間充質(zhì)干細(xì)胞衍生的凋亡小體在糖尿病創(chuàng)面治療中的研究進(jìn)展2025隨著全球糖尿病發(fā)病率不斷上升，2型糖尿病已成為嚴(yán)重威脅人類生命健康的重大慢性疾病。研究顯示，約19%~34%的糖尿病患者在其一生中會患者截肢甚至危及生命[1]。傳統(tǒng)糖尿病創(chuàng)面治療主要集中于改善下肢開發(fā)針對糖尿病創(chuàng)面發(fā)病機(jī)制的創(chuàng)新療法具細(xì)胞(mesenchymalstemcells,MSC)是一類具有多向分化潛能和免疫調(diào)節(jié)能力的成體干細(xì)胞，其來源的細(xì)胞外囊泡(extrEV)在維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)和促進(jìn)組織修復(fù)方面同樣展現(xiàn)出重要作用[2]。EV主要可分為三大亞型：外泌體、微囊泡和凋亡小體(apoptoticbodies,AB),AB是由細(xì)胞凋亡過程產(chǎn)生的具有膜結(jié)構(gòu)的細(xì)胞碎片，主要由細(xì)胞器、染色質(zhì)殘余物、細(xì)胞質(zhì)部分、降解蛋白以及片段化或完整的DNA組成[3,4]。已有研究顯示，AB在癌癥、免疫疾病、感染和神經(jīng)退行性疾病中的診斷和治療具有很大潛力，但在糖尿病創(chuàng)而緩解炎癥反應(yīng)[5,6,7],并且促進(jìn)組織再生。相較于輸注MSC,AB具有較低的免疫原性與較高的生產(chǎn)效率，更適合臨床應(yīng)用[3,8]。本文旨在綜述MSC及其衍生的AB在糖尿病創(chuàng)面治療中的研究進(jìn)展，為糖尿糖尿病創(chuàng)面，尤其是糖尿病足潰瘍，通常因高素[9],由于調(diào)控中性粒細(xì)胞流入及炎癥反應(yīng)的機(jī)制受到破壞，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)持續(xù)且過度[10,11]。此外，糖尿病傷口愈合困難還與血管生成失調(diào)及氧化應(yīng)激等多種生物學(xué)機(jī)制有關(guān)[12]。MSC作為一種多能性干細(xì)胞，已被廣泛應(yīng)用于糖尿病創(chuàng)面治療中。基礎(chǔ)研究表明，MSC通過分泌多種生長因子和細(xì)胞因子，促進(jìn)血管生成、減輕炎癥反應(yīng)，并加速創(chuàng)面修復(fù)[13]。已有臨床試驗(yàn)證明，MSC通過局部和靜脈給藥緩解慢性肢體缺血癥狀，并促進(jìn)糖尿病足潰瘍傷口愈合[14,15]。一項(xiàng)隨機(jī)對照試驗(yàn)將28例糖尿病足病患者隨機(jī)分為A組和B組，結(jié)果顯示，A組潰瘍傷口面積縮小66%,B組縮小71%,提示胎盤MSC聯(lián)合富血小板血漿可有效促進(jìn)糖尿病足病創(chuàng)面愈合[16]。在國內(nèi)，另一項(xiàng)研究采用自體骨髓MSC移植方法治療69例糖尿病足患者，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，氧分壓和皮膚溫度升高，表明MSC可在一定程度上改善糖尿病足臨床癥狀[17]。以上研究均提示，MSC能有效促進(jìn)糖尿病足創(chuàng)面愈合。然而，MSC治療有明確的局限性：包括干細(xì)胞治療的倫理爭議、異體移植引發(fā)的免疫排斥反應(yīng)、發(fā)生非預(yù)期的分化、輸注后快因此在治療過程中減少了細(xì)胞移植的毒性和免疫排斥的風(fēng)險[20]。近年來，關(guān)于EV的研究主要集中在外泌體，近期的一項(xiàng)研究顯示，脂肪來源MSC的外泌體制備的水凝膠可以加速糖尿病傷口愈合和皮膚再生[21],然而目前外泌體提取與純化較為復(fù)雜，缺乏成外泌體存在技術(shù)瓶頸，難以滿足臨床應(yīng)用需求[22]。AB作為EV的疫調(diào)節(jié)、組織再生、炎癥反應(yīng)調(diào)節(jié)和藥物遞療潛力[6]。因此下文將重點(diǎn)介紹AB的生物學(xué)特點(diǎn)及MSC來源的ABAB是由細(xì)胞凋亡過程中產(chǎn)生的，凋亡細(xì)胞的解體可分為三個主要的形態(tài)學(xué)過程：質(zhì)膜起泡、形成凋亡膜突起、最終分解范圍通常為50~5000nm[3],主要由細(xì)胞器、微核、染色質(zhì)殘余物、細(xì)胞質(zhì)部分、降解蛋白以及片段化或完整的DNA組成[24]。與其他EVEV不同；第三，AB的細(xì)胞外釋放方式和排出機(jī)制也與其他EV有所不同[26]。這些特點(diǎn)使得AB在生物學(xué)功能和治療潛力上具有一定的獨(dú)特AB可來源于不同類型的細(xì)胞[6]、不同的凋亡途徑[27]、不同的細(xì)胞刺激[281,其不同的生物學(xué)特性與其源細(xì)胞的類型有一定相關(guān)性[29],的轉(zhuǎn)錄組具有高度相似性[30],能夠反映親本細(xì)胞的基因表達(dá)特征。此促進(jìn)受體細(xì)胞的增殖[31],進(jìn)一步提示AB在細(xì)胞增生與修復(fù)中的潛在如有研究發(fā)現(xiàn)，膠質(zhì)母細(xì)胞源性AB可以促進(jìn)腫瘤生長[32],提示AB通[34,35],AB內(nèi)容物的轉(zhuǎn)移、循環(huán)甚至再利用可以影響吞噬細(xì)胞的功多種功能[6],進(jìn)一步揭示了其在糖尿病創(chuàng)面修復(fù)中的潛在應(yīng)用價值。與MSC相比，AB具有高穩(wěn)定性、易于儲存、無需增殖等優(yōu)勢[37],MSC(umbilicalcordmese來源AB(UCMSC-AB)和UCMSC來源外泌體(UCMSC-E發(fā)巨噬細(xì)胞向M2表型極化，促進(jìn)皮膚傷口愈合[39]。除了具有再生潛源性的AB比外泌體能更有效地治療小鼠血友病[7]。也有研究顯示，骨髓MSC來源的AB中的遺傳促分化因子導(dǎo)致缺失的Fas凋亡信號在多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞表面表達(dá)。由此推斷，AB可有效結(jié)合Fas配體誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡[40]。與此同時，通過預(yù)處理MSC,可以改變MSC-AB的性質(zhì)理、引入基因修飾[41];也可以通過工程化修飾AB,使其作為藥物運(yùn)載系統(tǒng)從而達(dá)到更高效的治療目的[42]。目前已經(jīng)有許多基礎(chǔ)研究證實(shí)了干細(xì)胞來源的AB在創(chuàng)面愈合[33]、骨組織修復(fù)[43]、心血管疾病[34]治療中的巨大潛力。綜上所述，AB有潛力成為比MSC本身更著至關(guān)重要的作用[44]。一般認(rèn)為巨噬細(xì)胞可分為促進(jìn)炎癥發(fā)生的M1細(xì)胞介素(interleukin,IL)-1β等促炎因子，參與炎癥的起始和發(fā)展；而M2型巨噬細(xì)胞可分泌IL-10、IL-4等抑炎因子，具有緩解炎癥、促進(jìn)組織修復(fù)的作用[45]。近年來研究表明，AB可以通過磷脂酰絲氨酸易位與膜聯(lián)蛋白V結(jié)合形成的特定分子信號被巨噬細(xì)胞等吞噬細(xì)胞更快識別[35],從而調(diào)控細(xì)胞再生和組織修復(fù)[27]。在一項(xiàng)骨髓MSC源性AB在小鼠皮膚傷口愈合的研究中，檢測出AB能夠通過吞噬作用被巨噬細(xì)胞攝取，以濃度和時間依賴性的方式促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M2表型的極化，增加巨噬細(xì)胞向M2極化過程中的兩個關(guān)鍵因子精氨酸酶-1和轉(zhuǎn)化生長因細(xì)胞的遷移和增殖，加速傷口愈合[39]。有研究發(fā)現(xiàn)，MSC來源的AB通過腺苷酸活化蛋白激酶/沉默信息調(diào)節(jié)因子1/核因子kB通路可以降低促炎巨噬細(xì)胞環(huán)氧合酶-2的表達(dá)，巨噬細(xì)胞腫瘤壞死因子-a及IL-6的分因ASS1上調(diào)，從而促使極化的巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榭寡妆硇汀y序分析發(fā)現(xiàn)，miR-20a-5p的存在可能是這一現(xiàn)象的潛在原因[33]。此外，關(guān)于EV相關(guān)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)外源性EV可以通過激活皮膚MSC中的Wnt信號通路中的β-catenin通路來促進(jìn)傷口愈合和頭發(fā)生長[47],這些研究為AB在糖尿病創(chuàng)面治療中的應(yīng)用提供了新的視角，揭示了其在調(diào)以通過運(yùn)輸miR-155等調(diào)控因子，激活傷口部位的細(xì)胞周期，促進(jìn)成纖維細(xì)胞和角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖[27,39],磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶來源的EV可以增強(qiáng)表皮中的細(xì)胞活力和遷移能力，并促進(jìn)真皮中的細(xì)胞外基質(zhì)重塑[48]。此外，AB還能通過減少細(xì)胞凋亡，延長關(guān)鍵細(xì)胞的存活時間[36]。一項(xiàng)關(guān)于MSC-AB對血管生成和心肌梗死后內(nèi)皮細(xì)胞功能影響的實(shí)驗(yàn)研而抗血管生成基因THBS1和VASH1下調(diào)，表明AB通過調(diào)控血管生成血管內(nèi)皮生長因子等促血管生成因子，激活內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移能力，直接促進(jìn)毛細(xì)血管網(wǎng)絡(luò)的形成[49]。此外，在糖尿病創(chuàng)面中缺氧是影響細(xì)胞的增殖和遷移[50]。原因。有研究利用小鼠脂肪來源干細(xì)胞構(gòu)建三維AB,結(jié)果表積累，并發(fā)現(xiàn)這些AB能夠有效減少皮瓣組織中的ROS積累，且通過細(xì)胞球體等三維結(jié)構(gòu)培養(yǎng)的3D培養(yǎng)組的ROS水平顯著低于傳統(tǒng)的二維平面培養(yǎng)的2D培養(yǎng)組[50]。盡管AB的具體作用機(jī)制尚未完全明確，但目前已有研究表明，MSC-Exo可以通過減少ROS生成、DNA損傷、異化能力，從而減輕細(xì)胞和組織的氧化損傷反應(yīng)[51]。這一機(jī)制對于糖尿病患者的創(chuàng)面愈合具有特別重要的意義，因?yàn)樗麄鸞48]。因此，AB的抗氧化作用可能在糖尿病創(chuàng)面愈合過程中發(fā)揮關(guān)和藥物，還能將這些分子準(zhǔn)確遞送至目標(biāo)細(xì)用[24]。近期有一項(xiàng)研究通過創(chuàng)新構(gòu)建裝載細(xì)胞合成AB的緩釋生物合成水凝膠微球系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)AB的持續(xù)活性，更有效地促進(jìn)了糖尿病創(chuàng)面愈合[33]。另一項(xiàng)研究證明，AB能夠攜帶miRNA-126,通過調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和分化，促進(jìn)血管生成和組織修復(fù)[52]。此外，AB在低免疫原性這些載藥AB保留了親代細(xì)胞的相關(guān)生物學(xué)特性，表現(xiàn)出優(yōu)異的靶向病灶展現(xiàn)了治療潛力。例如研究表明，工程化的AB可以通過負(fù)載抗腫瘤藥物有效抑制腫瘤生長，并增加抗炎細(xì)胞的數(shù)量來增強(qiáng)其治療效果[53]。但對于AB所展現(xiàn)的細(xì)胞間通訊功能，其機(jī)制尚不完全明確，未來需進(jìn)一步研究AB如何裝配、運(yùn)輸和在受體細(xì)胞內(nèi)如何釋放生物分子，從而為實(shí)現(xiàn)AB作為一種新的非細(xì)胞制劑參與臨床的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)[54]。目前，將使用方式、劑量和生物分布的研究還不夠深度的AB仍是一個難題[55]。近年來，對于AB在糖尿