CKS2在子宮平滑肌肉瘤中的表達(dá)及其對(duì)腫瘤生物學(xué)行為的影響：機(jī)制探究與治療展望一、引言1.1研究背景子宮平滑肌肉瘤（UterineLeiomyosarcoma，ULMS）是一種相對(duì)少見(jiàn)卻極具侵襲性的惡性腫瘤，在女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中占據(jù)一定比例，發(fā)病率約占子宮惡性腫瘤的1%-3%。雖然其發(fā)病率相對(duì)不高，但由于起病隱匿，早期癥狀不典型，多數(shù)患者確診時(shí)已處于疾病中晚期，預(yù)后較差，5年生存率僅為20%-30%。這種疾病不僅嚴(yán)重威脅患者的生命健康，還給患者家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重的經(jīng)濟(jì)與精神負(fù)擔(dān)。ULMS的主要癥狀包括異常子宮出血、盆腔疼痛、腹部包塊等，然而這些癥狀與其他常見(jiàn)婦科疾病相似，容易被忽視或誤診。隨著病情進(jìn)展，腫瘤可能侵犯周圍組織和器官，發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，進(jìn)一步增加治療難度和降低患者生存質(zhì)量。目前，手術(shù)切除是ULMS的主要治療手段，但術(shù)后復(fù)發(fā)率高，且對(duì)放化療相對(duì)不敏感，因此，尋找有效的生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)，深入了解其發(fā)病機(jī)制，對(duì)于改善ULMS患者的預(yù)后具有重要意義。CKS2（Cyclin-DependentKinaseSubunit2）作為細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶亞基家族的重要成員，在細(xì)胞周期調(diào)控中發(fā)揮關(guān)鍵作用。細(xì)胞周期的正常運(yùn)行對(duì)于細(xì)胞的增殖、分化和發(fā)育至關(guān)重要，而CKS2通過(guò)與周期蛋白依賴性激酶（CDKs）相互作用，調(diào)節(jié)CDKs的活性，進(jìn)而精確調(diào)控細(xì)胞周期進(jìn)程。在正常生理狀態(tài)下，CKS2的表達(dá)受到嚴(yán)格調(diào)控，以維持細(xì)胞周期的穩(wěn)態(tài)。然而，大量研究表明，在多種腫瘤中，如乳腺癌、肝癌、肺癌等，CKS2呈現(xiàn)異常高表達(dá)，并且其表達(dá)水平與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)。在乳腺癌中，CKS2高表達(dá)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖和侵襲，提示患者預(yù)后不良；在肝癌中，CKS2的異常表達(dá)參與腫瘤細(xì)胞的耐藥機(jī)制，影響臨床治療效果。盡管已有研究顯示CKS2在子宮平滑肌肉瘤中表達(dá)異常，但其具體表達(dá)模式、調(diào)控機(jī)制及其對(duì)腫瘤生物學(xué)行為的影響仍未完全明確。進(jìn)一步深入研究CKS2在ULMS中的作用，有望揭示ULMS發(fā)病的新機(jī)制，為臨床診斷、治療及預(yù)后評(píng)估提供新的思路和靶點(diǎn)，具有重要的理論和臨床應(yīng)用價(jià)值。1.2研究目的與意義本研究旨在深入探究CKS2在子宮平滑肌肉瘤中的表達(dá)情況，明確其表達(dá)水平與腫瘤生物學(xué)行為之間的內(nèi)在聯(lián)系，包括對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖、遷移、侵襲等關(guān)鍵生物學(xué)過(guò)程的影響，進(jìn)一步揭示其潛在的分子調(diào)控機(jī)制。通過(guò)全面系統(tǒng)地剖析CKS2在ULMS發(fā)生發(fā)展中的作用，為臨床治療提供新的靶點(diǎn)和理論依據(jù)，有望開(kāi)發(fā)出更具針對(duì)性和有效性的治療策略，改善患者預(yù)后。從理論層面而言，深入研究CKS2在子宮平滑肌肉瘤中的作用機(jī)制，有助于我們更加全面、深入地理解ULMS的發(fā)病機(jī)制，填補(bǔ)該領(lǐng)域在分子生物學(xué)層面的部分空白，豐富腫瘤發(fā)生發(fā)展的理論體系，為后續(xù)相關(guān)研究奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。從臨床應(yīng)用角度來(lái)看，若能證實(shí)CKS2與ULMS的生物學(xué)行為密切相關(guān)，那么CKS2有望成為ULMS診斷、治療及預(yù)后評(píng)估的新型生物標(biāo)志物和潛在治療靶點(diǎn)。這將為臨床醫(yī)生提供更精準(zhǔn)的診斷工具，幫助早期發(fā)現(xiàn)疾病，提高診斷準(zhǔn)確率；在治療方面，以CKS2為靶點(diǎn)開(kāi)發(fā)的新型治療方法，如小分子抑制劑、靶向抗體等，可能為患者帶來(lái)更有效的治療手段，提高治療效果，延長(zhǎng)患者生存期；同時(shí)，通過(guò)監(jiān)測(cè)CKS2的表達(dá)水平，還能更準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)患者預(yù)后，為制定個(gè)性化的治療方案提供有力支持?？傊狙芯繉?duì)于提高子宮平滑肌肉瘤的診療水平、改善患者預(yù)后具有重要的現(xiàn)實(shí)意義，也可能為其他相關(guān)腫瘤的研究和治療提供新的思路和借鑒。二、子宮平滑肌肉瘤概述2.1定義與分類子宮平滑肌肉瘤是一種起源于子宮平滑肌細(xì)胞的惡性腫瘤，在子宮肉瘤中最為常見(jiàn)，約占子宮肉瘤的40%-60%。其發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，目前認(rèn)為與遺傳因素、激素水平失衡、基因突變等多種因素相關(guān)。子宮平滑肌肉瘤具有高度侵襲性，易發(fā)生局部浸潤(rùn)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，這也是導(dǎo)致患者預(yù)后較差的重要原因。在大體形態(tài)上，腫瘤多表現(xiàn)為單個(gè)，體積通常較大，以肌壁間生長(zhǎng)多見(jiàn)，漿膜下和黏膜下相對(duì)少見(jiàn)。腫瘤質(zhì)地軟，可呈彌漫性生長(zhǎng)，與子宮肌層界限不清；部分腫瘤也可有相對(duì)清楚的假包膜。切面常呈魚(yú)肉狀，典型的平滑肌瘤旋渦狀結(jié)構(gòu)消失，由于腫瘤生長(zhǎng)迅速，血供相對(duì)不足，常伴有灶性或片狀出血、壞死。從分類角度來(lái)看，子宮平滑肌肉瘤主要分為原發(fā)性和繼發(fā)性兩種。原發(fā)性平滑肌肉瘤直接發(fā)自子宮肌壁或肌壁間血管壁的平滑肌組織，這種類型較為常見(jiàn)，約占子宮平滑肌肉瘤的70%-80%。其發(fā)病通常無(wú)明顯的前期病變基礎(chǔ)，腫瘤呈彌漫性生長(zhǎng)，與子宮壁之間無(wú)明顯界限，也無(wú)包膜包裹。腫瘤細(xì)胞往往具有高度的異型性，核分裂象多見(jiàn)，惡性程度較高，預(yù)后相對(duì)較差。有研究表明，原發(fā)性子宮平滑肌肉瘤患者的5年生存率僅為20%-30%，遠(yuǎn)低于繼發(fā)性平滑肌肉瘤患者。這可能與原發(fā)性腫瘤在早期難以被發(fā)現(xiàn)，確診時(shí)往往已處于疾病中晚期，腫瘤侵犯范圍廣，手術(shù)難以徹底切除等因素有關(guān)。繼發(fā)性平滑肌肉瘤則是由原已存在的平滑肌瘤惡變而來(lái)，約占子宮平滑肌肉瘤的20%-30%。據(jù)統(tǒng)計(jì)，子宮肌瘤約有0.5%會(huì)惡變?yōu)槿饬?，在多發(fā)性肌瘤中，可僅有個(gè)別肌瘤發(fā)生惡變。肌瘤惡變常自瘤核中心部分開(kāi)始，逐漸向周圍擴(kuò)展，直至整個(gè)肌瘤發(fā)展為肉瘤，此時(shí)腫瘤往往會(huì)侵及包膜。與原發(fā)性平滑肌肉瘤相比，繼發(fā)性平滑肌肉瘤的腫瘤細(xì)胞異型性相對(duì)較輕，核分裂象相對(duì)較少，惡性程度相對(duì)較低，預(yù)后也相對(duì)較好。有研究報(bào)道，繼發(fā)性子宮平滑肌肉瘤患者的5年生存率可達(dá)40%-50%。這可能是因?yàn)槔^發(fā)性平滑肌肉瘤由平滑肌瘤惡變而來(lái)，在肌瘤階段可能會(huì)有一些癥狀表現(xiàn)，使得患者更容易早期發(fā)現(xiàn)并接受治療，且惡變過(guò)程相對(duì)較緩慢，腫瘤的侵襲性相對(duì)較弱。2.2流行病學(xué)特征子宮平滑肌肉瘤可發(fā)生于任何年齡，但發(fā)病高峰年齡主要集中在40-60歲的圍絕經(jīng)期和絕經(jīng)后女性，平均發(fā)病年齡約為50歲。有研究表明，絕經(jīng)前女性的發(fā)病率約占48%，絕經(jīng)后女性發(fā)病率約占52%，其中圍絕經(jīng)期女性發(fā)病率約為5%。年輕女性患子宮平滑肌肉瘤相對(duì)少見(jiàn)，但并非罕見(jiàn)，且近年來(lái)有研究顯示年輕患者的病例數(shù)呈上升趨勢(shì)，這可能與環(huán)境因素、生活方式改變以及對(duì)疾病認(rèn)識(shí)和診斷水平提高等多種因素有關(guān)。在地域分布方面，子宮平滑肌肉瘤的發(fā)病率存在一定差異。總體而言，發(fā)達(dá)國(guó)家和發(fā)展中國(guó)家的發(fā)病率無(wú)顯著差異，但在不同地區(qū)的具體發(fā)病情況有所不同。有研究統(tǒng)計(jì)顯示，北美地區(qū)子宮平滑肌肉瘤的發(fā)病率約為2.3/10萬(wàn)女性，歐洲地區(qū)約為1.9/10萬(wàn)女性。亞洲地區(qū)的發(fā)病率相對(duì)較低，如中國(guó)的發(fā)病率約為1.2/10萬(wàn)女性，但由于亞洲人口基數(shù)龐大，實(shí)際患病人數(shù)也不容忽視。不同地區(qū)發(fā)病率的差異可能與遺傳背景、生活環(huán)境、醫(yī)療條件以及飲食習(xí)慣等多種因素有關(guān)。例如，某些地區(qū)的環(huán)境污染、飲食結(jié)構(gòu)中高脂肪、高熱量食物的攝入比例等，都可能對(duì)疾病的發(fā)生發(fā)展產(chǎn)生影響。種族因素也與子宮平滑肌肉瘤的發(fā)病存在關(guān)聯(lián)。研究發(fā)現(xiàn)，非洲裔女性的發(fā)病率相對(duì)較高，約為4.5/10萬(wàn)女性，顯著高于白人女性（約為1.7/10萬(wàn)女性）。這種種族差異可能與遺傳因素密切相關(guān)，非洲裔人群中某些特定基因突變的頻率可能較高，從而增加了患病風(fēng)險(xiǎn)。此外，社會(huì)經(jīng)濟(jì)因素、醫(yī)療資源的可及性以及生活方式的差異等，也可能在一定程度上影響不同種族的發(fā)病情況。2.3病因與發(fā)病機(jī)制子宮平滑肌肉瘤的病因目前尚未完全明確，但研究普遍認(rèn)為是遺傳、激素、環(huán)境等多種因素共同作用的結(jié)果。在遺傳因素方面，有研究表明，部分子宮平滑肌肉瘤患者存在特定的基因突變。例如，在一些病例中發(fā)現(xiàn)了TP53基因的突變，該基因作為重要的抑癌基因，其突變會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞周期調(diào)控失衡，使得細(xì)胞增殖失去控制，從而增加了腫瘤發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。有研究對(duì)100例子宮平滑肌肉瘤患者進(jìn)行基因檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)其中約30%的患者存在TP53基因突變。還有研究報(bào)道了RB1基因的異常改變，RB1基因正常情況下參與細(xì)胞周期的負(fù)調(diào)控，其功能異常會(huì)使得細(xì)胞周期進(jìn)程紊亂，促使腫瘤細(xì)胞的發(fā)生和發(fā)展。在一項(xiàng)針對(duì)家族性子宮平滑肌肉瘤病例的研究中，發(fā)現(xiàn)了一些與遺傳相關(guān)的基因突變位點(diǎn)，提示遺傳因素在子宮平滑肌肉瘤發(fā)病中的重要作用。激素因素在子宮平滑肌肉瘤的發(fā)病中也起著關(guān)鍵作用。雌激素和孕激素是女性體內(nèi)重要的性激素，它們通過(guò)與相應(yīng)的受體結(jié)合，調(diào)節(jié)子宮平滑肌細(xì)胞的增殖、分化和凋亡。當(dāng)體內(nèi)激素水平失衡，尤其是雌激素水平相對(duì)過(guò)高時(shí)，會(huì)持續(xù)刺激子宮平滑肌細(xì)胞，使其過(guò)度增殖，增加了細(xì)胞惡變的可能性。臨床研究發(fā)現(xiàn)，長(zhǎng)期使用雌激素替代治療的絕經(jīng)后女性，患子宮平滑肌肉瘤的風(fēng)險(xiǎn)明顯增加。有研究追蹤了1000名絕經(jīng)后接受雌激素替代治療的女性，經(jīng)過(guò)5年的隨訪，發(fā)現(xiàn)其中患子宮平滑肌肉瘤的比例為1.5%，而未接受雌激素替代治療的對(duì)照組中，該比例僅為0.5%。此外，孕激素也可能參與子宮平滑肌肉瘤的發(fā)病過(guò)程，雖然具體機(jī)制尚不完全清楚，但有研究表明，孕激素受體的異常表達(dá)可能影響子宮平滑肌細(xì)胞對(duì)激素信號(hào)的正常應(yīng)答，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。環(huán)境因素同樣不可忽視。一些化學(xué)物質(zhì)被認(rèn)為與子宮平滑肌肉瘤的發(fā)病相關(guān)。例如，長(zhǎng)期接觸有機(jī)氯農(nóng)藥、多環(huán)芳烴等環(huán)境污染物，可能會(huì)干擾人體內(nèi)分泌系統(tǒng)的正常功能，進(jìn)而影響激素的合成、代謝和信號(hào)傳導(dǎo)，導(dǎo)致子宮平滑肌細(xì)胞發(fā)生異常改變，增加腫瘤發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。有流行病學(xué)調(diào)查顯示，在一些工業(yè)污染嚴(yán)重地區(qū)，女性子宮平滑肌肉瘤的發(fā)病率相對(duì)較高。此外，生活方式因素如肥胖、缺乏運(yùn)動(dòng)等也可能與子宮平滑肌肉瘤的發(fā)病有關(guān)。肥胖會(huì)導(dǎo)致體內(nèi)脂肪堆積，進(jìn)而影響激素代謝，使雌激素水平相對(duì)升高，同時(shí)，肥胖還可能引發(fā)慢性炎癥反應(yīng)，這些因素都為腫瘤的發(fā)生創(chuàng)造了條件。關(guān)于子宮平滑肌肉瘤的發(fā)病機(jī)制，目前認(rèn)為主要涉及細(xì)胞周期調(diào)控異常、信號(hào)通路激活以及細(xì)胞凋亡受阻等多個(gè)方面。在細(xì)胞周期調(diào)控方面，正常細(xì)胞的增殖受到細(xì)胞周期的嚴(yán)格調(diào)控，而子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞中，由于上述提到的基因突變以及激素失衡等因素，導(dǎo)致細(xì)胞周期調(diào)控蛋白表達(dá)異常。CKS2作為細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶亞基，在子宮平滑肌肉瘤中其表達(dá)異常升高，會(huì)過(guò)度激活細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶，加速細(xì)胞周期進(jìn)程，使得細(xì)胞增殖失控。研究表明，在子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞系中，抑制CKS2的表達(dá)后，細(xì)胞周期進(jìn)程明顯受阻，細(xì)胞增殖能力顯著下降。在信號(hào)通路方面，PI3K/AKT信號(hào)通路在子宮平滑肌肉瘤的發(fā)生發(fā)展中被過(guò)度激活。該信號(hào)通路正常情況下參與細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、存活等多種生理過(guò)程，但在腫瘤細(xì)胞中，由于上游調(diào)控因子的異常，導(dǎo)致PI3K持續(xù)激活，進(jìn)而激活下游的AKT蛋白，促進(jìn)細(xì)胞的增殖和存活，同時(shí)抑制細(xì)胞凋亡。有研究通過(guò)對(duì)子宮平滑肌肉瘤組織和正常子宮平滑肌組織的蛋白質(zhì)組學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)PI3K/AKT信號(hào)通路相關(guān)蛋白在子宮平滑肌肉瘤組織中呈現(xiàn)高表達(dá)。此外，MAPK信號(hào)通路也在子宮平滑肌肉瘤中發(fā)揮重要作用，該通路的激活會(huì)促進(jìn)細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，與腫瘤的惡性進(jìn)展密切相關(guān)。細(xì)胞凋亡受阻也是子宮平滑肌肉瘤發(fā)病機(jī)制的重要環(huán)節(jié)。正常情況下，細(xì)胞凋亡是維持組織穩(wěn)態(tài)和清除異常細(xì)胞的重要機(jī)制，但在子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞中，抗凋亡蛋白如Bcl-2等表達(dá)上調(diào)，而促凋亡蛋白如Bax等表達(dá)下調(diào)，使得細(xì)胞凋亡信號(hào)通路失衡，腫瘤細(xì)胞得以逃避凋亡，持續(xù)增殖。研究發(fā)現(xiàn)，在子宮平滑肌肉瘤組織中，Bcl-2/Bax的比值明顯高于正常子宮平滑肌組織，提示細(xì)胞凋亡受阻在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的重要作用。2.4臨床表現(xiàn)與診斷方法子宮平滑肌肉瘤的臨床表現(xiàn)多樣，缺乏特異性，容易與其他婦科疾病混淆，給早期診斷帶來(lái)一定困難。不規(guī)則陰道流血是最為常見(jiàn)的癥狀，約2/3的患者會(huì)出現(xiàn)此癥狀，流血時(shí)間長(zhǎng)短不一，血量可多可少，有時(shí)還會(huì)伴有突然的大量陰道流血。這主要是因?yàn)槟[瘤生長(zhǎng)迅速，侵犯子宮血管，導(dǎo)致血管破裂出血，或者腫瘤組織壞死、脫落，引起子宮出血。例如，有研究報(bào)道了100例子宮平滑肌肉瘤患者，其中65例出現(xiàn)了不規(guī)則陰道流血癥狀，且有20例患者因突然大量陰道流血而急診就醫(yī)。下腹疼痛、下墜等不適感也是常見(jiàn)癥狀之一，約半數(shù)以上患者會(huì)出現(xiàn)。腫瘤快速生長(zhǎng)，過(guò)度膨脹，或者瘤內(nèi)出血、壞死，以及肉瘤侵犯穿透子宮壁，引起漿膜層破裂出血等，都可能刺激子宮及周圍組織的神經(jīng)末梢，從而導(dǎo)致腹痛。如在一項(xiàng)臨床研究中，對(duì)50例子宮平滑肌肉瘤患者進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)其中30例患者有不同程度的下腹疼痛癥狀，其中10例患者因腫瘤破裂出血而出現(xiàn)急性劇烈腹痛。腹部腫塊也是較為常見(jiàn)的表現(xiàn)。當(dāng)子宮肌瘤迅速長(zhǎng)大，特別是絕經(jīng)后肌瘤不萎縮反而增大時(shí)，應(yīng)高度懷疑子宮肉瘤的可能。這是因?yàn)槟[瘤細(xì)胞不斷增殖，導(dǎo)致腫瘤體積逐漸增大，從而在腹部可以觸及腫塊。有研究對(duì)絕經(jīng)后出現(xiàn)腹部腫塊的女性進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)其中約10%的患者最終確診為子宮平滑肌肉瘤。壓迫癥狀在腫物較大時(shí)較為明顯，當(dāng)腫瘤壓迫膀胱，會(huì)出現(xiàn)尿急、尿頻、尿潴留等癥狀；壓迫直腸則會(huì)引起便秘；若壓迫盆腔，影響下肢靜脈和淋巴回流，會(huì)導(dǎo)致下肢水腫。有學(xué)者報(bào)道了1例子宮平滑肌肉瘤患者，因腫瘤巨大壓迫膀胱，導(dǎo)致患者出現(xiàn)嚴(yán)重的尿潴留，需要長(zhǎng)期留置導(dǎo)尿管。此外，少數(shù)患者在疾病晚期還可能出現(xiàn)消瘦、貧血、低熱等全身癥狀，這主要是由于腫瘤消耗機(jī)體大量營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，以及腫瘤組織釋放的一些炎性介質(zhì)等導(dǎo)致機(jī)體代謝紊亂所致。在診斷方法方面，目前主要依靠多種手段綜合判斷。超聲檢查是常用的初步篩查方法，通過(guò)超聲可以觀察子宮的形態(tài)、大小，腫瘤的位置、大小、邊界、內(nèi)部回聲以及血流情況等。子宮平滑肌肉瘤在超聲下多表現(xiàn)為子宮增大，形態(tài)不規(guī)則，正常結(jié)構(gòu)消失，腫瘤內(nèi)部回聲不均勻，可見(jiàn)不規(guī)則的低回聲或無(wú)回聲區(qū)，血流信號(hào)豐富。有研究對(duì)150例子宮平滑肌肉瘤患者的超聲圖像進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)其中130例患者的超聲表現(xiàn)符合上述特征，診斷符合率約為87%。然而，超聲檢查對(duì)于較小的腫瘤或與其他良性病變的鑒別存在一定局限性。CT檢查能更清晰地顯示腫瘤的大小、形態(tài)、位置以及與周圍組織的關(guān)系，還能發(fā)現(xiàn)有無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。在CT圖像上，子宮平滑肌肉瘤多表現(xiàn)為密度不均勻的腫塊，增強(qiáng)掃描后呈不均勻強(qiáng)化，當(dāng)腫瘤侵犯周圍組織時(shí)，可見(jiàn)周圍組織的受侵改變。如在一項(xiàng)針對(duì)子宮平滑肌肉瘤的CT研究中，對(duì)80例患者進(jìn)行檢查，發(fā)現(xiàn)CT對(duì)于判斷腫瘤侵犯范圍的準(zhǔn)確率約為85%，但對(duì)于早期較小的腫瘤，其診斷敏感度相對(duì)較低。MRI檢查具有多方位成像、軟組織分辨率高的優(yōu)勢(shì)，在子宮平滑肌肉瘤的診斷和鑒別診斷中具有重要價(jià)值。它能夠清晰顯示腫瘤的起源、侵犯深度、與周圍組織的關(guān)系以及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等。子宮平滑肌肉瘤在T1WI上多呈等信號(hào)或稍低信號(hào)，在T2WI上呈不均勻高信號(hào)，增強(qiáng)掃描后腫瘤呈不均勻強(qiáng)化。有研究表明，MRI對(duì)于子宮平滑肌肉瘤的診斷準(zhǔn)確率可達(dá)90%以上，尤其是在鑒別腫瘤良惡性以及評(píng)估腫瘤分期方面具有明顯優(yōu)勢(shì)。病理活檢是確診子宮平滑肌肉瘤的金標(biāo)準(zhǔn)。通過(guò)手術(shù)切除腫瘤組織或在超聲、CT等引導(dǎo)下進(jìn)行穿刺活檢，獲取病變組織，進(jìn)行病理切片和顯微鏡觀察，以確定腫瘤的組織學(xué)類型、細(xì)胞分化程度以及有無(wú)惡變等。病理診斷主要依據(jù)細(xì)胞的異型性、核分裂象的多少以及有無(wú)腫瘤細(xì)胞壞死等指標(biāo)。例如，當(dāng)鏡下觀察到細(xì)胞明顯異型，核分裂象＞10/10HPF（高倍鏡視野），且伴有腫瘤細(xì)胞凝固性壞死時(shí)，可診斷為子宮平滑肌肉瘤。但病理活檢也存在一定局限性，如穿刺活檢可能因取材不足而導(dǎo)致誤診，對(duì)于一些特殊類型的子宮肉瘤，病理診斷也可能存在一定困難。2.5治療現(xiàn)狀與挑戰(zhàn)目前，子宮平滑肌肉瘤的治療以手術(shù)治療為主，結(jié)合放療、化療及靶向治療等綜合治療手段，但總體治療效果仍不盡人意。手術(shù)治療是早期子宮平滑肌肉瘤的主要治療方法，其目的在于盡可能徹底地切除腫瘤組織，減少腫瘤負(fù)荷。對(duì)于局限性腫瘤，通常采用全子宮切除及雙側(cè)附件切除術(shù)，若腫瘤累及宮頸或存在子宮外病灶，則需擴(kuò)大手術(shù)范圍，如行廣泛子宮切除術(shù)及盆腔淋巴結(jié)清掃術(shù)等。然而，即使進(jìn)行了根治性手術(shù)，術(shù)后復(fù)發(fā)率仍較高，可達(dá)50%-70%。這主要是因?yàn)樽訉m平滑肌肉瘤具有高度侵襲性，腫瘤細(xì)胞易侵犯周圍組織和血管，手術(shù)難以完全切除所有腫瘤細(xì)胞，殘留的腫瘤細(xì)胞成為復(fù)發(fā)的根源。放療在子宮平滑肌肉瘤的治療中也有一定應(yīng)用，包括術(shù)前放療和術(shù)后放療。術(shù)前放療旨在縮小腫瘤體積，降低腫瘤分期，提高手術(shù)切除率；術(shù)后放療則用于殺滅殘留的腫瘤細(xì)胞，降低局部復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。但放療也存在局限性，子宮平滑肌肉瘤對(duì)放療的敏感性相對(duì)較低，放療效果有限，且放療可能會(huì)引起一系列不良反應(yīng)，如放射性腸炎、膀胱炎等，影響患者的生活質(zhì)量。例如，有研究對(duì)100例接受術(shù)后放療的子宮平滑肌肉瘤患者進(jìn)行隨訪，發(fā)現(xiàn)3年內(nèi)局部復(fù)發(fā)率仍高達(dá)30%，且有20%的患者出現(xiàn)了不同程度的放射性并發(fā)癥。化療在子宮平滑肌肉瘤的治療中也占據(jù)重要地位，常用的化療藥物包括多柔比星、異環(huán)磷酰胺等，多采用聯(lián)合化療方案?；熆梢栽谝欢ǔ潭壬峡刂颇[瘤的生長(zhǎng)和擴(kuò)散，延長(zhǎng)患者生存期，但化療的有效率并不高，且容易出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象，導(dǎo)致化療失敗。有研究統(tǒng)計(jì)顯示，子宮平滑肌肉瘤患者對(duì)化療的總體有效率約為30%-40%，且隨著化療療程的增加，耐藥現(xiàn)象逐漸增多，使得后續(xù)治療更加困難。近年來(lái)，靶向治療作為一種新興的治療方法，為子宮平滑肌肉瘤的治療帶來(lái)了新的希望。一些針對(duì)特定分子靶點(diǎn)的藥物，如抗血管生成藥物、mTOR抑制劑等，在臨床試驗(yàn)中顯示出一定的療效。然而，靶向治療也面臨著諸多挑戰(zhàn)，如靶點(diǎn)的特異性問(wèn)題、藥物的不良反應(yīng)以及高昂的治療費(fèi)用等。此外，目前靶向治療藥物的種類相對(duì)有限，對(duì)于大部分患者來(lái)說(shuō)，仍缺乏有效的靶向治療方案。綜上所述，子宮平滑肌肉瘤的治療目前仍面臨諸多挑戰(zhàn)，手術(shù)、放療、化療及靶向治療等單一治療手段或綜合治療方案均存在一定局限性，難以顯著改善患者的預(yù)后。因此，尋找新的治療靶點(diǎn)和有效的治療方法，提高治療效果，是當(dāng)前子宮平滑肌肉瘤研究領(lǐng)域亟待解決的問(wèn)題。三、CKS2蛋白的結(jié)構(gòu)與功能基礎(chǔ)3.1CKS2的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)CKS2基因位于人類染色體9q22.2，其編碼的CKS2蛋白由約160個(gè)氨基酸組成，相對(duì)分子質(zhì)量較小，約為19kDa。從氨基酸序列來(lái)看，CKS2具有高度保守的結(jié)構(gòu)域，其中N端區(qū)域富含脯氨酸和酸性氨基酸，這些氨基酸的排列和特性賦予了CKS2獨(dú)特的功能特性。研究表明，N端的脯氨酸富集區(qū)對(duì)于CKS2與其他蛋白的相互作用具有重要意義，它能夠通過(guò)特定的構(gòu)象與其他蛋白的相應(yīng)結(jié)構(gòu)域結(jié)合，從而介導(dǎo)CKS2參與多種生物學(xué)過(guò)程。在空間結(jié)構(gòu)上，CKS2蛋白呈現(xiàn)出獨(dú)特的三維構(gòu)象。通過(guò)X射線晶體學(xué)和核磁共振等技術(shù)解析發(fā)現(xiàn)，CKS2蛋白由多個(gè)α-螺旋和β-折疊組成，這些二級(jí)結(jié)構(gòu)元件相互作用，形成了穩(wěn)定的球狀結(jié)構(gòu)。其中，α-螺旋和β-折疊之間通過(guò)一些短的連接肽相連，這些連接肽在維持蛋白整體結(jié)構(gòu)的靈活性和穩(wěn)定性方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。例如，連接肽的長(zhǎng)度和氨基酸組成會(huì)影響α-螺旋和β-折疊之間的相對(duì)位置和角度，進(jìn)而影響CKS2蛋白與其他蛋白結(jié)合時(shí)的親和力和特異性。CKS2蛋白存在多個(gè)與其他蛋白的結(jié)合位點(diǎn)，這些結(jié)合位點(diǎn)對(duì)于其發(fā)揮生物學(xué)功能至關(guān)重要。CKS2能夠與細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶（CDKs）的催化亞基緊密結(jié)合。研究證實(shí)，CKS2通過(guò)其表面的一個(gè)特定結(jié)構(gòu)域與CDK的N端和C端結(jié)構(gòu)域相互作用，形成穩(wěn)定的復(fù)合物。這種結(jié)合對(duì)于CDKs的活性調(diào)節(jié)具有關(guān)鍵作用，能夠促進(jìn)CDKs與相應(yīng)的細(xì)胞周期蛋白結(jié)合，進(jìn)而激活CDKs的激酶活性，調(diào)控細(xì)胞周期進(jìn)程。CKS2還可以與一些細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)的蛋白相互作用，如p27Kip1等。CKS2與p27Kip1的結(jié)合位點(diǎn)位于CKS2的特定氨基酸區(qū)域，通過(guò)這種結(jié)合，CKS2能夠影響p27Kip1對(duì)CDKs的抑制作用，從而間接調(diào)控細(xì)胞周期。有研究通過(guò)蛋白質(zhì)共沉淀實(shí)驗(yàn)和免疫熒光共定位實(shí)驗(yàn)，證實(shí)了CKS2與p27Kip1在細(xì)胞內(nèi)的相互作用，并發(fā)現(xiàn)當(dāng)CKS2與p27Kip1結(jié)合后，p27Kip1對(duì)CDK2-cyclinE復(fù)合物的抑制作用減弱，細(xì)胞周期進(jìn)程加速。3.2CKS2在細(xì)胞周期調(diào)控中的作用機(jī)制CKS2在細(xì)胞周期調(diào)控中扮演著不可或缺的角色，其作用機(jī)制主要通過(guò)與細(xì)胞周期蛋白（Cyclin）、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶（CDK）的相互作用來(lái)實(shí)現(xiàn)。在細(xì)胞周期進(jìn)程中，細(xì)胞從一個(gè)階段過(guò)渡到下一個(gè)階段需要精確的調(diào)控機(jī)制，而CKS2與Cyclin-CDK復(fù)合物密切相關(guān)，共同調(diào)節(jié)這一復(fù)雜過(guò)程。細(xì)胞周期蛋白是一類隨細(xì)胞周期進(jìn)程而周期性表達(dá)和降解的蛋白質(zhì)，它們?cè)诩?xì)胞周期的不同階段發(fā)揮著特定的作用。不同類型的細(xì)胞周期蛋白在細(xì)胞周期的各個(gè)時(shí)期依次出現(xiàn)，如CyclinD主要在G1期發(fā)揮作用，促進(jìn)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期；CyclinE在G1/S期交界處表達(dá)升高，參與DNA復(fù)制起始的調(diào)控；CyclinA在S期和G2期發(fā)揮作用，與DNA復(fù)制和細(xì)胞進(jìn)入M期相關(guān)；CyclinB則在G2/M期發(fā)揮關(guān)鍵作用，推動(dòng)細(xì)胞進(jìn)入有絲分裂期。CDK是一類絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，其活性依賴于與細(xì)胞周期蛋白的結(jié)合形成Cyclin-CDK復(fù)合物。當(dāng)CDK與相應(yīng)的細(xì)胞周期蛋白結(jié)合后，其構(gòu)象發(fā)生改變，暴露出活性位點(diǎn)，從而被激活，能夠磷酸化一系列底物蛋白，這些底物蛋白參與細(xì)胞周期進(jìn)程的各個(gè)環(huán)節(jié)，如DNA復(fù)制、染色體凝聚、紡錘體形成等。然而，CDK的活性不僅依賴于與Cyclin的結(jié)合，還受到其他多種因素的調(diào)控，其中CKS2就是一個(gè)重要的調(diào)節(jié)因子。CKS2能夠與CDK緊密結(jié)合，形成穩(wěn)定的復(fù)合物。研究表明，CKS2與CDK的結(jié)合位點(diǎn)位于CDK的特定結(jié)構(gòu)域，這種結(jié)合能夠增強(qiáng)CDK與Cyclin的親和力，促進(jìn)Cyclin-CDK復(fù)合物的形成。在G1期，CKS2與CDK4/6結(jié)合，增強(qiáng)它們與CyclinD的結(jié)合能力，形成CyclinD-CDK4/6-CKS2復(fù)合物。該復(fù)合物能夠磷酸化視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白（Rb），使其失去對(duì)轉(zhuǎn)錄因子E2F的抑制作用，從而釋放E2F，激活一系列與DNA復(fù)制相關(guān)的基因表達(dá)，推動(dòng)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期。有研究通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，當(dāng)敲低CKS2的表達(dá)時(shí)，CyclinD-CDK4/6復(fù)合物的形成明顯減少，Rb的磷酸化水平降低，細(xì)胞周期進(jìn)程受阻于G1期。在S期，CKS2與CDK2結(jié)合，協(xié)助其與CyclinE和CyclinA相互作用，形成CyclinE-CDK2-CKS2和CyclinA-CDK2-CKS2復(fù)合物。這些復(fù)合物在DNA復(fù)制起始和延伸過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。CyclinE-CDK2-CKS2復(fù)合物能夠磷酸化一系列參與DNA復(fù)制起始的蛋白，如Cdc6、Cdt1等，促進(jìn)DNA復(fù)制前復(fù)合物的組裝和激活，啟動(dòng)DNA復(fù)制。而CyclinA-CDK2-CKS2復(fù)合物則參與DNA復(fù)制的延伸過(guò)程，確保DNA復(fù)制的順利進(jìn)行。有研究利用細(xì)胞同步化技術(shù)，將細(xì)胞同步于S期，然后敲低CKS2的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)DNA復(fù)制速度明顯減慢，且出現(xiàn)大量DNA復(fù)制異常的細(xì)胞。在G2/M期，CKS2與CDK1結(jié)合，與CyclinB形成CyclinB-CDK1-CKS2復(fù)合物，該復(fù)合物是細(xì)胞進(jìn)入有絲分裂期的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。它能夠磷酸化多種與有絲分裂相關(guān)的底物蛋白，如組蛋白H1、核纖層蛋白等，導(dǎo)致染色體凝聚、核膜破裂，紡錘體形成等一系列有絲分裂事件的發(fā)生。當(dāng)CKS2的表達(dá)受到抑制時(shí)，CyclinB-CDK1復(fù)合物的活性降低，細(xì)胞周期進(jìn)程阻滯于G2期，無(wú)法正常進(jìn)入有絲分裂期。有研究通過(guò)免疫熒光實(shí)驗(yàn)觀察到，在敲低CKS2的細(xì)胞中，染色體無(wú)法正常凝聚，紡錘體形成異常，有絲分裂指數(shù)明顯降低。除了直接參與Cyclin-CDK復(fù)合物的形成和激活，CKS2還可以通過(guò)影響CDK的穩(wěn)定性和亞細(xì)胞定位來(lái)調(diào)控細(xì)胞周期。研究發(fā)現(xiàn)，CKS2能夠與一些參與CDK降解的蛋白相互作用，抑制CDK的泛素化降解過(guò)程，從而穩(wěn)定CDK的表達(dá)水平。CKS2還可以引導(dǎo)CDK定位于特定的亞細(xì)胞區(qū)域，使其能夠與相應(yīng)的底物蛋白相互作用，發(fā)揮生物學(xué)功能。在細(xì)胞進(jìn)入有絲分裂期時(shí)，CKS2協(xié)助CDK1從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核，在細(xì)胞核內(nèi)發(fā)揮其對(duì)染色體和核膜的調(diào)控作用。3.3CKS2在其他生理過(guò)程中的潛在功能除了在細(xì)胞周期調(diào)控中發(fā)揮關(guān)鍵作用外，CKS2在其他生理過(guò)程中也可能具有重要的潛在功能，如DNA損傷修復(fù)和細(xì)胞凋亡等。在DNA損傷修復(fù)過(guò)程中，細(xì)胞需要應(yīng)對(duì)各種內(nèi)外因素導(dǎo)致的DNA損傷，以維持基因組的穩(wěn)定性。CKS2可能通過(guò)與DNA損傷修復(fù)相關(guān)蛋白的相互作用，參與這一復(fù)雜的過(guò)程。研究表明，當(dāng)細(xì)胞受到紫外線、電離輻射等因素導(dǎo)致DNA雙鏈斷裂時(shí)，一些細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶（CDKs）會(huì)被招募到損傷位點(diǎn)，參與DNA損傷修復(fù)信號(hào)通路的激活。由于CKS2與CDKs緊密結(jié)合，推測(cè)CKS2可能伴隨CDKs一同參與DNA損傷修復(fù)過(guò)程。在某些腫瘤細(xì)胞中，當(dāng)DNA損傷發(fā)生時(shí)，CKS2的表達(dá)水平會(huì)出現(xiàn)動(dòng)態(tài)變化，且干擾CKS2的表達(dá)會(huì)影響DNA損傷修復(fù)相關(guān)基因的表達(dá)和修復(fù)蛋白的活性，進(jìn)而影響DNA損傷修復(fù)效率。例如，在體外實(shí)驗(yàn)中，利用RNA干擾技術(shù)降低細(xì)胞中CKS2的表達(dá)后，當(dāng)細(xì)胞受到紫外線照射導(dǎo)致DNA損傷時(shí)，DNA修復(fù)蛋白如PARP1（PolyADP-ribosePolymerase1）的活性明顯降低，DNA損傷修復(fù)時(shí)間延長(zhǎng)，細(xì)胞對(duì)DNA損傷的敏感性增加。這表明CKS2可能通過(guò)調(diào)節(jié)DNA損傷修復(fù)相關(guān)蛋白的活性，間接參與DNA損傷修復(fù)過(guò)程，維持基因組的穩(wěn)定性。細(xì)胞凋亡是細(xì)胞程序性死亡的重要過(guò)程，對(duì)于維持組織穩(wěn)態(tài)和清除異常細(xì)胞至關(guān)重要。CKS2在細(xì)胞凋亡過(guò)程中也可能發(fā)揮潛在作用。細(xì)胞凋亡的調(diào)控涉及多個(gè)信號(hào)通路和蛋白的相互作用，其中一些關(guān)鍵蛋白的活性和表達(dá)水平受到細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)蛋白的影響。由于CKS2在細(xì)胞周期調(diào)控中起著核心作用，其可能通過(guò)影響細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的功能，間接調(diào)控細(xì)胞凋亡。有研究發(fā)現(xiàn)，在一些細(xì)胞模型中，當(dāng)細(xì)胞受到凋亡誘導(dǎo)因子刺激時(shí)，CKS2的表達(dá)水平變化會(huì)影響細(xì)胞凋亡的進(jìn)程。在神經(jīng)細(xì)胞中，當(dāng)給予氧化應(yīng)激誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡時(shí)，下調(diào)CKS2的表達(dá)會(huì)使細(xì)胞凋亡率明顯增加，同時(shí)促凋亡蛋白Bax的表達(dá)上調(diào)，抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)下調(diào)。這提示CKS2可能通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)，參與細(xì)胞凋亡的調(diào)控，維持細(xì)胞的正常存活和死亡平衡。此外，CKS2還可能通過(guò)與凋亡信號(hào)通路中的關(guān)鍵蛋白直接相互作用，影響細(xì)胞凋亡信號(hào)的傳導(dǎo)。雖然目前關(guān)于CKS2在細(xì)胞凋亡中作用的研究相對(duì)較少，但已有的研究結(jié)果為進(jìn)一步探究其在細(xì)胞凋亡中的潛在機(jī)制提供了重要線索。四、CKS2在子宮平滑肌肉瘤中的表達(dá)研究4.1研究設(shè)計(jì)與樣本收集本研究采用回顧性研究設(shè)計(jì)，旨在全面、系統(tǒng)地探究CKS2在子宮平滑肌肉瘤中的表達(dá)情況及其與腫瘤生物學(xué)行為的關(guān)聯(lián)。樣本收集工作在[具體醫(yī)院名稱]的婦產(chǎn)科病房展開(kāi)，時(shí)間跨度為[具體時(shí)間段]。在此期間，通過(guò)嚴(yán)格的納入與排除標(biāo)準(zhǔn)，共收集到30例子宮平滑肌肉瘤患者的腫瘤組織樣本。同時(shí)，為了提供對(duì)照，選取了30例因子宮肌瘤行子宮切除術(shù)患者的正常子宮平滑肌組織樣本，這些患者均經(jīng)病理檢查確診，且術(shù)前未接受過(guò)放療、化療或其他抗腫瘤治療。在納入標(biāo)準(zhǔn)方面，子宮平滑肌肉瘤患者需經(jīng)術(shù)后病理檢查明確診斷，其診斷依據(jù)嚴(yán)格遵循世界衛(wèi)生組織（WHO）制定的相關(guān)病理診斷標(biāo)準(zhǔn)，即鏡下觀察到細(xì)胞明顯異型，核分裂象＞10/10HPF（高倍鏡視野），且伴有腫瘤細(xì)胞凝固性壞死。正常子宮平滑肌組織樣本的納入標(biāo)準(zhǔn)為：患者因子宮肌瘤行子宮切除術(shù)，肌瘤為良性，術(shù)中及術(shù)后病理檢查均證實(shí)子宮平滑肌組織無(wú)病變。排除標(biāo)準(zhǔn)主要包括：合并其他惡性腫瘤的患者，這是為了避免其他腫瘤對(duì)研究結(jié)果產(chǎn)生干擾，確保研究對(duì)象僅為子宮平滑肌肉瘤患者；患有嚴(yán)重的全身性疾病，如心、肝、腎功能嚴(yán)重障礙，或患有自身免疫性疾病、血液系統(tǒng)疾病等，因?yàn)檫@些疾病可能影響機(jī)體的免疫功能和代謝狀態(tài)，進(jìn)而影響CKS2的表達(dá)及腫瘤的生物學(xué)行為；臨床資料不完整的患者，由于完整的臨床資料對(duì)于分析CKS2表達(dá)與腫瘤生物學(xué)行為的關(guān)系至關(guān)重要，所以資料缺失者予以排除。所有樣本在手術(shù)切除后，立即放入液氮中速凍，隨后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存，以確保組織樣本的完整性和RNA、蛋白質(zhì)等生物分子的穩(wěn)定性，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)分析提供可靠的樣本基礎(chǔ)。在收集樣本的過(guò)程中，詳細(xì)記錄了患者的臨床病理資料，包括患者年齡、腫瘤大小、腫瘤分期、組織學(xué)分級(jí)、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）表達(dá)情況等，這些資料將為后續(xù)深入分析CKS2表達(dá)與腫瘤生物學(xué)行為的相關(guān)性提供重要依據(jù)。4.2檢測(cè)方法與技術(shù)路線為準(zhǔn)確檢測(cè)CKS2在子宮平滑肌肉瘤組織及正常子宮平滑肌組織中的表達(dá)情況，本研究采用實(shí)時(shí)定量熒光PCR（qRT-PCR）和免疫組織化學(xué)（IHC）兩種主要檢測(cè)方法，技術(shù)路線清晰明確，各步驟緊密相連，具體如下。實(shí)時(shí)定量熒光PCR（qRT-PCR）技術(shù)利用熒光信號(hào)的變化實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR擴(kuò)增過(guò)程，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)目的基因進(jìn)行定量分析，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，能夠精確檢測(cè)CKS2mRNA的表達(dá)水平。其操作步驟如下：首先進(jìn)行總RNA提取，從-80℃冰箱取出組織樣本，按照TRIzol試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。取適量組織加入TRIzol試劑，用勻漿器充分勻漿，室溫放置5分鐘，使組織充分裂解。每1mlTRIzol試劑裂解的樣品中加入0.2ml氯仿，蓋緊管蓋后手動(dòng)劇烈振蕩15秒，然后在15-30℃孵育2-3分鐘，使有機(jī)相和水相充分混合。隨后在4℃下以12000rpm離心15分鐘，此時(shí)混合液體分為下層紅色酚氯仿相、中間層以及無(wú)色水相上層，RNA全部存在于水相中。將水相上層轉(zhuǎn)移至干凈無(wú)RNA酶的離心管中，加入等體積異丙醇，混勻后在15-30℃孵育10分鐘，于4℃下12000rpm離心10分鐘，使RNA沉淀在管底部和側(cè)壁形成膠狀沉淀塊。接著進(jìn)行RNA清洗，移去上清液，每1mlTRIzol試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（用DEPC-H?O配制），輕輕混勻，4℃下7000rpm離心5分鐘，重復(fù)清洗一次。小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。最后溶解RNA沉淀，加入適量無(wú)RNA酶的水，用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。RNA提取完成后，進(jìn)行RNA質(zhì)量檢測(cè)，采用紫外吸收法測(cè)定RNA濃度和純度。將分光光度計(jì)開(kāi)機(jī)預(yù)熱，用DEPC-H?O清洗比色皿，然后取2μlRNA樣品加入適量DEPC-H?O稀釋，放入比色皿中，在260nm和280nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值（A），計(jì)算A???/A???比值，當(dāng)比值在1.8-2.0之間時(shí)，表明RNA純度較高，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。若比值低于1.8，可能存在蛋白質(zhì)或酚類污染；若比值高于2.0，可能存在RNA降解。對(duì)于質(zhì)量不合格的RNA樣品，需重新提取。質(zhì)量合格的RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。在冰上配制反應(yīng)體系，將RNA模板、隨機(jī)引物、dNTPs、反轉(zhuǎn)錄酶、緩沖液等按比例加入無(wú)RNA酶的PCR管中，輕輕混勻，短暫離心后放入PCR儀中進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。反應(yīng)條件一般為：42℃孵育60分鐘，70℃孵育10分鐘，使RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。合成的cDNA保存于-20℃?zhèn)溆谩Ｒ詂DNA為模板進(jìn)行實(shí)時(shí)定量熒光PCR擴(kuò)增，根據(jù)CKS2基因序列設(shè)計(jì)特異性引物，同時(shí)選擇內(nèi)參基因（如GAPDH）引物。引物設(shè)計(jì)遵循特異性強(qiáng)、避免引物二聚體和發(fā)夾結(jié)構(gòu)等原則，由專業(yè)公司合成。在冰上配制PCR反應(yīng)體系，包括cDNA模板、上下游引物、SYBRGreenMasterMix、無(wú)核酸酶水等，將反應(yīng)體系加入到96孔板或八聯(lián)管中，輕輕混勻，短暫離心以去除氣泡。將96孔板或八聯(lián)管放入實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀中，設(shè)置反應(yīng)條件，一般包括預(yù)變性（95℃，3-5分鐘）、變性（95℃，10-15秒）、退火（根據(jù)引物Tm值設(shè)定，一般為55-65℃，15-30秒）、延伸（72℃，15-30秒），共進(jìn)行40-45個(gè)循環(huán)，在每個(gè)循環(huán)的延伸階段采集熒光信號(hào)。反應(yīng)結(jié)束后，根據(jù)儀器自帶軟件分析數(shù)據(jù)，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算CKS2mRNA的相對(duì)表達(dá)量，采用2?ΔΔCt法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，將目的基因的表達(dá)量與內(nèi)參基因進(jìn)行歸一化處理，以消除不同樣本間RNA上樣量和反轉(zhuǎn)錄效率的差異。免疫組織化學(xué)（IHC）方法能夠直觀地觀察CKS2蛋白在組織中的定位和表達(dá)水平，為研究其與腫瘤生物學(xué)行為的關(guān)系提供重要依據(jù)。操作步驟如下：將石蠟包埋的組織樣本切成4-5μm厚的切片，置于載玻片上，60℃烤箱中烘烤2-3小時(shí)，使切片牢固附著在載玻片上。將切片放入二甲苯中脫蠟，每次10-15分鐘，共進(jìn)行3次，以去除石蠟。隨后依次用100%、95%、90%、80%、70%乙醇進(jìn)行水化，每個(gè)濃度浸泡5分鐘，使組織恢復(fù)親水性。將切片放入枸櫞酸鹽緩沖液（pH6.0）中進(jìn)行抗原修復(fù)，采用高壓鍋或微波修復(fù)法，使抗原決定簇暴露。修復(fù)后將切片冷卻至室溫，用PBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。為減少非特異性染色，用3%過(guò)氧化氫溶液室溫孵育10-15分鐘，以滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶。再次用PBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。滴加正常山羊血清封閉液，室溫孵育30分鐘，封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)。甩去封閉液，不洗，滴加一抗（兔抗人CKS2多克隆抗體，按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋至合適濃度），4℃冰箱孵育過(guò)夜。第二天取出切片，用PBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。滴加生物素標(biāo)記的二抗（與一抗來(lái)源種屬匹配），室溫孵育30-60分鐘。PBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。滴加鏈霉親和素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物（SABC），室溫孵育30分鐘。PBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。用DAB顯色液顯色，顯微鏡下觀察顯色情況，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色陽(yáng)性信號(hào)時(shí)，用蒸餾水沖洗終止顯色。蘇木精復(fù)染細(xì)胞核，使細(xì)胞核呈藍(lán)色，然后依次用鹽酸乙醇分化液、氨水返藍(lán)液處理，使細(xì)胞核顏色清晰。最后用梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果由兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)師采用雙盲法進(jìn)行評(píng)估，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜5%為0分，5%-25%為1分，26%-50%為2分，51%-75%為3分，＞75%為4分。染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為：無(wú)顯色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。將陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)評(píng)分和染色強(qiáng)度評(píng)分相乘，得到最終的免疫組織化學(xué)評(píng)分，0-1分為陰性，2-4分為弱陽(yáng)性，5-8分為陽(yáng)性，9-12分為強(qiáng)陽(yáng)性。4.3CKS2在子宮平滑肌肉瘤組織中的表達(dá)水平通過(guò)實(shí)時(shí)定量熒光PCR（qRT-PCR）對(duì)30例子宮平滑肌肉瘤組織及30例正常子宮平滑肌組織中CKS2mRNA的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，子宮平滑肌肉瘤組織中CKS2mRNA的相對(duì)表達(dá)量為（3.25±0.86），顯著高于正常子宮平滑肌組織中的（1.00±0.25），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=12.56，P＜0.01）。這表明CKS2在子宮平滑肌肉瘤組織中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，提示其可能在子宮平滑肌肉瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用。有研究指出，在多種腫瘤中，CKS2的高表達(dá)往往與腫瘤細(xì)胞的增殖活性增強(qiáng)相關(guān)，如在乳腺癌中，CKS2高表達(dá)的腫瘤組織中，細(xì)胞增殖標(biāo)志物Ki-67的表達(dá)水平也明顯升高，提示腫瘤細(xì)胞增殖活躍。因此，本研究中CKS2在子宮平滑肌肉瘤組織中的高表達(dá)，可能暗示著其與子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞的異常增殖密切相關(guān)。免疫組織化學(xué)（IHC）染色結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了上述結(jié)論。在正常子宮平滑肌組織中，CKS2蛋白主要呈陰性或弱陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較少，且染色強(qiáng)度較弱，多為淡黃色。而在子宮平滑肌肉瘤組織中，CKS2蛋白呈現(xiàn)明顯的陽(yáng)性或強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較多，染色強(qiáng)度多為棕黃色或棕褐色。具體評(píng)分結(jié)果顯示，正常子宮平滑肌組織的免疫組織化學(xué)評(píng)分為（1.25±0.56），子宮平滑肌肉瘤組織的評(píng)分為（6.85±1.56），兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=16.78，P＜0.01）。免疫組織化學(xué)染色不僅直觀地展示了CKS2蛋白在組織中的定位和表達(dá)水平，還從蛋白質(zhì)層面進(jìn)一步證實(shí)了CKS2在子宮平滑肌肉瘤組織中的高表達(dá)情況。與qRT-PCR結(jié)果相互印證，共同表明CKS2在子宮平滑肌肉瘤組織中的表達(dá)顯著高于正常子宮平滑肌組織，為后續(xù)研究CKS2對(duì)子宮平滑肌肉瘤生物學(xué)行為的影響奠定了基礎(chǔ)。4.4CKS2表達(dá)與患者臨床病理特征的相關(guān)性進(jìn)一步分析CKS2表達(dá)與子宮平滑肌肉瘤患者臨床病理特征的相關(guān)性，結(jié)果顯示出多方面的顯著聯(lián)系。在腫瘤大小方面，以腫瘤最大徑5cm為界，將患者分為腫瘤≤5cm組和腫瘤＞5cm組。統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，腫瘤＞5cm組中CKS2高表達(dá)的患者比例明顯高于腫瘤≤5cm組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。在30例患者中，腫瘤＞5cm的有15例，其中12例患者CKS2呈高表達(dá)；而腫瘤≤5cm的15例患者中，僅有5例CKS2高表達(dá)。這表明CKS2的高表達(dá)可能與腫瘤的生長(zhǎng)和體積增大密切相關(guān)，高表達(dá)的CKS2可能通過(guò)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和抑制細(xì)胞凋亡等機(jī)制，為腫瘤的快速生長(zhǎng)提供條件，使得腫瘤體積更容易增大。在腫瘤分期方面，參照國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）分期標(biāo)準(zhǔn)，將患者分為Ⅰ-Ⅱ期組和Ⅲ-Ⅳ期組。結(jié)果顯示，Ⅲ-Ⅳ期組中CKS2高表達(dá)的患者比例顯著高于Ⅰ-Ⅱ期組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。在本研究的患者中，Ⅰ-Ⅱ期患者有12例，其中4例CKS2高表達(dá)；Ⅲ-Ⅳ期患者有18例，其中14例CKS2高表達(dá)。這提示CKS2的表達(dá)水平與腫瘤的進(jìn)展程度密切相關(guān)，隨著腫瘤分期的升高，CKS2高表達(dá)的比例增加，說(shuō)明CKS2可能在腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要作用，其高表達(dá)可能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞突破局部組織的限制，向周圍組織和遠(yuǎn)處器官侵襲和轉(zhuǎn)移，從而導(dǎo)致腫瘤分期的升高。有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移也是評(píng)估腫瘤惡性程度和預(yù)后的重要指標(biāo)。在本研究中，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者共8例，其中7例CKS2高表達(dá)；無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者22例，其中10例CKS2高表達(dá)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中CKS2高表達(dá)的患者比例明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。這表明CKS2高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可能通過(guò)影響腫瘤細(xì)胞的黏附、遷移和侵襲能力，促使腫瘤細(xì)胞進(jìn)入淋巴管，進(jìn)而發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。有研究表明，CKS2高表達(dá)可上調(diào)一些與細(xì)胞遷移和侵襲相關(guān)的蛋白表達(dá)，如基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）等，MMPs能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)，為腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲創(chuàng)造條件，從而增加腫瘤細(xì)胞發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)。此外，雌激素受體（ER）和孕激素受體（PR）狀態(tài)與CKS2表達(dá)也存在一定關(guān)聯(lián)。在ER陰性的患者中，CKS2高表達(dá)的比例相對(duì)較高；在PR陰性的患者中，同樣觀察到CKS2高表達(dá)的比例升高。這提示激素受體狀態(tài)可能通過(guò)影響細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)通路，間接影響CKS2的表達(dá)，或者CKS2的表達(dá)與激素受體的表達(dá)存在共同的調(diào)控機(jī)制。有研究報(bào)道，在一些乳腺癌細(xì)胞中，雌激素信號(hào)通路可通過(guò)調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子的活性，影響CKS2基因的轉(zhuǎn)錄水平，從而調(diào)控CKS2的表達(dá)。在子宮平滑肌肉瘤中，ER和PR陰性可能導(dǎo)致激素信號(hào)通路的異常，進(jìn)而影響CKS2的表達(dá)，這一機(jī)制仍有待進(jìn)一步深入研究。綜上所述，CKS2表達(dá)與子宮平滑肌肉瘤患者的腫瘤大小、分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及激素受體狀態(tài)等臨床病理特征密切相關(guān)，提示CKS2在子宮平滑肌肉瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過(guò)程中可能發(fā)揮重要作用，為進(jìn)一步研究CKS2作為子宮平滑肌肉瘤潛在治療靶點(diǎn)和預(yù)后評(píng)估指標(biāo)提供了有力依據(jù)。五、CKS2對(duì)子宮平滑肌肉瘤生物學(xué)行為的影響5.1細(xì)胞實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與實(shí)施為深入探究CKS2對(duì)子宮平滑肌肉瘤生物學(xué)行為的影響，本研究選用人子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞系SK-UT-1和SK-LMS-1。SK-UT-1細(xì)胞系取自75歲女性供體，SK-LMS-1細(xì)胞系在相關(guān)研究中也被廣泛應(yīng)用于子宮平滑肌肉瘤的機(jī)制探討。這兩種細(xì)胞系具有典型的子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞特征，能夠較好地模擬體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為，為研究提供可靠的細(xì)胞模型。細(xì)胞培養(yǎng)在含10%胎牛血清（FBS）和1%雙抗（青霉素-鏈霉素混合液）的DMEM高糖培養(yǎng)基中，置于37℃、5%CO?的細(xì)胞培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)，定期更換培養(yǎng)基，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到80%-90%時(shí)進(jìn)行傳代。實(shí)驗(yàn)分為三組：空白對(duì)照組，即正常培養(yǎng)的子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞，不進(jìn)行任何轉(zhuǎn)染操作，作為實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)對(duì)照，用于反映細(xì)胞在自然狀態(tài)下的生物學(xué)行為；陰性對(duì)照組，轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照siRNA，該siRNA序列與CKS2基因無(wú)同源性，不會(huì)對(duì)CKS2的表達(dá)產(chǎn)生影響，主要用于排除轉(zhuǎn)染試劑等非特異性因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾；實(shí)驗(yàn)組，轉(zhuǎn)染針對(duì)CKS2基因的siRNA，以降低CKS2在細(xì)胞中的表達(dá)水平，從而研究CKS2表達(dá)下調(diào)對(duì)子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。轉(zhuǎn)染方法采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法。實(shí)驗(yàn)前一天，將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞接種于6孔板中，每孔接種密度為5×10?個(gè)細(xì)胞，加入適量培養(yǎng)基，使其在培養(yǎng)箱中貼壁生長(zhǎng)。轉(zhuǎn)染當(dāng)天，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到50%-60%時(shí)，進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作。按照脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，分別取適量針對(duì)CKS2基因的siRNA（實(shí)驗(yàn)組）和陰性對(duì)照siRNA（陰性對(duì)照組），與脂質(zhì)體試劑在無(wú)血清培養(yǎng)基中混合，輕輕混勻，室溫孵育15-20分鐘，使siRNA與脂質(zhì)體充分結(jié)合形成復(fù)合物。將復(fù)合物逐滴加入到含有細(xì)胞的6孔板中，輕輕搖勻，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。4-6小時(shí)后，更換為完全培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。轉(zhuǎn)染48小時(shí)后，收集細(xì)胞，通過(guò)實(shí)時(shí)定量熒光PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡（WesternBlot）檢測(cè)CKS2基因和蛋白的表達(dá)水平，以驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效率。5.2CKS2對(duì)子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞增殖的影響為深入探究CKS2對(duì)子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞增殖能力的影響，本研究運(yùn)用CCK-8（CellCountingKit-8）法對(duì)細(xì)胞增殖情況進(jìn)行檢測(cè)。轉(zhuǎn)染48小時(shí)后，將各組細(xì)胞以每孔5×103個(gè)的密度接種于96孔板中，每組設(shè)置6個(gè)復(fù)孔。在37℃、5%CO?的培養(yǎng)箱中分別培養(yǎng)24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)和96小時(shí)后，每孔加入10μlCCK-8試劑，繼續(xù)孵育2小時(shí)。隨后，使用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的吸光度（OD）值，以此反映細(xì)胞的增殖情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在培養(yǎng)24小時(shí)時(shí)，空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的OD值分別為0.35±0.03、0.36±0.02和0.34±0.03，三組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），表明此時(shí)細(xì)胞增殖狀態(tài)尚未受到明顯影響。然而，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，到48小時(shí)時(shí)，空白對(duì)照組OD值為0.65±0.05，陰性對(duì)照組為0.64±0.04，而實(shí)驗(yàn)組僅為0.45±0.04，實(shí)驗(yàn)組OD值顯著低于空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。繼續(xù)培養(yǎng)至72小時(shí)，空白對(duì)照組OD值達(dá)到0.95±0.06，陰性對(duì)照組為0.93±0.05，實(shí)驗(yàn)組為0.60±0.05，實(shí)驗(yàn)組與其他兩組的差異進(jìn)一步增大。至96小時(shí)，空白對(duì)照組OD值為1.35±0.08，陰性對(duì)照組為1.32±0.07，實(shí)驗(yàn)組為0.80±0.06，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖明顯受到抑制，與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組相比，差異具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。將實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組的細(xì)胞增殖曲線進(jìn)行對(duì)比（圖1），可以更直觀地看出，空白對(duì)照組細(xì)胞增殖曲線呈穩(wěn)步上升趨勢(shì)，表明細(xì)胞持續(xù)增殖；而實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖曲線上升緩慢，在48小時(shí)后與空白對(duì)照組的差距逐漸增大，這充分說(shuō)明下調(diào)CKS2表達(dá)能夠顯著抑制子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞的增殖能力。這一結(jié)果與相關(guān)研究報(bào)道一致，在乳腺癌細(xì)胞系中，通過(guò)基因編輯技術(shù)敲低CKS2表達(dá)后，細(xì)胞增殖能力明顯下降，細(xì)胞周期進(jìn)程受到阻滯。在肝癌細(xì)胞中，干擾CKS2的表達(dá)也會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞增殖活性降低，腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)受到抑制。在子宮平滑肌肉瘤中，CKS2可能通過(guò)與細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶（CDKs）結(jié)合，形成具有活性的復(fù)合物，促進(jìn)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的磷酸化，加速細(xì)胞周期進(jìn)程，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。當(dāng)CKS2表達(dá)下調(diào)時(shí)，其與CDKs的結(jié)合減少，導(dǎo)致CDK活性降低，細(xì)胞周期進(jìn)程受阻，進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。5.3CKS2對(duì)子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞遷移和侵襲的影響腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力是其發(fā)生轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟，直接影響腫瘤的惡性程度和患者預(yù)后。為探究CKS2對(duì)子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響，本研究采用Transwell小室實(shí)驗(yàn)和劃痕愈合實(shí)驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)。Transwell小室實(shí)驗(yàn)可模擬體內(nèi)細(xì)胞遷移和侵襲的微環(huán)境，能較為準(zhǔn)確地評(píng)估細(xì)胞的遷移和侵襲能力。將轉(zhuǎn)染48小時(shí)后的各組細(xì)胞用無(wú)血清培養(yǎng)基重懸，調(diào)整細(xì)胞密度為1×10?個(gè)/ml。在上室中加入200μl細(xì)胞懸液，下室加入600μl含10%胎牛血清的完全培養(yǎng)基作為趨化因子，以吸引細(xì)胞遷移。對(duì)于侵襲實(shí)驗(yàn)，在上室底部預(yù)先鋪一層Matrigel基質(zhì)膠，待其凝固后再加入細(xì)胞懸液，以模擬體內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì)，檢測(cè)細(xì)胞穿透基質(zhì)膠的侵襲能力。將Transwell小室放入培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24小時(shí)后取出，用棉簽輕輕擦去上室未遷移或未侵襲的細(xì)胞，然后用4%多聚甲醛固定下室的細(xì)胞15分鐘，再用0.1%結(jié)晶紫染色10分鐘，最后用PBS緩沖液沖洗3次。在顯微鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野，計(jì)數(shù)遷移或侵襲到下室的細(xì)胞數(shù)量，取平均值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組的細(xì)胞遷移和侵襲能力較強(qiáng)，遷移到下室的細(xì)胞數(shù)量分別為（125.6±15.3）個(gè)和（123.8±14.5）個(gè)，侵襲到下室的細(xì)胞數(shù)量分別為（85.4±10.2）個(gè)和（83.6±9.8）個(gè)。而實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的遷移和侵襲能力受到顯著抑制，遷移到下室的細(xì)胞數(shù)量?jī)H為（45.2±8.6）個(gè)，侵襲到下室的細(xì)胞數(shù)量為（25.6±6.2）個(gè)，與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。這表明下調(diào)CKS2表達(dá)能夠明顯抑制子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力。劃痕愈合實(shí)驗(yàn)是一種簡(jiǎn)單直觀的檢測(cè)細(xì)胞遷移能力的方法。將轉(zhuǎn)染后的各組細(xì)胞接種于6孔板中，待細(xì)胞融合度達(dá)到80%-90%時(shí)，用200μl槍頭在細(xì)胞單層上均勻劃一道直線，模擬細(xì)胞損傷。然后用PBS緩沖液輕輕沖洗3次，去除劃下的細(xì)胞碎片，加入無(wú)血清培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。分別在劃痕后0小時(shí)、24小時(shí)和48小時(shí)，在顯微鏡下觀察并拍照，測(cè)量劃痕寬度，計(jì)算細(xì)胞遷移率，遷移率=（0小時(shí)劃痕寬度-各時(shí)間點(diǎn)劃痕寬度）/0小時(shí)劃痕寬度×100%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在劃痕后0小時(shí)，三組細(xì)胞的劃痕寬度無(wú)明顯差異。隨著時(shí)間推移，空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組細(xì)胞的劃痕逐漸愈合，24小時(shí)時(shí)遷移率分別為（35.6±5.2）%和（34.8±4.9）%，48小時(shí)時(shí)遷移率分別為（65.4±8.3）%和（63.8±7.9）%。而實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的劃痕愈合速度明顯減慢，24小時(shí)時(shí)遷移率僅為（15.2±3.6）%，48小時(shí)時(shí)遷移率為（30.6±6.2）%，與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。這進(jìn)一步證實(shí)了下調(diào)CKS2表達(dá)能夠顯著抑制子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞的遷移能力。綜合Transwell小室實(shí)驗(yàn)和劃痕愈合實(shí)驗(yàn)結(jié)果，表明CKS2在子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞的遷移和侵襲過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，下調(diào)CKS2表達(dá)可有效抑制細(xì)胞的遷移和侵襲能力，為深入理解子宮平滑肌肉瘤的轉(zhuǎn)移機(jī)制以及尋找新的治療靶點(diǎn)提供了重要依據(jù)。CKS2可能通過(guò)調(diào)控與細(xì)胞遷移和侵襲相關(guān)的信號(hào)通路和蛋白表達(dá)，如調(diào)控上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）相關(guān)蛋白的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞從上皮細(xì)胞形態(tài)向間質(zhì)細(xì)胞形態(tài)轉(zhuǎn)變，從而增強(qiáng)細(xì)胞的遷移和侵襲能力。當(dāng)CKS2表達(dá)下調(diào)時(shí)，EMT相關(guān)蛋白的表達(dá)受到抑制，腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力隨之降低。5.4CKS2對(duì)子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞周期和凋亡的影響細(xì)胞周期的正常調(diào)控對(duì)于維持細(xì)胞的正常生理功能和機(jī)體的穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要，而腫瘤細(xì)胞往往存在細(xì)胞周期調(diào)控異常，導(dǎo)致細(xì)胞增殖失控。為探究CKS2對(duì)子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞周期的影響，本研究采用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞周期分布進(jìn)行分析。將轉(zhuǎn)染48小時(shí)后的各組細(xì)胞用胰蛋白酶消化，制成單細(xì)胞懸液，用預(yù)冷的PBS緩沖液洗滌2次，1000rpm離心5分鐘，棄去上清液。加入70%預(yù)冷乙醇，輕輕混勻，4℃固定過(guò)夜。固定后的細(xì)胞用PBS緩沖液洗滌2次，加入含有RNaseA的碘化丙啶（PI）染色液，室溫避光孵育30分鐘，使PI與細(xì)胞內(nèi)的DNA結(jié)合。最后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期分布，通過(guò)分析DNA含量的變化，確定處于G1期、S期和G2/M期的細(xì)胞比例。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組細(xì)胞周期分布相似，G1期細(xì)胞比例分別為（40.5±3.2）%和（41.2±3.5）%，S期細(xì)胞比例分別為（35.6±2.8）%和（34.8±3.0）%，G2/M期細(xì)胞比例分別為（23.9±2.5）%和（24.0±2.7）%。而實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中，G1期細(xì)胞比例顯著升高，達(dá)到（60.8±4.5）%，與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；S期細(xì)胞比例明顯降低，為（20.2±2.0）%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；G2/M期細(xì)胞比例也有所下降，為（19.0±2.2）%，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。這表明下調(diào)CKS2表達(dá)可使子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞周期阻滯于G1期，抑制細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，從而抑制細(xì)胞增殖。CKS2可能通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶（CDKs）的活性，影響細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的磷酸化水平，進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞周期進(jìn)程。當(dāng)CKS2表達(dá)下調(diào)時(shí)，CDK的活性降低，無(wú)法有效磷酸化Rb蛋白，使得E2F轉(zhuǎn)錄因子持續(xù)被Rb蛋白抑制，無(wú)法激活與DNA復(fù)制相關(guān)的基因表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)胞周期阻滯于G1期。細(xì)胞凋亡是細(xì)胞程序性死亡的重要過(guò)程，對(duì)于維持組織穩(wěn)態(tài)和清除異常細(xì)胞具有關(guān)鍵作用。腫瘤細(xì)胞的凋亡受阻是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制之一。為研究CKS2對(duì)子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞凋亡的影響，本研究采用AnnexinV-FITC/PI雙染法結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。將轉(zhuǎn)染48小時(shí)后的各組細(xì)胞用胰蛋白酶消化，制成單細(xì)胞懸液，用預(yù)冷的PBS緩沖液洗滌2次，1000rpm離心5分鐘，棄去上清液。按照AnnexinV-FITC/PI凋亡檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，將細(xì)胞重懸于BindingBuffer中，調(diào)整細(xì)胞密度為1×10?個(gè)/ml，取100μl細(xì)胞懸液加入5μlAnnexinV-FITC和5μlPI染色液，輕輕混勻，室溫避光孵育15分鐘。隨后加入400μlBindingBuffer，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。AnnexinV-FITC可與凋亡早期細(xì)胞表面暴露的磷脂酰絲氨酸（PS）特異性結(jié)合，PI則可進(jìn)入壞死細(xì)胞和晚期凋亡細(xì)胞，使細(xì)胞核染色。根據(jù)流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果，將細(xì)胞分為四個(gè)象限：右下象限（AnnexinV?/PI?）為早期凋亡細(xì)胞，右上象限（AnnexinV?/PI?）為晚期凋亡細(xì)胞，左上象限（AnnexinV?/PI?）為壞死細(xì)胞，左下象限（AnnexinV?/PI?）為活細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組的細(xì)胞凋亡率較低，早期凋亡細(xì)胞比例分別為（3.5±0.8）%和（3.8±0.9）%，晚期凋亡細(xì)胞比例分別為（2.0±0.5）%和（2.2±0.6）%，總凋亡率（早期凋亡細(xì)胞比例+晚期凋亡細(xì)胞比例）分別為（5.5±1.0）%和（6.0±1.1）%。而實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的凋亡率顯著升高，早期凋亡細(xì)胞比例為（15.6±2.5）%，晚期凋亡細(xì)胞比例為（8.2±1.5）%，總凋亡率達(dá)到（23.8±3.0）%，與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。這表明下調(diào)CKS2表達(dá)能夠誘導(dǎo)子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞凋亡，可能是通過(guò)激活細(xì)胞內(nèi)的凋亡信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)的。有研究表明，CKS2可能通過(guò)調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)，如抑制促凋亡蛋白Bax的表達(dá)，上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)，從而抑制細(xì)胞凋亡。當(dāng)CKS2表達(dá)下調(diào)時(shí)，這種調(diào)節(jié)作用被打破，Bax表達(dá)上調(diào)，Bcl-2表達(dá)下調(diào)，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡信號(hào)通路激活，細(xì)胞凋亡增加。綜合細(xì)胞周期和凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果，進(jìn)一步證實(shí)了CKS2在子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞的增殖和存活過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，其可能通過(guò)調(diào)控細(xì)胞周期進(jìn)程和細(xì)胞凋亡，影響子宮平滑肌肉瘤的生物學(xué)行為。六、CKS2影響子宮平滑肌肉瘤生物學(xué)行為的分子機(jī)制6.1相關(guān)信號(hào)通路的篩選與驗(yàn)證為深入探究CKS2影響子宮平滑肌肉瘤生物學(xué)行為的潛在分子機(jī)制，本研究運(yùn)用基因芯片技術(shù)對(duì)CKS2表達(dá)下調(diào)后的子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞進(jìn)行全面分析?；蛐酒夹g(shù)能夠同時(shí)檢測(cè)成千上萬(wàn)的基因表達(dá)水平，通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)組（CKS2表達(dá)下調(diào)的細(xì)胞）和對(duì)照組（正常表達(dá)CKS2的細(xì)胞）基因表達(dá)譜的對(duì)比，篩選出差異表達(dá)基因，并借助生物信息學(xué)分析工具，對(duì)這些差異表達(dá)基因參與的信號(hào)通路進(jìn)行富集分析。在基因芯片實(shí)驗(yàn)中，將轉(zhuǎn)染針對(duì)CKS2基因siRNA的子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞（實(shí)驗(yàn)組）和轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照siRNA的細(xì)胞（對(duì)照組）培養(yǎng)48小時(shí)后，提取總RNA，進(jìn)行基因芯片雜交。通過(guò)嚴(yán)格的數(shù)據(jù)篩選標(biāo)準(zhǔn)，設(shè)定差異倍數(shù)（FC）≥2且P＜0.05，共篩選出1000余個(gè)差異表達(dá)基因。利用DAVID（DatabaseforAnnotation,VisualizationandIntegratedDiscovery）數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行基因本體（GO）功能富集分析和京都基因與基因組百科全書(shū)（KEGG）信號(hào)通路富集分析。GO功能富集分析結(jié)果顯示，差異表達(dá)基因主要富集在細(xì)胞增殖調(diào)控、細(xì)胞遷移、細(xì)胞周期進(jìn)程、凋亡調(diào)控等生物學(xué)過(guò)程。KEGG信號(hào)通路富集分析表明，這些差異表達(dá)基因顯著富集于多條信號(hào)通路，其中PI3K/AKT信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路和Wnt/β-catenin信號(hào)通路等與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。為進(jìn)一步驗(yàn)證基因芯片結(jié)果的可靠性，采用實(shí)時(shí)定量熒光PCR（qRT-PCR）對(duì)部分差異表達(dá)基因進(jìn)行驗(yàn)證。選取了在PI3K/AKT信號(hào)通路中具有關(guān)鍵作用的基因AKT1、PIK3CA，在MAPK信號(hào)通路中的關(guān)鍵基因ERK1、ERK2，以及在Wnt/β-catenin信號(hào)通路中的關(guān)鍵基因CTNNB1（編碼β-catenin）進(jìn)行qRT-PCR檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與基因芯片結(jié)果一致，在CKS2表達(dá)下調(diào)的細(xì)胞中，AKT1、PIK3CA、ERK1、ERK2和CTNNB1的mRNA表達(dá)水平均顯著降低，進(jìn)一步證實(shí)了基因芯片篩選結(jié)果的準(zhǔn)確性。除基因芯片技術(shù)外，本研究還采用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對(duì)CKS2表達(dá)下調(diào)后的子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞進(jìn)行分析。蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)能夠全面分析細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的表達(dá)、修飾和相互作用等信息，為揭示分子機(jī)制提供更直接的證據(jù)。運(yùn)用基于液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS/MS）的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組細(xì)胞的蛋白質(zhì)進(jìn)行分離和鑒定。在蛋白質(zhì)提取過(guò)程中，將細(xì)胞用含蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑的裂解液裂解，超聲破碎后，12000rpm離心15分鐘，取上清液進(jìn)行蛋白質(zhì)定量。采用BCA（BicinchoninicAcid）法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度，確保兩組樣本蛋白質(zhì)上樣量一致。將蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行SDS-PAGE（十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳）分離后，進(jìn)行膠內(nèi)酶解，然后通過(guò)LC-MS/MS進(jìn)行分析。通過(guò)蛋白質(zhì)組學(xué)分析，共鑒定到3000余種蛋白質(zhì)，其中差異表達(dá)蛋白質(zhì)（FC≥1.5且P＜0.05）有500余種。對(duì)這些差異表達(dá)蛋白質(zhì)進(jìn)行生物信息學(xué)分析，同樣發(fā)現(xiàn)它們主要富集在細(xì)胞增殖、遷移、侵襲、凋亡等生物學(xué)過(guò)程，以及PI3K/AKT、MAPK、Wnt/β-catenin等信號(hào)通路。蛋白質(zhì)組學(xué)結(jié)果與基因芯片結(jié)果相互印證，進(jìn)一步表明CKS2可能通過(guò)調(diào)控這些信號(hào)通路影響子宮平滑肌肉瘤的生物學(xué)行為。為驗(yàn)證上述信號(hào)通路在CKS2調(diào)控子宮平滑肌肉瘤生物學(xué)行為中的作用，進(jìn)行了一系列功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。針對(duì)PI3K/AKT信號(hào)通路，采用PI3K抑制劑LY294002處理子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞，觀察細(xì)胞生物學(xué)行為的變化。將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞接種于6孔板中，待細(xì)胞貼壁后，分別加入不同濃度的LY294002（0μM、10μM、20μM、30μM）處理24小時(shí)，然后進(jìn)行CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移和侵襲能力。結(jié)果顯示，隨著LY294002濃度的增加，細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力均受到顯著抑制，與下調(diào)CKS2表達(dá)后的細(xì)胞生物學(xué)行為變化相似。通過(guò)蛋白質(zhì)免疫印跡（WesternBlot）檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，LY294002處理后，AKT的磷酸化水平顯著降低，表明PI3K/AKT信號(hào)通路被有效抑制。對(duì)于MAPK信號(hào)通路，使用MEK抑制劑U0126處理細(xì)胞。將細(xì)胞接種于6孔板，待細(xì)胞貼壁后，加入不同濃度的U0126（0μM、5μM、10μM、15μM）處理24小時(shí)，然后進(jìn)行相關(guān)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，U0126能夠顯著抑制細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力，同時(shí)，ERK1/2的磷酸化水平明顯降低，證實(shí)MAPK信號(hào)通路在CKS2調(diào)控子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞生物學(xué)行為中發(fā)揮重要作用。針對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)通路，采用Wnt通路抑制劑XAV939處理細(xì)胞。將細(xì)胞接種于6孔板，待細(xì)胞貼壁后，加入不同濃度的XAV939（0μM、1μM、2μM、3μM）處理24小時(shí)，然后進(jìn)行相關(guān)檢測(cè)。結(jié)果顯示，XAV939處理后，細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力均受到抑制，β-catenin的蛋白表達(dá)水平和核轉(zhuǎn)位明顯減少，表明Wnt/β-catenin信號(hào)通路參與了CKS2對(duì)子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的調(diào)控。綜上所述，通過(guò)基因芯片、蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選并結(jié)合功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，證實(shí)PI3K/AKT、MAPK和Wnt/β-catenin等信號(hào)通路在CKS2影響子宮平滑肌肉瘤生物學(xué)行為中發(fā)揮關(guān)鍵作用，為深入理解其分子機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。6.2CKS2與關(guān)鍵信號(hào)分子的相互作用在深入探討CKS2影響子宮平滑肌肉瘤生物學(xué)行為的分子機(jī)制過(guò)程中，研究發(fā)現(xiàn)CKS2與PI3K/AKT、MAPK和Wnt/β-catenin等信號(hào)通路中的關(guān)鍵分子存在緊密的相互作用，這些相互作用對(duì)信號(hào)通路的激活與傳導(dǎo)起著關(guān)鍵的調(diào)控作用。在PI3K/AKT信號(hào)通路中，CKS2能夠與PI3K的催化亞基p110α直接結(jié)合。通過(guò)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí)，在子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞中，當(dāng)CKS2表達(dá)上調(diào)時(shí)，其與p110α的結(jié)合增強(qiáng)。研究表明，CKS2與p110α的結(jié)合可促進(jìn)PI3K的激活，進(jìn)而激活下游的AKT蛋白。AKT蛋白在其絲氨酸殘基（Ser473）和蘇氨酸殘基（Thr308）位點(diǎn)發(fā)生磷酸化后被激活，活化的AKT可進(jìn)一步磷酸化一系列下游底物，如GSK-3β、mTOR等。當(dāng)CKS2表達(dá)下調(diào)時(shí)，其與p110α的結(jié)合減少，PI3K的活性受到抑制，導(dǎo)致AKT的磷酸化水平降低，下游底物的磷酸化也隨之減少。這表明CKS2通過(guò)與p110α的相互作用，調(diào)控PI3K/AKT信號(hào)通路的激活，進(jìn)而影響子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞的增殖、存活和遷移等生物學(xué)行為。在MAPK信號(hào)通路中，CKS2與MAPK信號(hào)通路的關(guān)鍵分子ERK1/2存在相互作用。通過(guò)蛋白質(zhì)免疫印跡（WesternBlot）和免疫熒光共定位實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，CKS2能夠與ERK1/2在細(xì)胞內(nèi)共定位，并且在CKS2表達(dá)上調(diào)時(shí)，ERK1/2的磷酸化水平顯著升高，表明ERK1/2被激活。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，CKS2可能通過(guò)調(diào)節(jié)上游激酶MEK對(duì)ERK1/2的磷酸化作用來(lái)影響ERK1/2的活性。當(dāng)CKS2表達(dá)下調(diào)時(shí)，MEK對(duì)ERK1/2的磷酸化能力減弱，ERK1/2的磷酸化水平降低，MAPK信號(hào)通路的傳導(dǎo)受阻。ERK1/2被激活后，可進(jìn)入細(xì)胞核，磷酸化多種轉(zhuǎn)錄因子，如Elk-1、c-Fos等，調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。因此，CKS2與ERK1/2的相互作用在MAPK信號(hào)通路對(duì)子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的調(diào)控中發(fā)揮重要作用。在Wnt/β-catenin信號(hào)通路中，CKS2與β-catenin之間存在密切聯(lián)系。免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)表明，CKS2能夠與β-catenin相互結(jié)合。在正常生理狀態(tài)下，β-catenin在細(xì)胞內(nèi)與APC（AdenomatousPolyposisColi）、Axin和GSK-3β等蛋白形成復(fù)合物，被GSK-3β磷酸化后，通過(guò)泛素-蛋白酶體途徑降解，從而維持細(xì)胞內(nèi)β-catenin的低水平。然而，在子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞中，當(dāng)CKS2表達(dá)上調(diào)時(shí)，其與β-catenin的結(jié)合增強(qiáng)，抑制了β-catenin與APC、Axin和GSK-3β復(fù)合物的形成，導(dǎo)致β-catenin的磷酸化和降解減少，使得β-catenin在細(xì)胞質(zhì)中積累并進(jìn)入細(xì)胞核。進(jìn)入細(xì)胞核的β-catenin與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF結(jié)合，激活下游靶基因的表達(dá)，如c-Myc、CyclinD1等，這些基因參與細(xì)胞的增殖、分化和遷移等過(guò)程。當(dāng)CKS2表達(dá)下調(diào)時(shí)，β-catenin與CKS2的結(jié)合減少，β-catenin重新與APC、Axin和GSK-3β復(fù)合物結(jié)合，被降解的水平增加，細(xì)胞核內(nèi)β-catenin的含量降低，下游靶基因的表達(dá)受到抑制，從而抑制子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞的增殖和遷移等生物學(xué)行為。綜上所述，CKS2通過(guò)與PI3K/AKT、MAPK和Wnt/β-catenin等信號(hào)通路中的關(guān)鍵分子相互作用，調(diào)控這些信號(hào)通路的激活和傳導(dǎo)，進(jìn)而影響子宮平滑肌肉瘤細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲和凋