shRNA管理師初級考試試卷與答案一、單項選擇題（每題2分，共10題）1.shRNA的中文名稱是（）A.小干擾RNAB.短發(fā)夾RNAC.微小RNA答案：B2.shRNA通常作用于（）A.DNAB.mRNAC.蛋白質(zhì)答案：B3.構(gòu)建shRNA載體常用的工具酶是（）A.淀粉酶B.限制性內(nèi)切酶C.蛋白酶答案：B4.shRNA設(shè)計時，一般序列長度為（）A.19-21bpB.25-30bpC.35-40bp答案：A5.以下哪種細胞適合進行shRNA轉(zhuǎn)染（）A.紅細胞B.細菌C.哺乳動物細胞答案：C6.檢測shRNA干擾效果常用的技術(shù)是（）A.凝膠成像B.熒光定量PCRC.蛋白質(zhì)電泳答案：B7.shRNA導入細胞的方法不包括（）A.脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染B.電穿孔C.離心法答案：C8.載體中標記shRNA表達的元件是（）A.啟動子B.終止子C.增強子答案：A9.設(shè)計shRNA時要避免的是（）A.與其他基因有同源性B.富含A-T堿基C.形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)答案：A10.shRNA干擾的主要機制是（）A.降解mRNAB.抑制轉(zhuǎn)錄C.抑制翻譯答案：A二、多項選擇題（每題2分，共10題）1.以下屬于shRNA優(yōu)點的有（）A.干擾效果穩(wěn)定B.操作簡單C.可特異性沉默基因答案：ABC2.構(gòu)建shRNA載體需要的材料有（）A.質(zhì)粒B.引物C.連接酶答案：ABC3.影響shRNA轉(zhuǎn)染效率的因素有（）A.細胞狀態(tài)B.轉(zhuǎn)染試劑用量C.培養(yǎng)溫度答案：ABC4.檢測shRNA干擾效果可從哪些水平檢測（）A.mRNA水平B.蛋白質(zhì)水平C.DNA水平答案：AB5.設(shè)計shRNA序列時要考慮（）A.堿基組成B.二級結(jié)構(gòu)C.與目標基因互補性答案：ABC6.shRNA可以通過哪些載體導入細胞（）A.質(zhì)粒載體B.病毒載體C.脂質(zhì)體載體答案：ABC7.以下哪些技術(shù)可用于shRNA研究（）A.WesternblotB.ELISAC.RNA測序答案：ABC8.選擇細胞進行shRNA實驗時要考慮（）A.細胞來源B.細胞生長特性C.細胞對轉(zhuǎn)染的耐受性答案：ABC9.shRNA干擾實驗中對照設(shè)置包括（）A.陰性對照B.陽性對照C.空白對照答案：ABC10.保存shRNA相關(guān)樣本需要注意（）A.溫度B.防止污染C.光照答案：ABC三、判斷題（每題2分，共10題）1.shRNA可以直接作用于DNA進行基因沉默。（×）2.構(gòu)建shRNA載體不需要考慮載體的酶切位點。（×）3.所有細胞都適合用相同方法導入shRNA。（×）4.shRNA序列設(shè)計越短干擾效果越好。（×）5.熒光定量PCR能準確檢測shRNA對mRNA的干擾程度。（√）6.轉(zhuǎn)染shRNA時，轉(zhuǎn)染試劑濃度越高越好。（×）7.shRNA干擾是一種永久性的基因沉默方式。（×）8.設(shè)計shRNA時不需要考慮其在細胞內(nèi)的穩(wěn)定性。（×）9.病毒載體比質(zhì)粒載體更適合導入shRNA。（×）10.可以通過觀察細胞表型變化來初步判斷shRNA干擾效果。（√）四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述shRNA干擾基因表達的基本原理。答案：shRNA進入細胞后，被細胞內(nèi)的酶加工成siRNA，siRNA與相關(guān)蛋白形成RNA誘導沉默復合體（RISC），RISC中的siRNA識別并結(jié)合與其互補的靶mRNA，然后在核酸酶作用下降解靶mRNA，從而實現(xiàn)對特定基因表達的干擾。2.構(gòu)建shRNA載體的主要步驟有哪些？答案：首先設(shè)計合成shRNA序列，將其與載體質(zhì)粒分別用限制性內(nèi)切酶進行酶切，然后通過連接酶將酶切后的shRNA序列與載體連接，構(gòu)建重組載體，最后轉(zhuǎn)化到感受態(tài)細胞中進行篩選鑒定。3.如何選擇合適的細胞進行shRNA實驗？答案：要考慮細胞來源是否與研究目的相關(guān)，細胞生長特性是否良好，易于培養(yǎng)和傳代，細胞對轉(zhuǎn)染試劑的耐受性，以及細胞本身是否存在內(nèi)源性干擾影響實驗結(jié)果等。4.列舉兩種檢測shRNA干擾效果的方法及原理。答案：熒光定量PCR：通過擴增靶基因mRNA，根據(jù)熒光信號強度計算mRNA含量，對比實驗組和對照組判斷干擾效果。Westernblot：利用抗體與靶蛋白特異性結(jié)合，經(jīng)顯色或發(fā)光檢測蛋白表達量，從而評估shRNA對蛋白表達的影響。五、討論題（每題5分，共4題）1.在shRNA實驗中，如何優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件以提高轉(zhuǎn)染效率？答案：可以從多方面優(yōu)化。比如調(diào)整轉(zhuǎn)染試劑與核酸的比例，不同細胞系最佳比例有差異；選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑，針對不同細胞特性選擇；優(yōu)化細胞接種密度，合適密度利于轉(zhuǎn)染；轉(zhuǎn)染時的培養(yǎng)條件如溫度、二氧化碳濃度等也會影響，需摸索合適參數(shù)。2.討論shRNA實驗中假陽性結(jié)果可能的原因及解決方法。答案：原因可能是載體自身影響，如載體上某些元件干擾細胞正常生理；轉(zhuǎn)染試劑對細胞產(chǎn)生非特異性影響；shRNA設(shè)計不當與其他基因非特異性結(jié)合。解決方法包括設(shè)置多種對照，優(yōu)化shRNA設(shè)計，更換載體或轉(zhuǎn)染試劑等。3.分析shRNA技術(shù)在基因功能研究中的優(yōu)勢與局限性。答案：優(yōu)勢在于能特異性沉默基因，操作相對簡便，可研究基因功能缺失表型。局限性有干擾效果可能不穩(wěn)定，存在脫靶效應(yīng)影響實驗結(jié)果準確性，對于一些必需基因沉默可能導致細胞死亡影響深入研究。4.若shRNA干擾效果不佳，從實驗流程角度分析可能存