3.2.2動物細(xì)胞工程（二）動物細(xì)胞融合與單克隆抗體一、動物細(xì)胞融合二、單克隆抗體動物細(xì)胞融合與單克隆抗體

漢水丑生作品（QQ:70939118）三、動物細(xì)胞融合

概念：使兩個(gè)或多個(gè)動物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的技術(shù)。融合后形成的雜交細(xì)胞具有原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的遺傳信息。原理：動物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的基本原理相同（磷脂分子重新排布）。

誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合的常用方法有PEG融合法、電融合法和滅活病毒誘導(dǎo)法等。物理方法：電融合法、離心法化學(xué)方法：聚乙二醇(PEG)高鈣—高pH培養(yǎng)法滅活的仙臺病毒誘導(dǎo)

滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子__________，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合。

滅活：是指用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去______能力，但是并不破壞這些病原體的______結(jié)構(gòu)。重新排布感染抗原利用細(xì)胞融合進(jìn)行基因定位已知人的體細(xì)胞和小鼠的體細(xì)胞(2N=40)雜交(融合)后，雜種細(xì)胞在有絲分裂過程中，人的染色體逐漸地丟失，最后僅保留少數(shù)幾條。由于人染色體的丟失是隨機(jī)的，因此不同的雜種細(xì)胞會保留不同的人染色體。

結(jié)論：人胸苷激酶基因位于17號染色體上。獲得雜種植株細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞的全能性去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合物理、化學(xué)方法、滅活的病毒制備單克隆抗體物理、化學(xué)方法4、意義：

細(xì)胞融合技術(shù)突破了有性雜交方法的局限，使____________成為可能。至今種間、屬間、科間，甚至動物和植物之間的細(xì)胞融合都已獲得了成功。目前，這一技術(shù)已經(jīng)成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段。特別是利用細(xì)胞融合技術(shù)而發(fā)展起來的雜交瘤技術(shù)，為制造_____________開辟了新途徑。遠(yuǎn)緣雜交單克隆抗體一、動物細(xì)胞融合二、單克隆抗體動物細(xì)胞融合與單克隆抗體

漢水丑生作品（QQ:70939118）1、傳統(tǒng)抗體的缺陷

長期以來，人們?yōu)榱双@得抗體，采用的方法是向動物體內(nèi)____________________，使動物產(chǎn)生抗體，然后，從動物______中分離所需抗體。這種方法不僅__________，而且____________。B1B2B312細(xì)菌3反復(fù)注射某種抗原血清產(chǎn)量低、純度低特異性差傳統(tǒng)抗體是多克隆抗體四、單克隆抗體

動物在免疫反應(yīng)的過程中，體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體種類可多達(dá)百萬種以上，但是每一個(gè)B淋巴細(xì)胞__________________。只產(chǎn)生一種抗體克隆B淋巴細(xì)胞與癌細(xì)胞融合形成雜交細(xì)胞四、單克隆抗體

因此，要想獲得大量的單一抗體，必須______單一的B淋巴細(xì)胞，形成細(xì)胞群。遺憾的是，在體外培養(yǎng)條件下，一個(gè)B淋巴細(xì)胞是不可能無限增殖的，解決這一問題的思路是讓

____________________________________________。選擇培養(yǎng)基篩選單克隆抗體誘導(dǎo)融合注射特定蛋白免疫小鼠培養(yǎng)小鼠骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞（A）多種細(xì)胞多種雜交瘤細(xì)胞能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞選擇培養(yǎng)基篩選專一抗體檢測注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖體外培養(yǎng)注射特定蛋白免疫小鼠培養(yǎng)小鼠骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞（A）多種細(xì)胞多種雜交瘤細(xì)胞能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞克隆化培養(yǎng)專一抗體檢測注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖體外培養(yǎng)資料：細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基喋呤阻斷。人淋巴細(xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑，但不能無限增殖。鼠骨髓瘤細(xì)胞中只有D途徑，沒有S途徑。B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞（A）合成DNAD途徑S途徑D途徑氨基喋呤A、B、AA、BB、AB1、AB2、AB3選擇性培養(yǎng)基：

在該培養(yǎng)基上，_______________細(xì)胞和____________________的細(xì)胞都會死亡，只有融合的雜種細(xì)胞才能生長。未融合的親本融合的具有同種核AB1、AB2、AB3。。。。。。專一抗體檢驗(yàn)陽性：有限稀釋法

用羊的紅細(xì)胞對小鼠進(jìn)行注射，使小鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)，從產(chǎn)生免疫反應(yīng)小鼠的脾臟細(xì)胞中，他們得到了抗_________的抗體，這說明在小鼠的脾中形成了_______________細(xì)胞。他們又設(shè)法將鼠的__________細(xì)胞與脾臟細(xì)胞中產(chǎn)生的__________細(xì)胞融合，再用特定的__________培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。在該培養(yǎng)基上，_______________細(xì)胞和____________________的細(xì)胞都會死亡，只有融合的雜種細(xì)胞才能生長。這種雜種細(xì)胞的特點(diǎn)是既能_______________，又能___________。對上述經(jīng)選擇性培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞，還需進(jìn)行_____________和____________，經(jīng)多次篩選，就可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細(xì)胞。最后，將雜交瘤細(xì)胞在體外條件下做大規(guī)模培養(yǎng)，或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖，這樣，從_____________或____________中，就可以提取出大量的單克隆抗體了。羊紅細(xì)胞相應(yīng)的B淋巴骨髓瘤B淋巴選擇性未融合的親本融合的具有同種核迅速大量繁殖產(chǎn)生專一抗體克隆化培養(yǎng)抗體檢測細(xì)胞培養(yǎng)液小鼠腹水4、單克隆抗體的應(yīng)用

單克隆抗體最主要的優(yōu)點(diǎn)在于它的____________、___________________________。

①作為診斷試劑

由于單克隆抗體純度高、特異性強(qiáng)，所以能準(zhǔn)確地識別各種______物質(zhì)的細(xì)微差異，并跟一定抗原發(fā)生_____________，因此，單克隆抗體在診斷的應(yīng)用上，具有準(zhǔn)確、高效、簡易、快速的優(yōu)點(diǎn)。特異性強(qiáng)靈敏度高并可大量制備抗原特異性結(jié)合抗（人絨毛膜促性腺激素）單克隆抗體

在受精后不久，胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞就會分泌人絨毛膜促性腺激素(HCG)，一種糖蛋白類激素，在孕婦的尿液中大量存在。而在非妊娠婦女尿液中幾乎不含有。

思考、正常的性成熟女性每個(gè)月都會排卵，最佳受精時(shí)間為排卵后24-36小時(shí)。在女性的月經(jīng)周期中，尿液中的促黃體生成素（SH）會在排卵前24小時(shí)左右出現(xiàn)高峰值。據(jù)此可推測，排卵試紙起核心作用的物質(zhì)是___________________?？勾冱S體生成素單克隆抗體

②用于疾病檢測

甲胎蛋白（AFP）是一種特異性較強(qiáng)的腫瘤標(biāo)志物，用甲胎蛋白作為______免疫小鼠，制備__________________，并與含有放射性同位素的標(biāo)記物連接，單克隆抗體攜帶放射性標(biāo)記物通過血液可到達(dá)全身幾乎所有組織。由于腫瘤細(xì)胞表面的______會和單克隆抗體特異性的結(jié)合，所以放射性同位素標(biāo)記物就不斷積累在______上。通過一定的顯影技術(shù)就可以發(fā)現(xiàn)腫瘤所在。抗原抗AFP單克隆抗體AFP腫瘤資料：使用高效的細(xì)胞毒素類藥物進(jìn)行化療可以有效殺傷腫瘤細(xì)胞。ADC示意圖問題：細(xì)胞毒素沒有特異性，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)還會對健康細(xì)胞造成傷害。解決方法：抗體—藥物偶聯(lián)物(ADC)，將細(xì)胞毒素與能特異性識別腫瘤抗原的單克隆抗體結(jié)合，實(shí)現(xiàn)了對腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷。抗體藥物接頭ADC的作用機(jī)制示意圖①ADC②③④溶酶體裂解釋放藥物⑤細(xì)胞凋亡脂質(zhì)體給藥：高效、低毒、靶向動物細(xì)胞融合與單克隆抗體注射特定蛋白免疫小鼠培養(yǎng)小鼠骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞（A）多種細(xì)胞多種雜交瘤細(xì)胞能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞選擇培養(yǎng)基篩選克隆化培養(yǎng)專一抗體檢測注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖體外培養(yǎng)單克隆抗體融合雜交瘤細(xì)胞A、B、