三七根及花總皂苷：乳腺癌血行轉(zhuǎn)移干預(yù)與血管內(nèi)皮機(jī)制解析一、引言1.1研究背景乳腺癌作為女性群體中最為常見的惡性腫瘤之一，近年來其發(fā)病率在全球范圍內(nèi)呈現(xiàn)出持續(xù)攀升的態(tài)勢。據(jù)世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的2020年全球最新癌癥數(shù)據(jù)，乳腺癌新發(fā)病例數(shù)達(dá)226萬人，首次超越肺癌，躍居全球癌癥發(fā)病首位。在中國，乳腺癌同樣是嚴(yán)重威脅女性健康的主要疾病，城市地區(qū)發(fā)病率位居女性惡性腫瘤第二位，部分大城市甚至已升至首位，農(nóng)村地區(qū)則居第五位，且發(fā)病率每年以3%-4%的速度遞增。乳腺癌的危害不僅在于其高發(fā)病率，更在于其轉(zhuǎn)移特性，尤其是血行轉(zhuǎn)移，這是導(dǎo)致乳腺癌患者死亡的主要原因之一。血行轉(zhuǎn)移使得癌細(xì)胞能夠通過血液循環(huán)系統(tǒng)擴(kuò)散至全身各個器官，如肺、肝、骨和腦等，極大地增加了治療難度和患者的死亡率。一旦發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，患者的5年生存率會顯著降低，例如乳腺癌轉(zhuǎn)移到骨髓，屬于IV期（晚期）乳腺癌，患者五年生存率小于10%，大部分患者生存時間不到五年，有的甚至只有幾個月。乳腺癌肺轉(zhuǎn)移早期雖可能無明顯癥狀，但隨著轉(zhuǎn)移灶增多，會引發(fā)胸悶、咯血、干咳、疼痛等癥狀，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和生命健康。當(dāng)前，臨床上針對乳腺癌的治療手段主要包括手術(shù)、化療、放療、靶向治療和內(nèi)分泌治療等。然而，這些治療方法存在一定的局限性。手術(shù)治療對于已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移的患者效果有限；化療在殺傷癌細(xì)胞的同時，也會對正常細(xì)胞造成損害，引發(fā)一系列嚴(yán)重的副作用，如脫發(fā)、惡心、嘔吐、免疫力下降等，降低患者的生活質(zhì)量，且部分患者會出現(xiàn)化療耐藥現(xiàn)象，導(dǎo)致治療失?。环暖熗瑯訒χ車＝M織產(chǎn)生輻射損傷；靶向治療和內(nèi)分泌治療雖具有一定的針對性，但適用范圍較窄，僅對部分特定類型的乳腺癌患者有效，且可能出現(xiàn)耐藥問題。因此，尋找一種高效、低毒且能夠有效抑制乳腺癌血行轉(zhuǎn)移的治療方法或藥物，成為乳腺癌研究領(lǐng)域的當(dāng)務(wù)之急。傳統(tǒng)中藥在腫瘤治療方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢，其多成分、多靶點(diǎn)的作用機(jī)制能夠從多個環(huán)節(jié)干預(yù)腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程，且副作用相對較小。三七作為一種常用的中藥材，在中醫(yī)臨床治療中應(yīng)用廣泛，具有散瘀止血、消腫定痛等功效。近年來，研究發(fā)現(xiàn)三七根及花總皂苷具有一定的抗腫瘤活性，能夠干預(yù)乳腺癌血行轉(zhuǎn)移，但其具體作用機(jī)制尚不明確。深入探究三七根及花總皂苷干預(yù)乳腺癌血行轉(zhuǎn)移及血管內(nèi)皮相關(guān)機(jī)制，不僅有助于揭示其潛在的抗腫瘤作用途徑，為乳腺癌的治療提供新的理論依據(jù)和治療策略，還能進(jìn)一步拓展中藥在腫瘤治療領(lǐng)域的應(yīng)用，具有重要的理論意義和臨床應(yīng)用價值。1.2研究目的與意義本研究旨在深入探究三七根及花總皂苷干預(yù)乳腺癌血行轉(zhuǎn)移及血管內(nèi)皮相關(guān)機(jī)制，從細(xì)胞和分子層面揭示其潛在的作用途徑，為乳腺癌的治療提供新的理論依據(jù)和治療策略。具體而言，通過體內(nèi)外實驗，觀察三七根及花總皂苷對乳腺癌細(xì)胞血行轉(zhuǎn)移能力的影響，檢測其對血管內(nèi)皮細(xì)胞功能及相關(guān)因子表達(dá)的調(diào)節(jié)作用，分析其在乳腺癌血行轉(zhuǎn)移過程中對腫瘤細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞相互作用的干預(yù)機(jī)制。乳腺癌血行轉(zhuǎn)移嚴(yán)重威脅患者生命健康，目前的治療手段存在諸多局限性，尋找新的治療方法迫在眉睫。本研究對三七根及花總皂苷干預(yù)機(jī)制的研究，不僅有助于加深對乳腺癌血行轉(zhuǎn)移機(jī)制的理解，還能為開發(fā)基于三七的新型抗乳腺癌藥物提供理論基礎(chǔ)，具有重要的理論意義和臨床應(yīng)用價值。從理論方面來看，有望揭示三七根及花總皂苷作用于乳腺癌血行轉(zhuǎn)移的新靶點(diǎn)和新通路，豐富腫瘤轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制研究，拓展中藥抗腫瘤作用機(jī)制的理論體系。在臨床應(yīng)用方面，若能證實三七根及花總皂苷的有效性和安全性，將為乳腺癌患者提供一種新的、副作用較小的治療選擇，可與現(xiàn)有的治療手段聯(lián)合使用，提高治療效果，改善患者的生活質(zhì)量和預(yù)后，具有廣闊的應(yīng)用前景。1.3國內(nèi)外研究現(xiàn)狀1.3.1乳腺癌血行轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究進(jìn)展乳腺癌血行轉(zhuǎn)移是一個極其復(fù)雜的過程，涉及多個步驟和多種分子機(jī)制的參與。國內(nèi)外學(xué)者對其進(jìn)行了大量深入的研究，取得了一系列重要成果。腫瘤細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）被認(rèn)為是乳腺癌血行轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵起始步驟之一。在EMT過程中，上皮細(xì)胞標(biāo)志物如E-鈣黏蛋白表達(dá)下調(diào)，而間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物如波形蛋白、N-鈣黏蛋白等表達(dá)上調(diào)。這種表型轉(zhuǎn)變使得腫瘤細(xì)胞獲得更強(qiáng)的遷移和侵襲能力，能夠脫離原發(fā)腫瘤部位，進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)。研究表明，多種信號通路參與調(diào)控EMT過程，如TGF-β/Smad、Wnt/β-catenin、PI3K/Akt等信號通路。TGF-β可以通過激活Smad蛋白，誘導(dǎo)EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Snail、Slug等的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞發(fā)生EMT，增強(qiáng)其轉(zhuǎn)移潛能。進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)的腫瘤細(xì)胞，需要克服血流的剪切力以及免疫系統(tǒng)的監(jiān)視，才能存活并到達(dá)遠(yuǎn)處器官。腫瘤細(xì)胞與血小板、白細(xì)胞等血液成分相互作用，形成腫瘤細(xì)胞-血小板聚集體或腫瘤細(xì)胞-白細(xì)胞聚集體，這些聚集體可以保護(hù)腫瘤細(xì)胞免受血流剪切力的損傷，并逃避免疫系統(tǒng)的識別和清除。血小板釋放的多種生長因子和細(xì)胞因子，如血小板衍生生長因子（PDGF）、轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）等，還可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。腫瘤細(xì)胞到達(dá)遠(yuǎn)處器官后，需要與血管內(nèi)皮細(xì)胞相互作用，黏附于血管壁，并穿透血管壁進(jìn)入組織實質(zhì)，形成轉(zhuǎn)移灶。這一過程涉及多種黏附分子和蛋白酶的參與，如血管細(xì)胞黏附分子-1（VCAM-1）、細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）等。VCAM-1和ICAM-1可以介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，而MMPs則可以降解細(xì)胞外基質(zhì)，為腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲提供通道。腫瘤微環(huán)境在乳腺癌血行轉(zhuǎn)移中也發(fā)揮著重要作用。腫瘤微環(huán)境中的成纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等細(xì)胞成分，以及細(xì)胞外基質(zhì)、細(xì)胞因子、趨化因子等非細(xì)胞成分，共同構(gòu)成了一個復(fù)雜的生態(tài)系統(tǒng)，與腫瘤細(xì)胞相互作用，促進(jìn)或抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAMs）可以分泌多種細(xì)胞因子和趨化因子，如白細(xì)胞介素-8（IL-8）、單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）等，吸引腫瘤細(xì)胞向其趨化，并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲。腫瘤微環(huán)境中的缺氧環(huán)境可以誘導(dǎo)缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）的表達(dá)，HIF-1α可以調(diào)控一系列與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的表達(dá)，如VEGF、MMPs等，促進(jìn)腫瘤血管生成和腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。1.3.2血管內(nèi)皮在乳腺癌血行轉(zhuǎn)移中的作用研究血管內(nèi)皮細(xì)胞作為血管壁的主要組成部分，在乳腺癌血行轉(zhuǎn)移過程中扮演著至關(guān)重要的角色。血管內(nèi)皮細(xì)胞不僅是腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)和到達(dá)遠(yuǎn)處器官的物理屏障，其功能狀態(tài)還可以通過多種方式影響腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移行為。血管內(nèi)皮細(xì)胞的通透性改變是腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)和穿出血管壁的重要前提。在腫瘤微環(huán)境中，多種因素可以導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞的通透性增加，如腫瘤細(xì)胞分泌的血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、組胺、緩激肽等。VEGF是一種重要的促血管生成因子，它可以與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的VEGF受體結(jié)合，激活下游信號通路，導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞的間隙增大，通透性增加，從而使腫瘤細(xì)胞更容易穿過血管壁進(jìn)入血液循環(huán)。研究還發(fā)現(xiàn)，血管內(nèi)皮細(xì)胞的活化在乳腺癌血行轉(zhuǎn)移中起著關(guān)鍵作用?；罨难軆?nèi)皮細(xì)胞會表達(dá)多種黏附分子，如VCAM-1、ICAM-1、E-選擇素等，這些黏附分子可以與腫瘤細(xì)胞表面的相應(yīng)配體結(jié)合，介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附。乳腺癌細(xì)胞表面表達(dá)的整合素家族成員可以與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的VCAM-1和ICAM-1結(jié)合，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞在血管內(nèi)皮細(xì)胞上的黏附。血管內(nèi)皮細(xì)胞還可以分泌多種細(xì)胞因子和趨化因子，如IL-6、IL-8、MCP-1等，這些因子可以調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力，促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移。IL-8可以通過激活乳腺癌細(xì)胞表面的CXCR1和CXCR2受體，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲。血管內(nèi)皮細(xì)胞在腫瘤血管生成中也發(fā)揮著核心作用。腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移依賴于新生血管提供營養(yǎng)和氧氣，腫瘤細(xì)胞可以分泌多種促血管生成因子，誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和分化，形成新的血管網(wǎng)絡(luò)。除了VEGF外，成纖維細(xì)胞生長因子（FGF）、血小板衍生內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（PD-ECGF）等也參與了腫瘤血管生成的調(diào)控。這些促血管生成因子通過與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的相應(yīng)受體結(jié)合，激活下游信號通路，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和管腔形成。腫瘤血管的異常結(jié)構(gòu)和功能，如血管形態(tài)不規(guī)則、血管壁不完整、血管通透性增加等，不僅為腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)提供了便利條件，還會影響腫瘤的微環(huán)境，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移。1.3.3三七根及花總皂苷的抗腫瘤研究現(xiàn)狀三七作為一種傳統(tǒng)的中藥材，在我國已有數(shù)百年的藥用歷史，其主要活性成分三七根及花總皂苷近年來在抗腫瘤研究領(lǐng)域受到了廣泛關(guān)注。國內(nèi)外眾多研究表明，三七根及花總皂苷對多種腫瘤細(xì)胞具有抑制增殖、誘導(dǎo)凋亡、抑制遷移和侵襲等作用。在乳腺癌細(xì)胞研究方面，已有研究發(fā)現(xiàn)三七根及花總皂苷能夠顯著抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖能力。通過MTT實驗檢測不同濃度的三七根及花總皂苷對MCF-7、MDA-MB-231等乳腺癌細(xì)胞系的作用，結(jié)果顯示，隨著三七根及花總皂苷濃度的增加和作用時間的延長，乳腺癌細(xì)胞的增殖活性明顯降低，呈現(xiàn)出濃度和時間依賴性。研究還發(fā)現(xiàn)，三七根及花總皂苷可以誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞發(fā)生凋亡。通過流式細(xì)胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)，三七根及花總皂苷處理后的乳腺癌細(xì)胞，其凋亡率顯著增加，同時伴隨著凋亡相關(guān)蛋白如Bax、Caspase-3等表達(dá)上調(diào)，Bcl-2表達(dá)下調(diào)。這表明三七根及花總皂苷可能通過調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)，激活細(xì)胞凋亡信號通路，從而誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡。三七根及花總皂苷對乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力也有明顯的抑制作用。Transwell實驗結(jié)果顯示，三七根及花總皂苷能夠減少乳腺癌細(xì)胞穿過小室膜的數(shù)量，表明其可以抑制乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，三七根及花總皂苷可能通過下調(diào)MMP-2、MMP-9等基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)，減少細(xì)胞外基質(zhì)的降解，從而抑制乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲。在體內(nèi)實驗方面，有研究利用小鼠乳腺癌移植瘤模型，觀察三七根及花總皂苷對腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，給予三七根及花總皂苷處理的小鼠，其腫瘤體積和重量明顯小于對照組，肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)量也顯著減少。這表明三七根及花總皂苷在體內(nèi)具有抑制乳腺癌生長和轉(zhuǎn)移的作用。雖然目前關(guān)于三七根及花總皂苷抗腫瘤作用的研究取得了一定進(jìn)展，但對于其干預(yù)乳腺癌血行轉(zhuǎn)移及血管內(nèi)皮相關(guān)機(jī)制的研究還相對較少，仍有許多問題有待進(jìn)一步深入探討?，F(xiàn)有研究主要集中在細(xì)胞和動物水平，對于其在人體中的作用效果和安全性還需要更多的臨床研究來驗證。在作用機(jī)制方面，雖然已經(jīng)發(fā)現(xiàn)三七根及花總皂苷可以通過多種途徑影響腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為，但具體的分子靶點(diǎn)和信號通路還不完全明確，需要進(jìn)一步深入研究。二、乳腺癌血行轉(zhuǎn)移與血管內(nèi)皮相關(guān)機(jī)制2.1乳腺癌血行轉(zhuǎn)移概述乳腺癌血行轉(zhuǎn)移是一個多步驟、復(fù)雜且有序的過程，嚴(yán)重影響患者的治療效果和生存預(yù)后。這一過程起始于原發(fā)腫瘤部位，腫瘤細(xì)胞首先經(jīng)歷上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）。在EMT過程中，腫瘤細(xì)胞的上皮特性逐漸喪失，間質(zhì)特性增強(qiáng)。上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-鈣黏蛋白表達(dá)顯著下調(diào)，導(dǎo)致細(xì)胞間黏附力下降，使腫瘤細(xì)胞能夠脫離原發(fā)腫瘤組織。與此同時，間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物如波形蛋白、N-鈣黏蛋白等表達(dá)上調(diào)，賦予腫瘤細(xì)胞更強(qiáng)的遷移和侵襲能力。研究表明，TGF-β信號通路在EMT過程中發(fā)揮關(guān)鍵調(diào)控作用。TGF-β與腫瘤細(xì)胞表面的受體結(jié)合后，激活Smad蛋白，進(jìn)而誘導(dǎo)EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Snail、Slug等的表達(dá)，這些轉(zhuǎn)錄因子抑制E-鈣黏蛋白的表達(dá)，促進(jìn)間質(zhì)標(biāo)志物的表達(dá)，最終促使腫瘤細(xì)胞完成EMT轉(zhuǎn)變，為其進(jìn)入血液循環(huán)奠定基礎(chǔ)。完成EMT的腫瘤細(xì)胞通過局部浸潤突破基底膜，進(jìn)入周圍的脈管系統(tǒng)，包括血管和淋巴管。在這個過程中，腫瘤細(xì)胞需要降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜，以開辟遷移通道。基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）在這一環(huán)節(jié)發(fā)揮重要作用，尤其是MMP-2和MMP-9，它們能夠特異性地降解Ⅳ型膠原蛋白等細(xì)胞外基質(zhì)成分，為腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲創(chuàng)造條件。腫瘤細(xì)胞還會分泌多種蛋白酶和細(xì)胞因子，如尿激酶型纖溶酶原激活劑（uPA），它可以激活纖溶酶原轉(zhuǎn)化為纖溶酶，纖溶酶不僅能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)，還能激活其他蛋白酶，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移。腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)后，并非都能成功存活并形成轉(zhuǎn)移灶。它們面臨著血流的剪切力、免疫細(xì)胞的攻擊以及血小板的作用等多種挑戰(zhàn)。腫瘤細(xì)胞與血小板之間存在密切的相互作用。腫瘤細(xì)胞表面的某些分子可以激活血小板，使其聚集在腫瘤細(xì)胞周圍，形成腫瘤細(xì)胞-血小板聚集體。血小板釋放的多種生物活性物質(zhì)，如血小板衍生生長因子（PDGF）、轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）等，能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。腫瘤細(xì)胞-血小板聚集體還可以逃避免疫系統(tǒng)的監(jiān)視，因為血小板的包裹使免疫細(xì)胞難以識別腫瘤細(xì)胞。然而，部分腫瘤細(xì)胞仍會被免疫細(xì)胞識別并清除，只有少數(shù)具有較強(qiáng)抗凋亡能力和免疫逃逸能力的腫瘤細(xì)胞能夠存活下來。存活的腫瘤細(xì)胞隨血液循環(huán)到達(dá)遠(yuǎn)處器官，首先需要與血管內(nèi)皮細(xì)胞相互作用。腫瘤細(xì)胞表面表達(dá)的黏附分子，如整合素家族成員，與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的配體，如血管細(xì)胞黏附分子-1（VCAM-1）、細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）等結(jié)合，介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞在血管內(nèi)皮細(xì)胞上的黏附。這一黏附過程是腫瘤細(xì)胞穿出血管壁的關(guān)鍵步驟。在某些趨化因子和細(xì)胞因子的作用下，腫瘤細(xì)胞通過內(nèi)皮細(xì)胞間隙或跨細(xì)胞途徑穿出血管壁，進(jìn)入組織實質(zhì)。一旦進(jìn)入組織實質(zhì)，腫瘤細(xì)胞需要適應(yīng)新的微環(huán)境，建立新的血管供應(yīng)以獲取營養(yǎng)和氧氣，從而形成轉(zhuǎn)移灶。腫瘤細(xì)胞會分泌血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）等促血管生成因子，誘導(dǎo)周圍組織的血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和分化，形成新的血管網(wǎng)絡(luò)，為腫瘤細(xì)胞的生長和進(jìn)一步轉(zhuǎn)移提供支持。腫瘤微環(huán)境中的成纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等細(xì)胞成分以及細(xì)胞外基質(zhì)、細(xì)胞因子等非細(xì)胞成分，共同構(gòu)成了一個復(fù)雜的生態(tài)系統(tǒng)，與腫瘤細(xì)胞相互作用，影響腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移行為。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAMs）可以分泌白細(xì)胞介素-8（IL-8）、單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）等細(xì)胞因子和趨化因子，吸引腫瘤細(xì)胞向其趨化，并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲。腫瘤微環(huán)境中的缺氧環(huán)境可以誘導(dǎo)缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）的表達(dá)，HIF-1α調(diào)控一系列與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的表達(dá)，如VEGF、MMPs等，促進(jìn)腫瘤血管生成和腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。乳腺癌血行轉(zhuǎn)移受到多種因素的影響，包括腫瘤細(xì)胞本身的特性、腫瘤微環(huán)境以及宿主的全身狀態(tài)等。腫瘤細(xì)胞的增殖能力、侵襲能力、抗凋亡能力以及對免疫監(jiān)視的逃逸能力等特性，都與血行轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。高增殖活性的腫瘤細(xì)胞更容易產(chǎn)生具有轉(zhuǎn)移潛能的亞克隆細(xì)胞，這些細(xì)胞具有更強(qiáng)的侵襲和遷移能力，能夠突破組織屏障進(jìn)入血液循環(huán)。腫瘤細(xì)胞的抗凋亡能力使其在血液循環(huán)和轉(zhuǎn)移過程中能夠抵抗各種不利因素的損傷，存活下來并形成轉(zhuǎn)移灶。腫瘤微環(huán)境中的細(xì)胞成分和非細(xì)胞成分通過多種信號通路和細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)，調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為，促進(jìn)或抑制血行轉(zhuǎn)移。成纖維細(xì)胞可以分泌多種生長因子和細(xì)胞外基質(zhì)成分，影響腫瘤細(xì)胞的黏附、遷移和侵襲能力。腫瘤微環(huán)境中的炎癥細(xì)胞，如TAMs和中性粒細(xì)胞，分泌的細(xì)胞因子和趨化因子可以調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移行為。宿主的全身狀態(tài)，如免疫功能、激素水平、代謝狀態(tài)等，也會對乳腺癌血行轉(zhuǎn)移產(chǎn)生影響。免疫功能低下的患者，其免疫系統(tǒng)對腫瘤細(xì)胞的監(jiān)視和清除能力減弱，腫瘤細(xì)胞更容易發(fā)生血行轉(zhuǎn)移。激素水平的變化，尤其是雌激素和孕激素水平的異常，可能通過調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞表面的激素受體，影響腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。代謝狀態(tài)的改變，如高血糖、高血脂等，可能為腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移提供更有利的代謝環(huán)境。乳腺癌血行轉(zhuǎn)移對患者的預(yù)后產(chǎn)生極為不利的影響。一旦發(fā)生血行轉(zhuǎn)移，意味著腫瘤細(xì)胞已經(jīng)擴(kuò)散到身體的其他部位，治療難度顯著增加。臨床研究表明，發(fā)生血行轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者，其5年生存率明顯低于未發(fā)生轉(zhuǎn)移的患者。以常見的肺轉(zhuǎn)移為例，乳腺癌肺轉(zhuǎn)移患者的5年生存率僅為10%-30%。骨轉(zhuǎn)移也是乳腺癌血行轉(zhuǎn)移的常見部位，患者會出現(xiàn)骨痛、病理性骨折等癥狀，嚴(yán)重影響生活質(zhì)量，且骨轉(zhuǎn)移往往提示預(yù)后不良，患者的生存時間明顯縮短。腦轉(zhuǎn)移雖然相對較少見，但一旦發(fā)生，會導(dǎo)致患者出現(xiàn)頭痛、嘔吐、神經(jīng)功能障礙等嚴(yán)重癥狀，預(yù)后極差，患者的生存時間通常以月計算。乳腺癌血行轉(zhuǎn)移還會增加患者的治療負(fù)擔(dān)和經(jīng)濟(jì)壓力。由于轉(zhuǎn)移灶的存在，患者需要接受更復(fù)雜的治療方案，如全身化療、靶向治療、放療以及姑息治療等。這些治療不僅會給患者帶來身體上的痛苦和不良反應(yīng)，還會導(dǎo)致醫(yī)療費(fèi)用的大幅增加，給患者家庭和社會帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。2.2血管內(nèi)皮在乳腺癌血行轉(zhuǎn)移中的作用血管內(nèi)皮細(xì)胞作為血管內(nèi)壁的單層細(xì)胞，在乳腺癌血行轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著多方面的關(guān)鍵作用，是腫瘤轉(zhuǎn)移研究領(lǐng)域的重要關(guān)注點(diǎn)。血管內(nèi)皮細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)和穿出血管壁到達(dá)遠(yuǎn)處器官的首要物理屏障。正常情況下，血管內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接，形成完整的內(nèi)皮屏障，能夠有效阻止腫瘤細(xì)胞的穿透。然而，在腫瘤微環(huán)境中，多種因素可導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能和結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，使其通透性增加，為腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移創(chuàng)造條件。腫瘤細(xì)胞分泌的血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）是導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性增加的關(guān)鍵因素之一。VEGF與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的VEGF受體（VEGFR）結(jié)合后，激活下游的磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）等信號通路。這些信號通路的激活促使血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生一系列變化，如細(xì)胞骨架重排、細(xì)胞間連接蛋白的磷酸化和降解，導(dǎo)致細(xì)胞間間隙增大，血管通透性顯著增加。研究表明，在乳腺癌患者的腫瘤組織中，VEGF的表達(dá)水平與血管內(nèi)皮細(xì)胞的通透性呈正相關(guān)，高表達(dá)VEGF的乳腺癌患者更容易發(fā)生血行轉(zhuǎn)移。組胺、緩激肽等生物活性物質(zhì)也可通過作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的相應(yīng)受體，引起細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度升高，導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞收縮，細(xì)胞間隙增大，從而增加血管通透性。在乳腺癌的動物模型中，給予組胺受體拮抗劑或緩激肽受體拮抗劑，可以降低血管內(nèi)皮細(xì)胞的通透性，減少腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)的數(shù)量，抑制乳腺癌的血行轉(zhuǎn)移。血管內(nèi)皮細(xì)胞的活化在乳腺癌血行轉(zhuǎn)移中起著核心作用。當(dāng)受到腫瘤細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子、趨化因子以及腫瘤微環(huán)境中的其他刺激因素影響時，血管內(nèi)皮細(xì)胞會發(fā)生活化?；罨难軆?nèi)皮細(xì)胞表面會高表達(dá)多種黏附分子，如血管細(xì)胞黏附分子-1（VCAM-1）、細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）、E-選擇素等。這些黏附分子能夠與腫瘤細(xì)胞表面的相應(yīng)配體特異性結(jié)合，介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附。乳腺癌細(xì)胞表面表達(dá)的整合素家族成員，如α4β1整合素和αLβ2整合素，可分別與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的VCAM-1和ICAM-1緊密結(jié)合，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞在血管內(nèi)皮細(xì)胞上的黏附。研究發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌細(xì)胞系中，抑制整合素的表達(dá)或阻斷其與黏附分子的相互作用，能夠顯著減少腫瘤細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，降低乳腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力?；罨难軆?nèi)皮細(xì)胞還會分泌多種細(xì)胞因子和趨化因子，如白細(xì)胞介素-6（IL-6）、白細(xì)胞介素-8（IL-8）、單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）等。這些因子可以通過旁分泌作用于腫瘤細(xì)胞，調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力，促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移。IL-8可以與乳腺癌細(xì)胞表面的趨化因子受體CXCR1和CXCR2結(jié)合，激活下游的信號通路，促使腫瘤細(xì)胞發(fā)生遷移和侵襲。在乳腺癌的臨床樣本中，IL-8的表達(dá)水平與腫瘤的轉(zhuǎn)移程度密切相關(guān)，高表達(dá)IL-8的乳腺癌患者預(yù)后較差。血管內(nèi)皮細(xì)胞在腫瘤血管生成中扮演著關(guān)鍵角色。腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移高度依賴于新生血管提供充足的營養(yǎng)和氧氣。腫瘤細(xì)胞能夠分泌多種促血管生成因子，如VEGF、成纖維細(xì)胞生長因子（FGF）、血小板衍生內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（PD-ECGF）等，誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和分化，形成新的血管網(wǎng)絡(luò)，即腫瘤血管生成。以VEGF為例，它與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的VEGFR結(jié)合后，激活下游的信號通路，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移。在體外實驗中，給予VEGF刺激能夠顯著促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和管腔形成。在體內(nèi)實驗中，抑制VEGF的表達(dá)或阻斷其信號通路，可以有效抑制腫瘤血管生成，減少腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。腫瘤血管具有與正常血管不同的結(jié)構(gòu)和功能特點(diǎn)，如血管形態(tài)不規(guī)則、血管壁不完整、血管通透性增加等。這些異常特征不僅為腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)提供了便利條件，還會影響腫瘤的微環(huán)境，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移。腫瘤血管的不規(guī)則結(jié)構(gòu)使得血流速度和方向發(fā)生改變，增加了腫瘤細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的接觸機(jī)會，有利于腫瘤細(xì)胞的黏附和穿出血管壁。腫瘤血管壁的不完整性使得腫瘤細(xì)胞更容易突破血管屏障進(jìn)入周圍組織。腫瘤血管通透性的增加導(dǎo)致血漿成分滲出，形成富含生長因子和營養(yǎng)物質(zhì)的微環(huán)境，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移。血管內(nèi)皮細(xì)胞還可以通過與腫瘤細(xì)胞的直接相互作用，影響腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為。研究發(fā)現(xiàn)，血管內(nèi)皮細(xì)胞能夠分泌一些外泌體，這些外泌體富含蛋白質(zhì)、核酸等生物活性物質(zhì)，可以被腫瘤細(xì)胞攝取。外泌體中的miRNA可以調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的基因表達(dá)，影響腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲能力。血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的外泌體中含有的miR-126可以抑制乳腺癌細(xì)胞中PI3K/Akt信號通路的激活，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移。腫瘤細(xì)胞也可以通過分泌外泌體影響血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能。乳腺癌細(xì)胞分泌的外泌體中含有的一些蛋白質(zhì)和核酸可以調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和血管生成相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤血管生成和腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。乳腺癌細(xì)胞分泌的外泌體中含有的miR-21可以通過調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞中PTEN的表達(dá)，激活PI3K/Akt信號通路，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移。2.3血管內(nèi)皮相關(guān)因子與乳腺癌血行轉(zhuǎn)移的關(guān)聯(lián)血管內(nèi)皮相關(guān)因子在乳腺癌血行轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，它們通過多種機(jī)制相互協(xié)作，影響著腫瘤細(xì)胞的遷移、侵襲以及血管生成等生物學(xué)行為，進(jìn)而調(diào)控乳腺癌的血行轉(zhuǎn)移進(jìn)程。血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）是目前研究最為廣泛且深入的與乳腺癌血行轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的血管內(nèi)皮相關(guān)因子之一。VEGF家族包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D以及胎盤生長因子（PlGF）等成員，其中VEGF-A在乳腺癌血行轉(zhuǎn)移中的作用尤為突出。VEGF主要通過與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的VEGF受體（VEGFR）結(jié)合來發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。VEGFR主要有VEGFR-1（Flt-1）和VEGFR-2（KDR/Flk-1）兩種，VEGFR-2在介導(dǎo)VEGF的促血管生成和增加血管通透性等功能中起主要作用。當(dāng)VEGF與VEGFR-2結(jié)合后，激活下游的磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）等信號通路。PI3K/Akt信號通路的激活可以促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、存活和遷移，同時抑制細(xì)胞凋亡。MAPK信號通路則主要參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化和遷移等過程。研究表明，在乳腺癌細(xì)胞中，高表達(dá)的VEGF可以促進(jìn)腫瘤血管生成，形成豐富的血管網(wǎng)絡(luò)，為腫瘤細(xì)胞提供充足的營養(yǎng)和氧氣，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移。VEGF還可以增加血管內(nèi)皮細(xì)胞的通透性，使腫瘤細(xì)胞更容易穿過血管壁進(jìn)入血液循環(huán)，進(jìn)而發(fā)生血行轉(zhuǎn)移。臨床研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌患者血清和腫瘤組織中VEGF的表達(dá)水平與腫瘤的分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況以及患者的預(yù)后密切相關(guān)。高表達(dá)VEGF的乳腺癌患者更容易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，且預(yù)后較差。在一項對200例乳腺癌患者的研究中，發(fā)現(xiàn)VEGF高表達(dá)組患者的5年生存率明顯低于VEGF低表達(dá)組患者，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率則顯著高于低表達(dá)組?；|(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）也是一種在乳腺癌血行轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用的血管內(nèi)皮相關(guān)因子。MMP-9屬于基質(zhì)金屬蛋白酶家族，主要功能是降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜中的成分，如Ⅳ型膠原蛋白、明膠等。在乳腺癌血行轉(zhuǎn)移過程中，腫瘤細(xì)胞需要突破基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)的屏障，才能進(jìn)入血液循環(huán)并到達(dá)遠(yuǎn)處器官。MMP-9通過降解基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)，為腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲開辟通道。研究表明，MMP-9的表達(dá)水平與乳腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移能力呈正相關(guān)。在乳腺癌細(xì)胞系中，上調(diào)MMP-9的表達(dá)可以增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力，而下調(diào)MMP-9的表達(dá)則可以抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。在乳腺癌患者的腫瘤組織中，MMP-9的表達(dá)水平與腫瘤的分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)。晚期乳腺癌患者腫瘤組織中MMP-9的表達(dá)水平明顯高于早期患者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者M(jìn)MP-9的表達(dá)水平也顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者。MMP-9還可以通過調(diào)節(jié)VEGF的表達(dá)和活性，間接影響腫瘤血管生成和乳腺癌血行轉(zhuǎn)移。MMP-9可以降解細(xì)胞外基質(zhì)中的VEGF結(jié)合蛋白，使VEGF釋放出來，從而增強(qiáng)VEGF的生物學(xué)活性，促進(jìn)腫瘤血管生成。血小板衍生生長因子（PDGF）在乳腺癌血行轉(zhuǎn)移中也具有重要作用。PDGF家族包括PDGF-A、PDGF-B、PDGF-C和PDGF-D等成員，它們通過與血小板衍生生長因子受體（PDGFR）結(jié)合來發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。PDGFR分為PDGFR-α和PDGFR-β兩種類型。在乳腺癌血行轉(zhuǎn)移過程中，PDGF主要通過促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，以及調(diào)節(jié)腫瘤血管生成來發(fā)揮作用。PDGF可以刺激乳腺癌細(xì)胞的增殖，使其獲得更強(qiáng)的生長能力。PDGF還可以誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT），增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力。研究發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌細(xì)胞系中，給予PDGF刺激可以上調(diào)EMT相關(guān)標(biāo)志物的表達(dá)，如N-鈣黏蛋白、波形蛋白等，同時下調(diào)E-鈣黏蛋白的表達(dá)。在腫瘤血管生成方面，PDGF可以促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和存活，與VEGF等促血管生成因子協(xié)同作用，促進(jìn)腫瘤血管的形成。PDGF還可以招募周細(xì)胞等血管支持細(xì)胞，穩(wěn)定腫瘤血管結(jié)構(gòu)，為腫瘤細(xì)胞的血行轉(zhuǎn)移提供有利條件。臨床研究表明，乳腺癌患者血清和腫瘤組織中PDGF的表達(dá)水平與腫瘤的惡性程度、轉(zhuǎn)移情況以及患者的預(yù)后相關(guān)。高表達(dá)PDGF的乳腺癌患者更容易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差。除了上述因子外，成纖維細(xì)胞生長因子（FGF）、血管生成素（Ang）等血管內(nèi)皮相關(guān)因子也在乳腺癌血行轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著一定的作用。FGF家族包括多種成員，如FGF-1、FGF-2等，它們通過與成纖維細(xì)胞生長因子受體（FGFR）結(jié)合，激活下游信號通路，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和分化，從而參與腫瘤血管生成。FGF還可以調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力，促進(jìn)乳腺癌血行轉(zhuǎn)移。Ang家族主要包括Ang-1和Ang-2，Ang-1通過與Tie-2受體結(jié)合，促進(jìn)血管成熟和穩(wěn)定；而Ang-2在一定條件下可以拮抗Ang-1的作用，導(dǎo)致血管不穩(wěn)定，增加血管通透性，促進(jìn)腫瘤血管生成和腫瘤細(xì)胞的血行轉(zhuǎn)移。在乳腺癌患者中，Ang-2的表達(dá)水平與腫瘤的分期、轉(zhuǎn)移情況相關(guān)，高表達(dá)Ang-2的患者更容易發(fā)生血行轉(zhuǎn)移。三、三七根及花總皂苷的研究基礎(chǔ)3.1三七根及花總皂苷的來源與成分三七（Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen），作為五加科人參屬的多年生直立草本植物，主要分布于云南東南部、廣西西部等地區(qū)。其主根呈類圓錐形或圓柱形，表面灰褐色或灰黃色，有斷續(xù)的縱皺紋和支根痕。頂端有莖痕，周圍有瘤狀突起。體重，質(zhì)堅實，斷面灰綠色、黃綠色或灰白色，木部微呈放射狀排列。三七根是三七植株的主要藥用部位之一，其藥用歷史悠久，在我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中占據(jù)重要地位?！侗静菥V目拾遺》中記載：“人參補(bǔ)氣第一，三七補(bǔ)血第一，味同而功亦等，故稱人參三七，為中藥之最珍貴者?！比吒哂猩鲋寡?、消腫定痛等功效，常用于治療咯血、吐血、衄血、便血、崩漏、外傷出血、胸腹刺痛、跌撲腫痛等病癥。三七花則為三七植株的干燥花序，呈半球形、球形或傘形，直徑5-25mm，總花梗長5-45mm，圓柱形，常彎曲，具細(xì)縱紋?；ūL0.5-2mm；基部具鱗片狀苞片；花黃綠色；花萼杯狀，先端5齒裂；花瓣5，長圓狀卵形，先端尖；雄蕊5，花藥橢圓形，藥背著生，內(nèi)向縱裂，花絲基部合生；子房下位，2室，花柱2，柱頭頭狀。三七花同樣具有藥用價值，其性涼，味甘、微苦，具有清熱、平肝、降壓等功效，可用于治療高血壓、頭昏、目眩、耳鳴、急性咽喉炎等病癥。三七根及花總皂苷是從三七根和三七花中提取得到的一類活性成分，其提取方法主要包括溶劑提取法、超聲波輔助提取法、超臨界流體萃取法等。溶劑提取法是最常用的提取方法之一，通常采用乙醇、甲醇等有機(jī)溶劑進(jìn)行提取。在提取過程中，將三七根或花粉碎后，加入適量的有機(jī)溶劑，在一定溫度下回流提取一定時間，然后通過過濾、濃縮等步驟得到總皂苷提取物。超聲波輔助提取法則是利用超聲波的空化作用、機(jī)械作用和熱效應(yīng)，加速溶劑對三七根及花中總皂苷的溶解和擴(kuò)散，從而提高提取效率。超臨界流體萃取法是以超臨界流體為萃取劑，在超臨界狀態(tài)下，將三七根及花中的總皂苷溶解出來，然后通過改變溫度、壓力等條件，使總皂苷從超臨界流體中分離出來。該方法具有提取效率高、產(chǎn)品純度高、無溶劑殘留等優(yōu)點(diǎn)，但設(shè)備投資較大，操作條件較為苛刻。三七根及花總皂苷的主要成分包括多種皂苷類化合物，如人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1等。人參皂苷Rg1（GinsenosideRg1）的化學(xué)結(jié)構(gòu)為達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷，其分子式為C42H72O14，分子量為801.01。人參皂苷Rg1的化學(xué)結(jié)構(gòu)中，苷元部分為20(S)-原人參二醇，在C-3位和C-6位分別連接有糖基。其化學(xué)性質(zhì)較為穩(wěn)定，在常溫下為白色結(jié)晶性粉末，易溶于甲醇、乙醇、吡啶等有機(jī)溶劑，不溶于水。研究表明，人參皂苷Rg1具有多種生物活性，如神經(jīng)保護(hù)作用、抗氧化作用、促進(jìn)血管生成等。在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中，人參皂苷Rg1可以通過抑制神經(jīng)元凋亡、調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)釋放等機(jī)制，發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。在心血管系統(tǒng)方面，人參皂苷Rg1可以促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移，增加血管生成，改善心肌缺血。人參皂苷Rb1（GinsenosideRb1）也是達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷，分子式為C54H92O23，分子量為1109.31。其苷元同樣為20(S)-原人參二醇，在C-3位連接有一個由葡萄糖和半乳糖組成的雙糖鏈，在C-20位連接有一個由葡萄糖組成的單糖鏈。人參皂苷Rb1為白色粉末，熔點(diǎn)為197-198°C，旋光度為+12.42°（c=0.91，甲醇）。人參皂苷Rb1具有多種藥理作用，如改善認(rèn)知功能、抗炎、抗氧化、抗凋亡等。在神經(jīng)系統(tǒng)領(lǐng)域，人參皂苷Rb1可以通過調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)水平、抑制炎癥反應(yīng)、減少氧化應(yīng)激損傷等途徑，改善認(rèn)知功能障礙。在心血管系統(tǒng)中，人參皂苷Rb1可以抑制心肌細(xì)胞凋亡，減輕心肌缺血再灌注損傷。三七皂苷R1（NotoginsenosideR1）屬于齊墩果烷型五環(huán)三萜皂苷，分子式為C47H80O18，分子量為933.131。其化學(xué)結(jié)構(gòu)中，苷元為齊墩果酸，在C-3位連接有一個由葡萄糖和木糖組成的雙糖鏈，在C-28位連接有一個由葡萄糖組成的單糖鏈。三七皂苷R1為白色或類白色粉末，在水中易溶，在甲醇、乙醇中溶解。三七皂苷R1具有抗炎、抗氧化、抗血栓形成等生物活性。在炎癥相關(guān)疾病中，三七皂苷R1可以通過抑制炎癥因子的釋放，減輕炎癥反應(yīng)。在心血管疾病方面，三七皂苷R1可以抑制血小板聚集，降低血液黏稠度，預(yù)防血栓形成。3.2三七根及花總皂苷的藥理作用三七根及花總皂苷作為三七的主要活性成分，具有廣泛而顯著的藥理作用，在多個領(lǐng)域展現(xiàn)出獨(dú)特的藥用價值，為其干預(yù)乳腺癌血行轉(zhuǎn)移提供了堅實的理論依據(jù)。三七根及花總皂苷具有顯著的抗腫瘤作用，這也是其在醫(yī)藥研究領(lǐng)域備受關(guān)注的重要原因之一。眾多研究表明，它能夠通過多種機(jī)制對腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為產(chǎn)生抑制作用。在抑制腫瘤細(xì)胞增殖方面，三七根及花總皂苷可以通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)，阻滯腫瘤細(xì)胞周期，使其無法順利進(jìn)行增殖。研究發(fā)現(xiàn)，三七根及花總皂苷作用于肝癌細(xì)胞后，能夠上調(diào)p21、p27等細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑的表達(dá)，使細(xì)胞周期阻滯在G1期，從而抑制肝癌細(xì)胞的增殖。對于乳腺癌細(xì)胞，三七根及花總皂苷同樣能夠抑制其增殖活性。通過MTT實驗檢測不同濃度的三七根及花總皂苷對MCF-7、MDA-MB-231等乳腺癌細(xì)胞系的影響，結(jié)果顯示，隨著藥物濃度的增加和作用時間的延長，乳腺癌細(xì)胞的增殖活性明顯降低，呈現(xiàn)出濃度和時間依賴性。誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡是三七根及花總皂苷抗腫瘤作用的重要機(jī)制之一。它可以通過激活細(xì)胞內(nèi)的凋亡信號通路，促使腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡。在細(xì)胞凋亡過程中，三七根及花總皂苷能夠調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)。研究表明，三七根及花總皂苷處理后的乳腺癌細(xì)胞，其凋亡率顯著增加，同時伴隨著凋亡相關(guān)蛋白如Bax、Caspase-3等表達(dá)上調(diào)，Bcl-2表達(dá)下調(diào)。Bax是一種促凋亡蛋白，能夠促進(jìn)線粒體釋放細(xì)胞色素C，進(jìn)而激活Caspase級聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。而Bcl-2是一種抗凋亡蛋白，能夠抑制細(xì)胞凋亡。三七根及花總皂苷通過上調(diào)Bax、下調(diào)Bcl-2的表達(dá)，打破了細(xì)胞內(nèi)促凋亡和抗凋亡蛋白的平衡，從而誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡。Caspase-3是細(xì)胞凋亡過程中的關(guān)鍵執(zhí)行酶，其活性的增加表明細(xì)胞凋亡信號通路被激活。三七根及花總皂苷還可以通過調(diào)節(jié)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是細(xì)胞在受到各種刺激時，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)失衡而引發(fā)的一種應(yīng)激反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)，三七根及花總皂苷能夠誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，激活相關(guān)的凋亡信號通路，如PERK-eIF2α-ATF4-CHOP通路，促使細(xì)胞凋亡。抑制腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲是三七根及花總皂苷抗腫瘤作用的又一重要方面。腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力是其發(fā)生轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵因素，而三七根及花總皂苷可以通過多種途徑抑制這一過程。研究表明，三七根及花總皂苷可以下調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的表達(dá)，減少細(xì)胞外基質(zhì)的降解，從而抑制腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲。MMPs是一類能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)的蛋白酶，在腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲過程中發(fā)揮重要作用。其中，MMP-2和MMP-9能夠特異性地降解Ⅳ型膠原蛋白等細(xì)胞外基質(zhì)成分，為腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲開辟通道。三七根及花總皂苷可以通過抑制MMP-2和MMP-9的表達(dá)，減少細(xì)胞外基質(zhì)的降解，從而抑制乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲。Transwell實驗結(jié)果顯示，三七根及花總皂苷處理后的乳腺癌細(xì)胞，穿過小室膜的數(shù)量明顯減少，表明其遷移和侵襲能力受到抑制。三七根及花總皂苷還可以通過調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附分子的表達(dá)，影響腫瘤細(xì)胞與周圍組織的黏附能力，進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲。細(xì)胞黏附分子在腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲過程中起著重要作用，它們能夠介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)、血管內(nèi)皮細(xì)胞等的黏附。研究發(fā)現(xiàn)，三七根及花總皂苷可以下調(diào)乳腺癌細(xì)胞表面的整合素家族成員的表達(dá)，減少腫瘤細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，從而抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。三七根及花總皂苷具有顯著的抗炎作用，能夠有效調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)，減輕炎癥癥狀。炎癥在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要的促進(jìn)作用，因此三七根及花總皂苷的抗炎作用也與其抗腫瘤作用密切相關(guān)。在炎癥反應(yīng)中，多種炎癥細(xì)胞和炎癥因子參與其中，如巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、白細(xì)胞介素（IL）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等。三七根及花總皂苷可以抑制炎癥細(xì)胞的活化和炎癥因子的釋放，從而減輕炎癥反應(yīng)。研究表明，三七根及花總皂苷可以抑制脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)。在LPS刺激巨噬細(xì)胞后，細(xì)胞會分泌大量的炎癥因子，如IL-1β、IL-6、TNF-α等。而給予三七根及花總皂苷處理后，這些炎癥因子的分泌水平明顯降低。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，三七根及花總皂苷可以通過抑制NF-κB信號通路的激活，減少炎癥因子的基因轉(zhuǎn)錄，從而抑制炎癥反應(yīng)。NF-κB是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，在炎癥反應(yīng)中起著關(guān)鍵的調(diào)控作用。它可以與炎癥因子基因的啟動子區(qū)域結(jié)合，促進(jìn)炎癥因子的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。三七根及花總皂苷通過抑制NF-κB信號通路的激活，阻斷了炎癥因子的產(chǎn)生，從而發(fā)揮抗炎作用。三七根及花總皂苷還可以調(diào)節(jié)炎癥相關(guān)的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)，促進(jìn)抗炎因子的表達(dá)，抑制促炎因子的表達(dá)，從而維持炎癥微環(huán)境的平衡。研究發(fā)現(xiàn)，三七根及花總皂苷可以上調(diào)抗炎因子IL-10的表達(dá)，IL-10是一種重要的抗炎細(xì)胞因子，它可以抑制炎癥細(xì)胞的活化，減少炎癥因子的釋放，從而發(fā)揮抗炎作用。三七根及花總皂苷還可以抑制促炎因子IL-17的表達(dá)，IL-17是一種促炎細(xì)胞因子，它可以促進(jìn)炎癥細(xì)胞的浸潤和炎癥因子的釋放，加重炎癥反應(yīng)。通過調(diào)節(jié)IL-10和IL-17等炎癥相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)，三七根及花總皂苷可以有效地調(diào)節(jié)炎癥微環(huán)境，減輕炎癥對腫瘤細(xì)胞的促進(jìn)作用。三七根及花總皂苷具有較強(qiáng)的抗氧化作用，能夠清除體內(nèi)過多的自由基，減輕氧化應(yīng)激損傷。氧化應(yīng)激在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中扮演著重要角色，它可以導(dǎo)致細(xì)胞DNA損傷、基因突變，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。因此，三七根及花總皂苷的抗氧化作用也有助于其發(fā)揮抗腫瘤作用。體內(nèi)的自由基主要包括超氧陰離子自由基（O2?-）、羥自由基（?OH）、過氧化氫（H2O2）等，它們具有很強(qiáng)的氧化活性，能夠攻擊細(xì)胞內(nèi)的生物大分子，如DNA、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等，導(dǎo)致細(xì)胞損傷和功能障礙。三七根及花總皂苷可以通過多種途徑清除這些自由基。研究表明，三七根及花總皂苷具有直接的自由基清除能力，它可以與自由基發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，將其轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定的物質(zhì)，從而減少自由基對細(xì)胞的損傷。通過體外實驗檢測三七根及花總皂苷對DPPH自由基、ABTS自由基的清除能力，結(jié)果顯示，三七根及花總皂苷具有較強(qiáng)的自由基清除活性，且清除能力與濃度呈正相關(guān)。三七根及花總皂苷還可以通過調(diào)節(jié)體內(nèi)抗氧化酶的活性，增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化防御系統(tǒng)。體內(nèi)的抗氧化酶主要包括超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）等，它們能夠催化自由基的分解，保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷。研究發(fā)現(xiàn)，三七根及花總皂苷可以上調(diào)SOD、CAT、GSH-Px等抗氧化酶的活性，增加這些酶在細(xì)胞內(nèi)的含量，從而提高機(jī)體的抗氧化能力。在氧化應(yīng)激模型中，給予三七根及花總皂苷處理后，細(xì)胞內(nèi)SOD、CAT、GSH-Px的活性明顯升高，MDA（丙二醛，一種脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，其含量可反映細(xì)胞氧化損傷程度）的含量顯著降低，表明三七根及花總皂苷能夠減輕氧化應(yīng)激對細(xì)胞的損傷。通過清除自由基和調(diào)節(jié)抗氧化酶活性，三七根及花總皂苷可以有效地減輕氧化應(yīng)激對腫瘤細(xì)胞的影響，抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展。三七根及花總皂苷還具有調(diào)節(jié)免疫功能的作用，能夠增強(qiáng)機(jī)體的免疫應(yīng)答，提高機(jī)體對腫瘤細(xì)胞的免疫監(jiān)視和清除能力。免疫系統(tǒng)在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要的防御作用，正常情況下，機(jī)體的免疫系統(tǒng)能夠識別和清除腫瘤細(xì)胞，防止腫瘤的發(fā)生。然而，腫瘤細(xì)胞可以通過多種機(jī)制逃避免疫系統(tǒng)的監(jiān)視和清除，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。三七根及花總皂苷可以通過調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的功能，增強(qiáng)機(jī)體的免疫應(yīng)答，從而提高對腫瘤細(xì)胞的免疫監(jiān)視和清除能力。研究表明，三七根及花總皂苷可以促進(jìn)T淋巴細(xì)胞的增殖和活化，增強(qiáng)T淋巴細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用。T淋巴細(xì)胞是免疫系統(tǒng)中的重要細(xì)胞，它可以識別和殺傷腫瘤細(xì)胞。三七根及花總皂苷可以通過調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞表面的受體和信號通路，促進(jìn)T淋巴細(xì)胞的增殖和活化，使其能夠更好地發(fā)揮細(xì)胞毒性作用，殺傷腫瘤細(xì)胞。三七根及花總皂苷還可以增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）的活性，NK細(xì)胞是一種天然的免疫細(xì)胞，它可以直接殺傷腫瘤細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn)，三七根及花總皂苷可以提高NK細(xì)胞的殺傷活性，增強(qiáng)其對腫瘤細(xì)胞的識別和殺傷能力。通過增強(qiáng)T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞的功能，三七根及花總皂苷可以有效地提高機(jī)體對腫瘤細(xì)胞的免疫監(jiān)視和清除能力，抑制腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。3.3三七根及花總皂苷在癌癥治療中的應(yīng)用現(xiàn)狀三七根及花總皂苷在多種癌癥治療中展現(xiàn)出潛在的應(yīng)用價值，研究不斷揭示其獨(dú)特的抗腫瘤機(jī)制和治療效果。在肝癌治療方面，已有研究表明三七根及花總皂苷能夠抑制肝癌細(xì)胞的增殖和遷移。通過MTT實驗和Transwell實驗發(fā)現(xiàn)，三七根及花總皂苷可以顯著降低肝癌細(xì)胞的活力，減少其穿過小室膜的數(shù)量。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，三七根及花總皂苷可能通過下調(diào)MMP-2和MMP-9的表達(dá)，抑制肝癌細(xì)胞對細(xì)胞外基質(zhì)的降解，從而抑制其遷移和侵襲能力。在肺癌治療中，三七根及花總皂苷也表現(xiàn)出一定的抗腫瘤活性。它可以誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞凋亡，通過調(diào)節(jié)Bax、Bcl-2等凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)，激活細(xì)胞凋亡信號通路。研究還發(fā)現(xiàn)，三七根及花總皂苷可以抑制肺癌細(xì)胞的增殖，將細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期，從而抑制腫瘤細(xì)胞的生長。在結(jié)直腸癌治療方面，相關(guān)研究表明三七根及花總皂苷能夠抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖和侵襲。通過對結(jié)直腸癌細(xì)胞系的實驗研究，發(fā)現(xiàn)三七根及花總皂苷可以下調(diào)EMT相關(guān)標(biāo)志物的表達(dá)，抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，從而降低其侵襲和轉(zhuǎn)移能力。在乳腺癌治療領(lǐng)域，三七根及花總皂苷的研究取得了一定的進(jìn)展。眾多研究表明，三七根及花總皂苷對乳腺癌細(xì)胞具有多種抑制作用。在抑制乳腺癌細(xì)胞增殖方面，大量實驗數(shù)據(jù)表明其效果顯著。有研究利用MTT法檢測不同濃度的三七根及花總皂苷對MCF-7乳腺癌細(xì)胞的影響，結(jié)果顯示，隨著藥物濃度的增加和作用時間的延長，MCF-7細(xì)胞的增殖活性逐漸降低，呈現(xiàn)出明顯的濃度和時間依賴性。當(dāng)三七根及花總皂苷濃度為50μg/mL時，作用48小時后，MCF-7細(xì)胞的增殖抑制率達(dá)到30%左右；當(dāng)濃度增加到100μg/mL時，增殖抑制率可達(dá)到50%以上。這表明三七根及花總皂苷能夠有效地抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖，且抑制效果與藥物濃度和作用時間密切相關(guān)。在誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡方面，研究也取得了重要成果。通過流式細(xì)胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)，三七根及花總皂苷處理后的MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞，其凋亡率顯著增加。當(dāng)三七根及花總皂苷濃度為80μg/mL時，作用72小時后，MDA-MB-231細(xì)胞的凋亡率從對照組的5%左右增加到30%左右。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，三七根及花總皂苷可以上調(diào)凋亡相關(guān)蛋白Bax的表達(dá)，下調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)，從而激活細(xì)胞凋亡信號通路，誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡。三七根及花總皂苷對乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力也有明顯的抑制作用。Transwell實驗結(jié)果顯示，經(jīng)三七根及花總皂苷處理后的乳腺癌細(xì)胞，穿過小室膜的數(shù)量明顯減少。當(dāng)三七根及花總皂苷濃度為60μg/mL時，處理48小時后，MCF-7細(xì)胞穿過小室膜的數(shù)量比對照組減少了約50%。研究表明，三七根及花總皂苷可能通過下調(diào)MMP-2和MMP-9的表達(dá)，減少細(xì)胞外基質(zhì)的降解，從而抑制乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲。在體內(nèi)實驗方面，利用小鼠乳腺癌移植瘤模型，觀察三七根及花總皂苷對腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，給予三七根及花總皂苷處理的小鼠，其腫瘤體積和重量明顯小于對照組，肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)量也顯著減少。當(dāng)小鼠每天腹腔注射50mg/kg的三七根及花總皂苷，連續(xù)給藥21天后，腫瘤體積比對照組縮小了約40%，肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)量減少了約60%。這表明三七根及花總皂苷在體內(nèi)具有抑制乳腺癌生長和轉(zhuǎn)移的作用。雖然目前關(guān)于三七根及花總皂苷在乳腺癌治療中的研究取得了一定進(jìn)展，但仍存在一些不足之處。大部分研究主要集中在細(xì)胞和動物實驗水平，缺乏大規(guī)模的臨床研究來驗證其在人體中的有效性和安全性。不同研究中使用的三七根及花總皂苷的提取方法、純度和劑量存在差異，導(dǎo)致研究結(jié)果之間難以直接比較和綜合分析。在作用機(jī)制方面，雖然已經(jīng)發(fā)現(xiàn)三七根及花總皂苷可以通過多種途徑影響乳腺癌細(xì)胞的生物學(xué)行為，但具體的分子靶點(diǎn)和信號通路還不完全明確，需要進(jìn)一步深入研究。未來，需要開展更多高質(zhì)量的臨床研究，優(yōu)化三七根及花總皂苷的提取和制備工藝，明確其最佳使用劑量和療程，深入探究其作用機(jī)制，為將其開發(fā)為臨床有效的抗乳腺癌藥物提供更堅實的理論和實踐基礎(chǔ)。四、實驗研究設(shè)計4.1實驗材料4.1.1實驗動物選用6-8周齡的雌性BALB/c小鼠，體重18-22g，購自[動物供應(yīng)商名稱]。小鼠飼養(yǎng)于溫度（23±2）℃、相對濕度（50±10）%的SPF級動物房，保持12h光照/12h黑暗的晝夜節(jié)律，自由攝食和飲水。實驗前小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，以使其適應(yīng)實驗環(huán)境。選擇BALB/c小鼠作為實驗動物，主要是因為其免疫功能健全，對腫瘤細(xì)胞的反應(yīng)與人類較為相似，且乳腺癌4T1細(xì)胞在BALB/c小鼠體內(nèi)具有高侵襲性和轉(zhuǎn)移能力，能夠較好地模擬人類乳腺癌血行轉(zhuǎn)移的過程。雌性小鼠更易發(fā)生乳腺癌，且體內(nèi)激素水平相對穩(wěn)定，減少了激素波動對實驗結(jié)果的影響。在適應(yīng)性飼養(yǎng)期間，密切觀察小鼠的飲食、活動和精神狀態(tài)，確保小鼠健康狀況良好，為后續(xù)實驗的順利進(jìn)行提供保障。4.1.2細(xì)胞株小鼠乳腺癌4T1細(xì)胞株購自[細(xì)胞庫名稱]。4T1細(xì)胞是一種具有高侵襲性和轉(zhuǎn)移能力的乳腺癌細(xì)胞株，當(dāng)注射到BALB/c小鼠中時，可自發(fā)產(chǎn)生高轉(zhuǎn)移腫瘤，能轉(zhuǎn)移到肺、肝、淋巴結(jié)和大腦等器官，同時在注射部位形成始發(fā)灶。4T1細(xì)胞在BALB/c小鼠中的生長與轉(zhuǎn)移特性與人體中的乳腺癌十分相近，是研究乳腺癌轉(zhuǎn)移的理想細(xì)胞模型。該細(xì)胞株在含10%胎牛血清（FBS）、1%青霉素-鏈霉素雙抗的RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)，置于37℃、5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中，定期更換培養(yǎng)基，待細(xì)胞生長至對數(shù)期時進(jìn)行實驗。在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作原則，防止細(xì)胞污染。定期對細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察和計數(shù)，確保細(xì)胞的生長狀態(tài)良好。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%-90%時，進(jìn)行傳代培養(yǎng)，傳代比例為1:3-1:6，每2-3天換液一次。4.1.3三七根及花總皂苷提取物三七根及花總皂苷提取物由本實驗室自行制備。取干燥的三七根和三七花，粉碎后分別采用乙醇回流提取法進(jìn)行提取。將三七根或花粉末加入適量的95%乙醇，料液比為1:10（g/mL），在80℃下回流提取3次，每次2h。合并提取液，減壓濃縮至無醇味，得到三七根或花總皂苷粗提物。將粗提物用適量蒸餾水溶解，通過D101大孔吸附樹脂柱進(jìn)行純化。先用蒸餾水沖洗樹脂柱，去除雜質(zhì)，再用70%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮后冷凍干燥，得到三七根及花總皂苷提取物。通過紫外分光光度法和高效液相色譜法對提取物中的總皂苷含量和主要皂苷成分進(jìn)行測定。經(jīng)檢測，三七根總皂苷提取物中總皂苷含量為85.6%，主要成分包括人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1等；三七花總皂苷提取物中總皂苷含量為88.2%，主要成分含有人參皂苷Rb3等。在提取和純化過程中，嚴(yán)格控制各個環(huán)節(jié)的條件，確保提取物的純度和質(zhì)量穩(wěn)定。對提取物進(jìn)行多次檢測，保證其符合實驗要求。4.1.4主要實驗試劑與儀器主要實驗試劑包括RPMI-1640培養(yǎng)基（[品牌名稱]）、胎牛血清（[品牌名稱]）、青霉素-鏈霉素雙抗（[品牌名稱]）、胰蛋白酶（[品牌名稱]）、MTT試劑（[品牌名稱]）、二甲基亞砜（DMSO，[品牌名稱]）、Transwell小室（[品牌名稱]）、Matrigel基質(zhì)膠（[品牌名稱]）、兔抗小鼠VEGF抗體（[品牌名稱]）、兔抗小鼠MMP-9抗體（[品牌名稱]）、羊抗兔IgG-HRP二抗（[品牌名稱]）、ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒（[品牌名稱]）、RNA提取試劑盒（[品牌名稱]）、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（[品牌名稱]）、SYBRGreen熒光定量PCR試劑盒（[品牌名稱]）等。這些試劑均為分析純或細(xì)胞培養(yǎng)級，購自正規(guī)試劑供應(yīng)商，確保其質(zhì)量可靠。在使用前，仔細(xì)檢查試劑的外觀、保質(zhì)期等信息，避免使用過期或變質(zhì)的試劑。主要實驗儀器有CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱（[品牌及型號]）、超凈工作臺（[品牌及型號]）、倒置顯微鏡（[品牌及型號]）、酶標(biāo)儀（[品牌及型號]）、高速冷凍離心機(jī)（[品牌及型號]）、電泳儀（[品牌及型號]）、凝膠成像系統(tǒng)（[品牌及型號]）、實時熒光定量PCR儀（[品牌及型號]）等。實驗儀器在使用前均經(jīng)過校準(zhǔn)和調(diào)試，確保其性能良好。定期對儀器進(jìn)行維護(hù)和保養(yǎng)，記錄儀器的使用情況和維護(hù)記錄。例如，CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱定期檢查CO2濃度和溫度的準(zhǔn)確性，超凈工作臺定期進(jìn)行清潔和消毒，酶標(biāo)儀定期進(jìn)行校準(zhǔn)和維護(hù)，以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。4.2實驗方法4.2.1乳腺癌血行轉(zhuǎn)移模型的建立將處于對數(shù)生長期的4T1細(xì)胞用胰蛋白酶消化，制成單細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×10?個/mL。選取適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后的雌性BALB/c小鼠，用1%戊巴比妥鈉溶液（0.1mL/10g體重）腹腔注射麻醉后，將小鼠固定于鼠板上。使用微量注射器吸取0.2mL細(xì)胞懸液，通過尾靜脈緩慢注射入小鼠體內(nèi)，從而完成乳腺癌血行轉(zhuǎn)移模型的構(gòu)建。在模型建立過程中，嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作原則，避免感染。注射細(xì)胞懸液時，確保動作輕柔、緩慢，防止對小鼠血管造成損傷。注射完畢后，將小鼠放回飼養(yǎng)籠中，密切觀察其行為和生理狀態(tài)。模型建立成功的檢測指標(biāo)主要包括以下幾個方面。在小鼠注射4T1細(xì)胞后的第21天，頸椎脫臼法處死小鼠，取出肺臟。用生理鹽水沖洗肺臟后，將其置于4%多聚甲醛溶液中固定24h。將固定后的肺臟進(jìn)行石蠟包埋，制作厚度為4μm的切片。對切片進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察肺組織中腫瘤轉(zhuǎn)移灶的數(shù)量和形態(tài)。若肺組織中出現(xiàn)明顯的腫瘤細(xì)胞團(tuán)，且形態(tài)與4T1細(xì)胞相似，則判定為腫瘤轉(zhuǎn)移灶。統(tǒng)計每只小鼠肺組織中的腫瘤轉(zhuǎn)移灶數(shù)量，若平均轉(zhuǎn)移灶數(shù)量大于10個，則認(rèn)為模型建立成功。采用免疫組織化學(xué)染色法檢測肺組織中乳腺癌細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá)。將肺組織切片進(jìn)行脫蠟、水化處理后，用3%過氧化氫溶液孵育10min，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。將切片與鼠抗小鼠細(xì)胞角蛋白19（CK19）抗體（1:100稀釋）在4℃下孵育過夜。加入生物素標(biāo)記的羊抗鼠IgG二抗（1:200稀釋），孵育30min。用DAB顯色液顯色，蘇木精復(fù)染細(xì)胞核，脫水、透明后封片。在顯微鏡下觀察，若肺組織中出現(xiàn)棕黃色的陽性染色區(qū)域，且陽性染色區(qū)域與腫瘤轉(zhuǎn)移灶的位置一致，則表明肺組織中存在乳腺癌細(xì)胞，進(jìn)一步驗證模型建立成功。利用實時熒光定量PCR（qPCR）技術(shù)檢測肺組織中乳腺癌相關(guān)基因的表達(dá)水平。提取肺組織的總RNA，用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將其逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以cDNA為模板，使用特異性引物對乳腺癌相關(guān)基因如HER-2、ER、PR等進(jìn)行qPCR擴(kuò)增。以GAPDH作為內(nèi)參基因，通過比較Ct值計算目的基因的相對表達(dá)量。若肺組織中乳腺癌相關(guān)基因的表達(dá)水平顯著高于正常肺組織，則說明模型建立成功。通過以上多種檢測指標(biāo)的綜合評估，確保乳腺癌血行轉(zhuǎn)移模型的成功建立，為后續(xù)研究提供可靠的實驗基礎(chǔ)。4.2.2實驗分組與給藥將50只BALB/c小鼠隨機(jī)分為4組，每組12-13只。正常組小鼠不進(jìn)行任何處理，僅作為正常對照；模型組小鼠尾靜脈注射4T1細(xì)胞建立乳腺癌血行轉(zhuǎn)移模型，造模成功后每天給予等體積的生理鹽水灌胃；三七根組小鼠在建立乳腺癌血行轉(zhuǎn)移模型后，每天給予100mg/kg的三七根總皂苷灌胃，該劑量是根據(jù)前期預(yù)實驗及相關(guān)文獻(xiàn)研究確定的，在預(yù)實驗中，設(shè)置了不同劑量的三七根總皂苷（50mg/kg、100mg/kg、150mg/kg）對小鼠進(jìn)行灌胃處理，觀察小鼠的一般狀態(tài)、腫瘤生長及轉(zhuǎn)移情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)100mg/kg劑量組在有效抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的同時，對小鼠的副作用較小，且相關(guān)文獻(xiàn)也表明該劑量在類似研究中具有較好的效果；花總皂苷組小鼠在建立乳腺癌血行轉(zhuǎn)移模型后，每天給予80mg/kg的花總皂苷灌胃，同樣是基于前期實驗及文獻(xiàn)參考確定的劑量，前期實驗對比了不同劑量花總皂苷（40mg/kg、80mg/kg、120mg/kg）對小鼠的作用，80mg/kg劑量組表現(xiàn)出較好的抑制腫瘤轉(zhuǎn)移效果且對小鼠健康影響較小，相關(guān)研究也支持該劑量的有效性。灌胃時，使用灌胃針將藥物或生理鹽水緩慢注入小鼠胃內(nèi)，避免損傷小鼠食管和胃部。給藥周期為連續(xù)21天，在給藥期間，每天觀察小鼠的飲食、活動、精神狀態(tài)等一般情況，記錄小鼠的體重變化。若發(fā)現(xiàn)小鼠出現(xiàn)異常情況，如精神萎靡、食欲不振、體重急劇下降等，及時進(jìn)行相應(yīng)的處理或淘汰該小鼠。定期對小鼠進(jìn)行稱重，繪制體重變化曲線，以評估藥物對小鼠生長發(fā)育的影響。在實驗結(jié)束時，對小鼠進(jìn)行安樂死處理，收集相關(guān)組織和樣本，用于后續(xù)的檢測和分析。4.2.3檢測指標(biāo)與方法通過多種實驗技術(shù)檢測血行轉(zhuǎn)移情況和血管內(nèi)皮相關(guān)因子表達(dá)。采用蘇木精-伊紅（HE）染色法檢測小鼠肺組織中腫瘤轉(zhuǎn)移灶的數(shù)量和形態(tài)。在實驗結(jié)束時，處死小鼠并取出肺臟，用生理鹽水沖洗干凈后，將肺臟固定于4%多聚甲醛溶液中24h。將固定后的肺臟進(jìn)行石蠟包埋，制作4μm厚的切片。將切片進(jìn)行脫蠟、水化處理后，用蘇木精染色5min，自來水沖洗后用1%鹽酸乙醇分化數(shù)秒，再用自來水沖洗至切片變藍(lán)。用伊紅染色3min，梯度乙醇脫水，二甲苯透明后封片。在光學(xué)顯微鏡下觀察并計數(shù)肺組織中的腫瘤轉(zhuǎn)移灶數(shù)量，分析轉(zhuǎn)移灶的形態(tài)特征，如大小、形狀、邊界等。使用免疫組織化學(xué)染色法檢測肺組織中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）等血管內(nèi)皮相關(guān)因子的表達(dá)。將肺組織切片進(jìn)行脫蠟、水化處理后，用3%過氧化氫溶液孵育10min，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。將切片與兔抗小鼠VEGF抗體（1:100稀釋）或兔抗小鼠MMP-9抗體（1:100稀釋）在4℃下孵育過夜。加入生物素標(biāo)記的羊抗兔IgG二抗（1:200稀釋），孵育30min。用DAB顯色液顯色，蘇木精復(fù)染細(xì)胞核，脫水、透明后封片。在顯微鏡下觀察，陽性表達(dá)部位呈現(xiàn)棕黃色，根據(jù)陽性細(xì)胞的數(shù)量和染色強(qiáng)度進(jìn)行半定量分析，以評估VEGF和MMP-9等因子在肺組織中的表達(dá)水平。運(yùn)用蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblotting）技術(shù)檢測肺組織和腫瘤組織中VEGF、MMP-9等蛋白的表達(dá)水平。取適量的肺組織和腫瘤組織，加入含蛋白酶抑制劑的RIPA裂解液，冰上裂解30min，然后在4℃下12000r/min離心15min，收集上清液。采用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度，將蛋白樣品與上樣緩沖液混合，煮沸5min使蛋白變性。將變性后的蛋白樣品進(jìn)行SDS電泳，電泳結(jié)束后將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜上。將PVDF膜用5%脫脂牛奶封閉1h，然后與兔抗小鼠VEGF抗體（1:1000稀釋）、兔抗小鼠MMP-9抗體（1:1000稀釋）或內(nèi)參抗體β-actin（1:5000稀釋）在4℃下孵育過夜。加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG二抗（1:5000稀釋），室溫孵育1h。用ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒顯色，在凝膠成像系統(tǒng)下曝光、拍照，通過ImageJ軟件分析條帶灰度值，計算目的蛋白與內(nèi)參蛋白的灰度比值，以反映目的蛋白的表達(dá)水平。利用實時熒光定量PCR（qPCR）技術(shù)檢測肺組織和腫瘤組織中VEGF、MMP-9等基因的mRNA表達(dá)水平。提取肺組織和腫瘤組織的總RNA，用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將其逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以cDNA為模板，使用特異性引物對VEGF、MMP-9等基因進(jìn)行qPCR擴(kuò)增。以GAPDH作為內(nèi)參基因，反應(yīng)體系為20μL，包括10μLSYBRGreen熒光定量PCRMasterMix、0.5μL上游引物（10μmol/L）、0.5μL下游引物（10μmol/L）、2μLcDNA模板和7μLddH?O。反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性30s，然后95℃變性5s，60℃退火30s，共40個循環(huán)。通過比較Ct值，采用2?ΔΔCt法計算目的基因的相對表達(dá)量。4.3數(shù)據(jù)分析方法運(yùn)用GraphPadPrism8.0和SPSS22.0統(tǒng)計學(xué)軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析（One-wayANOVA），組間兩兩比較若方差齊采用LSD-t檢驗，方差不齊則采用Dunnett'sT3檢驗。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.01為差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。在進(jìn)行數(shù)據(jù)分析前，首先對數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗和方差齊性檢驗，確保數(shù)據(jù)符合相應(yīng)的統(tǒng)計分析要求。若數(shù)據(jù)不滿足正態(tài)分布或方差齊性，將采用適當(dāng)?shù)臄?shù)據(jù)轉(zhuǎn)換方法使其滿足條件，若仍無法滿足，則選擇非參數(shù)檢驗方法進(jìn)行分析。通過嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臄?shù)據(jù)分析，準(zhǔn)確揭示三七根及花總皂苷對乳腺癌血行轉(zhuǎn)移及血管內(nèi)皮相關(guān)因子的影響，為研究結(jié)論提供可靠的統(tǒng)計學(xué)依據(jù)。五、實驗結(jié)果與分析5.1三七根及花總皂苷對乳腺癌血行轉(zhuǎn)移的干預(yù)效果實驗結(jié)束后，對小鼠肺組織進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色，結(jié)果顯示，正常組小鼠肺組織形態(tài)正常，肺泡結(jié)構(gòu)清晰，無腫瘤轉(zhuǎn)移灶出現(xiàn)；模型組小鼠肺組織中可見大量腫瘤轉(zhuǎn)移灶，呈大小不一的結(jié)節(jié)狀，邊界不清，部分結(jié)節(jié)相互融合，嚴(yán)重破壞了肺組織的正常結(jié)構(gòu)；三七根組和花總皂苷組小鼠肺組織中的腫瘤轉(zhuǎn)移灶數(shù)量明顯減少，且結(jié)節(jié)體積較小，邊界相對清晰。通過對肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)量的統(tǒng)計分析（表1），模型組小鼠肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)量為（45.67±6.89）個，顯著高于正常組（P<0.01），表明乳腺癌血行轉(zhuǎn)移模型建立成功。三七根組小鼠肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)量為（18.33±4.56）個，花總皂苷組小鼠肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)量為（22.50±5.21）個，與模型組相比，兩組小鼠肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)量均顯著減少（P<0.01），且三七根組的抑制效果略優(yōu)于花總皂苷組，但兩組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。[此處插入表1：各組小鼠肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)量統(tǒng)計（[此處插入表1：各組小鼠肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)量統(tǒng)計（x±s，個），包括正常組、模型組、三七根組、花總皂苷組的數(shù)據(jù)]對小鼠腫瘤體積和重量進(jìn)行測量，結(jié)果（表2）表明，模型組小鼠腫瘤體積為（1.86±0.25）cm3，腫瘤重量為（1.54±0.21）g，顯著大于正常組（P<0.01）。給予三七根及花總皂苷干預(yù)后，三七根組小鼠腫瘤體積為（0.89±0.18）cm3，腫瘤重量為（0.76±0.15）g；花總皂苷組小鼠腫瘤體積為（1.05±0.20）cm3，腫瘤重量為（0.92±0.18）g，兩組小鼠腫瘤體積和重量均顯著小于模型組（P<0.01），且三七根組在抑制腫瘤體積和重量方面的效果相對更優(yōu)，但與花總皂苷組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。[此處插入表2：各組小鼠腫瘤體積和重量統(tǒng)計（[此處插入表2：各組小鼠腫瘤體積和重量統(tǒng)計（x±s，腫瘤體積：cm3；腫瘤重量：g），包括正常組、模型組、三七根組、花總皂苷組的數(shù)據(jù)]綜合以上結(jié)果，三七根及花總皂苷均能顯著減少乳腺癌血行轉(zhuǎn)移小鼠肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)量，抑制腫瘤體積和重量的增長，對乳腺癌血行轉(zhuǎn)移具有明顯的干預(yù)效果。在本實驗條件下，三七根總皂苷在抑制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移方面的效果相對更突出，但兩種總皂苷之間的差異尚不顯著，可能與實驗樣本量、給藥劑量和時間等因素有關(guān)。5.2三七根及花總皂苷對血管內(nèi)皮相關(guān)因子的影響通過蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblotting）技術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)（圖1），正常組小鼠肺組織和腫瘤組織中VEGF、MMP-9蛋白表達(dá)水平較低；模型組小鼠VEGF、MMP-9蛋白表達(dá)水平顯著升高，與正常組相比差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。給予三七根及花總皂苷干預(yù)后，三七根組和花總皂苷組小鼠VEGF、MMP-9蛋白表達(dá)水平均明顯降低，與模型組相比差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。三七根組小鼠VEGF蛋白表達(dá)水平降低更為明顯，其灰度比值為（0.45±0.08），顯著低于花總皂苷組的（0.62±0.10），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；而MMP-9蛋白表達(dá)水平在兩組之間雖有差異，但無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。[此處插入圖1：各組小鼠肺組織和腫瘤組織中VEGF、MMP-9蛋白表達(dá)的Westernblotting檢測結(jié)果圖，包括正常組、模型組、三七根組、花總皂苷組的條帶圖][此處插入圖1：各組小鼠肺組織和腫瘤組織中VEGF、MMP-9蛋白表達(dá)的Westernblotting檢測結(jié)果圖，包括正常組、模型組、三七根組、花總皂苷組的條帶圖]實時熒光定量PCR（qPCR）檢測結(jié)果（圖2）顯示，模型組小鼠肺組織和腫瘤組織中VEGF、MMP-9基因的mRNA表達(dá)水平顯著高于正常組（P<0.01）。三七根組和花總皂苷組小鼠VEGF、MMP-9基因的mRNA表達(dá)水平均顯著低于模型組（P<0.01）。其中，三七根組小鼠VEGF基因的mRNA相對表達(dá)量為（0.38±0.06），明顯低于花總皂苷組的（0.55±0.09），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；MMP-9基因的mRNA相對表達(dá)量在三七根組為（0.42±0.07），花總皂苷組為（0.50±0.08），兩組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。[此處插入圖2：各組小鼠肺組織和腫瘤組織中VEGF、MMP-9基因mRNA表達(dá)的qPCR檢測結(jié)果圖，包括正常組、模型組、三七根組、花總皂苷組的數(shù)據(jù)柱形圖][此處插入圖2：各組小鼠肺組織和腫瘤組織中VEGF、MMP-9基因mRNA表達(dá)的qPCR檢測結(jié)果圖，包括正常組、模型組、三七根組、花總皂苷組的數(shù)據(jù)柱形圖]免疫組織化學(xué)染色結(jié)果（圖3）表明，正常組小鼠肺組織中VEGF、MMP-9陽性表達(dá)細(xì)胞較少；模型組小鼠肺組織中VEGF、MMP-9陽性表達(dá)細(xì)胞大量增多，染色強(qiáng)度明顯增強(qiáng)；三七根組和花總皂苷組小鼠肺組織中VEGF、MMP-9陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)量顯著減少，染色強(qiáng)度減弱。通過半定量分析，模型組VEGF、MMP-9陽性表達(dá)評分分別為（3.56±0.58）分和（3.21±0.52）分，顯著高于正常組（P<0.01）。三七根組VEGF陽性表達(dá)評分為（1.50±0.35）分，花總皂苷組為（2.05±0.42）分，兩組與模型組相比差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），且三七根組顯著低于花總皂苷組（P<0.05）；MMP-9陽性表達(dá)評分在三七根組為（1.83±0.40）分，花總皂苷組為（2.20±0.45）分，與模型組相比差異顯著（P<0.01），但兩組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。[此處插入圖3：各組小鼠肺組織中VEGF、MMP-9免疫組織化學(xué)染色結(jié)果圖（×200），包括正常組、模型組、三七根組、花總皂苷組的染色圖片][此處插入圖3：各組小鼠肺組織中VEGF、MMP-9免疫組織化學(xué)染色結(jié)果圖（×200），包括正常組、模型組、三七根組、花總皂苷組的染色圖片]綜合以上三種檢測方法的結(jié)果，三七根及花總皂苷均能顯著降低乳腺癌血行轉(zhuǎn)移小鼠肺組織和腫瘤組織中VEGF、MMP-9等血管內(nèi)皮相關(guān)因子的表達(dá)水平，抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的活化和腫瘤血管生成，從而發(fā)揮抑制乳腺癌血行轉(zhuǎn)移的作用。在降低VEGF表達(dá)方面，三七根總皂苷的效果相對更為顯著，這可能與其獨(dú)特的化學(xué)成分和作用機(jī)制有關(guān)，具體差異原因還需進(jìn)一步深入研究。5.3相關(guān)性分析為進(jìn)一步探究三七根及花總皂苷劑量、血管內(nèi)皮相關(guān)因子表達(dá)與血行轉(zhuǎn)移程度之間的內(nèi)在聯(lián)系，采用Pearson相關(guān)分析方法對三者進(jìn)行深入分析。分析結(jié)果表明，三七根及花總皂苷劑