pcr考試選擇題及答案

一、單項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的中文全稱是（）A.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)B.核酸內(nèi)切酶反應(yīng)C.反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)D.連接酶反應(yīng)答案：A2.PCR反應(yīng)體系中不包括以下哪種成分（）A.模板DNAB.引物C.限制性內(nèi)切酶D.Taq酶答案：C3.引物設(shè)計時，其長度一般為（）A.5-10bpB.15-30bpC.35-50bpD.50bp以上答案：B4.Taq酶的最適反應(yīng)溫度是（）A.55℃B.72℃C.94℃D.37℃答案：B5.PCR反應(yīng)的基本步驟不包括（）A.變性B.退火C.延伸D.轉(zhuǎn)化答案：D6.下列關(guān)于模板DNA的說法錯誤的是（）A.可以是基因組DNAB.不能是線粒體DNAC.可以是cDNAD.純度會影響PCR結(jié)果答案：B7.引物的Tm值一般要求在（）A.40-50℃B.50-60℃C.60-70℃D.70-80℃答案：B8.PCR技術(shù)的發(fā)明人是（）A.孟德爾B.克里克C.穆利斯D.沃森答案：C9.在PCR反應(yīng)中，循環(huán)次數(shù)一般為（）A.10-15次B.15-20次C.25-35次D.40-50次答案：C10.進(jìn)行PCR反應(yīng)的儀器是（）A.離心機(jī)B.移液器C.基因擴(kuò)增儀D.電泳儀答案：C二、多項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)可應(yīng)用于（）A.基因克隆B.疾病診斷C.法醫(yī)鑒定D.物種鑒定答案：ABCD2.引物設(shè)計的原則包括（）A.避免引物自身互補(bǔ)B.引物之間不能互補(bǔ)C.堿基分布均勻D.引物長度合適答案：ABCD3.PCR反應(yīng)體系的主要成分有（）A.緩沖液B.dNTPsC.引物D.模板DNA答案：ABCD4.影響PCR反應(yīng)的因素有（）A.模板濃度B.引物濃度C.反應(yīng)溫度D.循環(huán)次數(shù)答案：ABCD5.以下哪些酶可用于PCR反應(yīng)（）A.Taq酶B.Pfu酶C.Klenow片段D.反轉(zhuǎn)錄酶答案：AB6.PCR產(chǎn)物的檢測方法有（）A.瓊脂糖凝膠電泳B.聚丙烯酰胺凝膠電泳C.測序D.酶切分析答案：ABCD7.實時熒光定量PCR可以（）A.定量分析起始模板量B.檢測基因表達(dá)水平C.診斷疾病D.進(jìn)行SNP分析答案：ABC8.巢式PCR的優(yōu)點有（）A.提高特異性B.提高靈敏度C.減少非特異性擴(kuò)增D.無需引物設(shè)計答案：ABC9.多重PCR可同時擴(kuò)增多個靶基因片段，其應(yīng)用包括（）A.病毒分型B.遺傳疾病診斷C.腫瘤研究D.環(huán)境監(jiān)測答案：ABCD10.熱啟動PCR的作用是（）A.減少非特異性擴(kuò)增B.提高擴(kuò)增效率C.降低引物二聚體形成D.提高產(chǎn)物特異性答案：ACD三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)中引物與模板的結(jié)合是通過堿基互補(bǔ)配對原則。（）答案：對2.Taq酶具有3'→5'外切酶活性。（）答案：錯3.引物的濃度越高，PCR反應(yīng)效果越好。（）答案：錯4.PCR反應(yīng)中，變性溫度越高越好。（）答案：錯5.只要有模板DNA，就可以進(jìn)行PCR反應(yīng)。（）答案：錯6.實時熒光定量PCR能對核酸進(jìn)行絕對定量。（）答案：對7.巢式PCR需要兩對引物。（）答案：對8.多重PCR可以同時擴(kuò)增任意多個靶基因片段。（）答案：錯9.熱啟動PCR可以在常溫下配置反應(yīng)體系。（）答案：對10.PCR產(chǎn)物的長度由引物的位置決定。（）答案：對四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述PCR技術(shù)的基本原理。答案：以模板DNA為基礎(chǔ)，在引物、dNTPs、Taq酶等存在下，經(jīng)高溫變性使模板雙鏈解開，低溫退火讓引物與模板結(jié)合，中溫延伸由Taq酶催化合成新的DNA鏈，通過多次循環(huán)擴(kuò)增目的DNA片段。2.引物設(shè)計時需要注意哪些方面？答案：要注意避免引物自身互補(bǔ)、引物間互補(bǔ)，堿基分布均勻，長度合適，Tm值在50-60℃左右，同時引物3'端不能有錯配，且不能形成引物二聚體等。3.簡述實時熒光定量PCR的原理。答案：在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，隨著PCR擴(kuò)增，熒光信號強(qiáng)度與PCR產(chǎn)物量成正比，通過檢測熒光信號，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對起始模板量進(jìn)行定量分析。4.說明巢式PCR的優(yōu)點。答案：巢式PCR采用兩對引物，先由外引物擴(kuò)增出較大片段，再以內(nèi)引物對該片段進(jìn)行二次擴(kuò)增。優(yōu)點是提高特異性、靈敏度，有效減少非特異性擴(kuò)增，提高檢測準(zhǔn)確性。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論PCR技術(shù)在疾病診斷中的應(yīng)用及面臨的挑戰(zhàn)。答案：應(yīng)用包括病原體檢測、遺傳病診斷等。挑戰(zhàn)有樣本污染易致假陽性，模板質(zhì)量差異影響結(jié)果準(zhǔn)確性，引物設(shè)計不當(dāng)會出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增，且對儀器和操作人員要求較高。2.分析影響PCR反應(yīng)結(jié)果的因素，并探討如何優(yōu)化。答案：因素有模板、引物濃度，反應(yīng)溫度、循環(huán)次數(shù)等。優(yōu)化措施包括優(yōu)化模板和引物濃度，精準(zhǔn)控制溫度和循環(huán)次數(shù)，選擇合適的酶，使用高質(zhì)量緩沖液，避免雜質(zhì)污染等。3.闡述多重PCR的原理及在臨床診斷中的應(yīng)用前景。答案：原理是在同一反應(yīng)體系中加入多對引物，同時擴(kuò)增多個靶基因片段。臨床診斷中可用于多種病原體檢測、疾病分型等，能提高診斷效率和