(10)授權(quán)公告號(hào)CN113196055B(65)同一申請(qǐng)的已公布的文獻(xiàn)號(hào)(85)PCT國(guó)際申請(qǐng)進(jìn)入國(guó)家階段日(86)PCT國(guó)際申請(qǐng)的申請(qǐng)數(shù)據(jù)PCT/EP2019/0778182019(87)PCT國(guó)際申請(qǐng)的公布數(shù)據(jù)WO2020/078924EN(73)專利權(quán)人馬克斯·普朗克科學(xué)促進(jìn)協(xié)會(huì)(74)專利代理機(jī)構(gòu)北京市萬慧達(dá)律師事務(wù)所granuleregulatorsfromacompoundlibrary.ProteinCell.2017,第8卷(第8期),618-622.neurodegenerativedisease.2017ascb-embomeeting-oralabstracts.2017,第28卷(第26期),M128.Anoveltherapeuticstrategydiseases.PharmacolRes.2020,105143.granuleregulatorsfromacompoundlibrary.ProteinCell.2017,第8卷(第8期),618-622. 專利代理師周倩羽趙潔權(quán)利要求書3頁(yè)說明書62頁(yè)附圖19頁(yè)(54)發(fā)明名稱物有關(guān)的特性。用于治療疾病的化合物及其篩選方法本發(fā)明涉及一種用于在與應(yīng)激顆粒的形成有關(guān)的神經(jīng)退行性疾病的預(yù)防或治療中使用的硫辛酸和二氫硫辛酰胺。本發(fā)明進(jìn)一步涉及一種識(shí)別化合物的方法，該化合物調(diào)節(jié)與包含凝聚物相關(guān)分子的一種或多種凝聚物有關(guān)的特性，包含：(a)使所述化合物與包含一種或多種凝聚物的細(xì)胞組合物或能夠形成一種或多種凝聚物的細(xì)胞組合物接觸，和(b)測(cè)定與所述一種或多種21.一種識(shí)別化合物的方法，該化合物調(diào)節(jié)與包含凝聚物相關(guān)分子的一種或多種凝聚物(a)使所述化合物與包含一種或多種凝聚物的細(xì)胞組合物或能夠形成一種或多種凝聚(b)基于所述的包含凝聚物相關(guān)分子的一種或多種凝聚物的數(shù)目、所述一種或多種凝聚物的細(xì)胞位置、和所述一種或多種凝聚物的細(xì)胞分布，來測(cè)定與所述一種或多種凝聚物有關(guān)的特性，以識(shí)別調(diào)節(jié)與所述一種或多種凝聚物有關(guān)的特性的所述化合物，其中，與參比相比，所述特性的調(diào)節(jié)指示所述化合物調(diào)節(jié)與所述一種或多種凝聚物有關(guān)的特性。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中基于以下中的任何一種或多種測(cè)定與所述一種或多種凝聚物有關(guān)的特性：(i)所述一種或多種凝聚物的尺寸；(ii)所述一種或多種凝聚物和/或所述凝聚物相關(guān)分子的表面積；(iii)所述一種或多種凝聚物的組成；(iv)所述一種或多種凝聚物的流動(dòng)性；(v)所述一種或多種凝聚物的凝固；(vi)所述一種或多種凝聚物的溶解；(vii)纖維形成的存在和/或量；(viii)所述凝聚物相關(guān)分子的位置；(ix)所述凝聚物相關(guān)分子向所述一種或多種凝聚物中的分隔；和(x)所述凝聚物相關(guān)分子的聚集。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述一種或多種凝聚物在所述細(xì)胞組合物中的一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞內(nèi)。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，進(jìn)一步包含在步驟(b)之前使所述細(xì)胞組合物經(jīng)受凝聚物形成條件。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，進(jìn)一步包含在步驟(a)之前使所述細(xì)胞組合物經(jīng)受凝聚物形成條件。6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的方法，其中所述凝聚物形成條件是以下中的任何一種或多(ii)線粒體電子傳輸鏈抑制劑；(iv)滲透壓應(yīng)激源；(vi)糖酵解抑制。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述凝聚物相關(guān)分子是多肽。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述凝聚物相關(guān)分子是野生型多肽。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述凝聚物相關(guān)分子是突變多肽。10.根據(jù)權(quán)利要求7-9中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述凝聚物相關(guān)分子選自由FUS、TDP-343、EWSR1、TIAL1、PABPC1和G3BP1所組成的群組。14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，進(jìn)一步包含使所述細(xì)胞組合物的至少一部分與固定劑15.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，進(jìn)一步包含使所述細(xì)胞組合物的至少一部分與染色劑16.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，進(jìn)一步包含使所述細(xì)胞組合物的至少一部分與DNA損23.一種識(shí)別用于治療疾病的化合物的方法，所述方法包含根據(jù)權(quán)利要求1-22中任一25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中所述神經(jīng)退行性疾病是肌萎縮性側(cè)索硬化癥27.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述一種或多種凝聚物選自由應(yīng)激顆粒、P體、Cajal體、早幼粒細(xì)胞白血病蛋白質(zhì)PML體、旁斑、DNA損傷灶凝聚物、分裂體、P-顆粒、組蛋白基因座體、多泡體、神經(jīng)元RNA顆粒、核寶石、核孔、核應(yīng)激體、核仁、0ct1/PTF/轉(zhuǎn)錄OPT結(jié)構(gòu)域、核周區(qū)室、PML致癌結(jié)構(gòu)域、多梳體、加工體、Sam68核體和剪接斑點(diǎn)，所組成的群組。28.權(quán)利要求1-27中任一項(xiàng)所述的方法所識(shí)別的化合物在制備用于治療個(gè)體中的RNA31.根據(jù)權(quán)利要求28所述的用途，其中所述RBP選自由FUS、TDP-43、EWSR1、TIAL1、32.根據(jù)權(quán)利要求28所述的用途，其中所述RBP是FUS。433.根據(jù)權(quán)利要求28所述的用途，其中所述RBP是TDP-43。34.根據(jù)權(quán)利要求29所述的用途，其中所述RBP在所述細(xì)胞質(zhì)位置分隔成所述凝聚物。35.根據(jù)權(quán)利要求29所述的用途，其中所述藥物i)減少在所述細(xì)胞質(zhì)位置的包含所述RBP的所述凝聚物的數(shù)目；ii)增加在所述細(xì)胞質(zhì)位置的包含所述RBP的所述凝聚物的流動(dòng)性；和/或iii)降低和/或預(yù)防在所述細(xì)胞質(zhì)位置的包含所述RBP的所述凝聚物的凝固。36.根據(jù)權(quán)利要求29所述的用途，其中所述藥物不影響所述個(gè)體中的其他凝聚物和/或凝聚物相關(guān)分子。37.根據(jù)權(quán)利要求36所述的用途，其中所述其他凝聚物選自由不包含所述RBP的應(yīng)激顆39.根據(jù)權(quán)利要求28所述的用途，其中所述RBP相關(guān)疾病是神經(jīng)退行性疾病。40.根據(jù)權(quán)利要求39所述的用途，其中所述神經(jīng)退行性疾病是ALS。41.根據(jù)權(quán)利要求39所述的用途，其中所述藥物恢復(fù)所述RBP造成的神經(jīng)元缺陷。42.根據(jù)權(quán)利要求41所述的用途，其中所述神經(jīng)元缺陷包含軸突運(yùn)輸缺陷和/或軸突枯43.根據(jù)權(quán)利要求28所述的用途，其中所述化合物選自由硫辛酸和其鹽類、硫辛酰胺和44.一種根據(jù)權(quán)利要求1-27任一項(xiàng)所述的方法識(shí)別的化合物。45.根據(jù)權(quán)利要求44所述的化合物，選自由硫辛酸和其鹽類、硫辛酰胺和其鹽類、二氫46.一種藥物組合物，包含權(quán)利要求44或45所述的化合物。47.根據(jù)權(quán)利要求46所述的藥物組合物，進(jìn)一步包含藥學(xué)上可接受的賦形劑。48.根據(jù)權(quán)利要求46所述的藥物組合物，被配制用于口服施用。49.權(quán)利要求44或45所述的化合物或權(quán)利要求46-48任一項(xiàng)所述的藥物組合物在制備用于治療或預(yù)防個(gè)體中與應(yīng)激顆粒的形成有關(guān)的神經(jīng)退行性疾病的藥物中的用途。50.根據(jù)權(quán)利要求49所述的用途，其中所述藥物是用于口服施用。51.根據(jù)權(quán)利要求49所述的用途，其中所述與應(yīng)激顆粒的形成有關(guān)的神經(jīng)退行性疾病52.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述細(xì)胞分布是基于所述的包含凝聚物相關(guān)分子的一種或多種凝聚物在細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)中的比率。5[0001]相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用[0002]本申請(qǐng)要求在2018年10月15日提交的EP18200401.0和2019年8月2日提交的EP19189772.7的優(yōu)先權(quán)，在此通過引用將其各自的全部?jī)?nèi)容并入本文。背景技術(shù)[0003]肌萎縮性側(cè)索硬化癥(ALS)是一種致命的神經(jīng)退行性疾病，其預(yù)后差且治療選擇余地不多。目前僅有兩種FDA批準(zhǔn)的藥物利魯唑和依達(dá)拉奉可用，然而兩者僅能將疾病進(jìn)展減緩幾個(gè)月。利魯唑和依達(dá)拉奉的作用尚未得到充分了解，其很可能并不直接靶向疾病的潛在發(fā)病機(jī)制。因此迫切需要新的方法。大多數(shù)類型的ALS是散發(fā)的，但約10%是單基因病特有的低復(fù)雜性結(jié)構(gòu)域(LCD)。[0004]ALS發(fā)病機(jī)理的確切機(jī)制尚不清楚；聚集體或寡聚物是否有毒性、或它們是否導(dǎo)致蛋白質(zhì)功能喪失、以及這如何導(dǎo)致下游效應(yīng)尚不明確。然而，突變的TDP-43和FUS經(jīng)常錯(cuò)位至細(xì)胞質(zhì)，從而促進(jìn)與疾病相關(guān)的應(yīng)激顆粒形成和異常的細(xì)胞質(zhì)聚集體。一種假說特別地表明，應(yīng)激顆粒的病理穩(wěn)定性可能與疾病有關(guān)。這表明溶解應(yīng)激顆粒和/或聚集體可以減輕疾病，無論發(fā)病機(jī)理是否是通過毒性功能獲得還是蛋白質(zhì)螯合而功能喪失。[0005]應(yīng)激顆粒是液體狀無膜界限的區(qū)室，并且最近的研究表明，含有LCD的蛋白質(zhì)通過液-液相分離形成這些區(qū)室。因此，原則上，其可能靶向于該物理化學(xué)驅(qū)動(dòng)的應(yīng)激顆粒形成。確實(shí)存在破壞這種相分離的已知化合物，特別是1,6-己二醇和類似的醇類。然而，這些化合物存在兩個(gè)問題：首先，它們需要極高的濃度(1-10%)并且有毒。其次，它們的作用不是應(yīng)激顆粒特異性的，并且它們還影響其它液體狀無膜界限的區(qū)室。許多其它區(qū)室也是液體狀[0006]存在對(duì)一種識(shí)別化合物的方法的需要，該化合物更特異性地調(diào)節(jié)某些區(qū)室的相分離以有效且特異性地治療ALS。[0007]本文引用的所有參考文獻(xiàn)，包括專利申請(qǐng)和出版物，均通過引用以其整體并入本發(fā)明內(nèi)容[0008]在一些方面，本公開提供了一種識(shí)別化合物的方法，該化合物調(diào)節(jié)與包含凝聚物相關(guān)分子的一種或多種凝聚物有關(guān)的特性，該方法包含：(a)使所述化合物與包含一種或多種凝聚物的細(xì)胞組合物或能夠形成一種或多種凝聚物的細(xì)胞組合物接觸，和(b)測(cè)定與所述一種或多種凝聚物有關(guān)的特性，其中與參比相比，所述特性的調(diào)節(jié)指示所述化合物調(diào)節(jié)與所述一種或多種凝聚物有關(guān)的特性。[0009]在一些實(shí)施方式中，測(cè)定與所述一種或多種凝聚物有關(guān)的特性是基于以下中的任何一個(gè)或多個(gè)：(i)包含和/或不包含凝聚物相關(guān)分子的凝聚物的數(shù)目；(ii)所述一種或多種凝聚物的尺寸；(iii)所述一種或多種凝聚物的位置；(iv)一種或多種凝聚物的分布；(v)6所述一種或多種凝聚物的表面積；(vi)所述一種或多種凝聚物的組成；(vii)所述一種或多種凝聚物的流動(dòng)性(liquidity);(viii)所述一種或多種凝聚物的凝固；(ix)所述一種或多種凝聚物的溶解；(x)纖維形成的存在和/或量；(xi)所述凝聚物相關(guān)分子的位置；(xii)所述凝聚物相關(guān)分子向所述一種或多種凝聚物中的分隔；和(xiii)所述凝聚物相關(guān)分子的聚[0010]在一些實(shí)施方式中，所述一種或多種凝聚物在該細(xì)胞組合物中的一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞[0011]在一些實(shí)施方式中，本文所述的方法進(jìn)一步包含：在測(cè)定與一種或多種凝聚物有關(guān)的特性之前，使所述細(xì)胞組合物經(jīng)受凝聚物形成條件。[0012]在一些實(shí)施方式中，本文所述的方法進(jìn)一步包含：在使化合物與細(xì)胞組合物接觸之前，使所述細(xì)胞組合物經(jīng)受凝聚物形成條件。[0013]在一些實(shí)施方式中，所述綜合物形成條件是以下中的任何一種或多種：(i)氧化應(yīng)激源；(ii)線粒體電子傳輸鏈抑制劑；(iii)熱應(yīng)激源；(iv)滲透壓應(yīng)激源；(v)高滲應(yīng)激源；和(vi)糖酵解抑制。[0014]在一些實(shí)施方式中，所述凝聚物相關(guān)分子是多肽。在一些實(shí)施方式中，所述凝聚物相關(guān)分子是野生型多肽。在一些實(shí)施方式中，所述凝聚物相關(guān)分子是突變多肽。在一些實(shí)施[0015]在一些實(shí)施方式中，所述細(xì)胞組合物中的細(xì)胞表達(dá)所述凝聚物相關(guān)分子。在一些[0016]在一些實(shí)施方式中，本文所述的方法進(jìn)一步包含對(duì)所述細(xì)胞組合物的至少一部分成像。[0017]在一些實(shí)施方式中，本文所述的方法進(jìn)一步包含使所述細(xì)胞組合物的至少一部分與固定劑接觸。[0018]在一些實(shí)施方式中，本文所述的方法進(jìn)一步包含使所述細(xì)胞組合物的至少一部分與染色劑接觸。[0019]在一些實(shí)施方式中，本文所述的方法進(jìn)一步包含使所述細(xì)胞組合物的至少一部分[0020]在一些實(shí)施方式中，所述參比是第二凝聚物。在一些實(shí)施方式中，所述參比是第二細(xì)胞組合物。[0021]在一些實(shí)施方式中，本文所述的方法進(jìn)一步包含使用第二細(xì)胞水平測(cè)定來評(píng)估所識(shí)別的化合物。[0022]在一些實(shí)施方式中，本文所述的方法進(jìn)一步包含使用生化測(cè)定來評(píng)估所識(shí)別的化合物。[0023]在一些實(shí)施方式中，本文所述的方法進(jìn)一步包含使用體內(nèi)測(cè)定來評(píng)估所識(shí)別的化合物。[0024]在另一方面，本公開提供了一種識(shí)別可用于治療疾病的化合物的方法，所述方法包含根據(jù)本文所述方法的任一種來識(shí)別化合物。在一些實(shí)施方式中，所述疾病是神經(jīng)退行[0025]本發(fā)明涉及用于治療與應(yīng)激顆粒形成相關(guān)的神經(jīng)退行性疾病(特別是用于治療肌7萎縮性側(cè)索硬化癥)的化合物。[0026]本發(fā)明的一個(gè)方面涉及一種用于在預(yù)防或治療與應(yīng)激顆粒形成有關(guān)的神經(jīng)退行性疾病的方法中使用的化合物，該化合物選自硫辛酸(5-(1,2-二硫戊環(huán)-3-基)戊酸；CAS號(hào)1200-22-2;1077-27-6;1077-28-7)、硫辛酰胺(5-(1,2-二硫戊環(huán)-3-基)戊酰胺；CAS號(hào)940-69-2)、二氫硫辛酸(6,8-二巰基辛酸；CAS號(hào)462-20-4)和二氫硫辛酰胺(6,8-雙(硫烷基)辛[0027]特別地，所述神經(jīng)退行性疾病與受疾病影響的組織內(nèi)所含細(xì)胞的胞質(zhì)溶膠中應(yīng)激顆粒形成有關(guān)。[0028]特別地，硫辛酸和/或硫辛酰胺可以R-型、S-型或外消旋物的形式使用。[0029]本領(lǐng)域技術(shù)人員了解，任何具體提及的化合物可以作為化合物的藥學(xué)上可接受的鹽存在。藥學(xué)上可接受的鹽包含離子化的藥物和帶相反電荷的抗衡離子。藥學(xué)上可接受的[0030]在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的化合物根據(jù)以下劑量方案施用：施用日劑量600mg至1,600mg的所述化合物。[0032]在一些實(shí)施方式中，與應(yīng)激顆粒形成相關(guān)的神經(jīng)退行性疾病選自肌萎縮性側(cè)索硬[0033]在一些實(shí)施方式中，用于在預(yù)防或治療與應(yīng)激顆粒形成有關(guān)的神經(jīng)退行性疾病的方法中使用的藥物組合物包含如0025段所述的本發(fā)明化合物。[0034]在一些實(shí)施方案中，所述藥物組合物被配制用于口服施用。[0035]在一些實(shí)施方式中，與應(yīng)激顆粒形成有關(guān)的神經(jīng)退行性疾病是肌萎縮性側(cè)索硬化癥。[0036]或者，提供了一種用于在預(yù)防或治療與應(yīng)激顆粒形成有關(guān)的神經(jīng)退行性疾病的方法中使用的劑型，其中所述劑型包含本發(fā)明的化合物，特別是如0025段中所述的化合物。存在藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑。[0038]在一些實(shí)施方式中，所述劑型被配制用于口服施用。[0039]在一些實(shí)施方式中，所述與應(yīng)激顆粒形成有關(guān)的神經(jīng)退行性疾病選自肌萎縮性側(cè)[0040]或者，根據(jù)本發(fā)明的治療方面可以被配制為一種用于預(yù)防或治療與應(yīng)激顆粒形成有關(guān)的神經(jīng)退行性疾病的方法，其中所述方法包含向有需要的患者施用本發(fā)明的化合物，特別是施用如0025段中所述的化合物。8[0042]在一些實(shí)施方式中，口服施用所述化合物。[0043]在一些實(shí)施方式中，所述與應(yīng)激顆粒形成有關(guān)的神經(jīng)退行性疾病選自肌萎縮性側(cè)[0044]在一些實(shí)施方式中，所述與應(yīng)激粒形成有關(guān)的神經(jīng)退行性疾病是肌萎縮性側(cè)索硬化癥。[0045]在某些方面，本發(fā)明涉及一種用于減少或抑制細(xì)胞中應(yīng)激顆粒形成的方法，其中所述方法包含使用選自以下的化合物：[0047]-雜三環(huán)化合物，特別是蒽[0048]-吖啶或吖啶衍生物，例如奎納克林或氨基吖啶或米托蒽醌；[0051]在一些實(shí)施方式中，所述化合物提供在培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基中。[0052]本領(lǐng)域技術(shù)人員還將理解，在不脫離本公開的范圍的情況下，可以對(duì)本文描述的實(shí)現(xiàn)的形式和細(xì)節(jié)進(jìn)行改變。另外，盡管已經(jīng)參考各種實(shí)現(xiàn)描述了各種優(yōu)點(diǎn)、方面和目的，但本公開的范圍不應(yīng)通過參考此類優(yōu)點(diǎn)、方面和目的而受限制。附圖說明[0053]圖1示出了對(duì)影響離體HeLa細(xì)胞中含F(xiàn)US應(yīng)激顆粒形成的小分子化合物的篩選。a)(一種砷螯合藥物)以及吐根堿(其通過穩(wěn)定多核糖體防止應(yīng)激顆粒形成)的陽性對(duì)照應(yīng)激的細(xì)胞中的亞細(xì)胞定位。應(yīng)激引起FUS的出核轉(zhuǎn)運(yùn)和應(yīng)激顆粒(含F(xiàn)US的細(xì)胞質(zhì)液體液滴)的形成。b)對(duì)離體HeLa細(xì)胞中FUSGFP定位有影響的小分子的篩選工作流程。c)對(duì)于所有1600種篩選的化合物的馬氏距離排名(來自六個(gè)視野的平均值),其中高值意味著化合物作用更大。將FUS定位的幾種自動(dòng)測(cè)量組合成單個(gè)馬氏距離得分；最大的貢獻(xiàn)者是細(xì)胞質(zhì)FUS液滴數(shù)目和面積。使用130的截止值選擇了47種化合物用于進(jìn)一步分析。突出了二巰基丙醇和吐根堿。d)對(duì)純化的FUSGFP的體外FUS液-液相分離有影響的小分子的篩選工作流程。e)液滴數(shù)和向FUSGFP液滴的信號(hào)分隔(在低鹽條件下形成)變化的Z評(píng)分排名，其中較大的正值或負(fù)值意味著化合物作用更大。在化合物溶劑(DMSO)陰性對(duì)照沒有顯著影響的最大濃度下計(jì)種選出物類別的示例；硫辛酰胺、氯化十六烷基吡啶翁(表面活性劑)、米托蒽醌(雜三/四環(huán)化合物)。g)化合物溶劑(DMSO)陰性對(duì)照或以下化合物類別示例的液滴的外觀：氯化十六烷基吡啶(表面活性劑)、硫辛酰胺或米托蒽醌(雜三環(huán))。注意到氯化十六烷基吡啶和硫辛酰胺的液滴較大，而米托蒽醌的液體較小。[0054]圖2示出了硫辛酰胺相關(guān)化合物的結(jié)構(gòu)活性關(guān)系，其揭示了可能的作用機(jī)制。a)在用硫辛酰胺預(yù)處理1h,接著用砷酸鹽應(yīng)激1h,繼續(xù)用硫辛酰胺處理后，HeLa細(xì)胞FUSGFP液滴數(shù)(●,左軸)和核/細(xì)胞質(zhì)信號(hào)比率(O,右軸)的劑量響應(yīng)。b)iPS細(xì)胞FUSGFP液滴數(shù)和核/細(xì)胞質(zhì)比率的劑量響應(yīng)，如a)中所述。c)對(duì)于一系列與硫辛酰胺相關(guān)的化合物，使用與9a)相同的應(yīng)激/處理方案，HeLa細(xì)胞FUSGFP液滴數(shù)和核/細(xì)胞質(zhì)比率的劑量響應(yīng)。d)化合物結(jié)構(gòu)以及對(duì)細(xì)胞質(zhì)FUS液滴數(shù)和FUS細(xì)胞核分隔的影響的匯總。[0055]圖3示出了硫辛酰胺和硫辛酸在不同方案下對(duì)不同應(yīng)激的作用模式，報(bào)告了可能的作用機(jī)制。a)在用砷酸鹽預(yù)應(yīng)激1小時(shí)，然后用10μM硫辛酰胺(或DMSO溶劑對(duì)照)處理，然后持續(xù)砷酸鹽應(yīng)激的HeLa細(xì)胞中，細(xì)胞質(zhì)FUSGFP液滴的損失動(dòng)力學(xué)。右邊示出了在加入化合物后2分鐘和100分鐘的示例圖像。硫辛酰胺可以逆轉(zhuǎn)現(xiàn)存砷酸鹽應(yīng)激的作用。b)表達(dá)FUS次，然后用砷酸鹽應(yīng)激了1小時(shí)。硫辛酰胺預(yù)處理對(duì)細(xì)胞防止對(duì)砷酸鹽應(yīng)激的響應(yīng)沒有持久的HeLa細(xì)胞的圖像。硫辛酰胺和硫辛酸影響許多應(yīng)激顆粒組分。d)經(jīng)受不同的應(yīng)激-魚藤酮酰胺或者硫辛酸的異構(gòu)體處理之后，表達(dá)FUSGFP的HeLa細(xì)胞的圖像。硫辛酰胺和硫辛酸對(duì)多種應(yīng)激(包括線粒體、滲透和氧化應(yīng)激)具有活性。處理1小時(shí)后，表達(dá)其它無膜界限區(qū)室的蛋白GFP標(biāo)志物的HeLa細(xì)胞的圖像。不清楚的地方，用虛線輪廓指示細(xì)胞核的位置。硫辛酰胺不破壞P體(DCP1A)、Cajal體(COIL)、DNA損傷灶(TRP53BP1)或核仁(NCB1),而米托蒽醌確實(shí)具有非應(yīng)激顆粒特異性作用。b)在用化合物處的平均FUSGFP信號(hào)強(qiáng)度響應(yīng)以及高于和低于平均值的一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)偏差。米托蒽醌在低于細(xì)[0057]圖5顯示硫辛酰胺和硫辛酸在體外影響FUS凝聚物的性質(zhì)和ALS相關(guān)的突變體FUS的凝固。a)示意性地示出了使用光學(xué)鑷子對(duì)凝聚物液滴流動(dòng)性進(jìn)行定量的示意圖。使兩個(gè)液滴接觸并開始融合，松弛成單個(gè)球形液滴(一旦針對(duì)液滴尺寸進(jìn)行調(diào)整)所花費(fèi)的時(shí)間是液滴的粘度與表面張力之比的量度-流動(dòng)性的量度。兩個(gè)獨(dú)立重復(fù)的代表。b)對(duì)于與300μM硫辛酰胺或等效DMSO溶劑對(duì)照(0.3%)的液滴融合，液滴尺寸-校正的松弛時(shí)間。方框表示第25、第50和第75百分位數(shù)，須狀線表示第5和第95百分位數(shù)。硫辛酰胺減少融合時(shí)間，了較低的粘度和/或較大的表面張力。c-e)相對(duì)于等效DMSO溶劑對(duì)照(0.1%),在振蕩的同件與先前公開7的條件相匹配。c)老化30小時(shí)后的代表性圖像，顯示了DMSO樣品中的纖維形成。d)在老化過程中，在FUS凝聚物和纖維的光漂白(FRAP)時(shí)間序列之后的代表性熒光恢復(fù)。e)c)中FRAP的定量。誤差棒代表標(biāo)準(zhǔn)偏差。相對(duì)于等效DMSO溶劑對(duì)照(0.3%),用硫辛酰胺處理的老化凝聚物保持大的FUSGFP流動(dòng)分?jǐn)?shù)和短的FRAP半衰期，而未處理的凝聚物硬化了硫辛酰胺和硫辛酸對(duì)振蕩時(shí)G156EFUSGFP凝聚物“老化”的影響。兩種化合物都延遲了纖維形成。[0058]圖6顯示，硫辛酰胺和硫辛酸在體外直接改變了FUS相分離和FUSG156E凝固。a)由2.8μMFUSGFP在體外與不同濃度的KC1(其抑制液滴形成)與100μM硫辛酰胺、硫辛酸或等效的DMSO溶劑對(duì)照(1%)形成的液滴。硫辛酰胺和硫辛酸微妙地促進(jìn)了液滴形成。b)相對(duì)于當(dāng)量DMSO溶劑對(duì)照(0.3%),硫辛酰胺和硫辛酸對(duì)振蕩時(shí)G156EFUSGFP液滴“老化”的影響。兩種化合物都延遲了纖維形成。c)在b)中所示的老化過程中，在形成的FUS液滴和纖維的光漂白(FRAP)后的代表性熒光恢復(fù)。硫辛酰胺或硫辛酸處理的老化液滴保留了快速FRAP,表明了流動(dòng)性。d)在c)中所示的熒光信號(hào)強(qiáng)度的定量。誤差棒代表標(biāo)準(zhǔn)偏差。在未處理的液滴硬化時(shí)，硫辛酰胺和硫辛酸處理使得液滴保持大的FUSGFP流動(dòng)分?jǐn)?shù)和短的FRAP[0059]圖7示出了硫辛酰胺在細(xì)胞中積累到高濃度而沒有被代謝。a)合成并表征了15NR-(+)和(±)-硫辛酰胺。使用15N-編輯的細(xì)胞沉淀中選擇性地檢測(cè)兩種酰胺質(zhì)子。反式-酰胺質(zhì)子(在6.9ppm下共振)可由NMR定量。在低于pH8.5、10℃下，信號(hào)強(qiáng)度與硫辛酰胺濃度成正比。詳細(xì)參見補(bǔ)充方法。b)通過將細(xì)胞暴露于15N硫辛酰胺，然后分離樣品，并使用來自反式-酰胺質(zhì)子的NMR信號(hào)強(qiáng)度測(cè)量15N硫辛酰胺濃度，來測(cè)量的HeLa細(xì)胞對(duì)硫辛酰胺的攝取。在有或沒有HeLa細(xì)胞的情況下，將具有100μM15N硫辛酰胺的培養(yǎng)基培養(yǎng)1小時(shí)。除去培養(yǎng)基后，用培養(yǎng)基(不含砷酸鹽)洗滌細(xì)胞，的y軸比例示出了用3mM砷酸鹽應(yīng)激并用R-(+)-硫辛酰胺培養(yǎng)的細(xì)胞的示例性光譜。c)通過從來自無細(xì)胞培養(yǎng)基(青色)的信號(hào)中減去來自與細(xì)胞一起培養(yǎng)的培養(yǎng)基(紅色)的信號(hào)，來測(cè)定細(xì)胞攝取。這是對(duì)應(yīng)激(3mM砷酸鹽)或未應(yīng)激細(xì)胞與15NR-(+)或(±)-硫辛酰胺的所有四種組合進(jìn)行的。對(duì)于用15NR-(+)-硫辛酰胺處理的應(yīng)激細(xì)胞，來自洗滌細(xì)胞樣品的高信號(hào)強(qiáng)度(綠色)與從具有(紅色)和不具有細(xì)胞(青色)信號(hào)強(qiáng)度計(jì)算的來自培養(yǎng)基的大量攝取一致。d)c)的定量，顯示了攝取百分比和計(jì)算的細(xì)胞內(nèi)濃度，假設(shè)硫辛酰胺均勻分布在細(xì)胞內(nèi)(參見補(bǔ)充方法)。測(cè)量的不測(cè)定性為約30%,并且在條件之間的攝取中沒有顯著性差異。所有測(cè)量表明了硫辛酰胺的大幅攝取，并且細(xì)胞濃度>1mM。[0060]圖8顯示，硫辛酰胺和硫辛酸在體外和體內(nèi)對(duì)ALS模型具有有益作用。a,b)在秀麗隱桿線蟲中，硫辛酸降低了老化誘導(dǎo)的應(yīng)激顆粒而非應(yīng)激顆粒蛋白的聚集。a)在過表達(dá)易于聚集的熒光標(biāo)記蛋白的蠕蟲中，R-(+)-或S-(-)-硫辛酸的毒性和對(duì)蛋白聚集的影響。從具有>10個(gè)聚集體的細(xì)胞的比例，對(duì)咽肌中PAB-1聚集的發(fā)生率進(jìn)行評(píng)分。對(duì)RHO-1和KIN-辛酸的兩種異構(gòu)體都引起PAB-1(而非RHO-1或KIN-19)聚集的強(qiáng)劑量依賴性降低。表明了與DMSO對(duì)照相比有顯某處變化，F(xiàn)isher精確檢驗(yàn)。***p<0.0001,**p<0.001,*P<0.01。誤差棒代表比例的標(biāo)準(zhǔn)誤差，每個(gè)樣品的n>100.b)共焦顯微鏡的Z投射堆疊穿過經(jīng)過或不經(jīng)過硫辛酸處理的表達(dá)熒光標(biāo)記的PAB-1的蠕蟲的咽，顯示了降低的聚集體數(shù)量。c-e)在衍生自表達(dá)FUSP525L的iPS細(xì)胞的神經(jīng)元枯死上，硫辛酸和硫辛酰胺與家族性ALS相關(guān)。c)神經(jīng)元培養(yǎng)的示意圖，顯示了軸突從右邊的胞體生長(zhǎng)的通道。指示了d,e)中顯微照片所示的區(qū)域。d)在用0.02%DMSO培養(yǎng)60天后iPS衍生的神經(jīng)元。表達(dá)野生型FUS的神經(jīng)元具有穩(wěn)定的軸突，而表達(dá)FUSP525L的神經(jīng)元具有不穩(wěn)定的軸突，其枯死后在軸突從通道的出口點(diǎn)周圍留下物質(zhì)。e)在2μM硫辛酰胺或外消旋R-(+)-或S-(-)-硫辛酸存在下，培養(yǎng)物中60天后表達(dá)劑對(duì)照)處理的神經(jīng)元。f)硫辛酸恢復(fù)了過表達(dá)人類野生型FUS或ALS相關(guān)FUS突變的黑腹果11蠅的運(yùn)動(dòng)功能的缺陷。FUS的過表達(dá)導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)缺陷，并且動(dòng)物不能攀爬。硫辛酸治療顯示表達(dá)野生型FUS、FUSP525L或FUSR512C的動(dòng)物的攀爬能力<0.05,單因素ANOVA。g)硫辛酰胺也恢復(fù)黑腹果蠅的運(yùn)動(dòng)功能的缺陷。使用硫辛酰胺治療代替硫辛酸，顯示了與f)相當(dāng)?shù)臈l件。*P<0.05,**p<0.005,學(xué)生T檢驗(yàn)。h)硫辛酸恢復(fù)了過表達(dá)人類野生型FUS或ALS相關(guān)FUS突變的黑腹果蠅的運(yùn)動(dòng)功能的缺陷。FUS的過表達(dá)導(dǎo)致[0061]圖9示出了用0.02%DMSO培養(yǎng)5天和60天后的iPS衍生的神經(jīng)元。表達(dá)野生型FUS的神經(jīng)元具有穩(wěn)定的軸突，而表達(dá)FUSP525L的神經(jīng)元具有不穩(wěn)定的軸突，其枯死后在軸突從通道的出口點(diǎn)周圍留下物質(zhì)。[0062]圖10顯示，雜三環(huán)化合物的結(jié)構(gòu)活性關(guān)系暗示三環(huán)核是活性的原因。a)在用米托蒽醌預(yù)處理1小時(shí)，然后用砷酸鹽應(yīng)激1小時(shí)，繼續(xù)用米托蒽醌處理后，HeLa細(xì)胞FUSGFP液滴數(shù)(●,左軸)和核/細(xì)胞質(zhì)信號(hào)比率(O,右軸)的劑量應(yīng)響。b)對(duì)于與米托蒽醌和其它雜三環(huán)選出物、奎納克林和四環(huán)素抗生素家族相關(guān)的一系列化合物，采用與a)相同的應(yīng)激/處理方案，HeLa細(xì)胞FUSGFP液滴數(shù)目和核/細(xì)胞質(zhì)比率的劑量響應(yīng)。b)化合物結(jié)構(gòu)和對(duì)細(xì)胞質(zhì)FUS液滴數(shù)以及FUS細(xì)胞核分隔的影響的匯總。[0063]圖11顯示，硫辛酰胺減少iPS細(xì)胞中的野生型和P525LFUS細(xì)胞內(nèi)聚集體。a)在1小時(shí)砷酸鹽應(yīng)激、接著用30μM硫辛酰胺或DMSO陰性對(duì)照1小時(shí)應(yīng)激的組合下，表達(dá)野生型或P525LFUSGFP的同基因iPS細(xì)胞中的FUSGFP定位。FUSP525L導(dǎo)致形成更大的細(xì)胞質(zhì)FUS液滴，其仍然對(duì)硫辛酰胺敏感。b)用100μM硫酰胺或DMSO溶劑對(duì)照預(yù)處理1小時(shí)，隨后進(jìn)行1小時(shí)砷酸鹽應(yīng)激或無應(yīng)激，通過a)中的iPS細(xì)胞的濾膜阻滯來評(píng)估聚集的FUS的相對(duì)光密的免疫印跡。相對(duì)于GAPDH,沒有檢測(cè)到FUS表達(dá)水平的顯著變化(學(xué)生t-檢驗(yàn)，n=3)。***[0064]圖12顯示，硫辛酰胺恢復(fù)由運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中FUSP525L表達(dá)引起的軸突運(yùn)輸缺陷。a)用化合物溶劑(DMSO)或2μM硫辛酰胺處理3天后，F(xiàn)USP525LGFP運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元軸突遠(yuǎn)側(cè)部分中溶酶體運(yùn)動(dòng)的示例運(yùn)動(dòng)圖(kymograph)。溶酶體探針熒光。b)對(duì)于表達(dá)P525L或野生型FUS的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元，在用2μM硫辛酰胺或等效DMSO濃度溶劑對(duì)照處理3天后，速度移動(dòng)的溶酶體探針標(biāo)記的溶酶體的比例。n=5(P525L)或n=3(野生型)生物學(xué)重復(fù)，分析每個(gè)重復(fù)5個(gè)軸突束。硫辛酰胺顯著地增加溶酶體運(yùn)輸(學(xué)生T-檢驗(yàn))。***anova***[0065]圖13示出了通過HNMR對(duì)1?N硫辛酰胺的表征。a)1?N硫辛酰胺的化學(xué)結(jié)構(gòu)。b)1H顯示了硫辛酰胺的順式-酰胺和反式-酰胺質(zhì)子(分別為環(huán)境13和14)。相對(duì)信號(hào)強(qiáng)度對(duì)局部溶液條件敏感，表明了在37℃下的化學(xué)交換。d)在pH8.3,兩種共振的強(qiáng)度隨溫度升高而降低。這表明了化學(xué)交換，其中局部分子動(dòng)力學(xué)和/或與H?0在ms至μs時(shí)間尺度上的相互作用降低了信號(hào)。低于15℃,反式-酰胺共振(14)的強(qiáng)度接近平臺(tái)，表明緩慢的交換狀態(tài)，其中信號(hào)強(qiáng)度是濃度的明確量度。e)在10℃,順式-和反式-酰胺質(zhì)子共振的強(qiáng)度隨著pH降低而增的反式-酰胺質(zhì)子的積分信號(hào)強(qiáng)度是濃度的可靠代表。f)當(dāng)溶解于生長(zhǎng)培養(yǎng)基中時(shí)，硫辛酰胺的反式-酰胺質(zhì)子的信號(hào)強(qiáng)度在37℃下隨時(shí)間降低，但在10℃下則并非如此。在10℃下，信號(hào)強(qiáng)度穩(wěn)定>10h實(shí)驗(yàn)。g)在不同實(shí)驗(yàn)條件下，順式-和反式-酰胺質(zhì)子的信號(hào)強(qiáng)度。這是DNaseI破壞的細(xì)胞(來自iii)?？傊?，i)至iv)意味著硫辛酰胺以流動(dòng)形式被HeLa細(xì)胞吸收，而大多數(shù)分子未被修飾(圖13C-D中量化了攝取量)。h)在g)、i)和v)中的光譜的擴(kuò)展圖。在用TritonX-100和DNaseI破壞細(xì)胞后，光譜發(fā)生了顯著變化，表明了當(dāng)細(xì)胞區(qū)室被破壞時(shí)硫辛酰胺的化學(xué)修飾。具體實(shí)施方式[0066]在一些方面，本發(fā)明包括識(shí)別調(diào)節(jié)凝聚物的化合物的方法及其應(yīng)用，例如此類化合物在治療疾病中的有用性。[0067]傳統(tǒng)上，細(xì)胞的各種膜結(jié)合區(qū)室(細(xì)胞器)被認(rèn)為是擁擠雜亂的大分子和代謝物，它們都彼此自由混合，在勾畫該特定區(qū)室的膜的界限(細(xì)胞核、胞質(zhì)溶膠、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等)內(nèi)隨機(jī)擴(kuò)散。細(xì)胞過程被認(rèn)為是受這些分子的相互作用調(diào)節(jié)的，所述相互作用由可導(dǎo)致等)的特異性結(jié)合位點(diǎn)驅(qū)動(dòng)。例如，激酶擴(kuò)散直到恰巧結(jié)合到其識(shí)別為其靶標(biāo)的蛋白質(zhì)、與它結(jié)合并使它磷酸化。[0068]從最近的工作中現(xiàn)在清楚的是，基于蛋白質(zhì)、RNA和/或DNA的固有物理性質(zhì)，大分子在膜界限細(xì)胞器內(nèi)分選至凝聚物中。大分子在相分離反應(yīng)中組裝或凝聚到液體液滴中，導(dǎo)致特定的蛋白質(zhì)和/或核酸分子被富集在凝聚物內(nèi)，而其它特定的蛋白質(zhì)和/或核酸則被排除在外。[0069]形成凝聚物的過程不是由如先前所認(rèn)為的特定簡(jiǎn)單的化學(xué)計(jì)量結(jié)合事件驅(qū)動(dòng)的，而是由相分離反應(yīng)驅(qū)動(dòng)的。這是細(xì)胞內(nèi)的層結(jié)構(gòu)，其將整個(gè)細(xì)胞的大分子排布到亞區(qū)室中，以增加反應(yīng)的特異性并通過更高的局部濃度驅(qū)動(dòng)反應(yīng)。[0070]值得注意的是，凝聚物是液體并且是可逆的，使得在細(xì)胞生理學(xué)變化(例如信號(hào)事件、大分子之一的濃度變化或局部環(huán)境中的其他變化)時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的不同凝聚物將變化，有時(shí)完全溶解，有時(shí)更細(xì)微地改變它們的分子組成。因此，這是調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)幾乎所有反應(yīng)的主要機(jī)制，與先前理解的特異性結(jié)合事件的機(jī)制協(xié)同。[0071]一些疾病，包括神經(jīng)退行性疾病如ALS,似乎是由細(xì)胞中累積的異常蛋白聚集體引起的。先前篩選防止或破壞這些聚集體的藥物的嘗試不是基于凝聚物的新理解。本申請(qǐng)的公開內(nèi)容至少部分地基于發(fā)明人的獨(dú)特見解，即在這種情況下，大分子相分離成凝聚物是在蛋白質(zhì)隨后形成異常聚集體之前發(fā)生的中間步驟，因此通過使用直接監(jiān)測(cè)化合物對(duì)凝聚物形成和性質(zhì)的影響的測(cè)定法，可以發(fā)現(xiàn)用于治療此類疾病的新的有用化合物。[0072]在一些方面，本文公開的方法允許識(shí)別調(diào)節(jié)凝聚物行為的某些方面的化合物。例如，本文公開的方法的一些方面允許識(shí)別調(diào)節(jié)流動(dòng)性但不調(diào)節(jié)凝聚物形成的化合物。此外，使用本文所述的方法，本發(fā)明人識(shí)別了不是簡(jiǎn)單地破壞所有凝聚物形成，而是對(duì)目標(biāo)凝聚物表現(xiàn)出特異性的化合物。這種特異性可潛在地提高效力并減少副作用如毒性。[0073]本申請(qǐng)?zhí)峁┝擞糜谧R(shí)別調(diào)節(jié)細(xì)胞和細(xì)胞外凝聚物的一種或多種特性并因此可用于治療凝聚物相關(guān)疾病的化合物的新方法。所述方法聚焦于一種或多種凝聚物的行為或特性的變化，從而允許識(shí)別化合物而不必了解關(guān)于每種化合物的特定分子靶標(biāo)。這允許人們?cè)诤?jiǎn)單和精致的行為分析中快速地篩選潛在有用的化合物。凝聚物的示例性特性包括但不限于：(i)包含和/或不包含凝聚物相關(guān)分子的凝聚物的數(shù)目；(ii)所述一種或多種凝聚物的尺寸；(iii)所述一種或多種凝聚物的位置；(iv)一種或多種冷凝物的分布；(v)所述一種或多種冷凝物的表面積；(vi)所述一種或多種凝聚物的組成；(vii)所述一種或多種凝聚物的流動(dòng)性；(viii)所述一種或多種凝聚物的凝固；(ix)所述一種或多種凝聚物的溶解；(x)纖維形成的存在和/或量；(xi)所述凝聚物相關(guān)分子的位置；(xii)將所述凝聚物相關(guān)分子分隔到所述一種或多種凝聚物中；和(xiii)凝聚物相關(guān)分子的聚集?？赏ㄟ^評(píng)價(jià)調(diào)節(jié)一種力來識(shí)別具有所需性質(zhì)的化合物。另外，可以通過評(píng)價(jià)調(diào)節(jié)凝聚物的一些但不是其它特征的能力，或調(diào)節(jié)一些但不是其它凝聚物的能力來識(shí)別具有所需性質(zhì)的化合物。使用本文所述的方法，已經(jīng)識(shí)別了以通過液-液相分離形成的凝聚物的物理化學(xué)為靶的化合物。[0074]因此，在一些方面，本文提供了篩選化合物的方法，所述化合物調(diào)節(jié)與一種或多種凝聚物有關(guān)的特性和/或可用于治療疾病的方法中。在一些方面，本文提供了高通量篩選化合物的方法，所述化合物調(diào)節(jié)與一種或多種凝聚物有關(guān)的特性和/或可用于治療疾病的方[0075]在一些實(shí)施方式中，所述方法包含：(a)使所述化合物與包含一種或多種凝聚物的細(xì)胞組合物或與能夠形成一種或多種凝聚物的細(xì)胞組合物接觸，和(b)測(cè)定與所述一種或多種凝聚物有關(guān)的特性。在一些實(shí)施方式中，特性的調(diào)節(jié)指示所述化合物調(diào)節(jié)與一種或多種凝聚物有關(guān)的特性。在一些實(shí)施方式中，與參比相比，特性的調(diào)節(jié)指示所述化合物調(diào)節(jié)與一種或多種凝聚物有關(guān)的特性。在一些實(shí)施方式中，所述方法包含測(cè)定與一種或多種凝聚物相關(guān)的多種特性。[0076]在一些實(shí)施方式中，所述方法包含：(a)使多種候選化合物與包含一種或多種凝聚物的細(xì)胞組合物或與能夠形成一種或多種凝聚物的細(xì)胞組合物接觸，和(b)測(cè)定與該一種或多種凝聚物有關(guān)的特性，其中與參比相比，該特性的調(diào)節(jié)指示該候選化合物調(diào)節(jié)與該一種或多種凝聚物有關(guān)的特性，由此獲得調(diào)節(jié)一種或多種凝聚物的特性的化合物。[0077]在一些方面，本文提供了識(shí)別化合物的方法，該化合物調(diào)節(jié)與包含第一凝聚物相關(guān)分子的第一組一種或多種凝聚物有關(guān)的特性，所述方法包含：(a)使所述化合物與包含所述第一組和第二組一種或多種凝聚物的細(xì)胞組合物接觸，或者與能夠形成所述第一組和第二組一種或多種凝聚物的細(xì)胞組合物接觸，和(b)測(cè)定與所述第一組一種或多種凝聚物有關(guān)的特性，和(c)測(cè)定與所述第二組一種或多種凝聚物有關(guān)的特性。[0078]在一些方面，本文提供了識(shí)別化合物的方法，該化合物調(diào)節(jié)與包含第一凝聚物相關(guān)分子的第一組一種或多種凝聚物有關(guān)的特性，所述方法包含：(a)使所述化合物與包含所述第一組和第二組一種或多種凝聚物的細(xì)胞組合物接觸，或者與能夠形成所述第一組和第二組一種或多種凝聚物的細(xì)胞組合物接觸，和(b)測(cè)定與所述第一組一種或多種凝聚物有關(guān)的特性，和(c)測(cè)定與所述第二組一種或多種凝聚物有關(guān)的特性。[0079]在一些方面，本文提供了篩選(例如高通量篩選)化合物的方法，該化合物調(diào)節(jié)與包含第一凝聚物相關(guān)分子的第一組一種或多種凝聚物有關(guān)的特性，所述方法包含：(a)使多種候選化合物與包含所述第一組一種或多種凝聚物的細(xì)胞組合物或與能夠形成所述第一組一種或多種凝聚物的細(xì)胞組合物接觸，和(b)測(cè)定與所述第一組一種或多種凝聚物有關(guān)的特性，(c)使所述多種候選化合物與包含第二組一種或多種凝聚物或能夠形成所述第二組一種或多種凝聚物的細(xì)胞組合物接觸，所述第二組一種或多種凝聚物包含第二凝聚物相關(guān)分子，和(d)測(cè)定與所述第二組一種或多種凝聚物有關(guān)的特性。[0080]在一些實(shí)施方式中，與第一組有關(guān)特性的調(diào)節(jié)不同于與第二組有關(guān)特性的調(diào)節(jié)，指示候選化合物調(diào)節(jié)與第一組一種或多種凝聚物有關(guān)的特性，從而獲得調(diào)節(jié)與第一組一種或多種凝聚物有關(guān)特性的化合物。在一些實(shí)施方式中，與參比相比，與第二組有關(guān)特性的調(diào)節(jié)不同于與第一組有關(guān)特性的調(diào)制，指示該化合物調(diào)節(jié)與第二組一種或多種凝聚物有關(guān)的特性，從而獲得調(diào)節(jié)與第二組一種或多種凝聚物有關(guān)特性的化合物。[0082]為了解釋本說明書，將應(yīng)用以下定義，并且在任何適當(dāng)?shù)臅r(shí)候，以單數(shù)使用的術(shù)語也將包括復(fù)數(shù)，反之亦然。在以下闡述的任何定義與通過引用并入本文的任何文獻(xiàn)沖突的長(zhǎng)度。此類氨基酸殘基的聚合物可以含有天然或非天然氨基酸殘基，并且包括但不限于肽、寡肽、氨基酸殘基的二聚體、氨基酸殘基的三聚體和氨基酸殘基的多聚體。全長(zhǎng)蛋白及其片酸化等。糖核苷酸和脫氧核糖核苷酸。因此，該術(shù)語包括但不限于單鏈、雙鏈或多鏈DNA或RNA、基因雜交體或包含嘌呤和嘧啶堿基或其它天然、化學(xué)或生物化學(xué)修飾的、非天然或衍生的核苷酸堿基的聚合物。多核苷酸的主鏈可以包含糖和磷酸基團(tuán)(如通通過肽鍵(例如肽核酸)連接的重復(fù)單元，例如N-(2-氨基乙基)-甘氨酸?；蛘撸嗪塑账岬闹麈溈砂铣蓙喕木酆衔?，如氨基磷酸酯，因此可以是寡脫氧核苷氨基磷酸酯(P-NH2)或混合的氨基磷酸酯-磷酸二酯寡聚物。效物旨在在含義上等效并且是開放式的，因?yàn)檫@些詞語中的任一個(gè)之后的一個(gè)或多個(gè)項(xiàng)目并不意味著是此一個(gè)或多個(gè)項(xiàng)目的窮盡列舉，或者不意味著僅限于所列出的一個(gè)或多個(gè)項(xiàng)施方式。[0086]在提供值的范圍的情況下，應(yīng)當(dāng)理解的是，除非上下文另外明確規(guī)定，否則在所述范圍的上限與下限之間的到下限的單位的十分之一的每一中間值和在所述范圍中的任何其它陳述的或中間值均包含在本公開內(nèi)，受所述范圍中的任何明確排除的限制。在所述范圍包括一個(gè)或兩個(gè)限值的情況下，排除那些所包括的限值中的任一個(gè)或兩個(gè)的范圍也包括在本公開中。[0087]本文提及的“約”值或參數(shù)包括(和描述)涉及該值或參數(shù)本身的變化。例如，提及“約X”的描述包括“X”的描述。[0089]如本文所用，“凝聚物”是指通過一種或多種蛋白質(zhì)和/或其它大分子的相分離(包括所有階段的相分離)形成的無膜包封的區(qū)室。[0090]本文所用的“凝聚物相關(guān)分子”是指在生理或病理?xiàng)l件下可在凝聚物中或凝聚物上發(fā)現(xiàn)的分子。[0091]在本說明書的上下文中，術(shù)語應(yīng)激顆粒涉及液體狀的無膜界限的區(qū)室，其位于細(xì)胞的細(xì)胞核或胞質(zhì)溶膠內(nèi)并且包含蛋白質(zhì)和RNA,當(dāng)細(xì)胞處于應(yīng)激下時(shí)出現(xiàn)。[0092]在本說明書的上下文中，術(shù)語神經(jīng)退行性疾病涉及以神經(jīng)元的結(jié)構(gòu)或功能的進(jìn)行性喪失為特征的醫(yī)學(xué)病癥。神經(jīng)退行性疾病的非限制性實(shí)例包含肌萎縮性側(cè)索硬化癥、帕金森病、阿爾茨海默病和亨廷頓病。ALS),在一個(gè)實(shí)施方式中指改善該疾病或病癥(例如減緩或阻止或減少疾病或其至少一種臨床癥狀的發(fā)展)。在另一個(gè)實(shí)施方式中，“治療”或“治療”是指減輕或改善至少一種身體參數(shù)，包括患者可能無法辨別的那些。在又另一實(shí)施方式中，“治療”或“治療”是指在身體上(例如可辨別癥狀的穩(wěn)定化)、在生理上(例如身體參數(shù)的穩(wěn)定化)或兩者上調(diào)節(jié)疾病或病癥。如本文所用，術(shù)語預(yù)防(prevent)或預(yù)防(preventing)或預(yù)防(prevention)任何疾病或病癥(例如ALS)是指抑制(包括完全抑制)疾病或病癥的發(fā)展或發(fā)作(例如延遲疾病或病癥的發(fā)展或發(fā)作)。除非下文具體描述，否則評(píng)估疾病的治療和/或預(yù)防的方法通常是本領(lǐng)域已知的。[0094]本文所用的章節(jié)標(biāo)題僅用于組織結(jié)構(gòu)目的，而不應(yīng)被解釋為限制所描述的主題。[0095]篩選和識(shí)別化合物的方法[0096]在本申請(qǐng)的一些方面，提供了識(shí)別化合物的方法，該化合物調(diào)節(jié)與一種或多種凝聚物有關(guān)的特性和/或可用于治療疾病的方法中。在一些方面，本文提供了篩選化合物的方法，所述化合物調(diào)節(jié)與一種或多種凝聚物有關(guān)的特性和/或可用于治療疾病的方法中。在一些方面，本文提供了高通量篩選化合物的方法，所述化合物調(diào)節(jié)與一種或多種凝聚物有關(guān)的特性和/或可用于治療疾病的方法中。[0097]以下更詳細(xì)地描述了用于識(shí)別化合物的技術(shù)。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，鑒于所提供的描述，在本申請(qǐng)公開內(nèi)容的范圍和精神內(nèi)，多個(gè)實(shí)施方式是可能的。[0098]在一些方面，本文提供了識(shí)別化合物的方法，該化合物調(diào)節(jié)與包含凝聚物相關(guān)分子的一種或多種凝聚物有關(guān)的特性，所述方法包含：(a)使所述化合物與包含一種或多種凝聚物的細(xì)胞組合物或與能夠形成一種或多種凝聚物的細(xì)胞組合物接觸，和(b)測(cè)定與所述一種或多種凝聚物有關(guān)的特性，其中與參比相比，所述特性的調(diào)節(jié)指示所述化合物調(diào)節(jié)與所述一種或多種凝聚物有關(guān)的特性。在一些實(shí)施方式中，所述方法包含測(cè)定與一種或多種凝聚物有關(guān)的單個(gè)特性。在一些實(shí)施方式中，所述方法包含測(cè)定與所述一種或多種凝聚物有關(guān)的多個(gè)特性。[0099]在一些方面，本文提供了篩選(例如高通量篩選)化合物的方法，該化合物調(diào)節(jié)與一種或多種凝聚物有關(guān)的特性，所述方法包含使用本文所述的任何方法在篩選中評(píng)價(jià)多種化合物中的每一種與包含一種或多種凝聚物的細(xì)胞組合物或與能夠形成一種或多種凝聚特性的調(diào)節(jié)指示該候選化合物調(diào)節(jié)與該一種或多種凝聚物有關(guān)的一種或多種凝聚物的細(xì)胞組合物接觸，(b)測(cè)定與所述第一組一種或多種凝聚物有關(guān)的特組有關(guān)特性的調(diào)節(jié)不同于與所述第二組有關(guān)特性的調(diào)節(jié)，述第一組一種或多種凝聚物的細(xì)胞組合物接觸，或與能夠形成所多種凝聚物的細(xì)胞組合物接觸，所述第二組一種或多種凝聚物包含第二凝聚物相關(guān)分子，述第一和第二組一種或多種凝聚物的細(xì)胞組合物接觸，(b)測(cè)定與所述第一組一種或多種種候選化合物與包含所述第一組一種或多種凝聚物的細(xì)胞組合物或與能夠形成所述第一組一種或多種凝聚物的細(xì)胞組合物接觸，(b)測(cè)定與所述第一組一種或多種凝聚物有關(guān)的特性，(c)使多種候選化合物與包含第二組一種或多種凝聚物的細(xì)胞組合物或與能夠形成所述第二組一種或多種凝聚物的細(xì)胞組合物接觸，所述第二組一種或多種凝聚物包含第二凝聚物相關(guān)分子，和(d)測(cè)定與所述第二組一種或多種凝聚物有關(guān)的特性，其中與參考相比，與所述第一組有關(guān)的特性的調(diào)節(jié)不同于與所述第二組有關(guān)的特性的調(diào)節(jié)，表明所述化合物調(diào)節(jié)與所述第一組一種或多種凝聚物有關(guān)的特性，從而獲得調(diào)節(jié)與所述第一組一種或多種凝聚物有關(guān)的特性的化合物。在一些實(shí)施方式中，所述第一和第二凝聚物相關(guān)分子是相同的。在一些實(shí)施方式中，所述第一和第二凝聚物相關(guān)分子是不同的。在一些實(shí)施方式中，所述第一組一種或多種凝聚物是應(yīng)激顆粒，并且所述第二組一種或多種凝聚物是旁斑[0104]在一些方面，本文提供了識(shí)別化合物的方法，該化合物調(diào)節(jié)與一種或多種應(yīng)激顆粒有關(guān)的特性，所述方法包含：(a)使所述化合物與包含一種或多種應(yīng)激顆粒的細(xì)胞組合物或與能夠形成一種或多種應(yīng)激顆粒的細(xì)胞組合物接觸，和(b)測(cè)定與所述一種或多種應(yīng)激顆粒有關(guān)的特性，其中與參比相比，所述特性的調(diào)節(jié)表明所述化合物調(diào)節(jié)與所述一種或多種應(yīng)激顆粒有關(guān)的特性。在一些實(shí)施方式中，所述方法包括測(cè)定與所述一種或多種應(yīng)激顆粒相關(guān)的單個(gè)特性。在一些實(shí)施方式中，該方法包含測(cè)定與所述一種或多種應(yīng)激顆粒相關(guān)的多個(gè)特性。[0105]在一些方面，本文提供了篩選(例如高通量篩選)化合物的方法，該化合物調(diào)節(jié)與一種或多種應(yīng)激顆粒有關(guān)的特性，所述方法包含：(a)使多種候選化合物與包含一種或多種應(yīng)激顆粒的細(xì)胞組合物或與能夠形成一種或多種應(yīng)激顆粒的細(xì)胞組合物接觸，和(b)測(cè)定與所述一種或多種應(yīng)激顆粒有關(guān)的特性，其中與參比相比，所述特性的調(diào)節(jié)表明所述候選化合物調(diào)節(jié)與所述一種或多種應(yīng)激顆粒有關(guān)的特性，從而獲得調(diào)節(jié)一種或多種應(yīng)激顆粒的特性的化合物。在一些實(shí)施方式中，所述方法包括測(cè)定與所述一種或多種應(yīng)激顆粒相關(guān)的000、5,000、10,000或更多種不同候選化合物中的至少任一個(gè)。在一些實(shí)施方式中，使多種候選化合物在單獨(dú)的反應(yīng)中(例如單獨(dú)的孔或容器)與所述細(xì)胞組合物接觸。在一些實(shí)施方式中，使多種候選化合物在單獨(dú)的反應(yīng)中同時(shí)與所述細(xì)胞組合物接觸。[0106]在一些方面，本文提供了識(shí)別化合物的方法，該化合物調(diào)節(jié)與一種或多種應(yīng)激顆粒有關(guān)的特性，所述方法包含：(a)使所述化合物與包含一種或多種應(yīng)激顆粒和一種或多種能夠形成一種或多種應(yīng)激顆粒和一種或多種旁斑、在DNA損傷位點(diǎn)周圍形成的凝聚物、P體、Cajal體和/或PML體的細(xì)胞組合物接觸，(b)測(cè)定與所述一種或多種應(yīng)激顆粒有關(guān)的特性，PML體有關(guān)的特性，其中與參比相比，與所述一種或多種應(yīng)激顆粒有關(guān)的特性的調(diào)節(jié)不同于的特性的調(diào)節(jié)，表明所述化合物調(diào)節(jié)與所述一種或多種應(yīng)激顆粒有關(guān)的特性。[0107]在一些方面，本文提供了識(shí)別化合物的方法，該化合物調(diào)節(jié)與一種或多種應(yīng)激顆粒相關(guān)的特征，所述方法包含：(a)使所述化合物與包含所述一種或多種應(yīng)激顆粒的細(xì)胞組合物或與能夠形成所述一種或多種應(yīng)激顆粒的細(xì)胞組合物接觸，(b)測(cè)定與所述一種或多種應(yīng)激顆粒相關(guān)的特征，(c)使所述化合物與包含一種或多種旁斑、在DNA損傷位點(diǎn)周圍形成的凝聚物、P體、Cajal體和/或PML體的細(xì)胞組合物接觸，或與能夠形成一種或多種旁斑、在DNA損傷位點(diǎn)周圍形成的凝聚物、P體、的特性，其中與參比相比，與所述一種或多種應(yīng)激顆粒有關(guān)的特性的調(diào)節(jié)不同于與所述一種或多種旁斑、在DNA損傷位點(diǎn)周圍形成的凝聚物、P體、Ca調(diào)節(jié)，表明所述化合物調(diào)節(jié)與所述一種或多種應(yīng)激顆粒有關(guān)的特性。[0108]在一些方面，本文提供了篩選(例如高通量篩選)化合物的方法，該化合物調(diào)節(jié)與所述方法包含：(a)使多種候選化合物與包含所述一種或多種應(yīng)激顆粒和一種或多種旁斑、在DNA損傷位點(diǎn)周圍形成的凝聚物、P體、Cajal體和/或PML體的細(xì)胞組合物接觸，或與能夠形成所述一種或多種應(yīng)激顆粒和一種或多種旁斑、在DNA損傷位點(diǎn)周圍形成的凝聚物、P體、Cajal體和/或PML體的細(xì)胞組合物接觸，(b)測(cè)定與所述一種或多種應(yīng)激顆粒有關(guān)的特性，PML體有關(guān)的特性，其中與參比相比，與所述一種或多種應(yīng)激顆粒有關(guān)的特性的調(diào)節(jié)不同于的特性的調(diào)節(jié)，指示所述化合物調(diào)節(jié)與所述一種或多種應(yīng)激顆粒有關(guān)的特性，從而獲得調(diào)節(jié)與所述一種或多種應(yīng)激顆粒有關(guān)的特性的化合物。[0109]在一些方面，本文提供了篩選(例如高通量篩選)化合物的方法，該化合物調(diào)節(jié)與一種或多種應(yīng)激顆粒有關(guān)的特性，所述方法包含：(a)使多種候選化合物與包含所述一種或多種應(yīng)激顆粒的細(xì)胞組合物或與能夠形成所述一種或多種應(yīng)激顆粒的細(xì)胞組合物接觸，(b)測(cè)定與所述一種或多種應(yīng)激顆粒有關(guān)的特性，(c)使多種候選化合物與包含一種或多種體的細(xì)胞組合物接觸，和(d)測(cè)定與所述一種或多種旁斑、在DNA損傷位點(diǎn)周圍形成的凝聚關(guān)的特性的調(diào)節(jié)不同于與所述一種或多種旁斑、在DNA損傷位點(diǎn)周圍形成的凝聚物、P體、Cajal體和/或PML體有關(guān)的特性的調(diào)節(jié)，表明所述化合物調(diào)節(jié)與所述一種或多種應(yīng)激顆粒有關(guān)的特性，從而獲得調(diào)節(jié)與所述一種或多種應(yīng)激顆粒有關(guān)的特性的化合物。[0110]在一些實(shí)施方式中，所述方法進(jìn)一步包含對(duì)多種化合物重復(fù)所述方法的步驟。例一些實(shí)施方式中，所述方法進(jìn)一步包含用多種濃度的所述化合物重復(fù)所述方法的步驟。[0111]在一些實(shí)施方式中，本文所述的方法包含使所述化合物與包含一種或多種凝聚物的細(xì)胞組合物或能夠形成一種或多種凝聚物的細(xì)胞組合物接觸。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將容在一種或多種凝聚物的生命周期中的任何時(shí)點(diǎn)使組合物(諸如細(xì)胞組合物)與化合物接觸。例如，所述方法包含當(dāng)所述凝聚物相關(guān)分子在細(xì)胞的任何位置、以任何量、或具有任何翻譯后修飾狀態(tài)(如磷酸化殘基的存在、不存在或水平)時(shí)，使細(xì)胞組合物與化合物接觸。在一些方面，所述方法還可以包括例如當(dāng)一種或多種凝聚物在細(xì)胞的任何位置、以任何量存在(包括不存在)、正經(jīng)歷形態(tài)變化(如尺寸或流動(dòng)性變化、或組成變化)時(shí)，使細(xì)胞與化合物接觸。[0112]在一些實(shí)施方式中，所述細(xì)胞組合物在與化合物接觸之前包含一種或多種凝聚物。在一些實(shí)施方式中，所述方法進(jìn)一步包含在使所述化合物與包含一種或多種凝聚物的細(xì)胞組合物或與能夠形成一種或多種凝聚物的細(xì)胞組合物接觸之前，使所述細(xì)胞組合物經(jīng)受凝聚物形成條件。在一些實(shí)施方式中，所述細(xì)胞組合物在與所述化合物接觸之前不包含一種或多種凝聚物，并且所述方法包含使所述細(xì)胞組合物經(jīng)受凝聚物形成條件，以形成所述一種或多種凝聚物。在一些實(shí)施方式中，所述細(xì)胞組合物在與所述化合物接觸之前不包含一種或多種凝聚物，并且所述方法包含在使所述細(xì)胞組合物與所述化合物接觸之后，使所述細(xì)胞組合物經(jīng)受凝聚物形成條件，以形成所述一種或多種凝聚物。在一些實(shí)施方式中，所述細(xì)胞組合物在與所述化合物接觸之前不包含一種或多種凝聚物，并且在與所述化合物接觸的同時(shí)形成一種或多種凝聚物。在一些實(shí)施方式中，在添加所述化合物的同時(shí)和之后形成所述凝聚物。在一些實(shí)施方式中，在測(cè)定與所述一種或多種凝聚物有關(guān)的特性之前，使所述細(xì)胞組合物經(jīng)受凝聚物形成條件。在一些實(shí)施方式中，所述細(xì)胞組合物包含一種或多種凝聚物，并且在使所述細(xì)胞組合物與所述化合物接觸的同時(shí)形成所述一種或多種凝聚物的附加凝聚物。在一些實(shí)施方式中，所述細(xì)胞組合物包含一種或多種凝聚物，并且在使所述細(xì)胞組合物與所述化合物接觸之后形成所述一種或多種凝聚物的附加的凝聚物。在一些實(shí)施方式中，所述細(xì)胞組合物包含一種或多種凝聚物，并且在使所述細(xì)胞組合物和所述化合物接觸的同時(shí)和之后形成所述一種或多種凝聚物的附加凝聚物。[0113]因此，本文所述的方法包括使細(xì)胞組合物與化合物接觸，其中(i)所述細(xì)胞組合物包含一種或多種目標(biāo)凝聚物；和/或(ii)在使所述細(xì)胞組合物與所述化合物接觸的同時(shí)和/或之后形成所述一種或多種目標(biāo)凝聚物。在一些實(shí)施方式中，本文所述的方法包括使細(xì)胞組合物與化合物接觸，其中所述細(xì)胞組合物(i)包含一種或多種目標(biāo)凝聚物；和/或(ii)能夠形成一種或多種凝聚物，其中在使所述細(xì)胞組合物與所述化合物接觸的同時(shí)和/或之后形成所述一種或多種凝聚物。在一些實(shí)施方式中，本文所述的方法包括使化合物與包含一種或多種凝聚物的細(xì)胞組合物或能夠形成一種或多種凝聚物的細(xì)胞組合物接觸。[0114]凝聚物形成條件可以包含添加凝聚物誘導(dǎo)劑。在一些實(shí)施方式中，所述方法包含使細(xì)胞組合物經(jīng)受以下中的任何一種或多種：(i)氧化應(yīng)激源；(ii)線粒體電子傳輸鏈抑制式中，氧化應(yīng)激源是砷酸鹽。在一些實(shí)施方式中，線粒體電子傳輸鏈抑制劑是魚藤酮。在一些實(shí)施方式中，滲透壓應(yīng)激源是山梨醇。在一些實(shí)施方式中，糖酵解抑制是在不存在葡萄糖時(shí)的6-脫氧葡萄糖。在一些實(shí)施方式中，熱應(yīng)激源使細(xì)胞組合物經(jīng)受約40-45℃的溫度，諸如約42℃。[0115]在一些實(shí)施方式中，所述參比是實(shí)驗(yàn)對(duì)照。在一些實(shí)施方式中，凝聚物是第一凝聚物，而參比是第二凝聚物。在一些實(shí)施方式中，第二凝聚物是不包含凝聚物相關(guān)分子的凝聚物。在一些實(shí)施方式中，第二凝聚物是包含凝聚物相關(guān)分子的凝聚物。在一些實(shí)施方式中，第一凝聚物和第二凝聚物位于細(xì)胞組合物的不同部分中。在一些實(shí)施方式中，第一凝聚物和第二凝聚物位于細(xì)胞的不同部分。在一些實(shí)施方式中，第一凝聚物和第二凝聚物位于不同的細(xì)胞組合物中。在一些實(shí)施方式中，所述細(xì)胞組合物是第一組合物，且所述參比是第二細(xì)胞組合物。在一些實(shí)施方式中，所述參比是不與所述化合物接觸的細(xì)胞組合物。在一些實(shí)施方式中，所述參比是未用凝聚物形成條件處理的細(xì)胞組合物。在一些實(shí)施方式中，所述參比是用參比化合物處理的細(xì)胞組合物。[0116]在一些實(shí)施方式中，以使得可以評(píng)估化合物的有意義結(jié)果的方式制備參比。例如，在一些實(shí)施方式中，所述參比是細(xì)胞組合物，其中所述細(xì)胞組合物以與跟化合物接觸的細(xì)胞組合物類似的方式制備，除了參比細(xì)胞組合物不經(jīng)受測(cè)試化合物或不經(jīng)受與所述化合物接觸的相同步驟。在一些實(shí)施方式中，所述參比是與參比化合物(例如陽性或陰性對(duì)照化合物)接觸的細(xì)胞組合物。[0117]與凝聚物有關(guān)的特性[0118]在一些實(shí)施方式中，基于以下中的任何一種或多種測(cè)定與一種或多種凝聚物有關(guān)的特性：(i)包含和/或不包含凝聚物相關(guān)分子的凝聚物的數(shù)目；(ii)所述一種或多種凝聚物的尺寸；(iii)所述一種或多種凝聚物的位置；(iv)一種或多種凝聚物的分布；(v)所述一種或多種凝聚物的表面積；(vi)所述一種或多種凝聚物的組成，(vii)所述一種或多種凝聚物的流動(dòng)性；(viii)所述一種或多種凝聚物的凝固；(ix)所述一種或多種凝聚物的溶解；(x)纖維形成的存在和/或量；(xi)所述凝聚物相關(guān)分子的位置；(xii)所述凝聚物相關(guān)分子向所述凝聚物中的分隔；和(xiii)所述凝聚物相關(guān)分子的聚集。在一些實(shí)施方式中，所述方法包括測(cè)定與一種或多種凝聚物有關(guān)的第一特性和與一種或多種凝聚物有關(guān)的第二特性。在一些實(shí)施方式中，所述方法包括測(cè)定與所述一種或多種凝聚物有關(guān)的第三、第四、第五、定特性的示例性技術(shù)。[0119]在一些實(shí)施方式中，所述方法包括測(cè)定與一種或多種凝聚物有關(guān)的第一特性和與一種或多種凝聚物有關(guān)的第二特性。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性是(i)包含和/或不包含凝聚物相關(guān)分子的凝聚物的數(shù)目，并且第二特性是(ii)一種或多種凝聚物的尺寸、(iii)一種或多種凝聚物的位置、(iv)一種或多種凝聚物的分布、(v)一種或多種凝聚物的表面積、(vi)一種或多種凝聚物的組成、(vii)一種或多種凝聚物的流動(dòng)性、(viii)一種或多種凝聚物的凝固、(ix)一種或多種凝聚物的溶解、(x)纖維形成的存在和/或量、(xi)凝聚物相關(guān)分子的位置、(xii)所述凝聚物相關(guān)分子向所述凝聚物中的分隔和(xiii)所述凝聚式中，所述第一特性為(i)包含和/或不包含凝聚物相關(guān)分子的凝聚物的數(shù)目，并且第二特性為(ii)一種或多種凝聚物的尺寸。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性為(i)包含和/或不包含凝聚物相關(guān)分子的凝聚物的數(shù)目，并且第二特性為(iii)所述一種或多種凝聚物的位置。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性是(i)包含和/或不包含凝聚物相關(guān)分子的凝聚物的數(shù)目，并且第二特性是(iv)一種或多種凝聚物的分布。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性是(i)包含和/或不包含凝聚物相關(guān)分子的凝聚物的數(shù)目，并且第二特性是(v)所述一種或多種凝聚物的表面積。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性是(i)包含和/或不包含凝聚物相關(guān)分子的凝聚物的數(shù)目，并且第二特性是(vi)所述一種或多種凝聚物的組成。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性是(i)包含和/或不包含凝聚物相關(guān)分子的凝聚物的數(shù)目，并且第二特性是(vii)所述一種或多種凝聚物的流動(dòng)性。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性是(i)包含和/或不包含凝聚物相關(guān)分子的凝聚物的數(shù)目，并且第二特性是(viii)所述一種或多種凝聚物的凝固。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性是(i)包含和/或不包含凝聚物相關(guān)分子的凝聚物的數(shù)目，并且第二特性是(ix)所述一種或多種凝聚物的溶解。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性是(i)包含和/或不包含凝聚物相關(guān)分子的凝聚物的數(shù)目，并且第二特性是(x)纖維形成的存在和/或量。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性是(i)包含和/或不包含凝聚物相關(guān)分子的凝聚物的數(shù)目，并且第二特性是(xi)所述凝聚物相關(guān)分子的位置。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性是(i)包含和/或不包含凝聚物相關(guān)分子的凝聚物的數(shù)目，并且第二特性是(xii)所述凝聚物相關(guān)分子向所述凝聚物中的分隔。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性是(i)包含和/或不包含凝聚物相關(guān)分子的凝聚物的數(shù)目，并且第二特性是(xiii)所述凝聚物相關(guān)分子的聚集。[0120]在一些實(shí)施方式中，所述方法包含測(cè)定與所述一種或多種凝聚物有關(guān)的第一特性和與所述一種或多種凝聚物有關(guān)的第二特性。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性是(ii)所述一種或多種凝聚物的尺寸，并且第二特性是(iii)所述一種或多種凝聚物的位置、(iv)一種或多種凝聚物的分布、(v)所述一種或多種凝聚物的表面積、(vi)所述一種或多種凝聚物的組成、(vii)所述一種或多種凝聚物的流動(dòng)性、(viii)所述一種或多種凝聚物的凝固、(ix)所述一種或多種凝聚物的溶解、(x)纖維形成的存在和/或量、(xi)所述凝聚物相關(guān)分子的位置、(xii)所述凝聚物相關(guān)分子向所述凝聚物中的分隔和(xiii)所述凝聚物相關(guān)分第一特性為(ii)所述一種或多種凝聚物的尺寸，并且第二特性為(iii)所述一種或多種凝聚物的位置。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性為(ii)一種或多種凝聚物的尺寸，并且第二特性為(iv)一種或多種凝聚物的分布。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性為(ii)所述一種或多種凝聚物的尺寸，并且第二特性為(v)所述一種或多種凝聚物的表面積。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性為(ii)所述一種或多種凝聚物的尺寸，并且第二特性為(vi)所述一種或多種凝聚物的組成。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性為(ii)所述一種或多種凝聚物的尺寸，并且第二特性為(vii)所述一種或多種凝聚物的流動(dòng)性。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性是(ii)所述一種或多種凝聚物的尺寸，并且第二特性是(viii)所述一種或多種凝聚物的凝固。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性為(ii)所述一種或多種凝聚物的尺寸，并且第二特性為(ix)所述一種或多種凝聚物的溶解。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性是(ii)所述一種或多種凝聚物的尺寸，并且第二特性是(x)纖維形成的存在和/或量。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性是(ii)所述一種或多種凝聚物的尺寸，并且第二特性是(xi)所述凝聚物相關(guān)分子的位置。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性是(ii)所述一種或多種凝聚物的尺寸，并且第二特性是(xii)所述凝聚物相關(guān)分子向所述凝聚物中的分隔。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性為(ii)所述一種或多種凝聚物的尺寸，并且第二特性為(xiii)所述凝聚物相關(guān)分子的聚集。[0121]在一些實(shí)施方式中，所述方法包含測(cè)定與所述一種或多種凝聚物有關(guān)的第一特性和與所述一種或多種凝聚物有關(guān)的第二特性。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性是(iii)所述一種或多種凝聚物的位置，并且第二特性是(iv)一種或多種凝聚物的分布、(v)所述一種或多種凝聚物的表面積、(vi)所述一種或多種凝聚物的組成、(vii)所述一種或多種凝聚物的流動(dòng)性、(viii)所述一種或多種凝聚物的凝固、(ix)所述一種或多種凝聚物的溶解、(x)纖維形成的存在和/或量、(xi)所述凝聚物相關(guān)分子的位置、(xii)所述凝聚物相關(guān)分子向所述凝聚物中的分隔和(xiii)所述凝聚物相關(guān)分子的聚集中的任一種(或多種，例如2、3、位置，并且第二特性是(iv)一種或多種凝聚物的分布。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性為(iii)所述一種或多種凝聚物的位置，并且第二特性為(v)所述一種或多種凝聚物的表面積。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性為(iii)所述一種或多種凝聚物的位置，并且第二特性為(vi)所述一種或多種凝聚物的組成。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性為(iii)所述一種或多種凝聚物的位置，并且第二特性為(vii)所述一種或多種凝聚物的流動(dòng)性。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性是(iii)所述一種或多種凝聚物的位置，并且第二特性是(viii)所述一種或多種凝聚物的凝固。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性為(iii)所述一種或多種凝聚物的位置，并且第二特性為(ix)所述一種或多種凝聚物的溶解。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性是(iii)所述一種或多種凝聚物的位置，并且第二特性是(x)纖維形成的存在和/或量。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性是(iii)所述一種或多種凝聚物的位置，并且第二特性是(xi)所述凝聚物相關(guān)分子的位置。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性是(iii)所述一種或多種凝聚物的位置，并且第二特性是(xii)所述凝聚物相關(guān)分子向所述凝聚物中的分隔。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性是(iii)所述一種或多種凝聚物的位置，并且第二特性是(xiii)所述凝聚物相關(guān)分子的聚集。[0122]在一些實(shí)施方式中，所述方法包含測(cè)定與所述一種或多種凝聚物有關(guān)的第一特性和與所述一種或多種凝聚物有關(guān)的第二特性。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性是(iv)一種或多種凝聚物的分布，并且第二特性是(v)所述一種或多種凝聚物的表面積、(vi)所述一種或多種凝聚物的組成、(vii)所述一種或多種凝聚物的流動(dòng)性、(viii)所述一種或多種凝聚物的凝固、(ix)所述一種或多種凝聚物的溶解、(x)纖維形成的存在和/或量、(xi)所述凝聚物相關(guān)分子的位置、(xii)所述凝聚物相關(guān)分子向所述凝聚物中的分隔和(xiii)所述凝述第一特性是(iv)一種或多種凝聚物的分布，并且第二特性是(v)所述一種或多種凝聚物的表面積。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性是(iv)一種或多種凝聚物的分布，并且第二特性是(vi)所述一種或多種凝聚物的組成。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性是(iv)一種或多種凝聚物的分布，并且第二特性是(vii)所述一種或多種凝聚物的流動(dòng)性。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性是(iv)一種或多種凝聚物的分布，并且第二特性是(viii)所述一種或多種凝聚物的凝固。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性是(iv)一種或多種凝聚物的分布，并且第二特性是(ix)所述一種或多種凝聚物的溶解。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性是(iv)一種或多種凝聚物的分布，并且第二特性是(x)纖維形成的存在和/或量。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性是(iv)一種或多種凝聚物的分布，并且第二特性是(xi)所述凝聚物相關(guān)分子的位置。在一些實(shí)施方式中，所述第一特性是(iv)一種或多種凝聚物的分布，并且第二特性是(xii)所述凝聚物相關(guān)分子向