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文檔簡介
細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)操作規(guī)定一、總則
細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是生物醫(yī)學(xué)研究和生物工程領(lǐng)域的基礎(chǔ)技術(shù),廣泛應(yīng)用于藥物研發(fā)、疾病模型構(gòu)建、細(xì)胞治療等領(lǐng)域。為確保細(xì)胞培養(yǎng)操作的規(guī)范性、安全性和高效性,特制定本操作規(guī)定。本規(guī)定適用于所有涉及細(xì)胞培養(yǎng)工作的實(shí)驗(yàn)室人員,旨在規(guī)范操作流程,減少污染風(fēng)險(xiǎn),保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
二、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境與設(shè)備要求
(一)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境
1.細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)位于潔凈環(huán)境中,保持相對濕度在40%-60%,溫度控制在22℃-26℃。
2.實(shí)驗(yàn)室應(yīng)定期進(jìn)行空氣消毒,每周至少一次使用紫外線燈照射,每次持續(xù)1小時(shí)。
3.實(shí)驗(yàn)室地面、墻壁、天花板應(yīng)光滑易清潔,無明顯裂縫,定期使用70%-75%乙醇或中性洗滌劑進(jìn)行消毒。
(二)設(shè)備要求
1.細(xì)胞培養(yǎng)箱:應(yīng)配備CO?培養(yǎng)箱,溫度控制精度±0.5℃,CO?濃度控制精度±0.1%。
2.超凈工作臺:臺面材質(zhì)應(yīng)為防腐蝕不銹鋼,內(nèi)壁光滑,定期使用70%-75%乙醇進(jìn)行表面消毒。
3.生物安全柜:應(yīng)定期進(jìn)行泄漏測試,確??諝饬魉俸瓦^濾效果符合標(biāo)準(zhǔn)。
4.冰箱與冷凍柜:用于儲存細(xì)胞和試劑,冷凍柜溫度應(yīng)穩(wěn)定在-80℃以下。
三、細(xì)胞培養(yǎng)操作流程
(一)細(xì)胞準(zhǔn)備
1.細(xì)胞復(fù)蘇:
(1)從液氮中取出細(xì)胞凍存管,迅速置于37℃水浴中解凍,時(shí)間不超過1分鐘。
(2)解凍后立即加入預(yù)溫的培養(yǎng)基,輕柔吹打混勻,接種于培養(yǎng)皿或細(xì)胞瓶中。
2.細(xì)胞傳代:
(1)觀察細(xì)胞生長狀態(tài),待細(xì)胞匯合度達(dá)到80%-90%時(shí)進(jìn)行傳代。
(2)用磷酸鹽緩沖液(PBS)清洗細(xì)胞2次,每次3-5分鐘。
(3)加入0.25%胰蛋白酶消化細(xì)胞,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓即可終止消化。
(4)加入培養(yǎng)基終止消化,用移液器輕柔吹打收集細(xì)胞,接種于新的培養(yǎng)容器中。
(二)日常維護(hù)
1.培養(yǎng)基更換:
(1)每隔2-3天更換培養(yǎng)基一次,確保培養(yǎng)基未變渾濁或變酸(pH值6.0-6.5)。
(2)更換時(shí)用PBS清洗細(xì)胞1次,避免殘留舊培養(yǎng)基影響細(xì)胞生長。
2.細(xì)胞觀察:
(1)每日通過倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長狀態(tài),記錄細(xì)胞形態(tài)、匯合度及有無污染。
(2)發(fā)現(xiàn)異常細(xì)胞應(yīng)及時(shí)處理,避免污染擴(kuò)散。
(三)細(xì)胞凍存與復(fù)蘇
1.細(xì)胞凍存:
(1)收集生長良好的細(xì)胞,用PBS清洗后加入凍存液(含10%DMSO和基礎(chǔ)培養(yǎng)基)。
(2)分裝至凍存管,緩慢置于-80℃冰箱過夜,次日轉(zhuǎn)移至液氮長期保存。
2.細(xì)胞復(fù)蘇:
(1)從液氮中取出凍存管,37℃水浴解凍,迅速加入預(yù)溫培養(yǎng)基。
(2)混勻后接種于培養(yǎng)皿,置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
四、污染控制與廢棄物處理
(一)污染控制
1.嚴(yán)格區(qū)分無菌操作區(qū)與非無菌區(qū),避免交叉污染。
2.操作前后必須用70%-75%乙醇消毒雙手和操作臺面。
3.培養(yǎng)皿、細(xì)胞瓶等器材使用前需高壓滅菌,一次性器材應(yīng)一次性使用。
4.定期檢測細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中的微生物污染,必要時(shí)進(jìn)行滅菌處理。
(二)廢棄物處理
1.細(xì)胞培養(yǎng)廢棄物(如培養(yǎng)基、細(xì)胞懸液)應(yīng)先高壓滅菌后集中處理。
2.污染性廢棄物(如廢棄凍存管)應(yīng)放入專用銳器盒或化學(xué)廢物桶中處理。
3.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,所有器材需清洗并消毒,可重復(fù)使用的器材進(jìn)行高壓滅菌。
五、安全注意事項(xiàng)
1.操作過程中應(yīng)佩戴口罩和手套,避免直接接觸細(xì)胞和培養(yǎng)基。
2.使用酒精燈等明火時(shí)注意防火,保持實(shí)驗(yàn)臺面整潔,避免易燃物品堆積。
3.細(xì)胞培養(yǎng)箱和超凈工作臺應(yīng)定期維護(hù),確保設(shè)備正常運(yùn)行。
4.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,及時(shí)清理操作區(qū)域,關(guān)閉設(shè)備電源,做好記錄。
六、記錄與存檔
1.每次細(xì)胞培養(yǎng)操作需詳細(xì)記錄,包括細(xì)胞類型、操作時(shí)間、培養(yǎng)基成分、污染情況等。
2.記錄數(shù)據(jù)應(yīng)存檔至少3年,以備后續(xù)查閱和分析。
3.定期對操作記錄進(jìn)行審核,確保實(shí)驗(yàn)過程的可追溯性。
一、總則
細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是生物醫(yī)學(xué)研究和生物工程領(lǐng)域的基礎(chǔ)技術(shù),廣泛應(yīng)用于藥物研發(fā)、疾病模型構(gòu)建、細(xì)胞治療等領(lǐng)域。為確保細(xì)胞培養(yǎng)操作的規(guī)范性、安全性和高效性,特制定本操作規(guī)定。本規(guī)定適用于所有涉及細(xì)胞培養(yǎng)工作的實(shí)驗(yàn)室人員,旨在規(guī)范操作流程,減少污染風(fēng)險(xiǎn),保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
(一)目的與意義
1.規(guī)范化操作:通過明確的標(biāo)準(zhǔn)化的操作流程,確保每次實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性和可比性。
2.安全保障:減少操作過程中對操作者、環(huán)境及細(xì)胞的潛在風(fēng)險(xiǎn),防止交叉污染和安全事故。
3.提高效率:清晰的流程和明確的職責(zé)有助于提升實(shí)驗(yàn)室整體工作效率。
4.數(shù)據(jù)可靠性:規(guī)范的操作是獲得準(zhǔn)確、可靠實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的前提。
(二)適用范圍
本規(guī)定適用于所有使用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的實(shí)驗(yàn)室,包括但不限于常規(guī)細(xì)胞維持、細(xì)胞傳代、細(xì)胞凍存與復(fù)蘇、細(xì)胞計(jì)數(shù)等操作。所有實(shí)驗(yàn)室人員必須嚴(yán)格遵守本規(guī)定,未經(jīng)授權(quán)不得擅自更改操作流程或設(shè)備設(shè)置。
(三)基本原則
1.無菌操作:所有細(xì)胞培養(yǎng)操作必須在嚴(yán)格的無菌條件下進(jìn)行,防止微生物污染。
2.質(zhì)量控制:定期對細(xì)胞、培養(yǎng)基、試劑及設(shè)備進(jìn)行質(zhì)量檢測,確保實(shí)驗(yàn)質(zhì)量。
3.安全第一:操作過程中注意個(gè)人防護(hù)和設(shè)備安全,及時(shí)處理異常情況。
4.記錄完整:詳細(xì)記錄所有操作步驟和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),確保實(shí)驗(yàn)過程的可追溯性。
二、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境與設(shè)備要求
(一)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境
1.潔凈度:細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備相應(yīng)的潔凈度等級,通常建議為潔凈級或生物安全級,具體要求根據(jù)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容確定。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)遠(yuǎn)離人流、物流主干道,減少外界干擾。
2.溫濕度控制:實(shí)驗(yàn)室溫度應(yīng)維持在22℃-26℃,濕度控制在40%-60%,避免溫度和濕度劇烈波動(dòng)影響細(xì)胞生長。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備溫濕度監(jiān)測儀,并定期記錄數(shù)據(jù)。
3.空氣凈化:實(shí)驗(yàn)室應(yīng)安裝空氣凈化系統(tǒng),定期更換濾網(wǎng),確??諝鉂崈???諝鈨艋到y(tǒng)應(yīng)具備過濾細(xì)菌和病毒的capabilities,定期進(jìn)行空氣微生物檢測。
4.照明:實(shí)驗(yàn)室應(yīng)提供充足且穩(wěn)定的照明,避免光線直射培養(yǎng)箱等設(shè)備,影響細(xì)胞生長。
5.廢棄物處理:實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)置專門的廢棄物處理區(qū)域,分類收集和處理細(xì)胞培養(yǎng)廢棄物,包括培養(yǎng)基、細(xì)胞懸液、廢棄器材等。
(二)設(shè)備要求
1.細(xì)胞培養(yǎng)箱:
(1)CO?培養(yǎng)箱:應(yīng)配備高精度的溫度和CO?濃度控制器,溫度控制精度±0.5℃,CO?濃度控制精度±0.1%。培養(yǎng)箱應(yīng)定期校準(zhǔn),確保測量準(zhǔn)確。
(2)普通培養(yǎng)箱:溫度控制精度±1℃,應(yīng)定期檢查溫度分布均勻性,確保培養(yǎng)箱內(nèi)各處溫度一致。
2.超凈工作臺:
(1)臺面材質(zhì):臺面應(yīng)為防腐蝕不銹鋼,內(nèi)壁光滑易清潔,無裂縫,耐酸堿腐蝕。
(2)工作原理:超凈工作臺通過高速氣流形成潔凈區(qū)域,防止外界污染。臺內(nèi)應(yīng)配備紫外燈用于定期消毒,但操作過程中嚴(yán)禁開啟紫外燈。
(3)使用規(guī)范:使用前應(yīng)開啟紫外燈照射30分鐘進(jìn)行消毒,使用后應(yīng)關(guān)閉紫外燈,待臺內(nèi)空氣冷卻后再進(jìn)行清潔和關(guān)機(jī)。
3.生物安全柜:
(1)類型選擇:根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的生物安全柜類型,通常用于高風(fēng)險(xiǎn)操作。
(2)操作要求:操作過程中必須佩戴手套,并確保手套未破損。避免在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行劇烈晃動(dòng)或產(chǎn)生氣溶膠的操作。
(3)維護(hù)保養(yǎng):定期進(jìn)行泄漏測試和性能驗(yàn)證,確保生物安全柜正常運(yùn)行。
4.細(xì)胞計(jì)數(shù)器:
(1)類型選擇:可根據(jù)需要選擇手動(dòng)或自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)器,確保計(jì)數(shù)準(zhǔn)確。
(2)使用方法:使用前應(yīng)校準(zhǔn)細(xì)胞計(jì)數(shù)器,并按照說明書進(jìn)行操作。定期清潔細(xì)胞計(jì)數(shù)器,避免污漬影響計(jì)數(shù)結(jié)果。
5.冰箱與冷凍柜:
(1)溫度控制:冰箱溫度應(yīng)穩(wěn)定在4℃以下,冷凍柜溫度應(yīng)穩(wěn)定在-20℃以下,用于儲存短期和長期細(xì)胞。
(2)樣品存放:細(xì)胞樣品應(yīng)分裝后儲存,避免反復(fù)凍融。長期儲存細(xì)胞應(yīng)置于-80℃冷凍柜或液氮中。
6.其他設(shè)備:
(1)離心機(jī):用于細(xì)胞沉淀和上清液分離,應(yīng)定期校準(zhǔn),確保轉(zhuǎn)速和加速度準(zhǔn)確。
(2)移液器:應(yīng)選擇合適的量程和精度,定期進(jìn)行校準(zhǔn),確保移液準(zhǔn)確。
(3)顯微鏡:用于觀察細(xì)胞形態(tài)和生長狀態(tài),應(yīng)定期清潔和校準(zhǔn),確保觀察效果。
三、細(xì)胞培養(yǎng)操作流程
(一)細(xì)胞準(zhǔn)備
1.細(xì)胞復(fù)蘇:
(1)從液氮中取出細(xì)胞凍存管,迅速置于37℃水浴中解凍,時(shí)間不超過1分鐘。解凍過程中應(yīng)輕柔搖晃凍存管,避免細(xì)胞聚集或損傷。
(2)解凍后立即加入預(yù)溫的培養(yǎng)基(如含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基),輕柔吹打混勻,確保細(xì)胞懸浮均勻。
(3)接種于培養(yǎng)皿或細(xì)胞瓶中,接種密度根據(jù)細(xì)胞類型確定,通常為1×10?-1×10?cells/cm2。
(4)置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),初始24-48小時(shí)密切觀察細(xì)胞狀態(tài)。
2.細(xì)胞傳代:
(1)觀察細(xì)胞生長狀態(tài),待細(xì)胞匯合度達(dá)到80%-90%時(shí)進(jìn)行傳代,避免過度擁擠影響細(xì)胞生長。
(2)用預(yù)熱的PBS(pH7.4)清洗細(xì)胞2次,每次3-5分鐘,用移液器輕柔吹打,去除舊培養(yǎng)基。
(3)加入0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液(胰蛋白酶濃度可根據(jù)細(xì)胞類型調(diào)整,如某些細(xì)胞類型可能需要0.125%胰蛋白酶)消化細(xì)胞,消化時(shí)間根據(jù)細(xì)胞類型和密度確定,通常為3-10分鐘。期間可在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化,待細(xì)胞變圓即可終止消化。
(4)加入含有血清的培養(yǎng)基(如含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基)終止消化,血清可中和胰蛋白酶活性。
(5)用移液器輕柔吹打收集細(xì)胞,制成單細(xì)胞懸液。細(xì)胞計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞密度,按新的接種密度接種于新的培養(yǎng)容器中。
(6)置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),初始24-48小時(shí)密切觀察細(xì)胞狀態(tài)。
(二)日常維護(hù)
1.培養(yǎng)基更換:
(1)觀察培養(yǎng)基顏色,若由無色變?yōu)辄S色,表明培養(yǎng)基已變酸,需及時(shí)更換。
(2)觀察培養(yǎng)基是否變渾濁,若變渾濁,表明可能存在微生物污染,需立即處理。
(3)更換培養(yǎng)基前,用預(yù)熱的PBS清洗細(xì)胞1次,去除舊培養(yǎng)基和代謝廢物。
(4)加入新鮮培養(yǎng)基,量根據(jù)培養(yǎng)容器大小和細(xì)胞密度確定,通常為培養(yǎng)基液面剛好沒過細(xì)胞表面。
(5)更換培養(yǎng)基后,置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
2.細(xì)胞觀察:
(1)每日通過倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長狀態(tài),包括細(xì)胞形態(tài)、匯合度、有無異常變化等。
(2)記錄觀察結(jié)果,包括細(xì)胞狀態(tài)、培養(yǎng)基顏色、溫度等。
(3)發(fā)現(xiàn)異常細(xì)胞(如細(xì)胞變圓、聚集、有異物等)應(yīng)及時(shí)處理,避免污染擴(kuò)散。
(三)細(xì)胞凍存與復(fù)蘇
1.細(xì)胞凍存:
(1)收集生長良好的細(xì)胞,用PBS清洗2次,去除舊培養(yǎng)基。
(2)加入預(yù)冷的凍存液(通常含10%DMSO和基礎(chǔ)培養(yǎng)基,如含10%FBS的DMEM),DMSO濃度可根據(jù)細(xì)胞類型調(diào)整,某些細(xì)胞類型可能需要更高的DMSO濃度(如15%-20%)。
(3)分裝至凍存管,每個(gè)凍存管接種細(xì)胞數(shù)量根據(jù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)需求確定,通常為1×10?-1×10?cells/vial。
(4)標(biāo)記凍存管信息,包括細(xì)胞類型、凍存日期、細(xì)胞數(shù)量等。
(5)將凍存管置于-80℃冰箱過夜,次日轉(zhuǎn)移至液氮長期保存。
2.細(xì)胞復(fù)蘇:
(1)從液氮中取出凍存管,迅速置于37℃水浴中解凍,時(shí)間不超過1分鐘。解凍過程中應(yīng)輕柔搖晃凍存管,避免細(xì)胞聚集或損傷。
(2)解凍后立即加入預(yù)溫的培養(yǎng)基(如含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基),輕柔吹打混勻,確保細(xì)胞懸浮均勻。
(3)接種于培養(yǎng)皿或細(xì)胞瓶中,接種密度根據(jù)細(xì)胞類型確定,通常為1×10?-1×10?cells/cm2。
(4)置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),初始24-48小時(shí)密切觀察細(xì)胞狀態(tài)。
四、污染控制與廢棄物處理
(一)污染控制
1.無菌操作區(qū)與非無菌區(qū):
(1)嚴(yán)格區(qū)分無菌操作區(qū)和非無菌區(qū),無菌操作區(qū)通常為超凈工作臺或生物安全柜內(nèi)部。
(2)非無菌物品(如實(shí)驗(yàn)記錄本、個(gè)人物品等)不得進(jìn)入無菌操作區(qū)。
(3)無菌操作區(qū)應(yīng)保持整潔,避免雜物堆積。
2.手部消毒:
(1)操作前后必須用70%-75%乙醇擦拭雙手,或使用含氯消毒劑進(jìn)行手部消毒。
(2)佩戴無菌手套,操作過程中避免觸摸無菌區(qū)域。
(3)手套破損或污染后應(yīng)立即更換。
3.操作規(guī)范:
(1)使用無菌吸管、無菌培養(yǎng)皿、無菌移液器等無菌器材。
(2)避免在無菌操作區(qū)產(chǎn)生氣溶膠,如吹打細(xì)胞懸液時(shí)應(yīng)緩慢吹打。
(3)避免在無菌操作區(qū)內(nèi)說話、咳嗽、打噴嚏,如需說話應(yīng)面向無菌區(qū)域。
4.環(huán)境消毒:
(1)實(shí)驗(yàn)臺面、設(shè)備表面等定期使用70%-75%乙醇擦拭消毒。
(2)每周至少一次使用紫外線燈照射消毒無菌操作區(qū),每次持續(xù)1小時(shí),操作前必須關(guān)閉紫外燈。
(3)定期使用含氯消毒劑對實(shí)驗(yàn)室地面、墻壁等進(jìn)行消毒。
5.微生物檢測:
(1)定期對細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境(如空氣、超凈工作臺表面)進(jìn)行微生物檢測,確保符合潔凈度要求。
(2)發(fā)現(xiàn)污染時(shí),應(yīng)立即采取措施進(jìn)行處理,包括徹底消毒、更換器材、重新培養(yǎng)等。
(二)廢棄物處理
1.細(xì)胞培養(yǎng)廢棄物:
(1)培養(yǎng)基、細(xì)胞懸液等液體廢棄物應(yīng)先收集于帶蓋的容器中,然后高壓滅菌(121℃,15分鐘)后再作為普通垃圾處理。
(2)對于可能含有傳染性物質(zhì)的廢棄物,應(yīng)先進(jìn)行化學(xué)消毒(如使用含氯消毒劑)后再高壓滅菌。
2.污染性廢棄物:
(1)廢棄的細(xì)胞凍存管、培養(yǎng)瓶、移液器等應(yīng)先高壓滅菌(121℃,15分鐘)后再進(jìn)行清洗和消毒。
(2)破碎的玻璃器材應(yīng)放入專門的銳器盒中,避免刺傷。
3.化學(xué)廢棄物:
(1)廢棄的化學(xué)試劑(如酒精、消毒劑等)應(yīng)按照實(shí)驗(yàn)室規(guī)定進(jìn)行分類收集和處理。
(2)不得將化學(xué)廢棄物直接倒入下水道,應(yīng)委托專業(yè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行處置。
4.廢棄物處理流程:
(1)收集:將廢棄物分類收集于指定的容器中,并標(biāo)記廢棄物類型。
(2)消毒:對需要消毒的廢棄物進(jìn)行消毒處理。
(3)滅菌:對需要滅菌的廢棄物進(jìn)行高壓滅菌處理。
(4)處理:將處理后的廢棄物按照實(shí)驗(yàn)室規(guī)定進(jìn)行處置。
五、安全注意事項(xiàng)
1.個(gè)人防護(hù):
(1)操作前后必須佩戴合適的個(gè)人防護(hù)裝備,包括實(shí)驗(yàn)服、口罩、手套等。
(2)實(shí)驗(yàn)服應(yīng)覆蓋身體,避免皮膚暴露。
(3)口罩應(yīng)能有效過濾空氣中的顆粒物,避免吸入有害氣體。
(4)手套應(yīng)選擇合適的尺寸,避免滑落或破損。
2.防火安全:
(1)實(shí)驗(yàn)臺面應(yīng)保持整潔,避免雜物堆積,特別是易燃物品。
(2)使用酒精燈等明火時(shí),應(yīng)遠(yuǎn)離易燃物品,并配備滅火器。
(3)使用明火后應(yīng)及時(shí)熄滅,并確保酒精燈帽蓋好。
3.設(shè)備安全:
(1)定期檢查細(xì)胞培養(yǎng)箱、超凈工作臺、離心機(jī)等設(shè)備的運(yùn)行狀態(tài),確保設(shè)備正常。
(2)設(shè)備故障時(shí)應(yīng)及時(shí)報(bào)修,不得自行拆卸或修理。
(3)使用設(shè)備前應(yīng)仔細(xì)閱讀操作說明書,并按照規(guī)范操作。
4.異常處理:
(1)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞污染、設(shè)備故障等異常情況時(shí),應(yīng)立即采取措施進(jìn)行處理,并報(bào)告實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人。
(2)發(fā)生意外事故(如燙傷、割傷等)時(shí),應(yīng)立即采取急救措施,并送醫(yī)治療。
(3)定期進(jìn)行安全培訓(xùn),提高實(shí)驗(yàn)室人員的安全意識和應(yīng)急處理能力。
六、記錄與存檔
(一)記錄內(nèi)容
1.細(xì)胞基本信息:
(1)細(xì)胞類型:如HeLa細(xì)胞、Hela細(xì)胞等。
(2)細(xì)胞來源:如原代細(xì)
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