ICS11.220B41備案號(hào)：60763-2019DB542018-07-20發(fā)布西藏自治區(qū)市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布IDB54/T0159—2018前言 12術(shù)語(yǔ)和定義 13牛羊東畢吸蟲(chóng)病的診斷 14診斷結(jié)果 2附錄A（規(guī)范性附錄）實(shí)驗(yàn)用品與試劑 3附錄B（規(guī)范性附錄）樣本采集、保存、送檢 4DB54/T0159—2018本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由西藏自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)由西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所負(fù)責(zé)起草。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：劉建枝、劉金明、石斌、李浩、夏晨陽(yáng)、陸珂、唐文強(qiáng)、朱傳剛、單曲拉姆。本標(biāo)準(zhǔn)為首次制定。DB54/T0159—20181牛羊東畢吸蟲(chóng)毛蚴孵化診斷方法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了牛羊東畢吸蟲(chóng)病及其流行區(qū)的定義、臨床診斷、實(shí)驗(yàn)室診斷及結(jié)果判定等技術(shù)。本標(biāo)準(zhǔn)適用于西藏自治區(qū)境內(nèi)牛羊東畢吸蟲(chóng)病的診斷、防治效果考核、檢疫和流行病學(xué)調(diào)查。2術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)及定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。2.1牛羊東畢吸蟲(chóng)病由扁形動(dòng)物門(mén)、吸蟲(chóng)綱、梟形目、分體科、東畢屬的各種吸蟲(chóng)寄生于牛、羊腸系膜靜脈和門(mén)靜脈系統(tǒng)所引起的疾病。2.2東畢吸蟲(chóng)病流行區(qū)存在東畢吸蟲(chóng)的中間宿主，有牛和羊感染的地區(qū)。3牛羊東畢吸蟲(chóng)病的診斷3.1臨床診斷牛、羊等家畜感染東畢吸蟲(chóng)后，臨床癥狀因家畜品種及其年齡和感染強(qiáng)度而異。本病一般為慢性經(jīng)過(guò)的消耗性疾病，個(gè)別情況下出現(xiàn)急性病例。急性病例主要為幼齡牛羊或從外地新引進(jìn)的牛羊在突然感染大量尾蚴后發(fā)生。其癥狀為發(fā)熱、食欲減退、呼吸促迫、下痢、消瘦等，可造成大批死亡。慢性病例指感染劑量較低的吸蟲(chóng)后無(wú)典型病癥或癥狀較輕者，或急性病例耐過(guò)后的慢性感染者。慢性病例的癥狀為消瘦、可視粘膜蒼白，略有黃染，被毛雜亂，下頜及腹部多有不同程度水腫，腹圍增大，消化不良，多有稀便或下痢；重度感染者食欲停止、久臥不起、呼吸緩慢，最后衰竭而死亡；幼畜發(fā)育停滯，母畜不發(fā)情，不孕或流產(chǎn)。來(lái)源于東畢吸蟲(chóng)流行區(qū)的家畜，有以上癥狀者，列為疑似病例，但確診需進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷。3.2實(shí)驗(yàn)室診斷3.2.1實(shí)驗(yàn)步驟3.2.1.1取樣每頭（只）家畜的糞樣分別進(jìn)行1次獨(dú)立的孵化試驗(yàn)。將采集的糞樣分成2份，每份糞量為牛糞50g，羊糞10g。DB54/T0159—201823.2.1.2羊糞加樣取羊糞10g加入長(zhǎng)頸平底燒瓶并編號(hào),往長(zhǎng)頸平底燒瓶?jī)?nèi)加入25℃水至瓶口下4cm～5cm處。3.2.1.3牛糞加樣將50克牛糞放入銅篩中，銅篩置塑料量筒上部，加水淹沒(méi)糞樣，用竹筷攪拌至稀漿狀，撈出銅篩，瀝干后再次浸入，攪拌，如此3次。再將塑料量筒中的糞樣靜置沉淀15min～20min（室溫超過(guò)20℃時(shí)靜置時(shí)間不超過(guò)10min），棄上層清液，將沉淀物倒入長(zhǎng)頸平底燒瓶，加水至瓶口下4cm～5cm。3.2.1.4毛蚴孵化用玻璃棒將折疊好的1cm～1.5cm厚的松軟脫脂棉推入長(zhǎng)頸平底燒瓶,使脫脂棉剛好浸入液面,補(bǔ)加水至液面高出脫脂棉2cm～3cm。往長(zhǎng)頸平底燒瓶頸部加脫脂棉時(shí)不能有氣泡，產(chǎn)生氣泡時(shí)，用挑蟲(chóng)針輕輕地挑動(dòng)脫脂棉使氣泡溢出。將裝好糞樣的長(zhǎng)頸平底燒瓶放置于20℃~30℃環(huán)境中，在光照（日光或燈光）條件下進(jìn)行孵育，避免陽(yáng)光直射。如室溫低于20℃,可將長(zhǎng)頸平底燒瓶放入25℃溫箱（內(nèi)加入日光燈）或水浴鍋中進(jìn)行孵化。3.2.2毛蚴觀察孵化3h，將長(zhǎng)頸平底燒瓶向著光源（或在光線充足的地方并以黑色遮光板為背景，肉眼或用放大鏡觀察瓶頸部脫脂棉以上清水部位。每個(gè)樣品每次觀察應(yīng)在2min以上，孵化后5小時(shí)再觀察一次。3.3結(jié)果判定3.3.1東畢吸蟲(chóng)毛蚴形態(tài)及運(yùn)動(dòng)特征毛蚴眼觀為針尖大小、灰白色、梭形，折光性強(qiáng)，在脫脂棉上層清液中作水平或斜向直線運(yùn)動(dòng)。3.3.2陰性、陽(yáng)性判定發(fā)現(xiàn)毛蚴，則判定為陽(yáng)性；陰性樣本復(fù)查1次，如未發(fā)現(xiàn)毛蚴，則判定為陰性。4診斷結(jié)果4.1疑似有流行病學(xué)接觸史的動(dòng)物，出現(xiàn)本病臨床癥狀。4.2確診糞便孵化發(fā)現(xiàn)毛蚴。DB54/T0159—20183（規(guī)范性附錄）實(shí)驗(yàn)用品與試劑A.1實(shí)驗(yàn)用品A.1.1孵育室（箱）室溫低于20℃時(shí)，采用溫箱或在房間內(nèi)開(kāi)啟取暖設(shè)備，以維持20℃~25℃的環(huán)境條件，也可以用水浴鍋維持孵化溫度為25℃。孵育室（箱）需滿足日光或燈光的光照條件。500mL燒杯或塑料量杯、長(zhǎng)頸平底球瓶(500ml)、40目～80目的銅篩濾杯、溫度計(jì)、水浴鍋、玻璃棒、挑蟲(chóng)針、洗瓶、棉花、鑷子、遮光板(黑色)、記號(hào)筆、竹筷、糞桶、放大鏡、顯微鏡、吸管、載玻片、蓋玻片、取暖爐、盆、水缸、水桶、鬧鐘。A.2試劑A.2.1水蒸餾水或桶（瓶）裝飲用水，也可用自來(lái)水、河水、池水、井水等。處理方法如下：自來(lái)水，在容器中存放12h以上或陽(yáng)光下暴曬8小時(shí)以上；河水、池水、井水等，加溫至60℃,冷卻；混濁的水，每50L水加明礬3g～5g，充分?jǐn)嚢?，澄清。用NaOH或HCL調(diào)節(jié)pH值至6.8～7.2。自來(lái)水在盛器中存放去氯過(guò)程中需敞口，不能蓋蓋子。DB54/T0159—20184（規(guī)范性附錄）樣本采集、保存、送檢B.1樣本采集直腸采集新鮮糞樣，采糞量：牛100g，羊20g～25g。每