ICS65.020.30

CCSB40

33

浙江省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB33/T2481—2022

畜禽排泄物中磺胺類藥物殘留量的測定

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

Determinationofsulfonamidesresiduesinlivestockandpoultryexcreta

—Liquidchromatography–tandemmassspectrometry

2022-04-16發(fā)布2022-05-16實(shí)施

浙江省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB33/T2481—2022

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

請注意本標(biāo)準(zhǔn)的某些內(nèi)容可能涉及專利。本標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。

本標(biāo)準(zhǔn)由浙江省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并組織實(shí)施。

本標(biāo)準(zhǔn)由浙江省畜牧獸醫(yī)和飼料標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：浙江省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心、綠城農(nóng)科檢測技術(shù)有限公司。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：黃娟、裘丞軍、王彬、羅成江、陳潔、侯軒、陳曉林、阮鑫、周蕾、趙月均、

任玉琴。

I

DB33/T2481—2022

畜禽排泄物中磺胺類藥物殘留量的測定

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了畜禽排泄物中磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧

啶、磺胺二甲噁唑、磺胺異噁唑、磺胺甲噻二唑、苯甲?；前?、磺胺二甲嘧啶、磺胺異嘧啶、磺胺對甲

氧嘧啶、磺胺甲氧噠嗪、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺喹噁啉、磺胺鄰二甲氧嘧啶、磺胺間二甲

氧嘧啶、磺胺苯吡唑的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于畜禽排泄物中上述20種磺胺類藥物殘留量的測定。

本標(biāo)準(zhǔn)的檢出限為2g/kg，定量限為5g/kg。

注：畜禽排泄物包括畜禽排泄的糞便或糞便和尿液的混合物。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過規(guī)范性文件的引用而構(gòu)成本標(biāo)準(zhǔn)必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

標(biāo)準(zhǔn)。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T25169畜禽監(jiān)測技術(shù)規(guī)范

3術(shù)語和定義

本標(biāo)準(zhǔn)沒有需要界定的術(shù)語和定義。

4原理

試樣中殘留的磺胺類藥物經(jīng)酸化乙腈溶液提取，氮?dú)獯蹈珊笥昧姿猁}溶液復(fù)溶，固相萃取柱凈化，

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定，基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)，外標(biāo)法定量。

5試劑或材料

除非另有規(guī)定，均使用分析純試劑。

5.1水：GB/T6682，一級(jí)。

5.2甲醇（CH3OH）：色譜純。

5.3正己烷（C6H14）。

5.490%酸化乙腈溶液：取900mL乙腈，加冰乙酸10mL，加水稀釋至1000mL，混勻。

5.50.05mol/L磷酸鹽溶液：取1.48g磷酸二氫鈉和14.50g磷酸氫二鈉，加水溶解稀釋至1000mL,

混勻。

5.65%甲醇溶液：取50mL甲醇，加水稀釋至1000mL，混勻。

5.75%氨化甲醇：取5mL氨水，加甲醇稀釋至100mL，混勻。

1

DB33/T2481—2022

5.80.1%甲酸溶液：取1.0mL甲酸，加水稀釋至1000mL，混勻。

5.9乙腈甲酸溶液：取10mL乙腈，用0.1%甲酸溶液稀釋至100mL，混勻。

5.100.1%甲酸甲醇溶液：取1.0mL甲酸，加甲醇稀釋至1000mL，混勻。

5.11磺胺類標(biāo)準(zhǔn)品：各標(biāo)準(zhǔn)品信息見附錄A，純度≥95%。

5.12標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液(1mg/mL)：分別稱取磺胺類標(biāo)準(zhǔn)品（5.11)約10mg（準(zhǔn)確至0.01mg），分別置10

mL棕色容量瓶中，用甲醇（5.2）溶解并定容至刻度，混勻。-20℃以下保存，有效期6個(gè)月。

5.13混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液Ⅰ(10g/mL)：分別吸取標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液（5.12）各1.00mL，置于100mL棕色

容量瓶中，用甲醇（5.2）稀釋至刻度，混勻，-20℃以下保存，有效期1個(gè)月。

5.14混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液Ⅱ(250ng/mL)：準(zhǔn)確吸取混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液Ⅰ（5.13）250L，置于10mL棕

色容量瓶中，用乙腈甲酸溶液（5.9）稀釋至刻度，混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。

5.15系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：準(zhǔn)確吸取混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液Ⅱ（5.14）適量，用乙腈甲酸溶液（5.9）

稀釋成濃度為2.0ng/mL、5.0ng/mL、25.0ng/mL、50.0ng/mL、100.0ng/mL、250.0ng/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)

工作溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

5.16N-乙烯吡咯烷酮和二乙烯基苯混合固相萃取柱（HLB）：60mg/3mL或性能相當(dāng)者。

5.17微孔濾膜：0.22m，水系。

6儀器設(shè)備

6.1液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源。

6.2分析天平：感量0.01mg、0.01g。

6.3真空冷凍干燥機(jī)：冷阱溫度-50℃，真空度10Pa。

6.4離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于10000r/min。

6.5氮吹儀。

6.6固相萃取裝置。

6.7振蕩儀。

6.8渦旋混合器。

6.9超聲提取儀。

6.10樣品粉碎設(shè)備。

6.11分析篩：0.5mm孔徑。

7樣品制備與保存

按照GB/T25169采集畜禽排泄物，用四分法縮減至約200g，-40℃以下真空冷凍干燥24h，使樣品

中的水分在10%以下，粉碎，過0.5mm孔徑的分析篩（6.11），裝入密閉容器中，于-20℃以下保存?zhèn)?/p>

用。

取不含待測磺胺類藥物的樣品適量，按上述方法制備，作為空白試樣。

8測定步驟

8.1試樣溶液制備

8.1.1提取

2

DB33/T2481—2022

將裝有試樣的密閉容器取出，放至室溫。稱取試樣約2g（精確到0.01g），置于50mL離心管中，

準(zhǔn)確加入90%酸化乙腈溶液（5.4）10.0mL，渦旋使試樣分散，振蕩10min，超聲提取10min，10000r/min

離心5min。準(zhǔn)確移取上清液2mL，置于10mL試管中，加入0.05mol/L磷酸鹽溶液（5.5）1mL，混勻，

于30℃水浴中氮?dú)獯抵翚堄辔镄∮?mL。再加入0.05mol/L磷酸鹽溶液（5.5）3mL、正己烷（5.3）2mL，

渦旋1min、超聲2min，使殘余物溶解，靜置分層或10000r/min離心2min，取下層水相備用。

8.1.2凈化

取HLB固相萃取柱（5.16），依次用甲醇5mL和水5mL活化，取全部備用液（8.1.1）過柱，控制流

速在1.0mL/min以下，依次用水3mL，5%甲醇溶液（5.6）3mL淋洗，抽干。用5%氨化甲醇（5.7）3mL

洗脫，收集洗脫液，30℃水浴中氮?dú)獯蹈?，加乙腈甲酸溶液?.9）1.00mL，超聲2min、渦旋60s使殘

余物溶解，溶液經(jīng)0.22m微孔濾膜（5.17）過濾，上機(jī)測定。

8.2基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

稱取空白試樣約2g（精確至0.01g），按8.1步驟操作，氮?dú)獯蹈珊蠓謩e準(zhǔn)確加入系列混合標(biāo)準(zhǔn)工

作溶液（5.15）1.00mL，混合溶解后經(jīng)微孔濾膜（5.17）過濾，制成2.0ng/mL、5.0ng/mL、25.0ng/mL、

50.0ng/mL、100.0ng/mL、250.0ng/mL的基質(zhì)匹配系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，用液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。以

特征離子質(zhì)量色譜峰面積為縱坐標(biāo)、標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線，求回歸方程

和相關(guān)系數(shù)。

8.3液相色譜-質(zhì)譜參考條件

8.3.1液相色譜參考條件

色譜柱：C18柱，柱長50mm，內(nèi)徑2.1mm，粒度1.7m，或性能相當(dāng)者。

柱溫：35℃。

進(jìn)樣量：5L。

流動(dòng)相：A：0.1%甲酸溶液（5.8）；B：0.1%甲酸甲醇溶液（5.10），梯度洗脫程序見表1。

表1梯度洗脫程序

時(shí)間流速AB

minmL/min%%

0.00.3955

2.00.38515

5.00.36040

7.00.3595

7.10.3955

11.00.3955

8.3.2質(zhì)譜參考條件

離子化模式：電噴霧離子源（ESI），正離子多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM）。

噴霧電壓：1.0kV。

源溫：150℃。

霧化溫度：450℃。

霧化氣流速：1000L/h。

錐孔氣流速：30L/h。

3

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碰撞氣：氬氣。

定性、定量離子對及錐孔電壓和碰撞能量參考值見表2。

表2定性、定量離子對及錐孔電壓和碰撞能量參考條件

定性離子對定量離子對錐孔電壓碰撞能量保留時(shí)間

名稱

m/zm/zVeVmin

215.1＞156.12010

磺胺醋酰215.1＞156.11.39

215.1＞108.12018

250.2＞156.12016

磺胺吡啶250.2＞156.12.40

250.2＞108.12025

251.2＞156.12014

磺胺嘧啶251.2＞156.11.86

251.2＞108.12024

254.1＞156.12015

磺胺甲噁唑254.1＞156.13.90

254.1＞108.12025

256.3＞156.12014

磺胺噻唑256.3＞156.12.24

256.3＞108.12022

265.2＞156.12016

磺胺甲基嘧啶265.2＞156.12.61

265.2＞172.12014

268.2＞156.12015

磺胺二甲噁唑268.2＞156.13.35

268.2＞113.12020

268.2＞156.12013

磺胺異噁唑268.2＞156.14.24

268.2＞113.12016

271.2＞156.12013

磺胺甲噻二唑271.2＞156.13.31

271.2＞108.12020

277.1＞156.12010

苯甲?；前?77.1＞156.14.47

277.1＞108.12023

279.2＞186.12016

磺胺二甲嘧啶279.2＞186.13.32

279.2＞124.12024

279.2＞124.22020

磺胺異嘧啶279.2＞124.22.01

279.2＞186.12015

281.2＞156.12017

磺胺對甲氧嘧啶281.2＞156.13.17

281.2＞126.22017

281.2＞156.12017

磺胺甲氧噠嗪281.2＞156.13.54

281.2＞126.22017

281.2＞156.12016

磺胺間甲氧嘧啶281.2＞156.13.94

281.2＞126.22018

285.2＞156.12013

磺胺氯噠嗪285.2＞156.13.73

285.2＞108.12025

301.1＞156.12016

磺胺喹噁啉301.1＞156.15.40

301.1＞108.12026

磺胺鄰二甲氧嘧311.1＞156.12020

311.1＞156.14.16

啶311.1＞108.12030

4

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表2（續(xù)）

定性離子對定量離子對錐孔電壓碰撞能量保留時(shí)間

名稱

m/zm/zVeVmin

磺胺間二甲氧嘧311.1＞156.12017

311.1＞156.15.18

啶311.1＞91.82030

315.2＞158.22030

磺胺苯吡唑315.2＞158.24.83

315.2＞160.22022

8.4定性測定

在相同試驗(yàn)條件下，試樣溶液（8.1.2）與基質(zhì)匹配系列標(biāo)準(zhǔn)溶液（8.2）中待測物的保留時(shí)間相對

偏差在±2.5%之內(nèi)，且樣品圖譜中各待測物定性離子的相對豐度與濃度接近的基質(zhì)匹配系列標(biāo)準(zhǔn)溶液

中對應(yīng)的定性離子的相對離子豐度，若偏差不超過表3規(guī)定的范圍，則可判定為樣品中存在對應(yīng)的待測

物。

表3定性確證時(shí)相對離子豐度的最大允許偏差

單位為百分號(hào)

相對離子豐度允許的最大偏差

＞50±20

20～50（含）±25

10～20（含）±30

≤10±50

8.5定量測定

以待測藥物的濃度為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)應(yīng)不低于

0.99。試樣溶液與標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測的線性范圍內(nèi)，如超出線性范圍，應(yīng)重新

試驗(yàn)或?qū)⒃嚇尤芤鹤飨鄳?yīng)稀釋后重新測定。20種磺胺類藥物基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液的特征離子色譜圖見附錄

B。

9試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理

試樣中磺胺類藥物的殘留量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)，數(shù)值以微克每千克（g/kg）表示。按⑴式計(jì)算：

CVV1000

=1·······························································(1)

mV21000

式中：

——試樣中磺胺類藥物的殘留量，單位為微克每千克（g/kg）；

C——從基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的試樣溶液中待測物的濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；

V——試樣提取液總體積，單位為毫升（mL）；

V1——試樣凈化后溶解殘余物的體積，單位為毫升（mL）；

m——試樣質(zhì)量，單位為克（g）；

5

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V2——移取的提取液體積，單位為毫升（mL）。

測定結(jié)果用兩次平行測定的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。

10檢測方法準(zhǔn)確度和精密度

10.1準(zhǔn)確度

本方法在5.0g/kg、10.0g/kg、500g/kg三個(gè)添加濃度水平的回收率為60%～120%。

10.2精密度

在重復(fù)性條件下，兩次獨(dú)立測定結(jié)果與其算術(shù)平均值的絕對差值不大于該算術(shù)平均值的20%。

6

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A

A

附錄A

（資料性）

20種磺胺類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中文英文名稱對照、分子式、相對分子質(zhì)量和CAS號(hào)

20種磺胺類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中文英文名稱對照、分子式、相對分子質(zhì)量和CAS號(hào)見表A.1。

表A.120種磺胺類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中文英文名稱對照、分子式、相對分子質(zhì)量和CAS號(hào)

序號(hào)中文名稱英文名稱分子式相對分子質(zhì)量CAS號(hào)

1磺胺醋酰SulfacetamideC8H10N2SO3214.24144-80-9

2磺胺吡啶SulfapyridineC11H11N3O2S249.29144-83-2

3磺胺嘧啶SulfadiazineC10H10N4O2S250.2868-35-9

4磺胺甲噁唑SulfamethoxazoleC10H11N3O3S253.28723-46-6

5磺胺噻唑SulfathiazoleC9H9N3O2S2255.3272-14-0

6磺胺甲基嘧啶SulfamerazineC11H12N4O2S264.30127-79-7

7磺胺二甲噁唑SulfamoxoleC11H13N3O3S267.30729-99-7

8磺胺異噁唑SulfisoxazoleC11H13N3O3S267.30127-69-5

9磺胺甲噻二唑SulfamethizoleC9H10N4O2S2270.33144-82-1

10苯甲?；前稴ulfabenzamideC13H12N2O3S276.31127-71-9

11磺胺二甲嘧啶SulfamethazineC12H14N4O2S278.3357-68-1

12磺胺異嘧啶SulfisomidineC12H14N4O2S278.33515-64-0

13磺胺對甲氧嘧啶SulfameterC11H12N4O3S280.31651-06-9

14磺胺甲氧噠嗪SulfamethoxypyridazineC11H12N4O3S280.3080-35-3

15磺胺間甲氧嘧啶SulfamonomethoxineC11H12N4O3S280.301220-83-3

16磺胺氯噠嗪Sulfachloropyrid