fā)酵酒類發(fā)酵 醋酸菌、乳酸菌規(guī)模規(guī)模：大量罐染菌，個別連續(xù)染菌、部分罐染菌 無菌室 沙土管，試管 種子帶菌 培養(yǎng)基 空氣帶菌n污染途徑 操作失誤 設(shè)備 噬菌體 種子培養(yǎng)期： 滅菌或棄之染菌挽救 發(fā)酵前期 ：滅菌后補加種子或分罐 中、后期：加殺菌劑或抗生素、通風(fēng)攪拌 設(shè)備用12030

4、min殺菌6、污染不同種類和性質(zhì)的微生物的影響、污染不同種類和性質(zhì)的微生物的影響生產(chǎn)不同的品種，可污染不同種類和性質(zhì)的生產(chǎn)不同的品種，可污染不同種類和性質(zhì)的微生物。不同污染時間，不同污染途徑，污染不微生物。不同污染時間，不同污染途徑，污染不同菌量，不同培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件又可產(chǎn)生不同后同菌量，不同培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件又可產(chǎn)生不同后果。果。6.1、噬菌體的污染與防止、噬菌體的污染與防止 感染途徑： 三個必要條件三個必要條件 環(huán)境帶菌、環(huán)境帶活菌、環(huán)境帶菌、環(huán)境帶活菌、 噬菌體與活菌接觸噬菌體與活菌接觸防止措施防止措施：（1）、以環(huán)境凈化為中心（2）、以“種”為中心（3）、以空氣凈化系統(tǒng)為中心（4）、以設(shè)

5、備、管道為中心（5）、以管理為中心、輪換使用菌種Phage的主要生物學(xué)特征:（1）具有專一的寄主性，在菌體繁殖的情況下繁殖（2）不耐熱性，70 0C0C以上其基本失以上其基本失（3）pH穩(wěn)定性pH大于10，pH小于5 Phage急劇失活（4）不耐藥性（5）對干燥的穩(wěn)定性6.2污染其它雜菌污染其它雜菌 有些雜菌會使生產(chǎn)菌自溶產(chǎn)生大量泡沫，有些雜菌會使生產(chǎn)菌自溶產(chǎn)生大量泡沫，即使添加消泡劑也無法控制逃液，影響發(fā)酵過即使添加消泡劑也無法控制逃液，影響發(fā)酵過程的通氣攪拌。程的通氣攪拌。 有的雜菌會使發(fā)酵液發(fā)臭、發(fā)酸，致使有的雜菌會使發(fā)酵液發(fā)臭、發(fā)酸，致使pH下降，使不耐酸的產(chǎn)品破壞。特別是染芽孢下降，

6、使不耐酸的產(chǎn)品破壞。特別是染芽孢桿菌，由于芽孢耐熱，不易殺死，往往一次桿菌，由于芽孢耐熱，不易殺死，往往一次染菌后會反復(fù)染菌。染菌后會反復(fù)染菌。 n大罐染菌的挽救大罐染菌的挽救1、發(fā)酵前期；滅噬、易種法、用抗性菌2、發(fā)酵中期：易種、并罐3、發(fā)酵后期：實消放罐噬菌體的檢測噬菌體的檢測1、單層噬菌斑法2、雙層噬菌斑3、平板交叉劃線法4、快速檢查法5、液體培養(yǎng)檢查法事前分別配制2%和1%瓊脂的兩種培養(yǎng)基，將2%的培養(yǎng)機作底層，鋪成平板待用，用生理鹽水洗下生長旺盛的細(xì)菌斜面，配制菌懸液。取此0.2ml和被測定的Phage液or待檢樣品液0.1ml于試管中，加入冷卻至45 0C0C的含的含1%1%的瓊脂

7、培養(yǎng)基的瓊脂培養(yǎng)基34ml34ml混勻后立即倒混勻后立即倒在在2%2%的培養(yǎng)基平板上，保溫培養(yǎng)的培養(yǎng)基平板上，保溫培養(yǎng)1620hr1620hr，如有，如有Phage，在上層出現(xiàn)透明無菌的圓形or近圓形空斑。將Phage和菌懸液與含有0.50.8%瓊脂的培養(yǎng)基混合，在無菌載波片上凝固，經(jīng)過培養(yǎng)后在鏡檢計數(shù)。用500ml三角瓶加50ml一級種子培養(yǎng)基，經(jīng)滅菌后，接入0.51ml需檢查之發(fā)酵液或種子液，置于搖床上培養(yǎng)1012hr,觀察液體渾濁度。若渾濁度OD正常，鏡檢無染菌，正常。若液體清，說明感染。一、染菌對不同發(fā)酵過程的影響一、染菌對不同發(fā)酵過程的影響 第一節(jié)第一節(jié) 染菌對發(fā)酵的影響染菌對發(fā)酵的

8、影響染菌對發(fā)酵過程的影響很大，但由于生產(chǎn)的產(chǎn)品不同、污染雜菌的種類和性質(zhì)不染菌對發(fā)酵過程的影響很大，但由于生產(chǎn)的產(chǎn)品不同、污染雜菌的種類和性質(zhì)不同、染菌發(fā)生的時間不同以及染菌的途徑和程度不同，染菌造成的危害及后果不同。同、染菌發(fā)生的時間不同以及染菌的途徑和程度不同，染菌造成的危害及后果不同。一、染菌對不同發(fā)酵過程的影響（續(xù)）：一、染菌對不同發(fā)酵過程的影響（續(xù)）： 放線菌由于生長的最適放線菌由于生長的最適pH為為7左右，因此染細(xì)菌為左右，因此染細(xì)菌為多，而霉菌生長多，而霉菌生長pH為為5左右，因此染酵母菌為多。左右，因此染酵母菌為多。 （1）抗生素：青霉素生產(chǎn)中污染產(chǎn)青霉素酶的雜菌）抗生素：青霉

9、素生產(chǎn)中污染產(chǎn)青霉素酶的雜菌（自身產(chǎn)生或誘導(dǎo)產(chǎn)生），在發(fā)酵過程中，都會使青（自身產(chǎn)生或誘導(dǎo)產(chǎn)生），在發(fā)酵過程中，都會使青霉素迅速分解破壞，使目的產(chǎn)物得率降低，危害十分霉素迅速分解破壞，使目的產(chǎn)物得率降低，危害十分嚴(yán)重。一般污染細(xì)短產(chǎn)氣桿菌比粗大桿菌的危害大。嚴(yán)重。一般污染細(xì)短產(chǎn)氣桿菌比粗大桿菌的危害大。 鏈霉素（污染細(xì)短桿菌、假單孢桿菌和產(chǎn)氣桿菌鏈霉素（污染細(xì)短桿菌、假單孢桿菌和產(chǎn)氣桿菌比粗大桿菌的危害大）、四環(huán)素（污染雙球菌、芽比粗大桿菌的危害大）、四環(huán)素（污染雙球菌、芽孢桿菌和夾膜桿菌的危害較大）、紅霉素、卡那霉孢桿菌和夾膜桿菌的危害較大）、紅霉素、卡那霉素等雖不象青霉素發(fā)酵染菌那樣一無所

10、得，但也會素等雖不象青霉素發(fā)酵染菌那樣一無所得，但也會造成不同程度的危害?；尹S霉素、制霉菌素、克念造成不同程度的危害?；尹S霉素、制霉菌素、克念菌素等抗生素抑制霉菌，對細(xì)菌幾乎沒有抑制和殺菌素等抗生素抑制霉菌，對細(xì)菌幾乎沒有抑制和殺滅作用。滅作用。 （2）核苷或核苷酸發(fā)酵過程：因生產(chǎn)菌多為營養(yǎng)缺陷）核苷或核苷酸發(fā)酵過程：因生產(chǎn)菌多為營養(yǎng)缺陷型微生物，其生長能力差，所需的培養(yǎng)基營養(yǎng)豐富，易受型微生物，其生長能力差，所需的培養(yǎng)基營養(yǎng)豐富，易受到雜菌的污染，且染菌后，培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分迅速被消到雜菌的污染，且染菌后，培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分迅速被消耗，嚴(yán)重抑制了生產(chǎn)菌的生長和代謝產(chǎn)物的生成，污染芽耗，嚴(yán)重抑

11、制了生產(chǎn)菌的生長和代謝產(chǎn)物的生成，污染芽孢桿菌的危害最大。孢桿菌的危害最大。 （3）檸檬酸等有機酸發(fā)酵過程：一般在產(chǎn)酸后發(fā)酵液的）檸檬酸等有機酸發(fā)酵過程：一般在產(chǎn)酸后發(fā)酵液的pH值比較低，雜菌生長十分困難，在發(fā)酵中、后期不太會發(fā)值比較低，雜菌生長十分困難，在發(fā)酵中、后期不太會發(fā)生染菌，主要是要預(yù)防發(fā)酵前期染菌，最怕污染青霉菌。生染菌，主要是要預(yù)防發(fā)酵前期染菌，最怕污染青霉菌。 （4）谷氨酸發(fā)酵：周期短，生產(chǎn)菌繁殖快，培養(yǎng)基不太豐）谷氨酸發(fā)酵：周期短，生產(chǎn)菌繁殖快，培養(yǎng)基不太豐富，一般較少污染雜菌，但噬菌體污染對谷氨酸發(fā)酵的影響富，一般較少污染雜菌，但噬菌體污染對谷氨酸發(fā)酵的影響較大。較大。 （

12、5）疫苗：多采用深層培養(yǎng)，是不經(jīng)提純直接使用的產(chǎn)品）疫苗：多采用深層培養(yǎng)，是不經(jīng)提純直接使用的產(chǎn)品，在其培養(yǎng)過程中，一旦污染雜菌，不論死菌、活菌或內(nèi)外，在其培養(yǎng)過程中，一旦污染雜菌，不論死菌、活菌或內(nèi)外毒素，都應(yīng)全部廢棄。毒素，都應(yīng)全部廢棄。三、染菌發(fā)生的不同時間對發(fā)酵的影響三、染菌發(fā)生的不同時間對發(fā)酵的影響 污染時間：是指用無菌檢測方法能檢測到的污染時間（污染時間：是指用無菌檢測方法能檢測到的污染時間（因為因為雜菌進入培養(yǎng)液后，需有足夠的生長、繁殖的時間才能顯現(xiàn)出來雜菌進入培養(yǎng)液后，需有足夠的生長、繁殖的時間才能顯現(xiàn)出來 ），不），不是雜菌浸入發(fā)酵系統(tǒng)的時間。是雜菌浸入發(fā)酵系統(tǒng)的時間。 顯現(xiàn)

13、的時間又與污染菌量有關(guān)。顯現(xiàn)的時間又與污染菌量有關(guān)。3.1、種子培養(yǎng)期染菌、種子培養(yǎng)期染菌 種子培養(yǎng)期（主要是細(xì)胞生長繁殖期）：種子培養(yǎng)期（主要是細(xì)胞生長繁殖期）： 微生物菌體濃度低、培養(yǎng)基營養(yǎng)十分豐富、培養(yǎng)液中幾乎沒有抗微生物菌體濃度低、培養(yǎng)基營養(yǎng)十分豐富、培養(yǎng)液中幾乎沒有抗生素（產(chǎn)物）或只有很少抗生素（產(chǎn)物），故比較容易染菌，生素（產(chǎn)物）或只有很少抗生素（產(chǎn)物），故比較容易染菌， 。措施：一旦發(fā)現(xiàn)種子受到雜菌的污染，應(yīng)經(jīng)滅菌后棄去，并對種子措施：一旦發(fā)現(xiàn)種子受到雜菌的污染，應(yīng)經(jīng)滅菌后棄去，并對種子罐、管道等進行仔細(xì)檢查和徹底滅菌。罐、管道等進行仔細(xì)檢查和徹底滅菌。3.2、發(fā)酵前期染菌、發(fā)酵

14、前期染菌 雜菌與生產(chǎn)菌爭奪營養(yǎng)成分，干擾生產(chǎn)菌的繁殖和產(chǎn)物的形雜菌與生產(chǎn)菌爭奪營養(yǎng)成分，干擾生產(chǎn)菌的繁殖和產(chǎn)物的形成，成，發(fā)酵前期最易染菌，且危害最大。發(fā)酵前期最易染菌，且危害最大。措施：措施： 可以用降低培養(yǎng)溫度，調(diào)整補料量，用酸堿調(diào)可以用降低培養(yǎng)溫度，調(diào)整補料量，用酸堿調(diào)pH值，值，縮短培養(yǎng)周期等措施予以補救。如果前期染菌，且培養(yǎng)基養(yǎng)料消縮短培養(yǎng)周期等措施予以補救。如果前期染菌，且培養(yǎng)基養(yǎng)料消耗不多，可以重新滅菌，補加一些營養(yǎng)，重新接種再用。耗不多，可以重新滅菌，補加一些營養(yǎng)，重新接種再用。3.3、發(fā)酵中期染菌、發(fā)酵中期染菌 嚴(yán)重干擾生產(chǎn)菌的繁殖和產(chǎn)物的生成嚴(yán)重干擾生產(chǎn)菌的繁殖和產(chǎn)物的生成

15、。較嚴(yán)。較嚴(yán)重影響發(fā)酵液理化性質(zhì)，如雜菌大量產(chǎn)酸，重影響發(fā)酵液理化性質(zhì)，如雜菌大量產(chǎn)酸，pH下下降；糖、氮消耗快，發(fā)酵液發(fā)粘，菌絲自溶，降；糖、氮消耗快，發(fā)酵液發(fā)粘，菌絲自溶，產(chǎn)物分泌減少或停止，有時甚至?xí)挂旬a(chǎn)生的產(chǎn)物分泌減少或停止，有時甚至?xí)挂旬a(chǎn)生的產(chǎn)物分解。有時也會使發(fā)酵液發(fā)臭，產(chǎn)生大量產(chǎn)物分解。有時也會使發(fā)酵液發(fā)臭，產(chǎn)生大量泡沫。泡沫。措施措施 降溫培養(yǎng)，減少補料，密切注意代謝變化降溫培養(yǎng)，減少補料，密切注意代謝變化情況。如果發(fā)酵單位到達(dá)一定水平可以提前放罐情況。如果發(fā)酵單位到達(dá)一定水平可以提前放罐，或者抗生素生產(chǎn)中可以將高單位的發(fā)酵液輸送，或者抗生素生產(chǎn)中可以將高單位的發(fā)酵液輸送一

16、部分到染菌罐，抑制雜菌。一部分到染菌罐，抑制雜菌。3.4、發(fā)酵后期染菌、發(fā)酵后期染菌 發(fā)酵后期發(fā)酵液內(nèi)已積累大量的產(chǎn)物，特發(fā)酵后期發(fā)酵液內(nèi)已積累大量的產(chǎn)物，特別是抗生素，對雜菌有一定的抑制或殺滅能別是抗生素，對雜菌有一定的抑制或殺滅能力。力。 如雜菌量不大，可繼續(xù)發(fā)酵。如污染嚴(yán)重，如雜菌量不大，可繼續(xù)發(fā)酵。如污染嚴(yán)重，可采取措施提前放罐可采取措施提前放罐四、不同染菌途徑對發(fā)酵的影響四、不同染菌途徑對發(fā)酵的影響 種子帶菌：種子帶菌可使發(fā)酵染菌具有延續(xù)性種子帶菌：種子帶菌可使發(fā)酵染菌具有延續(xù)性 空氣帶菌：空氣帶菌也使發(fā)酵染菌具有延續(xù)性，導(dǎo)致染空氣帶菌：空氣帶菌也使發(fā)酵染菌具有延續(xù)性，導(dǎo)致染菌范圍擴

17、大至所有發(fā)酵罐菌范圍擴大至所有發(fā)酵罐 培養(yǎng)基或設(shè)備滅菌不徹底：一般為孤立事件，不具有延培養(yǎng)基或設(shè)備滅菌不徹底：一般為孤立事件，不具有延續(xù)性續(xù)性 設(shè)備滲漏：這種途徑造成染菌的危害性較大設(shè)備滲漏：這種途徑造成染菌的危害性較大五、染菌對產(chǎn)物提取和產(chǎn)品質(zhì)量的影響五、染菌對產(chǎn)物提取和產(chǎn)品質(zhì)量的影響（1 1）對過濾的影響對過濾的影響 發(fā)酵液的粘度加大（菌體自溶、發(fā)酵不徹發(fā)酵液的粘度加大（菌體自溶、發(fā)酵不徹底）。底）。 造成過濾時間拉長，影響設(shè)備的周轉(zhuǎn)使用造成過濾時間拉長，影響設(shè)備的周轉(zhuǎn)使用，破壞生產(chǎn)平衡；大幅度降低過濾收率。，破壞生產(chǎn)平衡；大幅度降低過濾收率。（2 2）對提取的影響對提取的影響 溶媒萃?。?/p>

18、易發(fā)生乳化溶媒萃?。阂装l(fā)生乳化 離子交換：預(yù)處理分離不徹底的膠體物質(zhì)（水溶離子交換：預(yù)處理分離不徹底的膠體物質(zhì)（水溶性蛋白質(zhì)等）易粘附在離子交換樹脂表面或被離子性蛋白質(zhì)等）易粘附在離子交換樹脂表面或被離子交換樹脂吸附，大大降低離子交換樹脂的交換量，交換樹脂吸附，大大降低離子交換樹脂的交換量，洗脫時易混入產(chǎn)品中。洗脫時易混入產(chǎn)品中。（3 3）對產(chǎn)品質(zhì)量的影響對產(chǎn)品質(zhì)量的影響 因含有較多分離不徹底的蛋白質(zhì)等物質(zhì)，因含有較多分離不徹底的蛋白質(zhì)等物質(zhì)，對產(chǎn)品的純度有較大影響，同時會使產(chǎn)品放對產(chǎn)品的純度有較大影響，同時會使產(chǎn)品放置一段時間后增大出現(xiàn)混濁的可能，影響產(chǎn)置一段時間后增大出現(xiàn)混濁的可能，影響產(chǎn)

19、品的外觀。品的外觀。六、染菌對三廢處理的影響六、染菌對三廢處理的影響 使過濾后的廢菌體無法利用，發(fā)酵染菌的使過濾后的廢菌體無法利用，發(fā)酵染菌的廢液，生物需氧量（廢液，生物需氧量（BODBOD）增高，增加三廢治）增高，增加三廢治理費用和時間。理費用和時間。第二節(jié)第二節(jié) 發(fā)酵異常現(xiàn)象及原因分析發(fā)酵異常現(xiàn)象及原因分析一、種子培養(yǎng)和發(fā)酵的異常現(xiàn)象一、種子培養(yǎng)和發(fā)酵的異常現(xiàn)象 發(fā)酵過程中的種子培養(yǎng)和發(fā)酵的異常現(xiàn)象是指發(fā)酵過程中某發(fā)酵過程中的種子培養(yǎng)和發(fā)酵的異?，F(xiàn)象是指發(fā)酵過程中某些物理參數(shù)、化學(xué)參數(shù)或生物參數(shù)發(fā)生與原有規(guī)律不同的改變些物理參數(shù)、化學(xué)參數(shù)或生物參數(shù)發(fā)生與原有規(guī)律不同的改變，這些改變必然影響

20、發(fā)酵水平，使生產(chǎn)蒙受損失。，這些改變必然影響發(fā)酵水平，使生產(chǎn)蒙受損失。1、種子培養(yǎng)異常（表現(xiàn)為培養(yǎng)的種子質(zhì)量不合格）：菌體生長緩、種子培養(yǎng)異常（表現(xiàn)為培養(yǎng)的種子質(zhì)量不合格）：菌體生長緩慢；菌絲結(jié)團；代謝不正常。慢；菌絲結(jié)團；代謝不正常。2、發(fā)酵異常：菌體生長差；、發(fā)酵異常：菌體生長差；pH值過高或過低；溶解氧水值過高或過低；溶解氧水平異常；泡沫過多；菌體濃度過高或過低；菌體生長差。平異常；泡沫過多；菌體濃度過高或過低；菌體生長差。二、染菌的檢查和判斷二、染菌的檢查和判斷 1、檢查的目的、意義、檢查的目的、意義 以無菌試驗的結(jié)果較以無菌試驗的結(jié)果較可靠、迅速的可靠、迅速的判斷染菌，以及時判斷染菌

21、，以及時采取處理措施。每個工序或經(jīng)一定時間都應(yīng)進行取樣檢采取處理措施。每個工序或經(jīng)一定時間都應(yīng)進行取樣檢查。查。 無菌試驗的目的：無菌試驗的目的：（1）監(jiān)測培養(yǎng)基、發(fā)酵罐及附屬設(shè)備滅菌是否徹底）監(jiān)測培養(yǎng)基、發(fā)酵罐及附屬設(shè)備滅菌是否徹底（2）監(jiān)測發(fā)酵過程中是否有雜菌從外界侵入，生產(chǎn)過程）監(jiān)測發(fā)酵過程中是否有雜菌從外界侵入，生產(chǎn)過程中是否存在染菌的隱患和死角中是否存在染菌的隱患和死角 2、 生產(chǎn)上常用的檢查方法有：顯微鏡檢查（簡生產(chǎn)上常用的檢查方法有：顯微鏡檢查（簡便、快速，能及時發(fā)現(xiàn)雜菌，但鏡撿取樣少，觀察面便、快速，能及時發(fā)現(xiàn)雜菌，但鏡撿取樣少，觀察面也小，則不易撿出早期雜菌）；平板劃線檢查；

22、也小，則不易撿出早期雜菌）；平板劃線檢查；肉湯培養(yǎng)檢查。（肉湯培養(yǎng)檢查。（ 后兩種操作較繁瑣（需過夜培養(yǎng)后兩種操作較繁瑣（需過夜培養(yǎng)），但能撿出比前者更少的雜菌，結(jié)果為主要依據(jù)），但能撿出比前者更少的雜菌，結(jié)果為主要依據(jù) ）表表8-1 8-1 發(fā)酵過程的雜菌檢查發(fā)酵過程的雜菌檢查 除了上述方法外，還對參數(shù)的變化情況進行實時監(jiān)控，以除了上述方法外，還對參數(shù)的變化情況進行實時監(jiān)控，以參數(shù)的異常變化來判斷是否染菌。參數(shù)的異常變化來判斷是否染菌。 3、發(fā)酵染菌率計算基準(zhǔn)、發(fā)酵染菌率計算基準(zhǔn) 總?cè)揪手敢荒臧l(fā)酵染菌的批（次）數(shù)與總投料批（次）數(shù)之比總?cè)揪手敢荒臧l(fā)酵染菌的批（次）數(shù)與總投料批（次）數(shù)之比

23、的百分率。染菌批次數(shù)應(yīng)包括染菌后培養(yǎng)基經(jīng)重新滅菌，又再次染的百分率。染菌批次數(shù)應(yīng)包括染菌后培養(yǎng)基經(jīng)重新滅菌，又再次染菌的批次數(shù)在內(nèi)。是我國的統(tǒng)一的習(xí)慣計算方法菌的批次數(shù)在內(nèi)。是我國的統(tǒng)一的習(xí)慣計算方法總?cè)揪士側(cè)揪?= 還用設(shè)備染菌率（統(tǒng)計發(fā)酵罐或其他設(shè)備的染菌率）還用設(shè)備染菌率（統(tǒng)計發(fā)酵罐或其他設(shè)備的染菌率）、不同品種發(fā)酵的染菌率、不同發(fā)酵階段的染菌率、季、不同品種發(fā)酵的染菌率、不同發(fā)酵階段的染菌率、季節(jié)染菌率、操作染菌率等統(tǒng)計，以很好地控制生產(chǎn)。節(jié)染菌率、操作染菌率等統(tǒng)計，以很好地控制生產(chǎn)。1、例如：、例如： 表表8-2 日本工業(yè)技術(shù)院發(fā)酵研究所多年來抗生素日本工業(yè)技術(shù)院發(fā)酵研究所多年來

24、抗生素 發(fā)酵染菌原因分析發(fā)酵染菌原因分析 項目項目 百分率百分率%種子帶菌或懷疑種子帶菌種子帶菌或懷疑種子帶菌 9.64接種時罐壓跌零接種時罐壓跌零 0.19培養(yǎng)基滅菌不透培養(yǎng)基滅菌不透 0.79總空氣系統(tǒng)有菌總空氣系統(tǒng)有菌 19.96泡沫冒頂泡沫冒頂 0.48夾套穿孔夾套穿孔 12.36盤管穿孔盤管穿孔 5.89接種管穿孔接種管穿孔 0.39閥門滲漏閥門滲漏 1.45攪拌軸密封滲漏攪拌軸密封滲漏 2.09罐蓋漏罐蓋漏 1.54其它設(shè)備滲漏其它設(shè)備滲漏 10.13操作原因操作原因 10.15 原因不明原因不明 24.94三、染菌原因三、染菌原因 表表6-3 國內(nèi)一制藥廠染菌原因分析國內(nèi)一制藥廠

25、染菌原因分析 項目項目百分率百分率%種子帶菌種子帶菌14.15盤管穿孔盤管穿孔14.20閥門滲漏閥門滲漏23.30空氣系統(tǒng)有菌空氣系統(tǒng)有菌10.0管理不善管理不善25.80原因不明原因不明5.78其它其它7.49管理不善而染菌的有管理不善而染菌的有31個罐批，占個罐批，占25.08經(jīng)分析有下經(jīng)分析有下表所列原因：表所列原因： 項目項目百分率百分率%進罐前未做設(shè)備嚴(yán)密度檢查進罐前未做設(shè)備嚴(yán)密度檢查25.8接種違反操作規(guī)程接種違反操作規(guī)程25.8檢修質(zhì)量缺乏驗收制度檢修質(zhì)量缺乏驗收制度19.35操作不熟練操作不熟練19.35配料違反工藝規(guī)程配料違反工藝規(guī)程6.45調(diào)度不當(dāng)調(diào)度不當(dāng)3.25表表8-4

26、 8-4 管理不善染菌的原因管理不善染菌的原因 表表8-5 國內(nèi)一抗生素生產(chǎn)廠鏈霉素發(fā)酵染菌原因分析國內(nèi)一抗生素生產(chǎn)廠鏈霉素發(fā)酵染菌原因分析 項目項目 百分率百分率%外界帶入雜菌（取樣、補料）外界帶入雜菌（取樣、補料） 8.20設(shè)備穿孔設(shè)備穿孔 7.60空氣系統(tǒng)有菌空氣系統(tǒng)有菌 26.00停電罐壓跌零停電罐壓跌零 1.60接種接種 11.00蒸汽壓力不足或蒸汽量不足蒸汽壓力不足或蒸汽量不足 0.60管理問題管理問題 7.80 操作違反規(guī)程操作違反規(guī)程 1.60種子帶菌種子帶菌 0.60原因不明原因不明 35.002 2、造成染菌的主要原因總結(jié)、造成染菌的主要原因總結(jié)（1 1）種子帶菌種子帶菌-

27、P233-P233 種子帶菌又分為種子本身帶菌和種子培養(yǎng)過種子帶菌又分為種子本身帶菌和種子培養(yǎng)過程中染菌。程中染菌。（2 2）、空氣帶菌）、空氣帶菌-P233-P233 無菌空氣帶菌是發(fā)酵染菌的主要原因之一（無菌空氣帶菌是發(fā)酵染菌的主要原因之一（19.9619.96，26%26%）。國內(nèi)外空氣除菌技術(shù)雖已有較。國內(nèi)外空氣除菌技術(shù)雖已有較大改善，但仍然沒有使染菌率降低到理想的程度。大改善，但仍然沒有使染菌率降低到理想的程度。因為空氣除菌系統(tǒng)較為復(fù)雜，環(huán)節(jié)多，偶遇不慎便因為空氣除菌系統(tǒng)較為復(fù)雜，環(huán)節(jié)多，偶遇不慎便會導(dǎo)致空氣除菌失敗。會導(dǎo)致空氣除菌失敗。（3）、）、設(shè)備滲漏設(shè)備滲漏-P234 -P2

28、34 設(shè)備滲漏包括冷卻夾套穿孔、盤管穿孔、設(shè)備滲漏包括冷卻夾套穿孔、盤管穿孔、接種管穿孔、閥門滲漏、攪拌軸滲漏、罐蓋漏接種管穿孔、閥門滲漏、攪拌軸滲漏、罐蓋漏和其它設(shè)備漏等。（和其它設(shè)備漏等。（33.8533.85，37.537.5）。）。所以說加強設(shè)備本身及附屬零部件的嚴(yán)密度檢所以說加強設(shè)備本身及附屬零部件的嚴(yán)密度檢查。查。（4 4）、滅菌不徹底）、滅菌不徹底滅菌技術(shù)的好壞與滅菌質(zhì)量很有關(guān)系滅菌技術(shù)的好壞與滅菌質(zhì)量很有關(guān)系 蒸汽通入培養(yǎng)基，升溫快慢、保溫時間蒸汽通入培養(yǎng)基，升溫快慢、保溫時間 蒸汽總壓是否達(dá)到要求標(biāo)準(zhǔn)蒸汽總壓是否達(dá)到要求標(biāo)準(zhǔn) 環(huán)境中的雜菌數(shù)量因季節(jié)而有很大差別環(huán)境中的雜菌數(shù)量

29、因季節(jié)而有很大差別 原材料儲存和保管，如玉米漿、母液糖等有機原料原材料儲存和保管，如玉米漿、母液糖等有機原料雜菌的數(shù)量雜菌的數(shù)量 發(fā)酵罐、培養(yǎng)基配制罐等設(shè)備的清洗質(zhì)量發(fā)酵罐、培養(yǎng)基配制罐等設(shè)備的清洗質(zhì)量有無滅菌有無滅菌的死角的死角（5 5）、生產(chǎn)技術(shù)管理不善）、生產(chǎn)技術(shù)管理不善 技術(shù)管理就是要對發(fā)酵每個環(huán)節(jié)嚴(yán)格控制，技術(shù)管理就是要對發(fā)酵每個環(huán)節(jié)嚴(yán)格控制，必須制定嚴(yán)格工藝衛(wèi)生管理制度。否則發(fā)酵中稍有必須制定嚴(yán)格工藝衛(wèi)生管理制度。否則發(fā)酵中稍有不慎就可能染菌，所以不能有僥幸心理而放松管理不慎就可能染菌，所以不能有僥幸心理而放松管理四、發(fā)酵染菌原因分析四、發(fā)酵染菌原因分析 1 1、染菌的雜菌種類分析

30、、染菌的雜菌種類分析雜菌雜菌原因原因耐熱的芽孢耐熱的芽孢桿菌桿菌培養(yǎng)基或設(shè)備滅菌不徹底、設(shè)備存在死培養(yǎng)基或設(shè)備滅菌不徹底、設(shè)備存在死角等角等球菌、酵母、球菌、酵母、無芽孢桿菌無芽孢桿菌等等種子帶菌、空氣過濾效率低、除菌不徹種子帶菌、空氣過濾效率低、除菌不徹底、發(fā)酵罐的冷卻管或加套等設(shè)備滲漏、底、發(fā)酵罐的冷卻管或加套等設(shè)備滲漏、操作問題等操作問題等真菌真菌無菌室滅菌不徹底、無菌操作不當(dāng)、滅無菌室滅菌不徹底、無菌操作不當(dāng)、滅菌不徹底等菌不徹底等表8-6 染菌的雜菌種類分析染菌的雜菌種類分析2 2、發(fā)酵染菌的規(guī)模分析、發(fā)酵染菌的規(guī)模分析染菌時期染菌時期原因原因發(fā)酵前期發(fā)酵前期種子帶菌、連消設(shè)備染菌種

31、子帶菌、連消設(shè)備染菌發(fā)酵中、后期發(fā)酵中、后期如雜菌類型相同，一般是空氣凈化如雜菌類型相同，一般是空氣凈化系統(tǒng)存在空氣系統(tǒng)結(jié)構(gòu)不合理、空系統(tǒng)存在空氣系統(tǒng)結(jié)構(gòu)不合理、空氣過濾介質(zhì)失效或效率下降等問題氣過濾介質(zhì)失效或效率下降等問題表8-7 大批量發(fā)酵罐染菌（情況較少，危害較大）大批量發(fā)酵罐染菌（情況較少，危害較大）表表8-8 8-8 部分發(fā)酵罐染菌部分發(fā)酵罐染菌 染菌時期染菌時期原因原因發(fā)酵前期發(fā)酵前期種子帶菌、滅菌不徹底種子帶菌、滅菌不徹底發(fā)酵后期發(fā)酵后期中間補料染菌，如補料液帶菌、中間補料染菌，如補料液帶菌、補料管滲漏，或油管系統(tǒng)發(fā)生問補料管滲漏，或油管系統(tǒng)發(fā)生問題題 個別發(fā)酵罐連續(xù)染菌（如果采

32、用間歇滅菌工藝，一個別發(fā)酵罐連續(xù)染菌（如果采用間歇滅菌工藝，一般不會發(fā)生）：大都由于設(shè)備滲漏造成（設(shè)備的腐蝕般不會發(fā)生）：大都由于設(shè)備滲漏造成（設(shè)備的腐蝕磨損所引起的染菌會出現(xiàn)每批發(fā)酵的染菌時間向前推磨損所引起的染菌會出現(xiàn)每批發(fā)酵的染菌時間向前推移的現(xiàn)象，），應(yīng)仔細(xì)檢查閥門、罐體或罐器是否清移的現(xiàn)象，），應(yīng)仔細(xì)檢查閥門、罐體或罐器是否清潔等。潔等。3 3、不同污染時間分析、不同污染時間分析 （1 1）、染菌發(fā)生在種子培養(yǎng)階段，或稱種子培養(yǎng)、染菌發(fā)生在種子培養(yǎng)階段，或稱種子培養(yǎng)期染菌。通常是由種子帶菌、培養(yǎng)基或設(shè)備滅菌不期染菌。通常是由種子帶菌、培養(yǎng)基或設(shè)備滅菌不徹底，以及接種操作不當(dāng)或設(shè)備因素

33、等原因而引起徹底，以及接種操作不當(dāng)或設(shè)備因素等原因而引起染菌。染菌。 （2 2）在發(fā)酵過程的初始階段發(fā)生染菌，或稱發(fā)在發(fā)酵過程的初始階段發(fā)生染菌，或稱發(fā)酵前期染菌。大部分也是由于種子帶菌、培養(yǎng)基酵前期染菌。大部分也是由于種子帶菌、培養(yǎng)基或設(shè)備滅菌不徹底，以及接種操作不當(dāng)或設(shè)備因或設(shè)備滅菌不徹底，以及接種操作不當(dāng)或設(shè)備因素、無菌空氣等原因而引起。素、無菌空氣等原因而引起。 （3 3）發(fā)酵后期染菌大部分是由空氣過濾不徹底、發(fā)酵后期染菌大部分是由空氣過濾不徹底、中間補料染菌、設(shè)備滲漏、泡沫頂蓋以及操作問題中間補料染菌、設(shè)備滲漏、泡沫頂蓋以及操作問題而引起。而引起。第三節(jié)第三節(jié) 發(fā)酵過程染菌的防止發(fā)酵

34、過程染菌的防止一、種子帶菌的原因及防止一、種子帶菌的原因及防止 1 1、帶菌的原因帶菌的原因（1 1）無菌室的無菌條件不符合要求；無菌室的無菌條件不符合要求；（2 2）培養(yǎng)基及用具滅菌不徹底；培養(yǎng)基及用具滅菌不徹底；（3 3）操作不當(dāng)（移接、培養(yǎng)過程中受污染）。操作不當(dāng)（移接、培養(yǎng)過程中受污染）。 2 2、種子帶菌的防治、種子帶菌的防治（1 1）無菌室和搖床間都要保持清潔。無菌室內(nèi)要）無菌室和搖床間都要保持清潔。無菌室內(nèi)要供給恒溫恒濕的無菌空氣，還要裝紫外燈用以供給恒溫恒濕的無菌空氣，還要裝紫外燈用以滅菌，或用化學(xué)藥品滅菌。滅菌，或用化學(xué)藥品滅菌。無菌室要求無菌室要求 接種、移種等無菌操作需要

35、在無菌室內(nèi)進行。接種、移種等無菌操作需要在無菌室內(nèi)進行。 無菌室面積不宜過大，一般約無菌室面積不宜過大，一般約46m46m2 2高約高約2.62.6米。為了減少米。為了減少外界空氣的侵入，無菌室要有外界空氣的侵入，無菌室要有1313個套間個套間( (緩沖過道緩沖過道)( )(參照下圖參照下圖) )。無菌室內(nèi)部的墻壁、天花板要涂白漆或采用瓷磚，要求。無菌室內(nèi)部的墻壁、天花板要涂白漆或采用瓷磚，要求無裂縫，墻角最好做成圓弧形，便于揩擦清洗以減少空氣無裂縫，墻角最好做成圓弧形，便于揩擦清洗以減少空氣中微生物的潛伏場所，室內(nèi)布置應(yīng)盡量簡單，最好能安裝中微生物的潛伏場所，室內(nèi)布置應(yīng)盡量簡單，最好能安裝空

36、氣調(diào)節(jié)裝置，通入無菌空氣并調(diào)節(jié)室內(nèi)的溫濕度?？諝庹{(diào)節(jié)裝置，通入無菌空氣并調(diào)節(jié)室內(nèi)的溫濕度。 在無菌室中裝有紫外燈，打開紫外燈，照半小時，關(guān)燈后在無菌室中裝有紫外燈，打開紫外燈，照半小時，關(guān)燈后15分鐘再接種。用消毒藥水如新潔而滅配成分鐘再接種。用消毒藥水如新潔而滅配成1/1000濃度擦濃度擦桌子、拖地，開啟超凈臺的通風(fēng)，桌子、拖地，開啟超凈臺的通風(fēng)， 接種時必須在超凈接種時必須在超凈臺上操作，超凈臺裝有一臺鼓風(fēng)機，進風(fēng)口有一粗過濾臺上操作，超凈臺裝有一臺鼓風(fēng)機，進風(fēng)口有一粗過濾器，出風(fēng)口有高效過濾器，保證無菌風(fēng)從超凈臺吹出，器，出風(fēng)口有高效過濾器，保證無菌風(fēng)從超凈臺吹出，外界有菌空氣不可能進入

37、接種區(qū)域，保證無菌條件。接外界有菌空氣不可能進入接種區(qū)域，保證無菌條件。接種人員必須穿好無菌服，戴好口罩，手用酒精棉球擦干種人員必須穿好無菌服，戴好口罩，手用酒精棉球擦干凈。凈。無菌室內(nèi)無菌度的要求是：把無菌培養(yǎng)皿無菌室內(nèi)無菌度的要求是：把無菌培養(yǎng)皿平板打開蓋子在無菌室內(nèi)放置平板打開蓋子在無菌室內(nèi)放置3030分鐘，根據(jù)一般分鐘，根據(jù)一般工廠的經(jīng)驗，長出的菌落在工廠的經(jīng)驗，長出的菌落在3 3個以下為好。個以下為好。 在種子的無菌條件不要求很高的情況下，在種子的無菌條件不要求很高的情況下，可以不采用無菌室而直接用無菌箱進行操作，可以不采用無菌室而直接用無菌箱進行操作，但無菌要求很高的情況下，即使在

38、無菌室內(nèi)還但無菌要求很高的情況下，即使在無菌室內(nèi)還要用無菌箱操作。要用無菌箱操作。（2）在制備種子時對砂土管、斜面、三角瓶及搖）在制備種子時對砂土管、斜面、三角瓶及搖瓶均嚴(yán)格進行管理瓶均嚴(yán)格進行管理（3）對每一級種子的培養(yǎng)物均應(yīng)進行嚴(yán)格的）對每一級種子的培養(yǎng)物均應(yīng)進行嚴(yán)格的無菌檢查無菌檢查 （4）對菌種培養(yǎng)基或器具進行嚴(yán)格的滅菌處）對菌種培養(yǎng)基或器具進行嚴(yán)格的滅菌處理理 二、空氣帶菌及其防治二、空氣帶菌及其防治 必須從空氣的凈化工藝和設(shè)備的設(shè)計、過濾介質(zhì)必須從空氣的凈化工藝和設(shè)備的設(shè)計、過濾介質(zhì)的選用和裝填、過濾介質(zhì)的滅菌和管理等方面完善的選用和裝填、過濾介質(zhì)的滅菌和管理等方面完善空氣凈化系統(tǒng)

39、?？諝鈨艋到y(tǒng)。 1 1、加強生產(chǎn)環(huán)境的衛(wèi)生管理，減少生產(chǎn)環(huán)境中、加強生產(chǎn)環(huán)境的衛(wèi)生管理，減少生產(chǎn)環(huán)境中空氣的含菌量?？諝獾暮俊?2 2、設(shè)計合理的空氣預(yù)處理工藝，盡可能減少生產(chǎn)、設(shè)計合理的空氣預(yù)處理工藝，盡可能減少生產(chǎn)環(huán)境中空氣帶油、水量，提高進入過濾器的空氣溫度環(huán)境中空氣帶油、水量，提高進入過濾器的空氣溫度，降低空氣的相對濕度，保持過濾介質(zhì)的干燥狀態(tài)，降低空氣的相對濕度，保持過濾介質(zhì)的干燥狀態(tài)，防止空氣冷卻器漏水，防止冷卻水進入空氣系統(tǒng)等。防止空氣冷卻器漏水，防止冷卻水進入空氣系統(tǒng)等。3 3、設(shè)計和安裝合理的空氣過濾器，防止過、設(shè)計和安裝合理的空氣過濾器，防止過濾器失效。濾器失效。 選

40、用除菌效率高的過濾介質(zhì)，在過濾器選用除菌效率高的過濾介質(zhì)，在過濾器滅菌時要防止過濾介質(zhì)被沖翻而造成短路滅菌時要防止過濾介質(zhì)被沖翻而造成短路，防止過濾介質(zhì)的裝填不均而使空氣走短，防止過濾介質(zhì)的裝填不均而使空氣走短路，保證一定的介質(zhì)充填密度。在操作中路，保證一定的介質(zhì)充填密度。在操作中要防止空氣壓力的劇變和流速的急增。要防止空氣壓力的劇變和流速的急增。 發(fā)酵設(shè)備及附件由于化學(xué)腐蝕、電化學(xué)腐蝕，物料與設(shè)發(fā)酵設(shè)備及附件由于化學(xué)腐蝕、電化學(xué)腐蝕，物料與設(shè)備摩擦造成機械磨損以及加工制作不良等原因會導(dǎo)致設(shè)備備摩擦造成機械磨損以及加工制作不良等原因會導(dǎo)致設(shè)備及附件形成微小漏孔所發(fā)生的滲漏現(xiàn)象。及附件形成微小漏

41、孔所發(fā)生的滲漏現(xiàn)象。1 1、發(fā)酵罐的滲漏、發(fā)酵罐的滲漏（1 1）冷卻管的滲漏）冷卻管的滲漏 是發(fā)酵罐中最容易滲漏的部件之一是發(fā)酵罐中最容易滲漏的部件之一 ，氣壓試驗和水壓試驗，氣壓試驗和水壓試驗 （2 2）罐體的穿孔）罐體的穿孔 每年大修時需檢查鋼板減每年大修時需檢查鋼板減簿的程度。有夾套的發(fā)酵罐可簿的程度。有夾套的發(fā)酵罐可在夾套內(nèi)用水壓或氣壓的試驗在夾套內(nèi)用水壓或氣壓的試驗方法檢查罐壁有無滲漏。方法檢查罐壁有無滲漏。2 2、管件的滲漏、管件的滲漏 （1 1）閥）閥 據(jù)統(tǒng)計，因閥的滲漏引起的染菌占染菌率的比例很大據(jù)統(tǒng)計，因閥的滲漏引起的染菌占染菌率的比例很大，采用密封性較高的閥門。目前使用的大

42、小閥門大多采用，采用密封性較高的閥門。目前使用的大小閥門大多采用截止閥和橡膠隔膜閥。截止閥和橡膠隔膜閥。 1)1)嚴(yán)密不漏。嚴(yán)密不漏。2)2)無填料。無填料。3)3)閥結(jié)構(gòu)為流線閥結(jié)構(gòu)為流線型，流量大，阻力小，無死角，無堆積物型，流量大，阻力小，無死角，無堆積物，在關(guān)閉時不會使緊密面軋壞。，在關(guān)閉時不會使緊密面軋壞。4)4)檢修方檢修方便。但須定期檢查隔膜有否老化及脫落。便。但須定期檢查隔膜有否老化及脫落。 2 2、管路的連接管路的連接 管子的連接有螺紋連接、法蘭連接和焊接三種管子的連接有螺紋連接、法蘭連接和焊接三種。 3 3、管路的配置、管路的配置 排氣管與下水管排氣管與下水管4 4、發(fā)酵罐

43、與管件的死角、發(fā)酵罐與管件的死角 所謂死角是指滅菌時因某些原因使滅菌溫度達(dá)不到所謂死角是指滅菌時因某些原因使滅菌溫度達(dá)不到或不易達(dá)到的局部地區(qū)?；虿灰走_(dá)到的局部地區(qū)。（1 1）法蘭連接的死角）法蘭連接的死角（2 2）渣滓在罐底與用環(huán)式空氣分布管所形成的死角）渣滓在罐底與用環(huán)式空氣分布管所形成的死角圖A圖B圖C（3 3）不銹鋼襯里的死角）不銹鋼襯里的死角 小型發(fā)酵罐通常采用不銹鋼制造。對于大型發(fā)酵罐，一般都小型發(fā)酵罐通常采用不銹鋼制造。對于大型發(fā)酵罐，一般都采用不銹鋼襯里的方法?？刹捎脧?fù)合鋼板采用不銹鋼襯里的方法?？刹捎脧?fù)合鋼板( (將兩種不同材質(zhì)的將兩種不同材質(zhì)的鋼板軋合為一體的鋼板鋼板軋合為

44、一體的鋼板) )制造發(fā)酵罐。制造發(fā)酵罐。(4) (4) 接種罐管路的死角接種罐管路的死角(6) (6) 壓力表安裝壓力表安裝不合理形成的死角不合理形成的死角 另外，須注意罐內(nèi)結(jié)垢形成的死角，對于不銹鋼罐及另外，須注意罐內(nèi)結(jié)垢形成的死角，對于不銹鋼罐及普通碳鋼罐的處理不同。普通碳鋼罐的處理不同。5、設(shè)備與管道的清洗與殺菌、設(shè)備與管道的清洗與殺菌管件和閥門清洗清水漂洗清水漂洗510min常溫洗滌劑洗滌洗滌劑洗滌1520min常溫70清洗漂洗清洗漂洗常溫510min消毒劑處理消毒劑處理1520min常溫清水漂洗清水漂洗(1520min，常溫)CIP 清洗系統(tǒng)定義： CIP ，是英文，是英文Clean

45、-In-Place的縮寫，的縮寫，即就地清洗或稱為原位清洗即就地清洗或稱為原位清洗, 其定義為不拆卸其定義為不拆卸設(shè)備或元件設(shè)備或元件, 在密閉的條件下在密閉的條件下, 用一定溫度和濃用一定溫度和濃度的清洗液對清洗裝置加以強力作用度的清洗液對清洗裝置加以強力作用, 使與食使與食品接觸的表面洗凈和殺菌的方法。品接觸的表面洗凈和殺菌的方法。與傳統(tǒng)的手工拆卸機器零件的清洗方式相比與傳統(tǒng)的手工拆卸機器零件的清洗方式相比,CIP 的優(yōu)點主要有的優(yōu)點主要有: (1) 能維持一定的清洗效果能維持一定的清洗效果, 保證產(chǎn)品的安全性。保證產(chǎn)品的安全性。 (2) 節(jié)約操作時間、提高效率節(jié)約操作時間、提高效率, 以

46、實現(xiàn)商業(yè)的最以實現(xiàn)商業(yè)的最 大利潤。大利潤。 (3) 節(jié)省勞動力節(jié)省勞動力, 保證操作的安全性。保證操作的安全性。 (4) 節(jié)省清洗用水和蒸汽。節(jié)省清洗用水和蒸汽。相比之下, 常規(guī)拆卸清洗的缺點是: 費時、費力, 易損壞聯(lián)接件; 設(shè)備停機時間長, 設(shè)備利用率低; 清洗不徹底, 有時對操作者也不十分安全。 CIP CIP 的優(yōu)點的優(yōu)點清洗程序分7個步驟：預(yù)沖洗：30s，10次；堿預(yù)洗：16分；中間清洗：清水4分；清水噴沖：3次，每次30S ；堿噴沖：15分；清水沖洗；酸性水沖洗。6、設(shè)備及管路的殺菌、設(shè)備及管路的殺菌n發(fā)酵罐及容器的殺菌過程容器的氣密性試驗，打開所有的冷凝水排除閥，開啟進蒸汽閥。

47、容器的氣密性試驗，打開所有的冷凝水排除閥，開啟進蒸汽閥。一定壓強后，打開排空氣閥，把容器中原有的空氣排除干凈。一定壓強后，打開排空氣閥，把容器中原有的空氣排除干凈。當(dāng)罐內(nèi)壓強升至當(dāng)罐內(nèi)壓強升至0.1MPa(121)，計滅菌時間，殺菌過程中不斷排除蒸汽管，計滅菌時間，殺菌過程中不斷排除蒸汽管路及罐內(nèi)的蒸汽冷凝水。路及罐內(nèi)的蒸汽冷凝水。結(jié)束滅菌操作時，先關(guān)閉所有排污閥及排氣閥，然后關(guān)蒸汽進口閥，打開結(jié)束滅菌操作時，先關(guān)閉所有排污閥及排氣閥，然后關(guān)蒸汽進口閥，打開無菌空氣進口閥，以確保罐內(nèi)壓強。無菌空氣進口閥，以確保罐內(nèi)壓強。設(shè)備及管路的殺菌設(shè)備及管路的殺菌n空氣分布器的蒸汽滅菌管路布置導(dǎo)流筒導(dǎo)流筒

48、空氣分布器空氣分布器BA無菌空氣無菌空氣蒸汽蒸汽設(shè)備及管路的殺菌設(shè)備及管路的殺菌n浸沒管路與旁路進口管的殺菌布管蒸汽蒸汽蒸汽蒸汽AB蒸汽蒸汽進料管進料管ABC蒸汽滅菌蒸汽滅菌無菌排料無菌排料ABCEDF蒸汽蒸汽冷凝水冷凝水排污或排污或CIP返回返回n排料系統(tǒng)蒸汽殺菌設(shè)備及管路的殺菌設(shè)備及管路的殺菌n罐的CIP清洗系統(tǒng)蒸汽殺菌配管CIPABC蒸汽蒸汽設(shè)備及管路的殺菌設(shè)備及管路的殺菌n發(fā)酵罐攪拌器密封裝置的蒸汽滅菌配管設(shè)備及管路的殺菌設(shè)備及管路的殺菌n空氣過濾器的殺菌止逆閥止逆閥設(shè)備及管路的殺菌設(shè)備及管路的殺菌n閥門的殺菌(2) 隔膜閥隔膜閥設(shè)備及管路的殺菌設(shè)備及管路的殺菌n取樣閥門的殺菌n保證管

49、道徹底滅菌的設(shè)計要求n管道應(yīng)有一定的斜度，通常取1/100或更大；n凹陷低點安裝排污閥；n管路有足夠的支撐點；n盡可能減少和簡化管路，盡可能少用彎頭管件和閥門；n盡可能減少最高與最低點，且在每個最高點裝設(shè)蒸汽進管，在最低點均裝冷水閥；n每個罐及管道盡可能分開滅菌。這樣才能保證蒸汽殺菌的嚴(yán)密性與穩(wěn)定安全性。設(shè)備及管路的殺菌設(shè)備及管路的殺菌1罐罐2罐罐兩個罐及連接管的蒸汽殺菌兩個罐及連接管的蒸汽殺菌ACBDEFn冷凝水的排放n自由排放n用汽水閥自動排放n利用計算機自動控制排除冷凝水設(shè)備及管路的殺菌設(shè)備及管路的殺菌n空罐滅菌空罐滅菌 滅菌溫度和滅菌時間的要求是高溫長時滅菌溫度和滅菌時間的要求是高溫長

50、時(121(121，6060分鐘分鐘) ) ，既合理經(jīng)濟，又能殺滅設(shè)備中各死角殘存的雜，既合理經(jīng)濟，又能殺滅設(shè)備中各死角殘存的雜菌或芽孢。菌或芽孢。 設(shè)備及管路的殺菌設(shè)備及管路的殺菌n通氣發(fā)酵罐清洗與滅菌管路圖止回閥止回閥三路進汽：三路進汽：在對培養(yǎng)基滅菌時，在對培養(yǎng)基滅菌時，直接蒸汽從通風(fēng)、取樣和出料口進直接蒸汽從通風(fēng)、取樣和出料口進入罐內(nèi)直接加熱，直到所入罐內(nèi)直接加熱，直到所規(guī)定的溫規(guī)定的溫度，并維持一定的時間度，并維持一定的時間, ,達(dá)到培養(yǎng)達(dá)到培養(yǎng)基滅菌之目的?；鶞缇康?。實罐滅菌的進汽和排氣原則實罐滅菌的進汽和排氣原則: :“非進即出非進即出”，就是說所有進入，就是說所有進入發(fā)酵罐

51、的管道在滅菌過程中如果發(fā)酵罐的管道在滅菌過程中如果不進入蒸汽就一定要進行排氣，不進入蒸汽就一定要進行排氣，使所有管道都被蒸汽（或二次蒸使所有管道都被蒸汽（或二次蒸汽）通過，得以滅菌。不能有既汽）通過，得以滅菌。不能有既不進汽也不排汽的管道（死角）不進汽也不排汽的管道（死角）存在。存在。 n發(fā)酵罐實罐滅菌發(fā)酵罐實罐滅菌四、操作失誤導(dǎo)致染菌及其防治四、操作失誤導(dǎo)致染菌及其防治1 1、通常對于淀粉質(zhì)培養(yǎng)基的滅菌采用實罐滅菌較好，先、通常對于淀粉質(zhì)培養(yǎng)基的滅菌采用實罐滅菌較好，先配料，過濾大顆粒物之后，在進行滅菌。配料，過濾大顆粒物之后，在進行滅菌。2 2、在滅菌升溫時，要打開排氣閥門，使蒸汽能通過并

52、驅(qū)、在滅菌升溫時，要打開排氣閥門，使蒸汽能通過并驅(qū)除罐內(nèi)冷空氣，一般可避免除罐內(nèi)冷空氣，一般可避免“假壓假壓”造成染菌造成染菌（自動控自動控溫溫） 。3 3、為加快升溫速度，、為加快升溫速度，凡能進蒸汽的管路在滅菌時都可同凡能進蒸汽的管路在滅菌時都可同時進汽，但各管路的阻力不同，易造成蒸汽短路現(xiàn)象，使時進汽，但各管路的阻力不同，易造成蒸汽短路現(xiàn)象，使物料受熱不勻，需調(diào)整各進汽管的流量。物料受熱不勻，需調(diào)整各進汽管的流量。4 4、滅菌蒸汽要求采用飽和蒸汽，冷凝水越少越好，滅菌時滅菌蒸汽要求采用飽和蒸汽，冷凝水越少越好，滅菌時蒸汽壓力要求平穩(wěn)。蒸汽壓力要求平穩(wěn)。5 5、泡沫問題、泡沫問題 培養(yǎng)基和

53、水的傳熱系數(shù)比空氣的傳熱系數(shù)大，如果滅菌培養(yǎng)基和水的傳熱系數(shù)比空氣的傳熱系數(shù)大，如果滅菌時升溫太快，培養(yǎng)基急劇膨脹，發(fā)酵罐內(nèi)的空氣排出較慢時升溫太快，培養(yǎng)基急劇膨脹，發(fā)酵罐內(nèi)的空氣排出較慢，就會產(chǎn)生大量泡沫，泡沫上升到發(fā)酵罐頂，泡沫中的耐，就會產(chǎn)生大量泡沫，泡沫上升到發(fā)酵罐頂，泡沫中的耐熱菌就不能與蒸汽直接接觸，未被殺死。熱菌就不能與蒸汽直接接觸，未被殺死。4 4、其他操作問題其他操作問題 實罐滅菌時，罐內(nèi)因蒸汽冷凝而使罐壓突然降低甚至實罐滅菌時，罐內(nèi)因蒸汽冷凝而使罐壓突然降低甚至?xí)纬烧婵?，所以此時必須將無菌空氣通入罐內(nèi)保持會形成真空，所以此時必須將無菌空氣通入罐內(nèi)保持一定壓力，并注意壓力變

54、化，隨時進行調(diào)節(jié)。一定壓力，并注意壓力變化，隨時進行調(diào)節(jié)。5 5、發(fā)酵過程越來越多的采用自動控制，一些控制儀器逐、發(fā)酵過程越來越多的采用自動控制，一些控制儀器逐漸被應(yīng)用。一般常采用化學(xué)試劑浸泡等方法來滅菌。漸被應(yīng)用。一般常采用化學(xué)試劑浸泡等方法來滅菌。五、發(fā)酵染菌后的措施五、發(fā)酵染菌后的措施1、如果種子培養(yǎng)或種子罐中發(fā)現(xiàn)污染、如果種子培養(yǎng)或種子罐中發(fā)現(xiàn)污染倒罐倒罐2、 發(fā)酵早期染菌發(fā)酵早期染菌可以適當(dāng)添加營養(yǎng)物質(zhì)，重新滅菌后再可以適當(dāng)添加營養(yǎng)物質(zhì)，重新滅菌后再接種發(fā)酵?；虿捎眉哟蠼臃N量的辦法接種發(fā)酵。或采用加大接種量的辦法3、中、后期染菌，如果雜菌的生長將影響發(fā)酵的正、中、后期染菌，如果雜菌的

55、生長將影響發(fā)酵的正常進行或影響產(chǎn)物的提取時，應(yīng)該提早放罐。但對發(fā)常進行或影響產(chǎn)物的提取時，應(yīng)該提早放罐。但對發(fā)酵液中的碳、氮源還較多，此時應(yīng)先設(shè)法使碳、氮源酵液中的碳、氮源還較多，此時應(yīng)先設(shè)法使碳、氮源消耗，再放罐提取?；蛟谌揪陌l(fā)酵液內(nèi)添加抑菌劑消耗，再放罐提取?；蛟谌揪陌l(fā)酵液內(nèi)添加抑菌劑(如小劑量的抗菌素或醛類如小劑量的抗菌素或醛類)用以抑制雜菌的生長也是一用以抑制雜菌的生長也是一種辦法。種辦法。5 5、染菌后的培養(yǎng)基必須滅菌后才可放下水、染菌后的培養(yǎng)基必須滅菌后才可放下水道。道。 滅菌方法：可通蒸汽滅菌，也可加入滅菌方法：可通蒸汽滅菌，也可加入過氧乙酸等化學(xué)滅菌劑攪拌半小時，才放下水過

56、氧乙酸等化學(xué)滅菌劑攪拌半小時，才放下水道。否則由于各罐的管道相通，會造成其它罐道。否則由于各罐的管道相通，會造成其它罐的染菌，而且直接放下水道也會造成空氣的污的染菌，而且直接放下水道也會造成空氣的污染而導(dǎo)致其它罐批染菌。染而導(dǎo)致其它罐批染菌。6 6、染菌厲害時，車間環(huán)境（罐內(nèi)、原料儲罐等）、染菌厲害時，車間環(huán)境（罐內(nèi)、原料儲罐等）要用石灰或要用石灰或甲醛熏蒸甲醛熏蒸消毒。消毒。7 7、凡染菌的罐要找染菌的原因，對癥下藥、凡染菌的罐要找染菌的原因，對癥下藥。六、染噬菌體的防治六、染噬菌體的防治1 1、染噬菌體對發(fā)酵的影響、染噬菌體對發(fā)酵的影響 發(fā)酵過程中如果受噬菌體的侵染，一般發(fā)發(fā)酵過程中如果受噬菌體的侵染，一般發(fā)生溶菌，隨之出現(xiàn)發(fā)酵遲緩或停止，