1、為了合理規(guī)范我院消毒滅菌效果、環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測工作，提高監(jiān)測結(jié)果的準(zhǔn)確性、真實性、可比性，特作如下規(guī)定及要求：一、各科室（部門）對此項監(jiān)測工作，按規(guī)定的要求開展監(jiān)測項目，嚴(yán)格遵守規(guī)定的監(jiān)測時限，真實規(guī)范采樣，完整填寫申請單。按時（每月底前）做好報表工作。二、各科室（部門）對每月監(jiān)測結(jié)果要進行效果評價并將資料妥善保管。對不合格項目要進行原因分析并制定改進措施，達到不斷持續(xù)性改進的目的。三、各科室（部門）對此項監(jiān)測工作，要務(wù)真求實，對不合格項目應(yīng)如實上報。避免單純追求合格率，而虛報、鬧假、走形式。經(jīng)核實將按獎罰條例進行重獎、重罰。四、檢驗科（細(xì)菌室）保證對全院各科室（部門），監(jiān)測所需合格采樣試管、培

2、養(yǎng)皿的供應(yīng)，并每月做無菌試驗。按要求做到培養(yǎng)時限準(zhǔn)確、中和劑添加正確、報告結(jié)果規(guī)范。五、檢驗科（細(xì)菌室） 對各科室 （部門） 送檢的采樣標(biāo)本有不合格，采樣不規(guī)范，申請單填寫不符合要求的，有權(quán)拒絕出示報告結(jié)果。六、感染控制科對全院重點科室（部門）的消毒滅菌效果、環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測工作負(fù)責(zé)監(jiān)督、并開展隨機抽查采樣監(jiān)測。各科室應(yīng)積極主動配合，對在隨機抽查采樣中態(tài)度不端正、 找借口、推諉等影響工作正常進行的，將按獎罰條例進行扣罰。七、各科室（部門）監(jiān)測時間具體安排重點科室（部門） ：、類科室及相關(guān)科室手術(shù)室、新生兒里間、監(jiān)測時間：每周一次（周二）。內(nèi)鏡室 1w、供應(yīng)室 3w、產(chǎn)一科 1w、產(chǎn)二科 1w、母

3、嬰同室1w、分娩室 2w、人流室 1w等。監(jiān)測時間：每月一次。 （第 1w、 2w、 3w）、（ 3* 、 9* ）普通科室（部門） ：、類科室及相關(guān)科室外科（換藥室） 3w、五官科 1w、兒一科 3w、兒二科 3w、兒三科 3w、新生兒科3w、婦一科 2w、婦二科 2w、檢驗科 3w、血庫 3w、醫(yī)療廢物儲存室 2w、放射科2w、病理室 1w、外科 3w、注射室 2w、換藥室 2w、泳吧 1w、婦科門診 1w、兒童樂園 3w、兒科門診治療室 3w、手足口病診室 2w監(jiān)測時間：每月一次。 （第 1w、 2w、 3w）、（ 3* 、 9* ）注：有 * 號的月份加紫外線強度監(jiān)測。八、各科室（部門

4、）監(jiān)測項目、監(jiān)測時限、采樣方法、評價（合格）標(biāo)準(zhǔn)，詳見附件。附件： 1 空氣消毒效果的監(jiān)測采樣時間：在消毒處理后、操作前進行采樣。(1) 采樣方法1) 布點方法；室內(nèi)面積 30Cm2，設(shè)內(nèi)、中、外對角線 3 點，內(nèi)、外點布點部位距墻壁 IM 處；室內(nèi)面積 >30M2，設(shè) 4 角及中央5 點， 4 角的布點部位距墻壁lm處。2) 平板暴露法：將普通營養(yǎng)瓊脂平板 ( 直徑為 9CM)放在室內(nèi)各采樣點處，采樣高度為距地面 1.5m，采樣時將平板蓋打開，扣放于平板旁，暴露 5min，蓋好立即送檢。3) 檢測方法：將送檢的平板置 37溫箱培養(yǎng) 48h，計數(shù)菌落數(shù)，并分離致病菌。(2) 結(jié)果判定類區(qū)

5、域：細(xì)菌總數(shù)10cfu/m3 ，未檢出致病菌為消毒合格；類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)200 cfu/m3 ，未檢出致病菌為消毒合格；類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)500 cfu/m3 ，未檢出致病菌為消毒合格。注意事項：采樣前，關(guān)閉門、窗，在無人走動的情況下，靜止10 分鐘后進行采樣。2 物品和環(huán)境表面消毒效果監(jiān)測采樣時間：在消毒處理后進行采樣。(1) 采樣方法：用 5cm× 5cmd 標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板，放在被檢問題表面，采樣面積2100cm，連續(xù)采樣 4 個，用浸有含有相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的棉拭子 1 支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各 5 次，并隨之轉(zhuǎn)棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投入 10ml 含有相

6、應(yīng)中和劑的無菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。門把手等不規(guī)則物體表面用棉拭子直接涂擦采樣。(2) 結(jié)果判定3、類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù) 5CFU/cm并未檢出致病菌為消毒合格。類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)310CFU/cm并未檢出致病菌為消毒合格。類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)3并未檢出致病菌為消毒合格。母嬰同室、早產(chǎn)15CFU/cm兒室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的物體表面不得檢出沙門氏3 手的消毒效果監(jiān)測 采樣時間 : 在消毒后立即采樣。（ 1）采樣方法1）手的采樣：被檢人五指并攏，用浸有含有相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的棉拭子在雙手指屈面從指根到指端往返涂擦2 次（一只手涂擦面積約 30 cm3），并隨之轉(zhuǎn)動采樣棉拭子，剪去操作者手接

7、觸部位，將棉拭子投入10ml 含有相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。2）結(jié)果判定、類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)3 ，5CFU/cm 并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單孢菌為消毒合格。類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)3并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌10CFU/cm為消毒合格。3類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)15CFU/cm并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格。母嬰同室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的工作人員手上，不得檢出沙門菌、大腸桿菌、溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌為消毒合格。4 壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測方法(1) 化學(xué)監(jiān)測法1) 化學(xué)指示卡 ( 管 ) 監(jiān)測方法： 將既能指示溫度， 又能指示溫度

8、持續(xù)時間的化學(xué)指示管 ( 卡 ) 放人每一待滅菌的物品包中央，經(jīng)一個滅菌周期后，取出指示管( 卡 ) ，根據(jù)其顏色及性狀的改變判斷是否達到滅菌條件。2) 化學(xué)指示膠帶監(jiān)測法： 將化學(xué)指示膠帶粘貼于每一待滅菌物品包外， 經(jīng)一個滅菌周期后，觀察其顏色的改變，以指示是否經(jīng)過滅菌處理。3) 結(jié)果判定：檢測時，所放置的指示管 ( 卡) 的性狀或顏色均變至規(guī)定的條件，可認(rèn)為該包滅菌合格。4) 注意事項：監(jiān)測所用化學(xué)指示劑須經(jīng)衛(wèi)生部批準(zhǔn)，并在有效期內(nèi)使用。(2) 生物監(jiān)測法1) 指示菌株：指示菌株為嗜熱脂肪桿菌芽胞(ATCC7953或 SSIK31 株 ) ，菌片含菌量為片，在121± 0.5 條

9、件下， D 值為，殺滅時間 (KT 值 ) 19min，存活時間(ST 值) 為。2) 培養(yǎng)基：試驗用培養(yǎng)基為溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基。3) 檢測方法： 將兩個嗜熱脂肪桿菌芽胞菌片分別裝人滅菌小紙袋內(nèi)，置于標(biāo)準(zhǔn)試驗包中心部位。滅菌柜室內(nèi) , 排氣口上方放置一個標(biāo)準(zhǔn)試驗包 ( 由 3 件平紋長袖手術(shù)衣， 4 塊小手術(shù)巾， 2 塊中手術(shù)巾， 1 塊大手術(shù)中， 3O塊 10cmx 10cm8層紗布敷料包裹成 25cm X 30cm x 30cm 大小 ) 。手提壓力蒸汽滅菌器用通氣貯物盒(22cm x 13cm x 6cm)代替標(biāo)準(zhǔn)試驗包，盒內(nèi)盛滿中試管，指示菌片放于中心部位的兩只滅菌試管內(nèi)( 試管口

10、用滅菌牛皮紙包封 ) ，將貯物盒平放于手提壓力蒸汽滅菌器底部。經(jīng)一個滅菌周期后，在無菌條件下，取出標(biāo)準(zhǔn)試驗包或通氣貯物盒中的指示菌片， 投人溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基中，經(jīng) 56培養(yǎng) 7 天 ( 自含式生物指示物按說明書執(zhí)行 ) ，觀察培養(yǎng)基顏色變化。檢測時設(shè)陰性對照和陽性對照。(4) 結(jié)果判定：每個指示菌片接種的溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基都不變色，判定為滅菌合格；指示菌片之一接種的溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基，由紫色變?yōu)辄S色時，則滅菌不合格。(5) 注意事項：監(jiān)測所用菌片須經(jīng)衛(wèi)生部認(rèn)可，并在有效期內(nèi)使用。5 紫外線消毒效果的監(jiān)測(1 ) 紫外線燈管輻照度值的測定1) 檢測方法：開啟紫外線燈 5min 后，

11、將測定波長為 254nm的紫外線輻照計探頭置于被檢紫外線燈下垂直距離 1m的中央處，待儀表穩(wěn)定后，所示數(shù)據(jù)即為該紫外線燈管的輻照度值。2) 結(jié)果判定：普通 30w。直管型紫外線燈，新燈輻照強度 90Uw/cm2為合格；使用中紫外線燈輻照強度 70Uw/cm2對為合格； 30W高強度紫外線新燈的輻照強度 180 Uw/cm2 行為合格。3) 注意事項：測定時電壓 220v 土 5v，溫度 20 一 25，相對濕度 <60%，紫外線輻照計必須在計量部門檢定的有效期內(nèi)使用。6 醫(yī)療器械滅菌效果的監(jiān)測(1) 采樣時間：在滅菌處理后，存放有效期內(nèi)采樣。常規(guī)監(jiān)測1) 檢測方法：用無菌的方法將擬檢縫合

12、針、針頭、手術(shù)刀片等小件醫(yī)療器械各5支，分別投人 5ml 的無茵洗脫液中； 注射器則取5 副在 5ml 無菌肉湯中分別抽吸5 次；手術(shù)鉗、鑷子等大的醫(yī)療器械在無菌操作下取2 份以上用沾有無菌洗脫液的棉拭子反復(fù)涂擦采樣，并將棉拭子投入5ml 無菌洗脫液中。 將采樣管用力振打80 次，用無菌吸管吸取lml待檢樣品放于滅菌平皿內(nèi)，加人已熔化的45 -48 的營養(yǎng)瓊脂15-18ml ，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，置37溫箱培養(yǎng)48h，計數(shù)菌落數(shù)。2) 結(jié)果判定：平板上無菌生長為滅菌合格。3) 注意事項：若消毒因子為化學(xué)消毒劑時，采樣液中應(yīng)加人相應(yīng)中和劑。7 消毒液的監(jiān)測(1) 常用消毒液有效成分測定1)

13、 有效氯含量測定配制 2mol/L 硫酸、 10%碘化鉀與 %淀粉等溶液。配制并標(biāo)定L 硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。對液體含氯消毒劑，吸取放容量瓶中，加蒸餾水至刻度，混勻。對固體含氯消毒劑，稱取 1g( 精確至，置研缽研磨后以蒸餾水溶解，轉(zhuǎn)人 100ml 容量瓶中 ( 溶水中無殘渣者可免研磨 ) 。稱量杯及研缽需用蒸餾水洗 3 次，洗液全部轉(zhuǎn)人容量瓶。向 100ml 碘量瓶中加 2mol/L 硫酸 10ml ，10%碘化鉀溶液 10ml 和混勻的消毒劑稀釋液。此時，溶液出現(xiàn)棕色。 蓋上蓋并振搖混勻后加蒸餾水?dāng)?shù)滿于碘量瓶蓋緣，置暗處 5min. 打開蓋，讓蓋緣蒸餾水流人瓶內(nèi)。 用硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液 (

14、裝于 25ml滴定管中 ) 滴定游離碘；邊滴邊搖勻。待溶液呈淡黃色時加人%淀粉溶液10 滴，溶液立即變藍色。繼續(xù)滴定至藍色消失，記錄用去的硫代硫酸鈉溶液總量。重復(fù)測 3 次，取 3 次平均值進行以下計算。因 lmol/L 硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液 Iml 相當(dāng)于有效氯， 故可按下式計算有效氯含量：有效氯含量二 C × V × W × 100%C 為硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液物質(zhì)的量濃度 (MOL/L)V 為滴定用去硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液毫升數(shù) ;w 為碘量瓶中所含消毒劑原藥克數(shù)( 液體消毒劑則為毫升數(shù)) 、 2) 有效碘含量的測定配制 %淀粉溶液。備36%醋酸溶液。配制并標(biāo)定L 硫

15、代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。向 ltolnl碘量瓶中精確加含碘消毒劑樣液50ml 及醋酸 1 滴。用 L 硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定 ( 通常用 25ML滴定管，若預(yù)計有效碘濃度>5%時用 50ml 滴定管 ) ，邊滴邊搖勻。 待溶液呈淡黃色時加人%淀粉溶液 10 滴 ( 溶液立即變藍色 ) ，繼續(xù)滴定至藍色消失，記錄用去的硫代硫酸鈉溶液總量。重復(fù)測3 次，取 3 次平均值進行以下計算。由于 lmol/L硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液lml相當(dāng)于有效碘，故可按下式計算有效碘含量：有效碘含量 =C × V × W × 100%”“”“ Wc 為硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液物質(zhì)的量濃度(mol/L

16、)v為滿定用去硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液毫升數(shù) ;W 為碘量瓶中所含消毒劑原藥克數(shù)( 液體消毒劑則為毫升數(shù))3) 戊二醛 (C5h 8O2。 ) 含量的測定配制 %三已醇胺溶液、%澳酚藍乙醇溶液與鹽酸羥胺中性溶液鹽酸羥胺加蒸餾水75ml 溶解，并加異丙醇稀釋至500ml，搖勻。加 %澳酚藍乙醇溶液15rnl ，用 %三乙醇胺溶液滴定至溶液顯藍綠色) 。配制并標(biāo)定L 硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。取戊二醛消毒劑樣液( 非消毒濃度的濃溶液需用50ml 容量瓶稀釋后取樣) 置250ml 碘量瓶中，精確加%三乙醇胺溶液與鹽酸羥胺中性溶液，搖勻。靜量反應(yīng) lh 后，用 L 硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定。 待溶液顯藍綠色， 記錄硫酸溶液用量

17、。 同時，以不含戊二醇的三乙醇胺、 鹽酸羥胺中性溶液重復(fù)上述操作 ( 空白對照 ) 。重復(fù)測3 次，取 3 次的平均值進行以下計算。由于lmol/L硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液Iml相當(dāng)于戊二醛，因此可按下式計算成二醛含量：戊二醛含量(w/v)=C×(v2-v1)×w×100%c為硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液物質(zhì)的量濃度(mol/L);V1與 V2分別為樣品與空白對照滴定中用去的硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液毫升數(shù);W 為戊二醛樣品毫升數(shù)。4) 過氧化氫 (H2O2)濃度的測定配制 2mol/L 硫酸與 10%硫酸錳等溶液。另外配制井標(biāo)定L 高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液。取過氧化氫樣液，于100ml 容量瓶中用蒸餾水稀釋至刻

18、度，混勻。取過氧化氫稀釋液，置100ml碘量瓶中，加人2mol/L硫酸20ml與10%硫酸錳3滴，搖勻。用L 高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液( 裝于25ml滴定管中) 滴定至溶液呈粉紅色，記錄高錳酸鉀溶液用量。重復(fù)測3 次，取 3 次平均值進行以下計算。因 lmol/L 高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液 lml 相當(dāng)于過氧化氫，故可按下式計算過氧化氫含量：過氧化氫濃度 (w/v)=C × V × w × 100%C 與 V 分別為高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液物質(zhì)的量濃度(MOL/L) 與滿定中用去的毫升數(shù)w為碘量瓶中所含過氧化氫樣液毫升數(shù)J(5) 過氧乙酸 (C2H4O3)濃度的測定配制以下溶液： 2mo

19、l/L 硫酸、 10%碘化鉀、 L 高錳酸鉀、 10%硫酸錳、 3%鋁酸銨與 %淀粉。配制并標(biāo)定L 硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。取過氧乙酸樣液，于100ml 容量瓶中用蒸餾水稀釋至8 無菌檢驗(1) 無菌檢驗前準(zhǔn)備1) 洗脫液與培養(yǎng)基無菌性試驗：無菌試驗前3 天，于需一厭養(yǎng)培養(yǎng)基與霉菌培養(yǎng)基內(nèi)各接種Iml洗脫液，分別置30-35 與20-25 培養(yǎng)72h，應(yīng)無菌生長。2) 陽性對照管菌液制備：在試驗前一天取金黃色葡萄球菌(26003)的普通瓊脂斜面新鮮培養(yǎng)物，接種1 環(huán)至需一厭氧培養(yǎng)基內(nèi)，在30-35 培養(yǎng)16-18h備用。(2)無菌操作：取縫合針、針頭、刀片等小件醫(yī)療器械5 件直接浸人6 管需一厭氧

20、培養(yǎng)管( 其中一管作陽性對照) 與4 管霉菌培養(yǎng)管C培養(yǎng)基用量為15ml/管。取 5 副注射器，在 5ml 洗脫液中反復(fù)抽吸 5 次，洗下管內(nèi)細(xì)菌，混和后接種需一厭養(yǎng)菌培養(yǎng)管 ( 共 6 管，其中 1 管作陽性對照 ) 與霉菌培養(yǎng)管 ( 共 4 管) 。接種量：lml 注射器為， 2ml 注射器為 Iml ，5-10ml 注射器為 2ml，20-50ml 注射器為 5ml，培養(yǎng)基用量：接種量為 2ml 以下為 15ml/ 管，接種量 5ml 為 40ml/ 管。手術(shù)鉗、鑷子等大件醫(yī)療器械取2 件用沾有無菌洗脫液的棉拭子反復(fù)涂抹采樣，將棉拭子投人 sml 無菌洗脫液中，將采樣液混勻，接種于需一厭

21、氧培養(yǎng)管( 共 6管，其中 1 管作陽性對照 ) 與霉菌培養(yǎng)基 ( 共 4 管 ) 。接種量為 lml/ 管，培養(yǎng)基用量為 15ml/ 管。(3) 培養(yǎng)：在待檢樣品的需一厭氧培養(yǎng)管中， 接種預(yù)先準(zhǔn)備的金黃色葡萄球菌陽性對照管液 1： 1000 稀釋 1ml，將需一厭氧培養(yǎng)管以及陽性與陰性對照管均于30-35 培養(yǎng) 5 天，霉菌培養(yǎng)管與陰性對照管于20-25 培養(yǎng) 7 天，培養(yǎng)期間逐日檢查是否有菌生長，如加人供試品后培養(yǎng)基出現(xiàn)混濁或沉淀，經(jīng)培養(yǎng)后不能從外觀上判斷時， 可取培養(yǎng)液轉(zhuǎn)種人另一支相同的培養(yǎng)基中或斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)48-72h 后，觀察是否再現(xiàn)混濁或在外面上有無菌落生長，并在轉(zhuǎn)種的同時，

22、取培養(yǎng)液少量，涂片染色，用顯微鏡觀察是否有菌生長。.(4)結(jié)果判定：陽性對照在24h 內(nèi)應(yīng)有菌生長，陰性對照在培養(yǎng)期間應(yīng)無菌生長，如需一厭氧菌及霉菌培養(yǎng)管內(nèi)均為澄清或更顯混濁但經(jīng)證明并非有菌生長，判為滅菌合格；如需一厭氧菌及霉菌培養(yǎng)管中任何1 管顯混濁并證實有菌生長，應(yīng)重新取樣，分別同法復(fù)試2 次，除陽性對照外，其他各管均不得有菌生長，否則判為滅菌不合格。( 5) 注意事項1) 送檢時間不得超過 6h，若樣品保存于 0-4 ，則不超過 24h。2) 被采樣本表面積 <100cm2取全部表面；被采樣本表面積 100Cm2，取 100cm2。3) 若消毒因子為兒學(xué)消毒劑，采樣液中應(yīng)加人相應(yīng)中

23、和劑。9 熱原檢查法：.(1) 鱟試驗本法系利用鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的機理，以判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法。內(nèi)毒素的量用內(nèi)毒素單位(EU) 表示。細(xì)菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品 ( 以下簡稱 RSE)系自大腸桿菌提取精致得到的內(nèi)毒素。以細(xì)菌內(nèi)毒素國際標(biāo)準(zhǔn)品為基準(zhǔn)，經(jīng)過協(xié)作標(biāo)定，使其與國際標(biāo)準(zhǔn)品單位含義一致.RSE用于標(biāo)定、復(fù)核、仲裁鱟試劑靈敏度和標(biāo)定細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品( 以下簡稱CSE)。CSE系經(jīng) RSE為基準(zhǔn)進行標(biāo)定， 確定其重量的相當(dāng)效價。 每毫微克 (Ing)CSE 的效價應(yīng)不小于 2EU，不大于 50EU，并具備均一性和穩(wěn)定性的實驗數(shù)據(jù)。 CSE用于試驗中空試

24、劑靈敏度復(fù)核、干擾試驗及設(shè)置的陽性對照。1) 試驗準(zhǔn)備：試驗所用器皿，需經(jīng)處理，除去可能存在的外源性內(nèi)毒素，常用的方法是 250于烤至少 lh 或 180干烤至少 2h，也可用其他適宜的方法。試驗所用器皿應(yīng)確證無吸附細(xì)菌內(nèi)毒素的作用。試驗操作過程應(yīng)防止微生物的污染。2) 鱟試劑靈敏度復(fù)核： 根據(jù)嘗試劑靈敏度的標(biāo)示值 ( ) ，將 RSE或 CSE用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水 ( 與批號鱟試劑 24h 不產(chǎn)生凝集反應(yīng)的滅菌注射用水， 以下簡稱 BET水 ) 溶解，在旋渦混合器上混合 15min，然后制備成、A 和等 4 個濃度的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，每稀釋一步均應(yīng)在旋渦混合器上混合30秒鐘，按“檢查法”項下試

25、驗，每一濃度平行做4 管，同時用 BET水做 4 管陰性對照，如最大濃度 )4管為陽性，最低濃度 )4管均為陰性，陰性對照 4 管均為陰性，按下式計算反應(yīng)終點濃度的幾何平均值即為鯊試劑靈敏度的測定值( ) 。 c=Lg-1( X/4)式中 X 為反應(yīng)終點濃度的對數(shù)值 (Lg) 。反應(yīng)終點濃度是系列濃度遞減的內(nèi)毒素溶液中最后一個呈陽性結(jié)果的濃度。當(dāng) c 在 ( 包括和 ) 時，方可用于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，并以為該批空鱟劑的靈敏度。 每批新的鯊試劑在用于試驗前都要進行靈敏度的復(fù)核。鱟試劑靈敏度定義為在本檢查法規(guī)定的條件下能檢測出標(biāo)準(zhǔn)溶液或供試品溶液中的最低內(nèi)毒素濃度，用 EU/ml 表示。3) 供試品

26、干擾試驗：按“鱟試劑靈敏度復(fù)核”項下試驗，用BET水和未檢出內(nèi)毒素的供試品溶液或其不超過最大有效稀釋倍數(shù)(MVD)的稀釋液分別制成合、 、和等 4種濃度的內(nèi)毒素溶液。 用 BET水和供試品溶液或稀釋液制成的每一濃度平行做 4管，另取 BET水和供試品溶液或稀釋液各做4 管陰性對照。 如標(biāo)準(zhǔn)溶液最大濃度 )4 管均為陽性，最低濃度)4 管均為陰性，兩種陰性對照 8 管均為陰性時，按下式計算用BET水制成的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液的反應(yīng)終點濃度的幾何平均值 (ES) 和用供試品溶液或稀釋液制成的內(nèi)毒素溶液的反應(yīng)終點濃度的幾何平均值 (ET) 。ES =ig-1( Xs/4)ET二ig-1(XT/4)式中 X

27、s XT 分別為用 BET水和供試品溶液或稀釋液制成的內(nèi)毒素溶液的反應(yīng)終點濃度的對數(shù)值 (Lg) 。當(dāng) ET 在包括和時測認(rèn)為供武品在該濃度下不干擾試驗，否則需進行適當(dāng)處理后重復(fù)試驗，或使用更靈敏的鱟試劑，對供試品進行更大倍數(shù)稀釋，是排除干擾因素的簡單有效的方法。每個品種要求至少對三個批號的供試品進行干擾試驗，若鱟試劑的來源、供試品的配方或生產(chǎn)工藝有變化時，須重復(fù)進行干擾試驗。供試品的最大有效稀釋倍數(shù)(MVD)按下式計算：MVD二 L/ L 為供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值，以 EU/ml 表示，當(dāng)正文中的限值以EU/mg或 EU/U表示時，應(yīng)乘以供試品溶液的濃度，再以所得值代人上式。4) 檢查法：取裝有鱟試劑溶液的10×75mm試管或支規(guī)格的鯊試劑原安瓿6 支，其中 2 支加人或供試品溶液( 其稀釋倍數(shù)不得超過MVD)