演講人：日期:造血干細胞移植相關(guān)檢驗技術(shù)目錄CATALOGUE01移植前供者檢驗02移植前受者檢驗03植活監(jiān)測技術(shù)04并發(fā)癥監(jiān)測檢驗05微小殘留病檢測06特色檢驗技術(shù)PART01移植前供者檢驗HLA高分辨配型技術(shù)基于PCR-SSO的基因分型方法流式細胞術(shù)交叉配型驗證下一代測序（NGS）技術(shù)應(yīng)用采用序列特異性寡核苷酸探針（PCR-SSO）技術(shù)，通過特異性探針與擴增產(chǎn)物的雜交反應(yīng)，精確識別HLA等位基因的細微差異，分辨率可達4位數(shù)以上，顯著降低移植后排斥反應(yīng)風(fēng)險。通過高通量測序平臺對HLA基因進行全序列分析，可同時檢測多個基因座，覆蓋傳統(tǒng)方法難以識別的稀有等位基因，為復(fù)雜病例提供更全面的配型數(shù)據(jù)支持。在分子分型基礎(chǔ)上，結(jié)合流式細胞術(shù)進行供受者淋巴細胞交叉試驗，評估抗體介導(dǎo)的免疫反應(yīng)風(fēng)險，進一步優(yōu)化供者選擇。傳染性疾病篩查項目病毒標(biāo)志物檢測包括HBV、HCV、HIV、CMV等病毒的血清學(xué)及核酸擴增檢測（NAT），確保供者無活動性感染或潛伏病毒攜帶，避免移植后病毒再激活導(dǎo)致并發(fā)癥。寄生蟲及細菌感染篩查針對瘧疾、弓形蟲、梅毒螺旋體等病原體進行抗體檢測，必要時結(jié)合PCR技術(shù)確認(rèn)感染狀態(tài)，保障干細胞制品的安全性。新興病原體監(jiān)測如EB病毒、HHV-6、BK病毒等嗜淋巴細胞病毒的動態(tài)監(jiān)測，建立基線數(shù)據(jù)以指導(dǎo)移植后感染防控策略。供體細胞功能評估免疫細胞功能分析采用混合淋巴細胞培養(yǎng)（MLC）和細胞毒性試驗，評估供者T細胞對受者抗原的應(yīng)答強度，規(guī)避過強移植物抗宿主病（GVHD）風(fēng)險。集落形成單位（CFU）實驗體外模擬造血微環(huán)境培養(yǎng)供者干細胞，觀察粒細胞-巨噬細胞集落（CFU-GM）形成能力，預(yù)測移植后造血重建效率。造血干細胞計數(shù)與活力檢測通過CD34+細胞流式計數(shù)及臺盼藍染色評估細胞存活率，確保移植物中干細胞數(shù)量與質(zhì)量滿足臨床需求。PART02移植前受者檢驗基礎(chǔ)疾病狀態(tài)評估01.疾病活動度檢測通過分子生物學(xué)、流式細胞術(shù)等技術(shù)評估原發(fā)病的進展程度，如白血病微小殘留?。∕RD）檢測，為移植時機選擇提供依據(jù)。02.腫瘤負(fù)荷評估采用影像學(xué)檢查（PET-CT/MRI）聯(lián)合腫瘤標(biāo)志物檢測，量化病灶范圍及代謝活性，判斷移植前減瘤治療必要性。03.遺傳易感性分析對遺傳性血液病患者進行基因測序，明確致病突變類型，指導(dǎo)供者篩選和移植后監(jiān)測方案制定。臟器功能與感染篩查包含肺功能測試、心臟超聲及冠脈評估，確?；颊吣艹惺茴A(yù)處理方案的毒性，尤其關(guān)注博來霉素相關(guān)肺纖維化風(fēng)險。心肺功能綜合評價除常規(guī)肝酶、肌酐外，需進行ICG清除率、GFR動態(tài)監(jiān)測等精準(zhǔn)評估，預(yù)測大劑量化療藥物的代謝能力。肝腎儲備功能檢測采用PCR、抗原抗體聯(lián)檢等技術(shù)全面排查EBV、CMV、HBV等潛伏感染，必要時進行預(yù)防性抗病毒治療。潛伏感染病原體篩查010203免疫抑制劑耐受性檢測藥物代謝基因分型通過CYP3A5、TPMT等基因檢測預(yù)判環(huán)孢素、硫唑嘌呤的代謝效率，個體化調(diào)整用藥劑量。免疫細胞功能分析采用淋巴細胞亞群檢測、混合淋巴細胞培養(yǎng)（MLC）評估受體免疫狀態(tài)，預(yù)測移植物抗宿主?。℅VHD）風(fēng)險。既往藥物過敏史追溯詳細記錄磺胺類、抗胸腺細胞球蛋白等藥物的超敏反應(yīng)史，制定替代性免疫抑制方案。PART03植活監(jiān)測技術(shù)通過PCR擴增檢測供受者特異性STR位點，計算嵌合率評估植入狀態(tài)，靈敏度可達1%-5%，是監(jiān)測微嵌合體的金標(biāo)準(zhǔn)方法。STR/SNP嵌合體分析短串聯(lián)重復(fù)序列（STR）分型技術(shù)基于高通量測序平臺檢測數(shù)十萬個SNP位點，可精確區(qū)分供受者來源細胞，適用于單倍體相合移植等復(fù)雜嵌合體分析。單核苷酸多態(tài)性（SNP）分型技術(shù)針對特定STR/SNP位點設(shè)計引物探針，實現(xiàn)動態(tài)定量監(jiān)測，尤其適用于早期植入失敗或混合嵌合體轉(zhuǎn)化的預(yù)警。實時熒光定量PCR技術(shù)供者細胞比例動態(tài)監(jiān)測流式細胞術(shù)免疫分型利用供受者HLA差異或性別染色體標(biāo)記（如CD45+CD19+雙標(biāo)），通過多色流式檢測特定細胞亞群嵌合率，可區(qū)分淋巴細胞和髓系植入。熒光原位雜交（FISH）針對性染色體（XX/XY）或特定染色體易位標(biāo)記，通過細胞遺傳學(xué)方法直接觀察供者細胞占比，適用于性別錯配移植監(jiān)測。數(shù)字PCR絕對定量采用微滴式數(shù)字PCR技術(shù)對供者特異性基因標(biāo)記（如HLA等位基因）進行絕對計數(shù)，檢測下限達0.1%，優(yōu)于傳統(tǒng)定量PCR。血細胞計數(shù)恢復(fù)追蹤全血細胞分析動態(tài)監(jiān)測通過自動化血細胞分析儀連續(xù)追蹤中性粒細胞（>0.5×10?/L）、血小板（>20×10?/L）等關(guān)鍵指標(biāo)，評估造血重建速度和質(zhì)量。網(wǎng)織紅細胞計數(shù)采用流式細胞術(shù)檢測CD71+網(wǎng)織紅細胞比例，反映骨髓紅系造血活性，是預(yù)測移植后紅細胞系統(tǒng)恢復(fù)的早期敏感指標(biāo)。造血祖細胞培養(yǎng)檢測通過體外甲基纖維素半固體培養(yǎng)體系，定量檢測CFU-GM、BFU-E等集落形成單位，評估造血干細胞植入后的增殖分化潛能。PART04并發(fā)癥監(jiān)測檢驗該蛋白是移植物抗宿主?。℅VHD）的重要生物標(biāo)志物，其血清水平升高與急性GVHD的發(fā)生及嚴(yán)重程度顯著相關(guān)，可用于早期預(yù)測和動態(tài)監(jiān)測疾病進展?？扇苄許T2蛋白IL-6、TNF-α等促炎因子水平異常升高與GVHD活動性相關(guān)，多因子聯(lián)合檢測可提高診斷特異性。細胞因子譜分析Treg細胞在免疫耐受中起關(guān)鍵作用，其比例降低可能預(yù)示GVHD風(fēng)險增加，通過流式細胞術(shù)檢測可評估患者免疫狀態(tài)。調(diào)節(jié)性T細胞（Treg）比例010302移植物抗宿主病標(biāo)志物組織病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)淋巴細胞浸潤或上皮細胞凋亡是GVHD的確診依據(jù)，尤其適用于不典型病例的鑒別診斷。皮膚或腸道活檢病理04機會性感染病原體檢測多重PCR技術(shù)可同步檢測巨細胞病毒（CMV）、EB病毒、腺病毒等常見病原體核酸，具有高靈敏度和快速出結(jié)果的優(yōu)勢，適用于移植后感染的早期篩查。血清半乳甘露聚糖（GM）試驗用于侵襲性曲霉菌感染的診斷，其動態(tài)監(jiān)測可指導(dǎo)抗真菌治療方案的調(diào)整。宏基因組測序（mNGS）對血液、肺泡灌洗液等樣本進行無偏倚病原體檢測，尤其適用于傳統(tǒng)方法陰性的疑難感染病例。CD4+T細胞計數(shù)通過流式細胞術(shù)評估患者免疫重建情況，CD4+計數(shù)持續(xù)低下者需警惕卡氏肺孢子蟲等機會性感染風(fēng)險。輸血相關(guān)指標(biāo)監(jiān)控反復(fù)輸血患者可能產(chǎn)生HLA或HPA抗體，導(dǎo)致血小板輸注無效，通過液相芯片技術(shù)可精準(zhǔn)識別抗體類型。血小板抗體篩查血清鐵蛋白及轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度直接抗人球蛋白試驗（DAT）動態(tài)監(jiān)測可評估移植后造血功能恢復(fù)情況，持續(xù)低血紅蛋白需排查遲發(fā)性溶血或純紅細胞再生障礙。長期輸血患者易發(fā)生鐵過載，定期檢測可指導(dǎo)去鐵治療，避免器官功能損傷。用于鑒別輸血后溶血反應(yīng)，陽性結(jié)果提示可能存在同種抗體或自身免疫性溶血。血紅蛋白及網(wǎng)織紅細胞計數(shù)PART05微小殘留病檢測流式細胞術(shù)MRD檢測流式細胞術(shù)通過檢測白血病細胞表面或胞內(nèi)特異性抗原標(biāo)記，可識別低至0.01%的殘留病變細胞，適用于B細胞、T細胞及髓系白血病MRD監(jiān)測。高靈敏度與特異性多參數(shù)分析能力快速動態(tài)監(jiān)測優(yōu)勢結(jié)合CD45/SSC設(shè)門策略及多色熒光抗體組合（如CD19/CD34/CD10/CD38），可區(qū)分正常造血祖細胞與異常白血病細胞克隆，提高檢測準(zhǔn)確性。樣本處理時間短（4-6小時），可實時評估移植后造血重建及早期復(fù)發(fā)風(fēng)險，指導(dǎo)臨床干預(yù)時機選擇。分子遺傳學(xué)定量分析融合基因定量檢測數(shù)字PCR技術(shù)應(yīng)用克隆性Ig/TCR基因重排分析通過實時熒光定量PCR（RQ-PCR）技術(shù)追蹤BCR-ABL1、PML-RARA等融合基因轉(zhuǎn)錄本水平，靈敏度達10^-5~10^-6，為CML、APL等疾病提供分子學(xué)緩解標(biāo)準(zhǔn)。利用PCR擴增淋巴細胞特異性V(D)J重排序列，結(jié)合毛細管電泳或二代測序（NGS）技術(shù)，可量化殘留克隆性B/T細胞群體，適用于ALL患者MRD評估。通過微滴式數(shù)字PCR（ddPCR）絕對定量目標(biāo)基因拷貝數(shù)，克服傳統(tǒng)PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線依賴性問題，尤其適用于低負(fù)荷突變（如FLT3-ITD）的精準(zhǔn)監(jiān)測。高通量突變譜系追蹤基于NGS平臺設(shè)計定制化基因panel（如涵蓋DNMT3A、TP53、ASXL1等高頻突變基因），可同時追蹤數(shù)百個腫瘤特異性突變，靈敏度達0.1%-1%，適用于異基因移植后嵌合狀態(tài)分析。個體化MRD標(biāo)志物開發(fā)通過全外顯子組測序（WES）篩選患者特異性體細胞突變，構(gòu)建個性化探針庫，實現(xiàn)超高靈敏度（10^-6）的克隆演化動態(tài)監(jiān)控。生物信息學(xué)整合分析結(jié)合突變等位基因頻率（VAF）、克隆豐度算法及機器學(xué)習(xí)模型，區(qū)分治療相關(guān)克隆造血與真實殘留病灶，減少假陽性結(jié)果干擾。靶向測序追蹤技術(shù)PART06特色檢驗技術(shù)臍帶血干細胞質(zhì)控干細胞數(shù)量與活性檢測通過流式細胞術(shù)和臺盼藍染色法評估臍帶血中CD34+造血干細胞的數(shù)量及存活率，確保移植前細胞具備足夠的增殖和分化潛力。冷凍復(fù)蘇后功能驗證模擬液氮冷凍復(fù)蘇過程，檢測干細胞集落形成能力（CFUassay）和長期培養(yǎng)啟動細胞（LTC-IC）活性，確保低溫保存后細胞功能完整性。微生物污染篩查采用PCR、細菌培養(yǎng)及內(nèi)毒素檢測技術(shù)，嚴(yán)格排除臍帶血樣本中的細菌、真菌、病毒等微生物污染，保障移植安全性。HLA配型與遺傳病篩查通過高通量測序技術(shù)完成HLA-A、B、DR位點精確匹配，并檢測常見遺傳病基因突變（如地中海貧血、鐮刀型貧血），避免供受體兼容性問題。單倍體移植免疫評估供受體HLA半相合分析利用SSO或SBT分型技術(shù)確定供體與受體至少50%HLA匹配度，評估GVHD（移植物抗宿主?。╋L(fēng)險并制定個體化免疫抑制方案。01NK細胞異源反應(yīng)性檢測通過KIR（殺傷細胞免疫球蛋白樣受體）基因分型及功能性實驗，預(yù)測供體NK細胞對受體腫瘤細胞的殺傷潛力，優(yōu)化移植抗白血病效應(yīng)。02T細胞亞群動態(tài)監(jiān)測采用多色流式細胞術(shù)追蹤移植后CD4+/CD8+比例、調(diào)節(jié)性T細胞（Treg）及記憶T細胞變化，早期識別免疫重建異?；騁VHD征兆。03供體特異性抗體（DSA）篩查通過Luminex平臺檢測受體血清中預(yù)存抗HLA抗體，評估抗體介導(dǎo)的排斥反應(yīng)風(fēng)險，必要時進行血漿置換或抗體清除預(yù)處理。04細胞治療產(chǎn)品釋放檢驗細胞純度與表型鑒定通過流式細胞術(shù)驗證終產(chǎn)品中目標(biāo)細胞（如CAR-T細胞）占比≥90%，排