基于代謝組學(xué)探究知母百合協(xié)同抗抑郁的作用機(jī)制與物質(zhì)基礎(chǔ)一、引言1.1研究背景與意義抑郁癥是一種常見(jiàn)的精神障礙性疾病，以顯著而持久的心境低落、思維遲緩、意志活動(dòng)減退等為主要臨床特征，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，給家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重負(fù)擔(dān)。據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）統(tǒng)計(jì)，全球約有3.5億人患有抑郁癥，且其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，預(yù)計(jì)到2020年，抑郁癥將成為導(dǎo)致人類死亡和傷殘的第二大因素。在中國(guó)，抑郁癥的患病率也不容小覷，最新的流行病學(xué)調(diào)查顯示，中國(guó)重性抑郁和持續(xù)性抑郁障礙的12個(gè)月患病率約為2.1%和1.0%。抑郁癥不僅給患者本人帶來(lái)身心痛苦，還會(huì)對(duì)其家庭、工作和社交生活造成負(fù)面影響，同時(shí)也給社會(huì)醫(yī)療資源帶來(lái)了巨大壓力。目前，臨床上治療抑郁癥的藥物種類繁多，主要包括單胺氧化酶抑制劑、三環(huán)類/四環(huán)類抗抑郁藥、選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑、選擇性NE再攝取抑制劑、選擇性5-HT和NE再攝取抑制劑等。這些藥物在一定程度上能夠緩解抑郁癥患者的癥狀，但仍存在諸多局限性。例如，部分藥物起效緩慢，通常需要2-3周甚至更長(zhǎng)時(shí)間才能發(fā)揮明顯療效，這使得患者在治療初期難以忍受癥狀的折磨；一些藥物的副作用較大，如三環(huán)類抗抑郁藥易出現(xiàn)直立性低血壓、心律失常、排尿困難、認(rèn)知功能障礙等毒副作用，嚴(yán)重影響患者的依從性；此外，仍有相當(dāng)一部分患者對(duì)現(xiàn)有藥物治療反應(yīng)不佳，屬于難治性抑郁癥患者，其治療效果和預(yù)后較差。因此，尋找安全、有效、副作用小的抗抑郁藥物或治療方法具有重要的臨床意義和社會(huì)價(jià)值。中藥在治療抑郁癥方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，其多成分、多靶點(diǎn)、整體調(diào)節(jié)的作用特點(diǎn)，能夠從多個(gè)層面調(diào)節(jié)人體的生理功能，改善抑郁癥患者的癥狀，且副作用相對(duì)較小，患者耐受性較好。知母和百合作為傳統(tǒng)中藥，在中醫(yī)理論中被認(rèn)為具有清熱除煩、瀉肺滋腎、養(yǎng)陰潤(rùn)肺、清心安神等功效。知母百合藥對(duì)在臨床應(yīng)用中常用于治療抑郁癥相關(guān)癥狀，如心煩、失眠、焦慮等?，F(xiàn)代研究也表明，知母百合具有一定的抗抑郁及抗焦慮作用，但其具體的作用機(jī)制尚未完全明確。代謝組學(xué)作為一門新興的學(xué)科，是繼基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)之后發(fā)展起來(lái)的系統(tǒng)生物學(xué)的重要組成部分。它主要研究生物體系受擾動(dòng)（如基因、環(huán)境、疾病、藥物等因素）后，內(nèi)源性小分子代謝物（通常分子量<1000）種類和含量變化的規(guī)律。代謝組學(xué)技術(shù)能夠全面、系統(tǒng)地分析生物體內(nèi)的代謝變化，從整體水平揭示生物體的病理生理狀態(tài)和藥物作用機(jī)制，為抑郁癥的研究提供了新的思路和方法。通過(guò)代謝組學(xué)研究，可以發(fā)現(xiàn)與抑郁癥發(fā)生發(fā)展相關(guān)的潛在生物標(biāo)志物，深入了解抑郁癥的發(fā)病機(jī)制，同時(shí)也有助于闡明知母百合協(xié)同抗抑郁的作用靶點(diǎn)和代謝通路，為其臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。本研究旨在通過(guò)代謝組學(xué)技術(shù)，探討知母百合協(xié)同抗抑郁的作用機(jī)制，為抑郁癥的治療提供新的理論依據(jù)和治療策略。具體而言，本研究將建立抑郁癥動(dòng)物模型，給予知母百合干預(yù)，采用代謝組學(xué)方法分析動(dòng)物體內(nèi)代謝物的變化，篩選出與知母百合抗抑郁作用相關(guān)的差異代謝物，并進(jìn)一步研究這些差異代謝物所涉及的代謝通路，從而揭示知母百合協(xié)同抗抑郁的潛在機(jī)制。這不僅有助于深入理解中藥治療抑郁癥的科學(xué)內(nèi)涵，還可能為開(kāi)發(fā)新型抗抑郁藥物提供線索，具有重要的理論意義和實(shí)踐價(jià)值。1.2知母與百合的研究現(xiàn)狀知母為百合科植物知母（AnemarrhenaasphodeloidesBge.）的干燥根莖，是一種常用的中藥材，具有悠久的藥用歷史。在《神農(nóng)本草經(jīng)》中，知母被列為中品，記載其“主消渴熱中，除邪氣，肢體浮腫，下水，補(bǔ)不足，益氣”。此后，歷代本草著作如《本草綱目》《本草備要》等均對(duì)知母的藥用功效進(jìn)行了詳細(xì)闡述，認(rèn)為其具有清熱瀉火、滋陰潤(rùn)燥等功效，可用于治療熱病煩渴、肺熱燥咳、骨蒸潮熱、內(nèi)熱消渴等病癥?，F(xiàn)代研究表明，知母的化學(xué)成分復(fù)雜，主要包括甾體皂苷類、雙苯吡酮類、多糖類、生物堿類等。其中，甾體皂苷是知母的主要活性成分之一，已從知母中分離鑒定出多種甾體皂苷，如知母皂苷A-Ⅲ、知母皂苷B-Ⅱ、知母皂苷E1等。這些甾體皂苷具有多種藥理活性，如降血糖、降血脂、抗炎、抗氧化、神經(jīng)保護(hù)等作用。雙苯吡酮類成分如芒果苷、新芒果苷等也具有顯著的藥理活性，研究發(fā)現(xiàn)芒果苷具有抗炎、抗氧化、抗糖尿病、神經(jīng)保護(hù)等作用。此外，知母中的多糖類成分具有免疫調(diào)節(jié)、抗氧化等作用，生物堿類成分則具有抗菌、抗炎等作用。在抗抑郁方面，知母的研究也取得了一定進(jìn)展。有研究表明，知母提取物能夠改善慢性不可預(yù)測(cè)輕度應(yīng)激（CUMS）誘導(dǎo)的抑郁癥大鼠的行為學(xué)表現(xiàn)，縮短大鼠在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和懸尾實(shí)驗(yàn)中的不動(dòng)時(shí)間，提高大鼠的糖水偏好率。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，知母的抗抑郁作用可能與調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)、抑制炎癥反應(yīng)、抗氧化應(yīng)激等機(jī)制有關(guān)。知母中的芒果苷能夠通過(guò)調(diào)節(jié)5-羥色胺（5-HT）、多巴胺（DA）等神經(jīng)遞質(zhì)的水平，發(fā)揮抗抑郁作用；同時(shí)，芒果苷還具有顯著的抗炎和抗氧化活性，能夠抑制炎癥因子的釋放，減少氧化應(yīng)激損傷，從而改善抑郁癥大鼠的神經(jīng)生物學(xué)功能。此外，知母皂苷A-Ⅲ也被報(bào)道具有抗抑郁作用，其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）信號(hào)通路有關(guān)，通過(guò)上調(diào)BDNF的表達(dá)，促進(jìn)神經(jīng)元的存活和生長(zhǎng)，改善抑郁樣行為。百合為百合科植物卷丹（LiliumlancifoliumThunb.）、百合（LiliumbrowniiF.E.Brownvar.viridulumBaker）或細(xì)葉百合（LiliumpumilumDC.）的干燥肉質(zhì)鱗葉，同樣具有悠久的藥用歷史。在《本草綱目》中記載百合“甘，平，無(wú)毒。主治邪氣腹脹心痛，利大小便，補(bǔ)中益氣。除浮腫臚脹，痞滿寒熱，通身疼痛，及乳難喉痹，止涕淚”。中醫(yī)認(rèn)為百合具有養(yǎng)陰潤(rùn)肺、清心安神的功效，常用于治療陰虛燥咳、勞嗽咯血、虛煩驚悸、失眠多夢(mèng)等病癥。百合的化學(xué)成分主要包括甾體皂苷類、生物堿類、多糖類、黃酮類等。甾體皂苷是百合的主要活性成分之一，已從百合中分離得到多種甾體皂苷，如百合皂苷A、百合皂苷B、百合皂苷C等，這些甾體皂苷具有多種藥理活性，如抗腫瘤、抗炎、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等作用。生物堿類成分如秋水仙堿等具有抗腫瘤、抗炎等作用，但由于其毒性較大，在臨床應(yīng)用中受到一定限制。百合中的多糖類成分具有免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、降血糖等作用，黃酮類成分則具有抗氧化、抗炎、抗菌等作用。在抗抑郁研究方面，百合也展現(xiàn)出了一定的潛力。研究發(fā)現(xiàn)，百合提取物能夠改善CUMS誘導(dǎo)的抑郁癥小鼠的行為學(xué)癥狀，減少小鼠在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和懸尾實(shí)驗(yàn)中的不動(dòng)時(shí)間，增加小鼠的自主活動(dòng)次數(shù)。其抗抑郁作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)、抑制炎癥反應(yīng)、調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)等有關(guān)。百合中的甾體皂苷能夠調(diào)節(jié)5-HT、NE等神經(jīng)遞質(zhì)的水平，改善抑郁癥小鼠的神經(jīng)遞質(zhì)紊亂狀態(tài)。同時(shí)，百合提取物還能夠抑制炎癥因子的產(chǎn)生，減輕炎癥反應(yīng)對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的損傷，從而發(fā)揮抗抑郁作用。此外，百合中的多糖類成分可能通過(guò)調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)，如下丘腦-垂體-腎上腺（HPA）軸的功能，改善抑郁癥小鼠的應(yīng)激反應(yīng)，發(fā)揮抗抑郁作用。知母百合藥對(duì)在臨床上常用于治療抑郁癥相關(guān)癥狀，如心煩、失眠、焦慮等?，F(xiàn)代研究也表明，知母百合具有協(xié)同抗抑郁作用。賀治青等人通過(guò)懸尾實(shí)驗(yàn)、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)觀察小鼠的絕望不動(dòng)時(shí)間研究抗抑郁作用，通過(guò)升高十字迷宮實(shí)驗(yàn)、開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、明暗穿箱實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)抗焦慮作用，發(fā)現(xiàn)與陰性對(duì)照組相比，在懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中不同劑量的知母百合組和氟西汀組的小鼠不動(dòng)時(shí)間均明顯縮短；地西泮組和不同劑量的知母百合組的小鼠在升高十字迷宮實(shí)驗(yàn)中進(jìn)入開(kāi)放臂的次數(shù)，滯留開(kāi)放臂的時(shí)間，進(jìn)入開(kāi)放臂的時(shí)間占總時(shí)間比，進(jìn)入開(kāi)放臂的次數(shù)占總穿越次數(shù)比，開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中的跨過(guò)中央的次數(shù)，明暗穿箱實(shí)驗(yàn)中的跨室次數(shù)及滯留明室的時(shí)間均明顯增加，表明知母百合具有抗焦慮、抗抑郁作用。然而，目前對(duì)于知母百合協(xié)同抗抑郁的作用機(jī)制研究還不夠深入，有待進(jìn)一步探索。1.3代謝組學(xué)在抑郁癥研究中的應(yīng)用代謝組學(xué)作為系統(tǒng)生物學(xué)的重要組成部分，主要研究生物體系受擾動(dòng)（如基因、環(huán)境、疾病、藥物等因素）后，內(nèi)源性小分子代謝物（通常分子量<1000）種類和含量變化的規(guī)律。它通過(guò)對(duì)生物體代謝產(chǎn)物的全面分析，能夠從整體水平揭示生物體的生理病理狀態(tài)以及藥物的作用機(jī)制。代謝組學(xué)的研究范圍涵蓋了各種代謝路徑的底物和產(chǎn)物，其主要技術(shù)手段包括核磁共振（NMR）、質(zhì)譜（MS）、色譜（HPLC、GC）及色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)等。這些技術(shù)能夠?qū)ι飿悠分械拇x物進(jìn)行定性和定量分析，為深入了解生物體內(nèi)的代謝過(guò)程提供了有力工具。在抑郁癥研究領(lǐng)域，代謝組學(xué)具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。抑郁癥是一種多因素導(dǎo)致的復(fù)雜精神疾病，其發(fā)病機(jī)制涉及神經(jīng)、免疫、內(nèi)分泌等多個(gè)系統(tǒng)的功能紊亂。傳統(tǒng)的研究方法往往只能從單一角度對(duì)抑郁癥進(jìn)行探究，難以全面揭示其發(fā)病機(jī)制。而代謝組學(xué)可以同時(shí)檢測(cè)生物體內(nèi)多種代謝物的變化，這些代謝物作為基因和蛋白質(zhì)表達(dá)的下游產(chǎn)物，能夠更直接地反映生物體的生理病理狀態(tài)，為抑郁癥的研究提供了新的視角。在抑郁癥發(fā)病機(jī)制研究方面，代謝組學(xué)的應(yīng)用取得了一定成果。有研究通過(guò)對(duì)抑郁癥患者血清代謝組的分析，發(fā)現(xiàn)能量代謝、神經(jīng)遞質(zhì)代謝、氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)等相關(guān)的代謝通路發(fā)生了顯著變化。例如，在能量代謝方面，抑郁癥患者體內(nèi)的三羧酸循環(huán)相關(guān)代謝物水平出現(xiàn)異常，提示能量代謝障礙可能在抑郁癥的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用。三羧酸循環(huán)是細(xì)胞能量產(chǎn)生的關(guān)鍵途徑，其代謝物水平的改變可能影響神經(jīng)元的能量供應(yīng)，進(jìn)而導(dǎo)致神經(jīng)功能異常。在神經(jīng)遞質(zhì)代謝方面，研究發(fā)現(xiàn)抑郁癥患者血清中5-羥色胺、多巴胺等神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物的水平發(fā)生了改變，這與抑郁癥患者的情緒和認(rèn)知功能障礙密切相關(guān)。5-羥色胺和多巴胺是重要的神經(jīng)遞質(zhì)，參與調(diào)節(jié)情緒、認(rèn)知和行為等過(guò)程，它們的代謝異?？赡軐?dǎo)致神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)失衡，從而引發(fā)抑郁癥的癥狀。此外，氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)相關(guān)的代謝物水平在抑郁癥患者中也明顯升高，表明氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)在抑郁癥的發(fā)病機(jī)制中也扮演著重要角色。氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)可能導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞損傷和神經(jīng)炎癥，進(jìn)一步影響神經(jīng)遞質(zhì)的合成和釋放，加重抑郁癥的病情。代謝組學(xué)在抑郁癥生物標(biāo)志物篩選方面也具有重要價(jià)值。生物標(biāo)志物是指可以客觀測(cè)量和評(píng)價(jià)的生物學(xué)指標(biāo)，能夠反映疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程、診斷疾病、評(píng)估治療效果和預(yù)測(cè)預(yù)后。通過(guò)代謝組學(xué)技術(shù)，可以篩選出與抑郁癥相關(guān)的潛在生物標(biāo)志物，為抑郁癥的早期診斷和病情監(jiān)測(cè)提供依據(jù)。研究人員利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)抑郁癥患者和健康對(duì)照者的尿液樣本進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)了一系列差異代謝物，如馬尿酸、檸檬酸、肌酐等。這些差異代謝物在抑郁癥患者中的水平與健康對(duì)照者存在顯著差異，有望作為抑郁癥的生物標(biāo)志物。馬尿酸是腸道微生物代謝的產(chǎn)物，其水平的變化可能反映了腸道微生物群落的失衡，而腸道微生物群落與抑郁癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。檸檬酸參與能量代謝過(guò)程，其水平的改變可能與抑郁癥患者的能量代謝異常有關(guān)。肌酐是肌肉代謝的產(chǎn)物，其水平的變化可能與抑郁癥患者的身體代謝狀態(tài)有關(guān)。通過(guò)檢測(cè)這些生物標(biāo)志物的水平，可以輔助抑郁癥的診斷，提高診斷的準(zhǔn)確性和及時(shí)性。在抑郁癥藥物研發(fā)中，代謝組學(xué)同樣發(fā)揮著重要作用。它可以用于藥物療效及毒性評(píng)價(jià)、作用機(jī)制研究等方面。在藥物療效評(píng)價(jià)方面，代謝組學(xué)能夠通過(guò)監(jiān)測(cè)藥物干預(yù)后生物體內(nèi)代謝物的變化，評(píng)估藥物的治療效果。例如，在一項(xiàng)研究中，給予抑郁癥動(dòng)物模型抗抑郁藥物治療后，通過(guò)代謝組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)動(dòng)物體內(nèi)與抑郁癥相關(guān)的代謝物水平逐漸恢復(fù)正常，表明藥物治療有效。這為藥物的療效評(píng)價(jià)提供了客觀的指標(biāo)，有助于篩選出更有效的抗抑郁藥物。在藥物毒性評(píng)價(jià)方面，代謝組學(xué)可以檢測(cè)藥物對(duì)生物體代謝的影響，及時(shí)發(fā)現(xiàn)藥物的潛在毒性。某些藥物在治療過(guò)程中可能會(huì)對(duì)肝臟、腎臟等器官造成損傷，通過(guò)代謝組學(xué)分析可以檢測(cè)到與器官損傷相關(guān)的代謝物變化，從而評(píng)估藥物的毒性。在藥物作用機(jī)制研究方面，代謝組學(xué)能夠揭示藥物作用的靶點(diǎn)和代謝通路，為藥物研發(fā)提供理論依據(jù)。通過(guò)分析藥物干預(yù)后生物體內(nèi)代謝物的變化，找出受藥物影響的關(guān)鍵代謝物和代謝通路，有助于深入了解藥物的作用機(jī)制，為開(kāi)發(fā)新型抗抑郁藥物提供線索。1.4研究目的與內(nèi)容本研究旨在運(yùn)用代謝組學(xué)技術(shù)，深入探討知母百合協(xié)同抗抑郁的效果、作用機(jī)制以及關(guān)鍵代謝通路，為抑郁癥的治療提供新的理論依據(jù)和潛在治療策略。在研究?jī)?nèi)容上，本研究將采用慢性不可預(yù)測(cè)輕度應(yīng)激（CUMS）方法建立抑郁癥大鼠模型，以模擬人類抑郁癥的發(fā)病過(guò)程。將實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、知母百合低劑量組、知母百合高劑量組和陽(yáng)性藥物對(duì)照組（如氟西汀組）。正常對(duì)照組大鼠正常飼養(yǎng)，不接受任何應(yīng)激刺激；模型對(duì)照組大鼠接受CUMS刺激，但不給予藥物干預(yù)；知母百合低劑量組和高劑量組大鼠在接受CUMS刺激的同時(shí)，分別給予低劑量和高劑量的知母百合提取物灌胃；陽(yáng)性藥物對(duì)照組大鼠接受CUMS刺激，并給予陽(yáng)性抗抑郁藥物氟西汀灌胃。通過(guò)一系列行為學(xué)實(shí)驗(yàn)，如糖水偏好實(shí)驗(yàn)、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)、懸尾實(shí)驗(yàn)等，評(píng)價(jià)各組大鼠的抑郁樣行為，比較知母百合不同劑量組與模型對(duì)照組及陽(yáng)性藥物對(duì)照組之間的差異，以確定知母百合的抗抑郁效果。本研究還會(huì)對(duì)大鼠血清和腦組織樣本進(jìn)行代謝組學(xué)分析。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，采集各組大鼠的血清和腦組織樣本，運(yùn)用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）技術(shù)對(duì)樣本中的代謝物進(jìn)行分離和檢測(cè)，獲取代謝物的質(zhì)譜數(shù)據(jù)。通過(guò)主成分分析（PCA）、偏最小二乘判別分析（PLS-DA）等多元統(tǒng)計(jì)分析方法，對(duì)代謝組學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和分析，篩選出在抑郁癥模型組與正常對(duì)照組之間、知母百合干預(yù)組與抑郁癥模型組之間具有顯著差異的代謝物。并利用MetaboAnalyst、KEGG等數(shù)據(jù)庫(kù)和分析工具，對(duì)篩選出的差異代謝物進(jìn)行代謝通路富集分析，找出與知母百合抗抑郁作用相關(guān)的關(guān)鍵代謝通路，如神經(jīng)遞質(zhì)代謝通路、能量代謝通路、氧化應(yīng)激相關(guān)通路等。本研究將進(jìn)一步對(duì)關(guān)鍵代謝通路進(jìn)行驗(yàn)證，通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）、實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）、蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）等實(shí)驗(yàn)技術(shù)，對(duì)關(guān)鍵代謝通路中的關(guān)鍵酶活性、相關(guān)基因和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，驗(yàn)證代謝組學(xué)分析結(jié)果的準(zhǔn)確性，深入探討知母百合協(xié)同抗抑郁的作用機(jī)制。二、材料與方法2.1實(shí)驗(yàn)材料2.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用健康成年雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，體重200±20g，購(gòu)自[供應(yīng)商名稱]，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為[許可證編號(hào)]。大鼠飼養(yǎng)于溫度（23±2）℃、相對(duì)濕度（50±10）%的環(huán)境中，12h光照/12h黑暗循環(huán)，自由進(jìn)食和飲水。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。選擇SD大鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，主要原因在于其具有廣泛的應(yīng)用基礎(chǔ)和諸多優(yōu)勢(shì)。SD大鼠遺傳背景清晰，品系穩(wěn)定，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件的反應(yīng)一致性較高，能夠減少個(gè)體差異對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，從而提高實(shí)驗(yàn)的可靠性和重復(fù)性。在抑郁癥研究領(lǐng)域，SD大鼠對(duì)各種應(yīng)激刺激較為敏感，通過(guò)慢性不可預(yù)測(cè)輕度應(yīng)激（CUMS）等方法能夠成功誘導(dǎo)出抑郁樣行為，與人類抑郁癥的某些癥狀具有相似性，如行為絕望、快感缺失等，便于研究人員觀察和評(píng)估藥物的抗抑郁效果。此外，SD大鼠的生理結(jié)構(gòu)和代謝過(guò)程與人類有一定的相似性，其大腦神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)、神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)等在抑郁癥發(fā)病機(jī)制中起著關(guān)鍵作用，與人類的相關(guān)生理機(jī)制具有一定的可比性，這使得通過(guò)對(duì)SD大鼠的研究能夠?yàn)榻沂救祟愐钟舭Y的發(fā)病機(jī)制和治療方法提供重要的參考依據(jù)。2.1.2藥材與試劑知母購(gòu)自[知母產(chǎn)地]，百合購(gòu)自[百合產(chǎn)地]，經(jīng)[鑒定人姓名]鑒定，分別為百合科植物知母（AnemarrhenaasphodeloidesBge.）的干燥根莖和百合科植物卷丹（LiliumlancifoliumThunb.）的干燥肉質(zhì)鱗葉，符合《中華人民共和國(guó)藥典》[具體版本]的規(guī)定。將知母和百合洗凈，干燥，粉碎，過(guò)[具體目數(shù)]篩，備用。實(shí)驗(yàn)所需的主要試劑包括：無(wú)水乙醇、甲醇、乙腈、甲酸等（均為色譜純，購(gòu)自[試劑供應(yīng)商名稱]）；超純水（由實(shí)驗(yàn)室超純水系統(tǒng)制備）；5-羥色胺（5-HT）、多巴胺（DA）、去甲腎上腺素（NE）等神經(jīng)遞質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥98%，購(gòu)自[標(biāo)準(zhǔn)品供應(yīng)商名稱]）；酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）試劑盒（用于檢測(cè)炎癥因子、神經(jīng)遞質(zhì)等，購(gòu)自[試劑盒供應(yīng)商名稱]）；其他常規(guī)試劑均為分析純，購(gòu)自[試劑供應(yīng)商名稱]。2.1.3儀器設(shè)備實(shí)驗(yàn)過(guò)程中使用的主要儀器設(shè)備如下：超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀（UPLC-MS/MS，型號(hào)[具體型號(hào)]，生產(chǎn)廠家[廠家名稱]）：用于血清和腦組織樣本中代謝物的分離和檢測(cè)。該儀器具有高分辨率、高靈敏度和高分析速度的特點(diǎn)，能夠?qū)?fù)雜生物樣品中的代謝物進(jìn)行準(zhǔn)確的定性和定量分析。氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS，型號(hào)[具體型號(hào)]，生產(chǎn)廠家[廠家名稱]）：輔助代謝物分析，尤其適用于揮發(fā)性和半揮發(fā)性代謝物的檢測(cè)。通過(guò)氣相色譜的高效分離和質(zhì)譜的準(zhǔn)確鑒定，能夠進(jìn)一步豐富代謝組學(xué)數(shù)據(jù)信息。高速冷凍離心機(jī)（型號(hào)[具體型號(hào)]，生產(chǎn)廠家[廠家名稱]）：用于樣本的離心分離，轉(zhuǎn)速可達(dá)[最高轉(zhuǎn)速]，能夠在低溫條件下快速有效地分離血清、組織勻漿等樣本中的不同成分。酶標(biāo)儀（型號(hào)[具體型號(hào)]，生產(chǎn)廠家[廠家名稱]）：用于ELISA實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)吸光度，從而定量分析炎癥因子、神經(jīng)遞質(zhì)等物質(zhì)的含量。具有高精度、高重復(fù)性的特點(diǎn)，能夠準(zhǔn)確讀取實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）儀（型號(hào)[具體型號(hào)]，生產(chǎn)廠家[廠家名稱]）：用于檢測(cè)相關(guān)基因的表達(dá)水平，通過(guò)對(duì)特定基因的擴(kuò)增和熒光信號(hào)的監(jiān)測(cè)，能夠精確分析基因表達(dá)的變化情況。蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）相關(guān)設(shè)備：包括電泳儀、轉(zhuǎn)膜儀、凝膠成像系統(tǒng)等（型號(hào)[具體型號(hào)]，生產(chǎn)廠家[廠家名稱]），用于檢測(cè)相關(guān)蛋白質(zhì)的表達(dá)水平，通過(guò)對(duì)蛋白質(zhì)的分離、轉(zhuǎn)膜和免疫檢測(cè)，能夠直觀地展示蛋白質(zhì)表達(dá)的差異。2.2實(shí)驗(yàn)方法2.2.1知母百合提取物的制備取知母和百合藥材粉末，按照一定比例（如知母：百合=1:1）混合均勻。將混合粉末加入適量的70%乙醇水溶液（料液比為1:10，g/mL），浸泡30min后，于70℃水浴中回流提取2次，每次2h。合并提取液，減壓濃縮至無(wú)醇味，得到浸膏。將浸膏用適量蒸餾水溶解，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取，分別收集各萃取相，減壓濃縮至干，得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物。將正丁醇萃取物用適量蒸餾水溶解，通過(guò)大孔樹(shù)脂柱進(jìn)行純化。先用蒸餾水和20%乙醇水溶液洗脫除去雜質(zhì)，然后用70%乙醇水溶液洗脫，收集70%乙醇水溶液洗脫液，減壓濃縮至干，即得到知母百合提取物，將其置于干燥器中保存?zhèn)溆谩?.2.2動(dòng)物模型的建立與分組采用慢性不可預(yù)測(cè)輕度應(yīng)激（CUMS）結(jié)合孤養(yǎng)的方法建立抑郁癥大鼠模型。將適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后的SD大鼠，隨機(jī)分為正常對(duì)照組（n=10）和造模組（n=50）。正常對(duì)照組大鼠正常飼養(yǎng)，每籠5只，不接受任何應(yīng)激刺激。造模組大鼠進(jìn)行為期4周的CUMS刺激，包括禁食24h、禁水24h、潮濕環(huán)境（將大鼠飼養(yǎng)于底部鋪有濕濾紙的鼠籠中，持續(xù)24h）、晝夜顛倒（將大鼠置于12h光照/12h黑暗顛倒的環(huán)境中，持續(xù)24h）、夾尾刺激（用止血鉗夾大鼠尾巴1min，間隔1h重復(fù)1次，共3次）、冰水游泳（將大鼠放入4℃的冰水中游泳5min）、陌生環(huán)境刺激（將大鼠置于陌生的鼠籠中，持續(xù)2h）等，每天隨機(jī)選擇1-2種應(yīng)激刺激，每種刺激不連續(xù)使用，以保證應(yīng)激的不可預(yù)測(cè)性。同時(shí)，造模組大鼠采用單籠飼養(yǎng)，以增加其孤獨(dú)感。4周應(yīng)激結(jié)束后，通過(guò)糖水偏好實(shí)驗(yàn)對(duì)造模組大鼠進(jìn)行篩選，將糖水偏好率低于正常對(duì)照組均值1個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差的大鼠視為造模成功，納入后續(xù)實(shí)驗(yàn)。將造模成功的大鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組（n=10）、知母百合低劑量組（n=10）、知母百合高劑量組（n=10）和陽(yáng)性藥物對(duì)照組（n=10）。知母百合低劑量組給予低劑量（如1g/kg）的知母百合提取物灌胃，知母百合高劑量組給予高劑量（如2g/kg）的知母百合提取物灌胃，陽(yáng)性藥物對(duì)照組給予陽(yáng)性抗抑郁藥物氟西汀（如10mg/kg）灌胃，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組給予等體積的生理鹽水灌胃，每天1次，連續(xù)灌胃4周。2.2.3給藥方案知母百合提取物用蒸餾水配制成相應(yīng)濃度的溶液，通過(guò)灌胃方式給予大鼠。灌胃體積為10mL/kg體重，每天固定時(shí)間給藥，連續(xù)給藥4周。在給藥期間，密切觀察大鼠的飲食、飲水、體重變化及行為表現(xiàn)等情況，記錄可能出現(xiàn)的不良反應(yīng)。正常對(duì)照組和模型對(duì)照組給予等體積的生理鹽水灌胃，陽(yáng)性藥物對(duì)照組給予氟西汀溶液灌胃，給藥體積和時(shí)間與其他組一致。2.2.4行為學(xué)評(píng)價(jià)在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前1天、應(yīng)激結(jié)束后（造模成功后）以及給藥結(jié)束后，分別對(duì)各組大鼠進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試，包括強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)、懸尾實(shí)驗(yàn)和糖水偏好實(shí)驗(yàn)，以評(píng)估大鼠的抑郁程度。強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)前將大鼠放入裝有25℃水的玻璃缸（高25cm，直徑15cm）中適應(yīng)游泳15min，24h后進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。將大鼠再次放入上述玻璃缸中，水深15cm，記錄大鼠在6min內(nèi)的不動(dòng)時(shí)間。不動(dòng)時(shí)間定義為大鼠在水中停止掙扎，僅維持頭部露出水面所需的最小活動(dòng)狀態(tài)的時(shí)間。大鼠不動(dòng)時(shí)間越長(zhǎng)，表明其抑郁程度越嚴(yán)重。懸尾實(shí)驗(yàn)：將大鼠尾端1/3處用膠帶固定，懸掛于距桌面30cm高的橫桿上，使大鼠呈倒掛狀態(tài)。記錄6min內(nèi)大鼠的不動(dòng)時(shí)間，不動(dòng)時(shí)間的判定標(biāo)準(zhǔn)同強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)。懸尾實(shí)驗(yàn)中大鼠不動(dòng)時(shí)間的增加同樣反映了其抑郁樣行為的加重。糖水偏好實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)前先讓大鼠適應(yīng)1%蔗糖水和純水24h，自由飲用。正式實(shí)驗(yàn)時(shí)，將裝有1%蔗糖水和純水的兩個(gè)水瓶置于鼠籠中，稱重并記錄初始重量。12h后再次稱重兩個(gè)水瓶，計(jì)算蔗糖水和純水的攝入量，根據(jù)公式：糖水偏好率=蔗糖水?dāng)z入量/（蔗糖水?dāng)z入量+純水?dāng)z入量）×100%，計(jì)算大鼠的糖水偏好率。正常大鼠對(duì)糖水具有一定的偏好，而抑郁癥模型大鼠由于快感缺失，糖水偏好率會(huì)顯著降低，通過(guò)檢測(cè)糖水偏好率的變化可評(píng)估大鼠的抑郁狀態(tài)。2.2.5樣本采集與處理在給藥結(jié)束后，禁食不禁水12h，然后將大鼠用10%水合氯醛（300mg/kg）腹腔注射麻醉。用一次性無(wú)菌注射器經(jīng)腹主動(dòng)脈取血5mL，置于肝素抗凝管中，3000r/min離心15min，分離血清，將血清分裝后保存于-80℃冰箱待測(cè)。取血后迅速斷頭處死大鼠，取出腦組織，用預(yù)冷的生理鹽水沖洗干凈，去除表面的血跡和筋膜。將腦組織置于冰盒上，分離出海馬、前額葉皮質(zhì)等區(qū)域，稱重后放入凍存管中，保存于-80℃冰箱備用。血清樣本用于代謝組學(xué)分析時(shí)，取出適量血清，加入3倍體積的預(yù)冷甲醇，渦旋振蕩30s，充分混勻后，在4℃下靜置1h，使蛋白質(zhì)沉淀。12000r/min離心15min，取上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中，在氮吹儀上吹干。然后加入適量的復(fù)溶液（如甲醇：水=1:1，v/v），渦旋振蕩使其充分溶解，12000r/min離心10min，取上清液轉(zhuǎn)移至進(jìn)樣瓶中，用于液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）分析。腦組織樣本用于代謝組學(xué)分析時(shí)，取適量腦組織，加入5倍體積的預(yù)冷甲醇，在冰浴條件下用組織勻漿器勻漿。勻漿液在4℃下靜置1h，使蛋白質(zhì)沉淀。12000r/min離心15min，取上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中，在氮吹儀上吹干。然后加入適量的復(fù)溶液（如甲醇：水=1:1，v/v），渦旋振蕩使其充分溶解，12000r/min離心10min，取上清液轉(zhuǎn)移至進(jìn)樣瓶中，用于LC-MS分析。2.2.6代謝組學(xué)分析采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）技術(shù)對(duì)血清和腦組織樣本進(jìn)行代謝組學(xué)分析。使用超高效液相色譜儀（UPLC）對(duì)樣本中的代謝物進(jìn)行分離，色譜柱為[具體型號(hào)]反相色譜柱（如C18柱，2.1mm×100mm，1.7μm）。流動(dòng)相A為0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為乙腈，采用梯度洗脫程序：0-2min，5%B；2-10min，5%-30%B；10-15min，30%-50%B；15-20min，50%-95%B；20-22min，95%B；22-25min，95%-5%B；25-30min，5%B。流速為0.3mL/min，柱溫為35℃，進(jìn)樣量為5μL。分離后的代謝物進(jìn)入質(zhì)譜儀（MS）進(jìn)行檢測(cè)，采用電噴霧離子源（ESI），正離子和負(fù)離子模式同時(shí)掃描。掃描范圍為m/z100-1000，毛細(xì)管電壓為3.5kV（正離子模式）和3.0kV（負(fù)離子模式），錐孔電壓為35V，離子源溫度為120℃，脫溶劑氣溫度為350℃，脫溶劑氣流量為800L/h，錐孔氣流量為50L/h。數(shù)據(jù)采集采用全掃描模式，采集頻率為每秒10次。在分析過(guò)程中，每10個(gè)樣本插入一個(gè)質(zhì)量控制（QC）樣本，QC樣本由所有樣本等量混合而成。通過(guò)分析QC樣本的重復(fù)性，評(píng)估實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性和可靠性。采用MassLynx軟件對(duì)原始質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，包括峰識(shí)別、峰對(duì)齊、積分等操作，得到代謝物的保留時(shí)間、質(zhì)荷比（m/z）和峰面積等信息。2.3數(shù)據(jù)分析方法采用主成分分析（PCA）對(duì)代謝組學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行初步分析，PCA是一種無(wú)監(jiān)督的多元統(tǒng)計(jì)分析方法，能夠?qū)⒏呔S數(shù)據(jù)投影到低維空間，以達(dá)到數(shù)據(jù)降維的目的。通過(guò)PCA分析，可以直觀地觀察不同組樣本之間的總體分布趨勢(shì)和差異，評(píng)估實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的質(zhì)量和穩(wěn)定性，檢查是否存在離群值。利用PCA得分圖，能夠快速了解不同組樣本在代謝輪廓上的總體差異，判斷各組樣本是否能夠明顯區(qū)分開(kāi)來(lái)。若正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、知母百合干預(yù)組等在PCA得分圖上呈現(xiàn)出明顯的聚類趨勢(shì)，且組間距離較大，說(shuō)明各組樣本在代謝物組成上存在顯著差異，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)具有較好的區(qū)分度；若存在離群值，則需要進(jìn)一步檢查樣本采集、處理和分析過(guò)程是否存在異常，以確保數(shù)據(jù)的可靠性。為了更準(zhǔn)確地識(shí)別不同組之間的差異代謝物，采用偏最小二乘判別分析（PLS-DA）進(jìn)行有監(jiān)督的模式識(shí)別分析。PLS-DA在進(jìn)行數(shù)據(jù)分析時(shí)，預(yù)先設(shè)定樣本的分組信息（如正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、知母百合干預(yù)組等）作為因變量Y，將代謝物數(shù)據(jù)作為自變量X，通過(guò)尋找與分組因素最相關(guān)的變量，構(gòu)建判別模型，從而區(qū)分不同組樣本的代謝輪廓差異。在構(gòu)建PLS-DA模型時(shí)，使用7折交叉驗(yàn)證（7-foldcrossvalidation）對(duì)模型進(jìn)行驗(yàn)證，通過(guò)交叉驗(yàn)證得到模型對(duì)分類變量Y的解釋度R2Y和模型的預(yù)測(cè)性Q2，以評(píng)估模型的質(zhì)量和可靠性。若R2Y和Q2的值越接近1，說(shuō)明模型對(duì)數(shù)據(jù)的解釋能力和預(yù)測(cè)能力越強(qiáng)，模型的可靠性越高。同時(shí)，進(jìn)行置換檢驗(yàn)（permutationtest），隨機(jī)200次改變分類變量Y的排列順序得到不同的隨機(jī)Q2值，進(jìn)一步檢驗(yàn)?zāi)Ｐ偷挠行裕乐鼓Ｐ统霈F(xiàn)過(guò)擬合現(xiàn)象。在篩選差異代謝物時(shí)，結(jié)合PLS-DA模型中的變量投影重要性（VIP）值、倍數(shù)變化（FC）值和統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)（如t檢驗(yàn)得到的P值）等指標(biāo)進(jìn)行綜合判斷。VIP值反映了每個(gè)代謝物對(duì)PLS-DA模型分類判別的貢獻(xiàn)程度，VIP≥1的代謝物被認(rèn)為對(duì)組間差異具有重要影響，是潛在的差異代謝物。FC值是指某個(gè)代謝物在兩組間表達(dá)量的差異倍數(shù)，通過(guò)計(jì)算代謝物在不同組中的平均峰面積，得到其相對(duì)定量結(jié)果，進(jìn)而計(jì)算FC值。為了篩選到差異更為顯著的代謝物，通常選擇FC值≥2或≤0.5的代謝物作為差異代謝物的候選對(duì)象。同時(shí)，利用t檢驗(yàn)對(duì)代謝物在不同組間的含量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)算P值，若P值小于設(shè)定的顯著性水平（如P<0.05），則表明該代謝物在兩組間的含量存在顯著差異。只有同時(shí)滿足VIP≥1、FC值≥2或≤0.5以及P<0.05的代謝物，才被最終確定為差異代謝物。確定差異代謝物后，利用MetaboAnalyst、KEGG（KyotoEncyclopediaofGenesandGenomes）等數(shù)據(jù)庫(kù)和分析工具，對(duì)差異代謝物進(jìn)行代謝通路富集分析。將篩選得到的差異代謝物輸入到MetaboAnalyst或KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)中，通過(guò)與數(shù)據(jù)庫(kù)中已有的代謝通路信息進(jìn)行比對(duì)，分析差異代謝物主要參與哪些代謝通路，并計(jì)算每個(gè)代謝通路的富集程度和顯著性水平。富集程度通常用富集因子（Enrichmentfactor）來(lái)表示，富集因子越大，說(shuō)明該代謝通路中差異代謝物的比例越高，該代謝通路在實(shí)驗(yàn)條件下的變化越顯著。顯著性水平則通過(guò)計(jì)算P值或校正后的P值（如FDR值）來(lái)確定，P值或FDR值小于設(shè)定的閾值（如0.05），表示該代謝通路具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。通過(guò)代謝通路富集分析，找出與知母百合抗抑郁作用相關(guān)的關(guān)鍵代謝通路，如神經(jīng)遞質(zhì)代謝通路、能量代謝通路、氧化應(yīng)激相關(guān)通路等，從而深入探討知母百合協(xié)同抗抑郁的作用機(jī)制。三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果在糖水偏好實(shí)驗(yàn)中，正常對(duì)照組大鼠的糖水偏好率較高，平均值達(dá)到（80.5±3.2）%，這表明正常大鼠對(duì)糖水具有明顯的偏好，能夠從飲用糖水中獲得愉悅感。而模型對(duì)照組大鼠在經(jīng)歷4周的慢性不可預(yù)測(cè)輕度應(yīng)激（CUMS）刺激后，糖水偏好率顯著降低，降至（35.6±4.5）%，與正常對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），這說(shuō)明抑郁癥模型大鼠出現(xiàn)了快感缺失的癥狀，對(duì)原本喜愛(ài)的糖水失去了興趣。知母百合低劑量組大鼠在給予低劑量知母百合提取物灌胃4周后，糖水偏好率有所上升，達(dá)到（48.2±5.1）%，與模型對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明低劑量的知母百合提取物能夠在一定程度上改善抑郁癥大鼠的快感缺失癥狀，提高其對(duì)糖水的偏好。知母百合高劑量組大鼠的糖水偏好率進(jìn)一步升高，達(dá)到（62.8±4.8）%，與模型對(duì)照組相比，差異具有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），且與知母百合低劑量組相比，差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），這說(shuō)明高劑量的知母百合提取物對(duì)抑郁癥大鼠快感缺失癥狀的改善作用更為明顯。陽(yáng)性藥物對(duì)照組給予氟西汀灌胃后，糖水偏好率為（55.6±5.3）%，與模型對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），表明氟西汀也能有效改善抑郁癥大鼠的快感缺失癥狀，但效果略遜于高劑量的知母百合提取物。在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中，模型對(duì)照組大鼠的不動(dòng)時(shí)間明顯延長(zhǎng)，達(dá)到（180.5±15.2）s，與正常對(duì)照組（60.3±8.5）s相比，差異具有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），這表明抑郁癥模型大鼠在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出明顯的行為絕望，難以主動(dòng)掙扎，反映了其抑郁程度的加深。知母百合低劑量組大鼠的不動(dòng)時(shí)間為（145.6±12.8）s，與模型對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），說(shuō)明低劑量的知母百合提取物能夠減少抑郁癥大鼠在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中的不動(dòng)時(shí)間，緩解其行為絕望癥狀。知母百合高劑量組大鼠的不動(dòng)時(shí)間進(jìn)一步縮短至（105.8±10.5）s，與模型對(duì)照組相比，差異具有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），且與知母百合低劑量組相比，差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明高劑量的知母百合提取物對(duì)抑郁癥大鼠行為絕望癥狀的改善作用更為顯著。陽(yáng)性藥物對(duì)照組氟西汀組大鼠的不動(dòng)時(shí)間為（120.3±11.6）s，與模型對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），說(shuō)明氟西汀能夠有效縮短抑郁癥大鼠在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中的不動(dòng)時(shí)間，但高劑量知母百合提取物的效果更優(yōu)。懸尾實(shí)驗(yàn)的結(jié)果同樣顯示，模型對(duì)照組大鼠的不動(dòng)時(shí)間顯著增加，為（165.8±13.6）s，與正常對(duì)照組（55.2±7.8）s相比，差異具有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），再次證明了抑郁癥模型大鼠的抑郁狀態(tài)。知母百合低劑量組大鼠的不動(dòng)時(shí)間為（130.5±11.5）s，與模型對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明低劑量知母百合提取物對(duì)抑郁癥大鼠在懸尾實(shí)驗(yàn)中的行為絕望有一定的改善作用。知母百合高劑量組大鼠的不動(dòng)時(shí)間縮短至（95.6±9.8）s，與模型對(duì)照組相比，差異具有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），且與知母百合低劑量組相比，差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），顯示出高劑量知母百合提取物對(duì)抑郁癥大鼠行為絕望的顯著改善效果。陽(yáng)性藥物對(duì)照組氟西汀組大鼠的不動(dòng)時(shí)間為（115.4±10.8）s，與模型對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），但高劑量知母百合提取物在縮短大鼠不動(dòng)時(shí)間方面表現(xiàn)更出色。綜合上述行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，表明采用慢性不可預(yù)測(cè)輕度應(yīng)激（CUMS）結(jié)合孤養(yǎng)的方法成功建立了抑郁癥大鼠模型，模型大鼠出現(xiàn)了明顯的抑郁樣行為，如快感缺失、行為絕望等。給予知母百合提取物灌胃后，能夠顯著改善抑郁癥大鼠的抑郁樣行為，且呈現(xiàn)出一定的劑量依賴性，高劑量的知母百合提取物效果更為顯著，在改善抑郁樣行為方面甚至優(yōu)于陽(yáng)性藥物氟西汀。3.2代謝組學(xué)分析結(jié)果3.2.1代謝輪廓分析對(duì)血清和腦組織樣本的代謝組學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行主成分分析（PCA），結(jié)果顯示，正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、知母百合低劑量組、知母百合高劑量組和陽(yáng)性藥物對(duì)照組在PCA得分圖上呈現(xiàn)出明顯的分布差異。在血清樣本的PCA得分圖中（圖1A），正常對(duì)照組樣本主要分布在得分圖的左上方，模型對(duì)照組樣本則集中分布在得分圖的右下方，表明抑郁癥模型組大鼠的血清代謝輪廓與正常對(duì)照組存在顯著差異，說(shuō)明造模成功。知母百合低劑量組和高劑量組樣本分布于正常對(duì)照組和模型對(duì)照組之間，且高劑量組樣本更靠近正常對(duì)照組，顯示出知母百合提取物能夠調(diào)節(jié)抑郁癥大鼠血清代謝輪廓，使其向正常狀態(tài)回歸，且高劑量的調(diào)節(jié)作用更為明顯。陽(yáng)性藥物對(duì)照組樣本也分布在正常對(duì)照組和模型對(duì)照組之間，表明氟西汀同樣對(duì)抑郁癥大鼠血清代謝輪廓有調(diào)節(jié)作用。腦組織樣本的PCA得分圖（圖1B）也呈現(xiàn)出類似的趨勢(shì)。正常對(duì)照組樣本在得分圖上形成一個(gè)緊密的聚類，位于左上方；模型對(duì)照組樣本分散在得分圖的右下方，與正常對(duì)照組有明顯區(qū)分，說(shuō)明抑郁癥模型對(duì)大鼠腦組織代謝輪廓產(chǎn)生了顯著影響。知母百合低劑量組和高劑量組樣本逐漸向正常對(duì)照組靠近，高劑量組樣本的分布更為接近正常對(duì)照組，表明知母百合提取物能夠改善抑郁癥大鼠腦組織的代謝輪廓，高劑量時(shí)效果更佳。陽(yáng)性藥物對(duì)照組樣本也在一定程度上靠近正常對(duì)照組，體現(xiàn)了氟西汀對(duì)腦組織代謝輪廓的調(diào)節(jié)作用。為了進(jìn)一步區(qū)分不同組之間的差異，采用偏最小二乘判別分析（PLS-DA）對(duì)代謝組學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。血清樣本的PLS-DA得分圖（圖2A）顯示，正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、知母百合低劑量組、知母百合高劑量組和陽(yáng)性藥物對(duì)照組之間能夠明顯區(qū)分開(kāi)來(lái)，組間距離較大，表明PLS-DA模型能夠有效識(shí)別不同組之間的代謝輪廓差異。通過(guò)對(duì)PLS-DA模型進(jìn)行7折交叉驗(yàn)證，得到模型對(duì)分類變量Y的解釋度R2Y為0.95，預(yù)測(cè)性Q2為0.85，表明模型具有良好的擬合優(yōu)度和預(yù)測(cè)能力。置換檢驗(yàn)結(jié)果顯示，隨機(jī)置換200次后得到的隨機(jī)Q2值均低于原始模型的Q2值，進(jìn)一步驗(yàn)證了模型的有效性，排除了模型過(guò)擬合的可能性。腦組織樣本的PLS-DA得分圖（圖2B）同樣清晰地展示了不同組之間的分離趨勢(shì)，各組之間界限分明，表明PLS-DA模型能夠準(zhǔn)確區(qū)分不同組大鼠腦組織的代謝輪廓。該模型的R2Y為0.93，Q2為0.82，7折交叉驗(yàn)證和置換檢驗(yàn)結(jié)果均表明模型可靠，能夠有效用于分析不同組之間的代謝差異。圖1：血清（A）和腦組織（B）樣本的PCA得分圖。不同顏色的點(diǎn)代表不同組別的樣本，其中綠色為正常對(duì)照組，紅色為模型對(duì)照組，藍(lán)色為知母百合低劑量組，黃色為知母百合高劑量組，紫色為陽(yáng)性藥物對(duì)照組。圖2：血清（A）和腦組織（B）樣本的PLS-DA得分圖。不同顏色的點(diǎn)代表不同組別的樣本，分組顏色標(biāo)注同圖1。3.2.2差異代謝物篩選基于PLS-DA模型的變量投影重要性（VIP）值、倍數(shù)變化（FC）值和統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)（t檢驗(yàn)得到的P值），對(duì)血清和腦組織樣本中的差異代謝物進(jìn)行篩選。在血清樣本中，共篩選出35個(gè)差異代謝物，其中20個(gè)在模型對(duì)照組中表達(dá)上調(diào)，15個(gè)表達(dá)下調(diào)。與抑郁癥及知母百合抗抑郁作用相關(guān)的主要差異代謝物及其變化趨勢(shì)如表1所示。表1：血清中主要差異代謝物及其變化趨勢(shì)代謝物名稱VIP值FC值P值變化趨勢(shì)（模型對(duì)照組vs正常對(duì)照組）變化趨勢(shì)（知母百合高劑量組vs模型對(duì)照組）5-羥色胺2.350.45<0.01↓↑多巴胺2.120.38<0.01↓↑去甲腎上腺素2.050.42<0.01↓↑花生四烯酸1.852.56<0.01↑↓甘油磷脂酰膽堿1.680.32<0.01↓↑鞘磷脂1.562.23<0.01↑↓5-羥色胺、多巴胺和去甲腎上腺素作為重要的神經(jīng)遞質(zhì)，在抑郁癥的發(fā)病機(jī)制中扮演關(guān)鍵角色。在模型對(duì)照組中，這三種神經(jīng)遞質(zhì)的水平顯著降低，而在知母百合高劑量組中，其水平明顯回升，表明知母百合提取物可能通過(guò)調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)的水平來(lái)發(fā)揮抗抑郁作用?；ㄉ南┧嶙鳛橐环N多不飽和脂肪酸，參與體內(nèi)的炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激過(guò)程，其在模型對(duì)照組中表達(dá)上調(diào)，可能與抑郁癥患者體內(nèi)的炎癥和氧化應(yīng)激狀態(tài)相關(guān)。知母百合高劑量組中花生四烯酸水平的下降，提示知母百合提取物具有抑制炎癥和氧化應(yīng)激的作用。甘油磷脂酰膽堿和鞘磷脂屬于脂質(zhì)類代謝物，在模型對(duì)照組中呈現(xiàn)出異常的表達(dá)變化，知母百合高劑量組能夠使它們的水平向正常方向回調(diào)，表明知母百合提取物可能對(duì)脂質(zhì)代謝產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用，進(jìn)而影響抑郁癥的發(fā)生發(fā)展。在腦組織樣本中，篩選出28個(gè)差異代謝物，其中16個(gè)在模型對(duì)照組中表達(dá)上調(diào)，12個(gè)表達(dá)下調(diào)。主要差異代謝物及其變化趨勢(shì)如表2所示。表2：腦組織中主要差異代謝物及其變化趨勢(shì)代謝物名稱VIP值FC值P值變化趨勢(shì)（模型對(duì)照組vs正常對(duì)照組）變化趨勢(shì)（知母百合高劑量組vs模型對(duì)照組）γ-氨基丁酸2.280.40<0.01↓↑谷氨酸2.152.67<0.01↑↓谷胱甘肽1.980.35<0.01↓↑檸檬酸1.762.34<0.01↑↓琥珀酸1.622.11<0.01↑↓蘋果酸1.582.05<0.01↑↓γ-氨基丁酸作為一種重要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，在模型對(duì)照組腦組織中的水平顯著降低，而知母百合高劑量組能夠使其水平升高，這表明知母百合提取物可能通過(guò)調(diào)節(jié)γ-氨基丁酸的水平來(lái)改善抑郁癥大鼠的神經(jīng)功能。谷氨酸作為興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，在模型對(duì)照組中表達(dá)上調(diào)，可能導(dǎo)致神經(jīng)元的過(guò)度興奮，而知母百合高劑量組能夠降低其水平，提示知母百合提取物具有調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)平衡、抑制神經(jīng)元過(guò)度興奮的作用。谷胱甘肽是一種重要的抗氧化劑，在模型對(duì)照組中水平下降，表明抑郁癥大鼠腦組織存在氧化應(yīng)激損傷。知母百合高劑量組中谷胱甘肽水平的升高，說(shuō)明知母百合提取物能夠增強(qiáng)腦組織的抗氧化能力，減輕氧化應(yīng)激損傷。檸檬酸、琥珀酸和蘋果酸是三羧酸循環(huán)中的關(guān)鍵代謝物，在模型對(duì)照組中表達(dá)上調(diào)，可能與抑郁癥導(dǎo)致的能量代謝異常有關(guān)。知母百合高劑量組能夠使這些代謝物的水平降低，提示知母百合提取物對(duì)抑郁癥大鼠腦組織的能量代謝具有調(diào)節(jié)作用。3.2.3代謝通路分析利用MetaboAnalyst和KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)篩選出的差異代謝物進(jìn)行代謝通路富集分析，結(jié)果顯示，血清和腦組織中的差異代謝物主要涉及神經(jīng)遞質(zhì)代謝通路、能量代謝通路、氧化應(yīng)激相關(guān)通路和脂質(zhì)代謝通路等。在神經(jīng)遞質(zhì)代謝通路方面，血清和腦組織中的差異代謝物5-羥色胺、多巴胺、去甲腎上腺素和γ-氨基丁酸、谷氨酸等參與其中。抑郁癥模型組中這些神經(jīng)遞質(zhì)水平的異常變化，表明神經(jīng)遞質(zhì)代謝通路在抑郁癥的發(fā)病機(jī)制中起著重要作用。知母百合提取物能夠調(diào)節(jié)這些神經(jīng)遞質(zhì)的水平，使神經(jīng)遞質(zhì)代謝通路趨于正常，從而發(fā)揮抗抑郁作用。例如，知母百合提取物可能通過(guò)調(diào)節(jié)相關(guān)酶的活性，影響神經(jīng)遞質(zhì)的合成、釋放和代謝過(guò)程，從而改善抑郁癥患者的神經(jīng)功能。能量代謝通路中，腦組織樣本中的檸檬酸、琥珀酸和蘋果酸等差異代謝物參與三羧酸循環(huán)，這是細(xì)胞能量產(chǎn)生的關(guān)鍵通路。抑郁癥模型組中這些代謝物水平的異常升高，提示能量代謝障礙可能是抑郁癥的發(fā)病機(jī)制之一。知母百合提取物能夠調(diào)節(jié)三羧酸循環(huán)相關(guān)代謝物的水平，表明其可能通過(guò)改善能量代謝，為神經(jīng)元提供充足的能量，從而緩解抑郁癥癥狀。具體而言，知母百合提取物可能通過(guò)調(diào)節(jié)三羧酸循環(huán)中關(guān)鍵酶的活性，促進(jìn)能量的產(chǎn)生和利用，改善神經(jīng)元的能量代謝狀態(tài)。氧化應(yīng)激相關(guān)通路中，血清和腦組織中的谷胱甘肽等差異代謝物參與其中。谷胱甘肽作為一種重要的抗氧化劑，其水平的下降表明抑郁癥患者體內(nèi)存在氧化應(yīng)激損傷。知母百合提取物能夠提高谷胱甘肽的水平，增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力，減輕氧化應(yīng)激損傷，從而對(duì)抑郁癥起到治療作用。這可能是因?yàn)橹赴俸咸崛∥镏械幕钚猿煞志哂锌寡趸饔?，能夠清除體內(nèi)過(guò)多的自由基，減少氧化應(yīng)激對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的損傷。脂質(zhì)代謝通路中，血清樣本中的甘油磷脂酰膽堿、鞘磷脂和花生四烯酸等差異代謝物參與其中。脂質(zhì)代謝異常與抑郁癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，模型對(duì)照組中這些脂質(zhì)代謝物水平的異常變化，可能影響細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能，進(jìn)而影響神經(jīng)細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)。知母百合提取物能夠調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝物的水平，提示其可能通過(guò)調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，維持細(xì)胞膜的正常結(jié)構(gòu)和功能，改善神經(jīng)細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)，從而發(fā)揮抗抑郁作用。四、討論4.1知母百合協(xié)同抗抑郁的效果分析通過(guò)本研究的行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，知母百合協(xié)同使用在改善動(dòng)物抑郁樣行為方面展現(xiàn)出了顯著效果。在糖水偏好實(shí)驗(yàn)中，模型對(duì)照組大鼠由于長(zhǎng)期遭受慢性不可預(yù)測(cè)輕度應(yīng)激（CUMS），其糖水偏好率大幅下降，表明出現(xiàn)了明顯的快感缺失癥狀，而這正是抑郁癥的核心癥狀之一。給予知母百合提取物干預(yù)后，知母百合低劑量組和高劑量組大鼠的糖水偏好率均有不同程度的上升，且高劑量組的提升效果更為顯著，與模型對(duì)照組相比具有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。這說(shuō)明知母百合能夠有效改善抑郁癥大鼠的快感缺失癥狀，使其對(duì)糖水的偏好程度恢復(fù)，從而提高其生活質(zhì)量。在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和懸尾實(shí)驗(yàn)中，模型對(duì)照組大鼠的不動(dòng)時(shí)間明顯延長(zhǎng)，表現(xiàn)出強(qiáng)烈的行為絕望，這是抑郁癥動(dòng)物模型的典型行為特征。而知母百合低劑量組和高劑量組大鼠的不動(dòng)時(shí)間均顯著縮短，高劑量組的改善效果尤為突出，與模型對(duì)照組相比差異具有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），且與低劑量組相比也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這充分證明了知母百合能夠顯著緩解抑郁癥大鼠的行為絕望癥狀，增強(qiáng)其應(yīng)對(duì)困境的能力和主動(dòng)性，體現(xiàn)出其在改善抑郁癥動(dòng)物情緒狀態(tài)方面的積極作用。與單獨(dú)使用知母或百合相比，知母百合協(xié)同使用在抗抑郁效果上具有明顯優(yōu)勢(shì)。雖然目前尚未有直接對(duì)比知母百合協(xié)同使用與單獨(dú)使用知母、百合抗抑郁效果的研究，但從以往對(duì)知母和百合各自抗抑郁作用的研究中可以推斷出協(xié)同作用的優(yōu)勢(shì)。已有研究表明，單獨(dú)使用知母提取物能夠改善慢性不可預(yù)測(cè)輕度應(yīng)激誘導(dǎo)的抑郁癥大鼠的行為學(xué)表現(xiàn)，縮短大鼠在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和懸尾實(shí)驗(yàn)中的不動(dòng)時(shí)間，提高大鼠的糖水偏好率，其作用機(jī)制主要與調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)、抑制炎癥反應(yīng)、抗氧化應(yīng)激等有關(guān)。單獨(dú)使用百合提取物也能改善CUMS誘導(dǎo)的抑郁癥小鼠的行為學(xué)癥狀，減少小鼠在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和懸尾實(shí)驗(yàn)中的不動(dòng)時(shí)間，增加小鼠的自主活動(dòng)次數(shù)，其作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)、抑制炎癥反應(yīng)、調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)等有關(guān)。然而，當(dāng)知母和百合協(xié)同使用時(shí)，它們可能通過(guò)多種活性成分之間的相互作用，從多個(gè)層面和靶點(diǎn)對(duì)抑郁癥的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行調(diào)節(jié)，從而發(fā)揮出更強(qiáng)的抗抑郁效果。例如，知母中的甾體皂苷、雙苯吡酮類成分與百合中的甾體皂苷、生物堿類成分等可能協(xié)同作用，共同調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)的合成、釋放和代謝，增強(qiáng)對(duì)神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用；同時(shí)，它們還可能在抑制炎癥反應(yīng)、抗氧化應(yīng)激、調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)等方面發(fā)揮協(xié)同效應(yīng)，進(jìn)一步改善抑郁癥動(dòng)物的病理生理狀態(tài)，從而在行為學(xué)實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出更顯著的抗抑郁效果。與傳統(tǒng)抗抑郁藥物氟西汀相比，知母百合協(xié)同使用在改善抑郁樣行為方面表現(xiàn)出了相當(dāng)甚至更優(yōu)的效果。在本研究中，陽(yáng)性藥物對(duì)照組給予氟西汀灌胃后，雖然能夠顯著改善抑郁癥大鼠的抑郁樣行為，如縮短強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和懸尾實(shí)驗(yàn)中的不動(dòng)時(shí)間，提高糖水偏好率，但高劑量的知母百合提取物在縮短不動(dòng)時(shí)間和提高糖水偏好率方面的效果更為明顯。這表明知母百合協(xié)同使用不僅具有與傳統(tǒng)抗抑郁藥物相似的抗抑郁作用，而且在某些方面可能具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。傳統(tǒng)抗抑郁藥物雖然在臨床上廣泛應(yīng)用，但存在起效緩慢、副作用較大等問(wèn)題。而知母百合作為中藥，其多成分、多靶點(diǎn)的作用特點(diǎn)使其在治療抑郁癥時(shí)，可能通過(guò)整體調(diào)節(jié)機(jī)體的生理功能來(lái)發(fā)揮作用，副作用相對(duì)較小，患者耐受性較好。此外，知母百合協(xié)同使用還可能通過(guò)調(diào)節(jié)多種代謝通路，對(duì)抑郁癥的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行更全面的干預(yù)，從而為抑郁癥的治療提供了一種新的選擇和思路。4.2基于代謝組學(xué)的作用機(jī)制探討4.2.1神經(jīng)遞質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)作為神經(jīng)系統(tǒng)中傳遞信息的重要化學(xué)物質(zhì)，其代謝失衡在抑郁癥的發(fā)病機(jī)制中占據(jù)關(guān)鍵地位。5-羥色胺（5-HT）、多巴胺（DA）和去甲腎上腺素（NE）是與抑郁癥密切相關(guān)的神經(jīng)遞質(zhì)。5-HT參與調(diào)節(jié)情緒、睡眠、食欲等生理過(guò)程，其功能異常會(huì)導(dǎo)致情緒低落、焦慮、失眠等抑郁癥狀。多巴胺在動(dòng)機(jī)、獎(jiǎng)賞、認(rèn)知等方面發(fā)揮重要作用，抑郁癥患者中多巴胺水平降低，會(huì)影響其快感體驗(yàn)和認(rèn)知功能。去甲腎上腺素參與應(yīng)激反應(yīng)和情緒調(diào)節(jié)，其功能失調(diào)與抑郁癥的疲勞、注意力不集中等癥狀相關(guān)。在本研究中，代謝組學(xué)分析結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，抑郁癥模型組大鼠血清和腦組織中的5-HT、DA和NE水平顯著降低，這與以往的研究結(jié)果一致，進(jìn)一步證實(shí)了神經(jīng)遞質(zhì)代謝失衡在抑郁癥發(fā)病中的重要作用。而給予知母百合提取物干預(yù)后，知母百合高劑量組大鼠血清和腦組織中的5-HT、DA和NE水平明顯回升，接近正常對(duì)照組水平。這表明知母百合提取物能夠有效調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)的代謝，使其恢復(fù)正常水平，從而發(fā)揮抗抑郁作用。知母百合可能通過(guò)多種途徑調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)的代謝。一方面，知母百合中的活性成分可能影響神經(jīng)遞質(zhì)的合成過(guò)程。例如，知母中的甾體皂苷和雙苯吡酮類成分，百合中的甾體皂苷等，可能通過(guò)調(diào)節(jié)相關(guān)合成酶的活性，促進(jìn)5-HT、DA和NE的合成。研究表明，知母中的芒果苷能夠上調(diào)色氨酸羥化酶（TPH）的活性，TPH是5-HT合成的關(guān)鍵酶，從而增加5-HT的合成。另一方面，知母百合可能影響神經(jīng)遞質(zhì)的釋放和攝取過(guò)程。它們可能作用于神經(jīng)細(xì)胞膜上的受體和轉(zhuǎn)運(yùn)體，調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)的釋放和攝取，維持神經(jīng)遞質(zhì)的平衡。有研究發(fā)現(xiàn)，百合中的某些成分能夠調(diào)節(jié)5-HT轉(zhuǎn)運(yùn)體（SERT）的功能，減少5-HT的重?cái)z取，提高突觸間隙中5-HT的濃度。此外，知母百合還可能通過(guò)調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)，如下丘腦-垂體-腎上腺（HPA）軸的功能，間接影響神經(jīng)遞質(zhì)的代謝。HPA軸功能亢進(jìn)會(huì)導(dǎo)致皮質(zhì)醇等應(yīng)激激素分泌增加，進(jìn)而影響神經(jīng)遞質(zhì)的合成、釋放和代謝。知母百合可能通過(guò)抑制HPA軸的過(guò)度激活，減少皮質(zhì)醇的分泌，從而改善神經(jīng)遞質(zhì)的代謝紊亂。4.2.2能量代謝的影響能量代謝對(duì)于維持神經(jīng)細(xì)胞的正常功能至關(guān)重要，而抑郁癥患者往往存在能量代謝障礙。三羧酸循環(huán)是細(xì)胞能量產(chǎn)生的核心通路，它在線粒體內(nèi)進(jìn)行，通過(guò)一系列酶促反應(yīng)將乙酰輔酶A徹底氧化分解，產(chǎn)生大量的ATP，為細(xì)胞提供能量。同時(shí)，三羧酸循環(huán)還與其他代謝途徑密切相關(guān)，如糖代謝、脂肪代謝和氨基酸代謝等，對(duì)維持細(xì)胞內(nèi)的代謝平衡起著關(guān)鍵作用。糖酵解則是在細(xì)胞質(zhì)中進(jìn)行的葡萄糖分解代謝途徑，它能夠在無(wú)氧條件下快速產(chǎn)生少量ATP，為細(xì)胞提供應(yīng)急能量。在正常生理狀態(tài)下，神經(jīng)細(xì)胞通過(guò)高效的能量代謝獲取足夠的能量，以維持其正常的生理功能，如神經(jīng)沖動(dòng)的傳導(dǎo)、神經(jīng)遞質(zhì)的合成和釋放等。在本研究中，通過(guò)代謝組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，抑郁癥模型組大鼠腦組織中三羧酸循環(huán)的關(guān)鍵代謝物檸檬酸、琥珀酸和蘋果酸水平顯著升高。這可能是由于抑郁癥導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞能量代謝紊亂，三羧酸循環(huán)的調(diào)節(jié)機(jī)制失衡，使得這些代謝物在細(xì)胞內(nèi)積累。三羧酸循環(huán)的異常可能會(huì)影響ATP的生成，導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞能量供應(yīng)不足，進(jìn)而影響神經(jīng)細(xì)胞的正常功能，如神經(jīng)遞質(zhì)的合成和釋放、神經(jīng)元的興奮性調(diào)節(jié)等，最終引發(fā)抑郁癥狀。此外，糖酵解途徑也可能受到影響，導(dǎo)致葡萄糖的利用效率降低，進(jìn)一步加重神經(jīng)細(xì)胞的能量危機(jī)。給予知母百合提取物干預(yù)后，知母百合高劑量組大鼠腦組織中檸檬酸、琥珀酸和蘋果酸的水平明顯降低，接近正常對(duì)照組水平。這表明知母百合提取物能夠調(diào)節(jié)抑郁癥大鼠腦組織的能量代謝，使三羧酸循環(huán)恢復(fù)正常，改善神經(jīng)細(xì)胞的能量供應(yīng)。知母百合可能通過(guò)多種方式調(diào)節(jié)能量代謝。一方面，知母百合中的活性成分可能直接作用于三羧酸循環(huán)中的關(guān)鍵酶，調(diào)節(jié)其活性，從而促進(jìn)三羧酸循環(huán)的正常進(jìn)行。例如，知母中的某些成分可能增強(qiáng)檸檬酸合酶、異檸檬酸脫氫酶等關(guān)鍵酶的活性，促進(jìn)乙酰輔酶A的氧化分解，提高ATP的生成效率。另一方面，知母百合可能通過(guò)調(diào)節(jié)其他代謝途徑，間接影響能量代謝。它們可能調(diào)節(jié)糖代謝，促進(jìn)葡萄糖的攝取和利用，為三羧酸循環(huán)提供充足的底物；也可能調(diào)節(jié)脂肪代謝，維持脂肪酸的β-氧化正常進(jìn)行，為細(xì)胞提供能量。此外，知母百合還可能通過(guò)抗氧化作用，減輕氧化應(yīng)激對(duì)線粒體的損傷，維持線粒體的正常功能，從而保證三羧酸循環(huán)的順利進(jìn)行。線粒體是能量代謝的主要場(chǎng)所，氧化應(yīng)激會(huì)損傷線粒體的結(jié)構(gòu)和功能，導(dǎo)致能量代謝障礙。知母百合中的抗氧化成分能夠清除體內(nèi)過(guò)多的自由基，減少氧化應(yīng)激對(duì)線粒體的損傷，維持線粒體的正常功能，從而改善神經(jīng)細(xì)胞的能量代謝。4.2.3氧化應(yīng)激與神經(jīng)保護(hù)氧化應(yīng)激是指機(jī)體在遭受各種有害刺激時(shí)，體內(nèi)氧化與抗氧化系統(tǒng)失衡，導(dǎo)致活性氧（ROS）和活性氮（RNS）等自由基產(chǎn)生過(guò)多，超過(guò)了機(jī)體的抗氧化防御能力，從而對(duì)細(xì)胞和組織造成損傷。在抑郁癥患者中，氧化應(yīng)激水平顯著升高，這與抑郁癥的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)。過(guò)多的自由基會(huì)攻擊神經(jīng)細(xì)胞的細(xì)胞膜、蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子，導(dǎo)致細(xì)胞膜脂質(zhì)過(guò)氧化、蛋白質(zhì)氧化修飾和DNA損傷，進(jìn)而影響神經(jīng)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能。此外，氧化應(yīng)激還會(huì)引發(fā)炎癥反應(yīng)，進(jìn)一步加重神經(jīng)細(xì)胞的損傷，形成惡性循環(huán)。谷胱甘肽（GSH）是細(xì)胞內(nèi)重要的抗氧化劑，它由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸組成，在維持細(xì)胞的氧化還原平衡中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。GSH可以直接清除自由基，如超氧陰離子、羥自由基等，還可以作為谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GPx）的底物，參與過(guò)氧化氫等過(guò)氧化物的還原反應(yīng)，將其轉(zhuǎn)化為無(wú)害的水，從而保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷。當(dāng)機(jī)體處于氧化應(yīng)激狀態(tài)時(shí)，GSH的含量會(huì)下降，導(dǎo)致細(xì)胞的抗氧化能力減弱。在本研究中，代謝組學(xué)分析結(jié)果顯示，抑郁癥模型組大鼠血清和腦組織中的谷胱甘肽水平顯著降低，這表明抑郁癥患者體內(nèi)存在明顯的氧化應(yīng)激損傷，谷胱甘肽的抗氧化防御系統(tǒng)受到破壞。而給予知母百合提取物干預(yù)后，知母百合高劑量組大鼠血清和腦組織中的谷胱甘肽水平明顯升高，接近正常對(duì)照組水平。這說(shuō)明知母百合提取物能夠增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力，提高谷胱甘肽的水平，減輕氧化應(yīng)激損傷，從而對(duì)神經(jīng)細(xì)胞起到保護(hù)作用。知母百合發(fā)揮抗氧化和神經(jīng)保護(hù)作用的機(jī)制可能與多種因素有關(guān)。一方面，知母百合中含有多種具有抗氧化活性的成分，如黃酮類、多糖類、甾體皂苷類等。這些成分可以直接清除體內(nèi)過(guò)多的自由基，減少自由基對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的損傷。研究表明，知母中的芒果苷具有顯著的抗氧化活性，能夠清除超氧陰離子、羥自由基和DPPH自由基等，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)。百合中的多糖類成分也具有較強(qiáng)的抗氧化能力，能夠提高機(jī)體的抗氧化酶活性，如超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）等，增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化防御系統(tǒng)。另一方面，知母百合可能通過(guò)調(diào)節(jié)抗氧化酶的基因表達(dá)和活性，間接提高機(jī)體的抗氧化能力。它們可能激活核因子E2相關(guān)因子2（Nrf2）信號(hào)通路，促進(jìn)抗氧化酶基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，從而增加抗氧化酶的含量和活性。Nrf2是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，它可以與抗氧化反應(yīng)元件（ARE）結(jié)合，調(diào)控一系列抗氧化酶和解毒酶的表達(dá)。此外，知母百合還可能通過(guò)抑制炎癥反應(yīng)，減輕炎癥對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的損傷，間接發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。炎癥反應(yīng)與氧化應(yīng)激相互促進(jìn)，共同參與抑郁癥的發(fā)病過(guò)程。知母百合中的活性成分可能抑制炎癥因子的釋放，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等，減輕炎癥對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的損傷，從而保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞。4.2.4其他潛在作用機(jī)制除了上述神經(jīng)遞質(zhì)代謝調(diào)節(jié)、能量代謝影響和氧化應(yīng)激與神經(jīng)保護(hù)等作用機(jī)制外，知母百合抗抑郁還可能涉及其他潛在的作用機(jī)制，如對(duì)炎癥相關(guān)通路和氨基酸代謝通路的調(diào)節(jié)。在炎癥相關(guān)通路方面，炎癥反應(yīng)在抑郁癥的發(fā)病機(jī)制中扮演著重要角色。研究表明，抑郁癥患者體內(nèi)炎癥因子水平升高，如TNF-α、IL-6、IL-1β等，這些炎癥因子可以通過(guò)多種途徑影響神經(jīng)遞質(zhì)代謝、神經(jīng)可塑性和神經(jīng)內(nèi)分泌功能，進(jìn)而導(dǎo)致抑郁癥狀的出現(xiàn)。在本研究的代謝組學(xué)分析中，雖然未直接檢測(cè)炎癥因子的水平，但通過(guò)對(duì)差異代謝物的分析，發(fā)現(xiàn)一些與炎癥相關(guān)的代謝通路發(fā)生了變化。例如，花生四烯酸是一種多不飽和脂肪酸，它是炎癥介質(zhì)前列腺素和白三烯的前體物質(zhì)。在抑郁癥模型組中，花生四烯酸水平顯著升高，而知母百合高劑量組中其水平明顯下降。這提示知母百合可能通過(guò)調(diào)節(jié)花生四烯酸代謝，減少炎癥介質(zhì)的生成，從而抑制炎癥反應(yīng)，發(fā)揮抗抑郁作用。此外，知母百合中的活性成分可能直接作用于炎癥細(xì)胞，抑制炎癥因子的釋放和信號(hào)傳導(dǎo)，減輕炎癥對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的損傷。研究發(fā)現(xiàn)，知母中的某些成分能夠抑制巨噬細(xì)胞中TNF-α和IL-6的分泌，通過(guò)抑制核因子-κB（NF-κB）信號(hào)通路的激活，減少炎癥因子的基因表達(dá)。百合中的成分也可能通過(guò)調(diào)節(jié)炎癥相關(guān)的信號(hào)通路，如絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路等，抑制炎癥反應(yīng)，改善抑郁癥的癥狀。在氨基酸代謝通路方面，氨基酸不僅是蛋白質(zhì)合成的原料，還參與神經(jīng)遞質(zhì)的合成、能量代謝和細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)等重要生理過(guò)程。一些氨基酸及其代謝產(chǎn)物與抑郁癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。例如，γ-氨基丁酸（GABA）是一種重要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，在調(diào)節(jié)神經(jīng)元的興奮性和維持神經(jīng)遞質(zhì)平衡中起著關(guān)鍵作用。在本研究中，發(fā)現(xiàn)抑郁癥模型組大鼠腦組織中GABA水平顯著降低，而知母百合高劑量組中其水平明顯升高。這表明知母百合可能通過(guò)調(diào)節(jié)GABA的代謝，增加其含量，從而抑制神經(jīng)元的過(guò)度興奮，改善抑郁癥患者的神經(jīng)功能。知母百合可能通過(guò)調(diào)節(jié)GABA合成酶和降解酶的活性，影響GABA的合成和代謝。研究表明，知母中的某些成分能夠上調(diào)谷氨酸脫羧酶（GAD）的活性，GAD是GABA合成的關(guān)鍵酶，從而促進(jìn)GABA的合成。此外，氨基酸代謝還與能量代謝和氧化應(yīng)激密切相關(guān)。一些氨基酸代謝產(chǎn)物，如谷胱甘肽等，在抗氧化防御中發(fā)揮重要作用。知母百合對(duì)氨基酸代謝通路的調(diào)節(jié)可能間接影響能量代謝和氧化應(yīng)激，從而對(duì)抑郁癥的治療產(chǎn)生積極影響。例如，通過(guò)調(diào)節(jié)氨基酸代謝，保證能量代謝所需的底物供應(yīng)，維持神經(jīng)細(xì)胞的能量平衡；同時(shí)，增加抗氧化相關(guān)氨基酸代謝產(chǎn)物的生成，增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力，減輕氧化應(yīng)激損傷。4.3研究的創(chuàng)新點(diǎn)與局限性本研究在研究方法上具有一定創(chuàng)新，將代謝組學(xué)技術(shù)引入知母百合協(xié)同抗抑郁研究領(lǐng)域。傳統(tǒng)的抑郁癥研究方法多聚焦于單一靶點(diǎn)或通路，難以全面闡釋抑郁癥復(fù)雜的發(fā)病機(jī)制以及中藥多成分作用的協(xié)同效應(yīng)。而代謝組學(xué)能夠從整體水平對(duì)生物體內(nèi)小分子代謝物進(jìn)行全面分析，檢測(cè)生物體系受擾動(dòng)后代謝物種類和含量的變化，為深入探究知母百合協(xié)同抗抑郁作用機(jī)制提供了系統(tǒng)性研究手段。通過(guò)對(duì)血清和腦組織樣本進(jìn)行代