提能訓(xùn)練練案[45]A組一、選擇題1．(2025·高中生物規(guī)范訓(xùn)練)下列關(guān)于基因工程的敘述錯(cuò)誤的是()A．基因的“剪刀”是限制酶B．基因的“針線”是DNA聚合酶C．常用的運(yùn)載體有質(zhì)粒、噬菌體和動(dòng)植物病毒D．基因工程操作的核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建答案：B解析：限制酶能識(shí)別DNA分子中特定的堿基序列進(jìn)而在該部位對(duì)DNA分子實(shí)現(xiàn)剪切，因而被稱為基因的“剪刀”，A正確；DNA連接酶能夠?qū)蓚€(gè)DNA片段通過磷酸二酯鍵連接起來，因而被稱為基因的“針線”，B錯(cuò)誤；目前常用的運(yùn)載體有質(zhì)粒、噬菌體和動(dòng)植物病毒，C正確；基因工程的操作一般有四個(gè)步驟，目的基因的篩選與獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)與鑒定，其中基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心步驟，D正確。2．(2024·北師大附中隨堂檢測(cè))下列有關(guān)限制性內(nèi)切核酸酶的敘述，正確的是()A．用限制酶切割DNA分子獲得一個(gè)目的基因時(shí)，被水解的磷酸二酯鍵有2個(gè)B．限制酶識(shí)別序列越短，則該序列在DNA中出現(xiàn)的概率就越大C．－CATG↓－和－G↓GATCC－序列被限制酶切出的黏性末端可用DNA連接酶連接D．只有用相同的限制酶處理含目的基因的片段和質(zhì)粒，才能形成重組質(zhì)粒答案：B解析：用限制性內(nèi)切核酸酶切割一個(gè)DNA分子獲得一個(gè)目的基因時(shí)，需要切割目的基因的兩側(cè)，因此要斷裂4個(gè)磷酸二酯鍵，即被水解的磷酸二酯鍵有4個(gè)，A錯(cuò)誤；限制性內(nèi)切核酸酶能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，其識(shí)別序列越短，則該序列在DNA中出現(xiàn)的概率就越大，B正確；－CATG↓－和－G↓GATCC－序列被限制酶切出的黏性末端不同，分別為CATG和GATC，不能用DNA連接酶連接，C錯(cuò)誤；用不同的限制性內(nèi)切核酸酶處理含目的基因的DNA片段和質(zhì)粒，若產(chǎn)生的黏性末端相同，也能形成重組質(zhì)粒，D錯(cuò)誤。3．(2025·北師大附中模擬)在重組DNA技術(shù)中，將外源基因?qū)胧荏w細(xì)胞，通常是利用質(zhì)粒作為載體，下列關(guān)于質(zhì)粒的說法正確的是()A．質(zhì)粒是獨(dú)立于原核細(xì)胞擬核DNA之外的雙鏈DNA分子B．沒有限制酶就無法使用質(zhì)粒，其復(fù)制和表達(dá)不遵循中心法則C．質(zhì)粒只有把目的基因整合到受體細(xì)胞的DNA中才能表達(dá)D．真正被用作載體的質(zhì)粒都是對(duì)天然質(zhì)粒進(jìn)行過人工改造的答案：D解析：質(zhì)粒是存在于許多細(xì)菌擬核DNA之外以及酵母菌(真核細(xì)胞)細(xì)胞核外的、有自主復(fù)制能力的小型環(huán)狀DNA分子，A錯(cuò)誤；質(zhì)粒的復(fù)制和表達(dá)都遵循中心法則，B錯(cuò)誤；只需要將含有目的基因的質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞，無需整合到受體細(xì)胞的DNA中也能表達(dá)，C錯(cuò)誤；天然的質(zhì)粒不能直接作為載體，基因工程中用到的質(zhì)粒都是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上進(jìn)行過人工改造的，D正確。4．如表列舉了幾種限制酶的識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)(箭頭表示相關(guān)酶的切割位點(diǎn))。圖是酶切后產(chǎn)生的幾種末端。下列說法正確的是()限制酶AluⅠBamHⅠSmaⅠSau3AⅠ識(shí)別序列A．BamHⅠ切割的是氫鍵，AluⅠ切割的是磷酸二酯鍵B．Sau3AⅠ和BamHⅠ切割產(chǎn)生的片段能夠相連，但連接后的片段兩者都不能再切割C．②④⑤對(duì)應(yīng)的識(shí)別序列均能被Sau3AⅠ識(shí)別并切割D．T4DNA連接酶即能連接①③，也能連接②⑤，但后者連接效率低答案：C解析：BamHⅠ與AluⅠ切割的均是磷酸二酯鍵，A錯(cuò)誤；BamHⅠ切割G↓GATCC，Sau3AⅠ切割↓GATC，故二者切割后產(chǎn)生的黏性末端是相同的，因此二者切割后產(chǎn)生的黏性末端能夠相連，連接后仍然存在GATC的序列，能被Sau3AⅠ切割，但是BamHⅠ不一定能切割，B錯(cuò)誤；②④⑤對(duì)應(yīng)的識(shí)別序列都存在GATC，都能被Sau3AⅠ識(shí)別并切割，C正確；T4DNA連接酶既可以連接黏性末端也可以連接平末端，而圖中①③屬于平末端，②⑤是黏性末端，T4DNA連接酶連接平末端時(shí)效率較低，D錯(cuò)誤。5．(2025·東北育才學(xué)校適應(yīng)性測(cè)試)常規(guī)PCR只能擴(kuò)增兩引物間的DNA區(qū)段，要擴(kuò)增已知DNA序列兩側(cè)的未知DNA序列，可用反向PCR技術(shù)。反向PCR技術(shù)擴(kuò)增的原理如圖所示。下列敘述正確的是()A．酶切階段，L中不能含有酶切時(shí)所選限制酶的識(shí)別序列B．環(huán)化階段，可選E.coliDNA連接酶而不能選T4DNA連接酶C．應(yīng)選擇引物2和引物3進(jìn)行PCR，且二者不能互補(bǔ)配對(duì)D．PCR擴(kuò)增，每輪循環(huán)前應(yīng)加入限制酶將環(huán)狀DNA切割成線狀答案：A解析：在酶切階段，已知序列L中不能含有酶切時(shí)所選限制酶的識(shí)別序列，不然會(huì)將已知序列L切斷，造成序列識(shí)別混亂，A正確；T4DNA連接酶或E.coliDNA連接酶都可以用來連接黏性末端，因此環(huán)化階段，可選用E.coliDNA連接酶或T4DNA連接酶，B錯(cuò)誤；PCR過程需要兩種引物，能分別與目的基因兩條鏈的3′端通過堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合，為保證延伸的是已知序列兩側(cè)的未知序列，應(yīng)該選擇引物1和引物4，且二者間不能互補(bǔ)配對(duì)，C錯(cuò)誤；PCR的擴(kuò)增只需要第一次循環(huán)前加入足夠的限制酶，并不需要每輪都加入，D錯(cuò)誤。6．(2024·山東日照校際聯(lián)合考試)下列關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)的敘述，錯(cuò)誤的是()A．可選用在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)的大腸桿菌作為實(shí)驗(yàn)材料B．向含DNA的濾液中加入2mol/L的NaCl溶液，有利于去除雜質(zhì)C．將過濾液放入4℃D．鑒定DNA時(shí)，將二苯胺試劑加入到含DNA的溶液中即可出現(xiàn)藍(lán)色答案：D解析：大腸桿菌是細(xì)菌，含有擬核和質(zhì)粒，DNA含量也較多，適合提取DNA，故可選用在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)的大腸桿菌作為實(shí)驗(yàn)材料，A正確；在2mol/L的NaCl溶液中DNA的溶解度較高，攪拌過濾后，DNA存在于濾液中，有利于去除雜質(zhì)，B正確；酶活性的發(fā)揮需要適宜的溫度等條件，將過濾液放入4℃7．用A和B兩種限制酶同時(shí)和分別處理同一DNA片段，限制酶對(duì)應(yīng)切點(diǎn)一定能切開。兩種酶切位點(diǎn)及酶切產(chǎn)物電泳分離結(jié)果如圖1和圖2所示。下列敘述錯(cuò)誤的是()A．圖1中限制酶A、B識(shí)別的核苷酸序列不相同B．圖1中X代表的堿基對(duì)數(shù)為4500C．推測(cè)圖1中Y是限制酶B的酶切位點(diǎn)D．推測(cè)圖2中①是限制酶A處理得到的酶切產(chǎn)物答案：C解析：酶具有專一性，不同的限制酶識(shí)別并切割不同的核苷酸序列，A正確；從圖2的A＋B酶一組結(jié)果可知，限制酶A和B切完后總共有4個(gè)片段，長度分別為500、1500、3500、4500，而圖1表示酶A和B切割時(shí)只會(huì)得到3個(gè)片段，長度應(yīng)該是3500、X、2000，所以可推測(cè)Y是限制酶A或限制酶B的酶切位點(diǎn)，X代表的堿基對(duì)數(shù)為4500，B正確，C錯(cuò)誤；根據(jù)以上結(jié)論，圖1中有兩個(gè)限制酶A的酶切位點(diǎn)，切割完后得到三個(gè)長度的片段：3500、(4500＋1500)、500，正好與圖2的①結(jié)果相符，故推測(cè)圖2中①是限制酶A處理得到的酶切產(chǎn)物，D正確。二、非選擇題8．(2024·遼寧高三聯(lián)考三模)某真菌的W基因可編碼一種高效降解纖維素的酶：已知圖中W基因轉(zhuǎn)錄方向?yàn)閺淖笸摇槭狗啪€菌產(chǎn)生該酶，以圖1中質(zhì)粒為載體，進(jìn)行轉(zhuǎn)基因。不同限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)如下表所示。請(qǐng)回答下列問題：限制酶BamHⅠEcoRⅠMfeⅠKpnⅠHindⅢ識(shí)別序列及切割位點(diǎn)G↓GATTCG↓AATTCC↓AATTGGGTAC↓CA↓AGCTT(1)限制酶主要是從____________中分離純化出來的。應(yīng)使用限制酶____________切割圖1中質(zhì)粒，使用限制酶____________切割圖2中含W基因的DNA片段，以獲得能正確表達(dá)W基因的重組質(zhì)粒。(2)與質(zhì)粒中啟動(dòng)子結(jié)合的酶是____________。啟動(dòng)子通常具有物種特異性，在質(zhì)粒中插入W基因，其上游啟動(dòng)子應(yīng)選擇________啟動(dòng)子(選填“植物”“真菌”或“放線菌”)。(3)W基因轉(zhuǎn)錄的模板鏈?zhǔn)莀_______(選填“甲鏈”或“乙鏈”)。利用PCR技術(shù)對(duì)W基因進(jìn)行擴(kuò)增的原理是________，子鏈的延伸方向是________。(4)研究人員欲對(duì)W基因的mRNA進(jìn)行RT－PCR，已知其mRNA的序列為5′－UGAACGCUA…(中間序列)…GUCGACUCG－3′。為了便于將擴(kuò)增后的基因和載體成功構(gòu)建成重組質(zhì)粒，用于PCR擴(kuò)增的引物應(yīng)為________。A．5′－TGAACGCTA…B．5′－CCAGTCGAC…C．5′－GAATTCTGA…D．5′－AAGCTTCGA…答案：(1)原核生物MfeⅠ、HindⅢEcoRⅠ、HindⅢ(2)RNA聚合酶放線菌(3)乙鏈DNA半保留復(fù)制5′→3′(4)A解析：(1)限制酶主要是從原核生物分離純化出來的。根據(jù)題圖信息“圖中W基因轉(zhuǎn)錄方向是從左往右”“質(zhì)粒啟動(dòng)子到終止子方向?yàn)轫槙r(shí)針”，故重組質(zhì)粒的啟動(dòng)子應(yīng)在W基因左側(cè)，終止子應(yīng)在W基因右側(cè)，W基因右側(cè)只能用HindⅢ切割，W基因左側(cè)有BamHⅠ、KpnⅠ、EcoRⅠ三種酶切位點(diǎn)，結(jié)合質(zhì)粒情況及切割位點(diǎn)識(shí)別序列，應(yīng)使用限制酶MfeⅠ、HindⅢ切割圖中質(zhì)粒，使用限制酶EcoRⅠ(切割出的黏性末端與MfeⅠ相同)、HindⅢ切割圖中含W基因的DNA片段，以獲得能正確表達(dá)W基因的重組質(zhì)粒，因?yàn)橄拗泼窶feⅠ和限制酶EcoRⅠ切割露出相同的黏性末端。(2)啟動(dòng)子啟動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄，故與質(zhì)粒中啟動(dòng)子結(jié)合的酶是RNA聚合酶；根據(jù)題干信息“啟動(dòng)子通常具有物種特異性”，目標(biāo)是使放線菌產(chǎn)生高效降解纖維素的酶，故應(yīng)選擇放線菌的質(zhì)粒，在質(zhì)粒中插入W基因，其上游啟動(dòng)子應(yīng)選擇放線菌啟動(dòng)子。(3)W基因轉(zhuǎn)錄方向是從左向右，mRNA鏈的合成方向?yàn)?′→3′，與乙鏈從左向右3′→5′互補(bǔ)，故W基因轉(zhuǎn)錄的模板鏈?zhǔn)且益?。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的原理是DNA半保留復(fù)制，子鏈延伸方向?yàn)?′→3′。(4)引物與模板鏈的3′端結(jié)合，mRNA也與模板鏈結(jié)合，因此引物與mRNA序列相似，不同的是引物是一段DNA，因此將mRNA中的U替換成T即是引物序列，即5′－UGAAC－CCUA…(中間序列)…GUCCACUCG－3′?5′－TGAACCCTA…(中間序列)…GTCCACTCG－3′，與A相同。故選A。B組一、選擇題1．(2025·高中生物北師大版同步訓(xùn)練)如表為幾種限制酶的切割位點(diǎn)，相關(guān)敘述不正確的是()限制酶BamHⅠBclⅠSau3AⅠ識(shí)別序列及切割位點(diǎn)G↓GATCCCCTAG↑GT↓GATCAACTAG↑T↓GATCCTAG↑A.限制酶能夠水解DNA上特定的磷酸二酯鍵B．BamHⅠ切割的序列一定能被Sau3AⅠ切割C．BclⅠ切割的序列一定能被Sau3AⅠ切割D．以上信息說明限制酶沒有特異性和專一性答案：D解析：限制酶能夠水解DNA上特定的磷酸二酯鍵，形成黏性末端或平末端，A正確；Sau3AⅠ識(shí)別的序列為↓GATC，BamHⅠ識(shí)別的序列為G↓GATCC，后者識(shí)別序列中包含前者，因此BamHⅠ切割的序列一定能被Sau3AⅠ切割，B正確；BclⅠ識(shí)別序列包含Sau3AⅠ的識(shí)別序列，因此BclⅠ切割的序列一定能被Sau3AⅠ切割，C正確；限制酶需要識(shí)別特定的序列后進(jìn)行切割，以上信息說明限制酶有特異性和專一性，D錯(cuò)誤。2．(2024·沈陽二中三模)將熒光蛋白基因與目的基因連接后導(dǎo)入植物體細(xì)胞中，其表達(dá)產(chǎn)物既具有熒光蛋白的特性，又保持了目的基因表達(dá)產(chǎn)物的活性，因此可以通過檢測(cè)熒光強(qiáng)度來檢測(cè)目的基因的表達(dá)水平。下列有關(guān)該技術(shù)的說法錯(cuò)誤的是()A．可使用同種限制酶切割熒光蛋白基因和目的基因以便連接B．需要將熒光蛋白基因和目的基因分別連接在不同的啟動(dòng)子后面C．熒光強(qiáng)度高的細(xì)胞，目的基因的表達(dá)水平一般也高D．熒光蛋白還可用于檢測(cè)目的基因表達(dá)產(chǎn)物的轉(zhuǎn)移和分布情況答案：B解析：使用同種限制酶切割熒光蛋白基因和目的基因，可以形成相同的末端，以便連接，A正確；需要將熒光蛋白基因和目的基因連接在相同的啟動(dòng)子后面，B錯(cuò)誤；熒光蛋白基因進(jìn)入受體細(xì)胞后會(huì)表達(dá)出熒光蛋白，熒光強(qiáng)度高的細(xì)胞，目的基因的表達(dá)水平一般也高，C正確；熒光蛋白基因與目的基因連接后導(dǎo)入植物體細(xì)胞中，其表達(dá)產(chǎn)物具有熒光蛋白的特性，可以通過檢測(cè)熒光強(qiáng)度來檢測(cè)目的基因表達(dá)產(chǎn)物的轉(zhuǎn)移和分布情況，D正確。3．(2024·大連市高三二模)將棉花的酶D基因與擬南芥的轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因相連，導(dǎo)入雙子葉植物油菜的葉片細(xì)胞，可培育出高產(chǎn)轉(zhuǎn)基因油菜品種。下圖是需要用到的Ti質(zhì)粒。下列敘述錯(cuò)誤的是()A．必須用相同的限制酶對(duì)目的基因和T－DNA進(jìn)行切割B．四環(huán)素抗性基因不可檢測(cè)目的基因是否表達(dá)成功C．將重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌后，再用其侵染油菜葉片細(xì)胞D．兩個(gè)基因的表達(dá)產(chǎn)物不能影響油菜葉片細(xì)胞的存活答案：A解析：對(duì)目的基因和T－DNA進(jìn)行切割需要形成相同的黏性末端，除用相同的限制酶外，也可用同尾酶(不同的限制酶，卻能形成相同的黏性末端)切割，A錯(cuò)誤；四環(huán)素抗性基因?qū)儆跇?biāo)記基因，可用于重組質(zhì)粒的初步篩選，但不能用于檢測(cè)目的基因是否表達(dá)成功，B正確；將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，將重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌后，再用其侵染油菜葉片細(xì)胞，C正確；目的基因不能影響植物正常的生長，故兩個(gè)基因的表達(dá)產(chǎn)物不能影響油菜葉片細(xì)胞的存活，D正確。4．(2024·沈陽市第二中學(xué)五模)下圖為基因工程部分操作步驟，質(zhì)粒的外側(cè)鏈為a鏈，內(nèi)側(cè)鏈為b鏈?；駻mpr轉(zhuǎn)錄的模板鏈屬于a鏈的片段。ALDH2基因編碼區(qū)首端到末端(其中一條鏈)的序列為5′－ATCCATGCGCTC…(中間核苷酸序列)…CAGTGAGTAGCG－3′。四種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)見下表。以下說法不正確的是()注：Ampr為氨芐青霉素抗性基因，Tetr為四環(huán)素抗性基因限制酶BamHⅠPstⅠXhoⅠXbaⅠ識(shí)別序列和切割位點(diǎn)(5′→3′)G↓GATCCC↓TGCAGC↓TCGAGT↓CTAGAA.質(zhì)粒復(fù)制的模板鏈?zhǔn)恰癮和b”，基因Tetr轉(zhuǎn)錄的模板鏈?zhǔn)莃鏈的片段B．過程②是基因工程的核心步驟，過程④的培養(yǎng)基具有鑒定作用C．為擴(kuò)增目的基因，需選擇的引物對(duì)為：5′－TCTAGACGCTACTCACTG－3′和5′－GGATCCATCCATGCGCTC－3′D．根據(jù)選定的引物，經(jīng)過5次循環(huán)，即可獲得32個(gè)符合要求的目的基因答案：D解析：質(zhì)粒的a和b兩條鏈都作為模板進(jìn)行復(fù)制，Tetr的轉(zhuǎn)錄方向與Ampr的轉(zhuǎn)錄方向相反，說明Tetr的轉(zhuǎn)錄模板和Ampr轉(zhuǎn)錄模板不在一條鏈上，Ampr轉(zhuǎn)錄的模板鏈屬于a鏈的片段，則Tetr的轉(zhuǎn)錄模板鏈屬于b鏈的片段，A正確；過程②表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建，是基因工程的核心步驟，過程④表示目的基因的檢測(cè)與鑒定，所以該培養(yǎng)基具有鑒定作用，B正確；擴(kuò)增目的基因需要兩種引物，能分別與目的基因兩條鏈的3′端通過堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合。根據(jù)ALDH2基因編碼區(qū)首端到末端的序列為5′－ATCCATGCGGCTC…(中間核苷酸序列)…CAGTGAGTAGCG－3′，且引物5′端需要添加BamHⅠ、XbaⅠ的識(shí)別序列，可推測(cè)引物鏈為5′－TCTAGACGCTACTCACTG－3′，5′－GGATCCATCCATGCGCTC－3′，C正確；利用PCR技術(shù)可以擴(kuò)增目的基因，根據(jù)DNA半保留復(fù)制的特點(diǎn)，根據(jù)PCR反應(yīng)原理，前兩次循環(huán)無法得到符合要求的目的基因，第3次循環(huán)可以得到等長雙鏈，這樣的雙鏈DNA分子的兩端兩條鏈均有限制酶識(shí)別序列。3次循環(huán)可以得到2個(gè)，4次循環(huán)后有8個(gè)符合要求的目的基因，以此類推，可推知，經(jīng)過6次循環(huán)，可獲得32個(gè)符合要求的目的基因，D錯(cuò)誤。5．(2024·山東德州一中三模)研究人員用酶M和酶N兩種限制酶同時(shí)處理某DNA分子和質(zhì)粒，得到的DNA片段如圖所示。圖中DNA片段只注明了黏性末端處的堿基種類，其他堿基的種類未注明。下列敘述錯(cuò)誤的是()A．該DNA分子和質(zhì)粒上均含有酶M的一個(gè)切割位點(diǎn)和酶N的一個(gè)切割位點(diǎn)B．根據(jù)圖示信息不能確定圖中形成的不同黏性末端與這兩種限制酶的對(duì)應(yīng)關(guān)系C．用T4DNA連接酶或E.coliDNA連接酶均可以將片段乙和片段丁連接起來D．片段乙、片段丁、片段戊可依次連接形成一個(gè)環(huán)狀DNA分子答案：D解析：該DNA分子經(jīng)酶M和酶N兩種限制酶切割后，產(chǎn)生了三個(gè)DNA片段且兩個(gè)切口形成的黏性末端不同，說明該DNA分子含有酶M的一個(gè)切割位點(diǎn)和酶N的一個(gè)切割位點(diǎn)；質(zhì)粒為環(huán)狀DNA，其經(jīng)酶M和酶N兩種限制酶切割后，產(chǎn)生了兩個(gè)DNA片段，觀察兩個(gè)切口形成的黏性末端，可推出質(zhì)粒含有酶M的一個(gè)切割位點(diǎn)和酶N的一個(gè)切割位點(diǎn)，A正確；根據(jù)圖中黏性末端可知，酶M和酶N識(shí)別的序列可能是或，但無法確定其對(duì)應(yīng)關(guān)系，B正確；圖中經(jīng)酶切后形成的片段均是黏性末端，T4DNA連接酶既可以“縫合”雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端，也可以“縫合”雙鏈DNA片段的平末端，而E.coliDNA連接酶只能將具有互補(bǔ)黏性末端的DNA片段連接起來，片段乙和片段丁黏性末端互補(bǔ)，C正確；根據(jù)圖中黏性末端可知，片段乙、片段丁、片段戊三個(gè)片段不能連接成環(huán)狀DNA分子，D錯(cuò)誤。6．(2025·遼寧省朝陽市期末試題)花粉管通道法是我國科學(xué)家獨(dú)創(chuàng)的介導(dǎo)植物基因轉(zhuǎn)化的一種方法，其原理是在植物受粉的特定時(shí)期，將外源DNA溶液涂于柱頭上，利用植物在開花、受精過程中形成的花粉管通道，將外源DNA導(dǎo)入受精卵細(xì)胞，并進(jìn)一步整合到受體細(xì)胞的基因組中，過程如圖所示。下列相關(guān)說法錯(cuò)誤的是()A．外源DNA需要構(gòu)建基因表達(dá)載體才能借助圖示方法實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化B．構(gòu)建的基因表達(dá)載體必須含有起始密碼子，以作為轉(zhuǎn)錄的起始位點(diǎn)C．外源DNA進(jìn)入圖中的受精卵后，可以整合到其染色體的DNA上D．相比于農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，花粉管通道法可省去植物組織培養(yǎng)這一操作答案：B解析：要讓目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞后能穩(wěn)定存在并得到復(fù)制和表達(dá)，不管采用什么導(dǎo)入方法，都需要構(gòu)建基因表達(dá)載體才能實(shí)現(xiàn)，外源DNA也需要構(gòu)建基因表達(dá)載體才能借助圖示方法實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化，A正確；起始密碼子存在于mRNA上，不在基因表達(dá)載體(DNA)上，B錯(cuò)誤；外源DNA進(jìn)入圖中的受精卵后，可以整合到染色體的DNA上，從而實(shí)現(xiàn)復(fù)制和表達(dá)，C正確；花粉管通道法可以直接實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因植物的自然生成，而農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法需要對(duì)成功導(dǎo)入目的基因的受體細(xì)胞進(jìn)行植物組織培養(yǎng)獲得轉(zhuǎn)基因植物，而花粉管通道法避免了植物組織培養(yǎng)這一操作，D正確。7．(2024·東北師大附中模擬)“DNA粗提取與鑒定”的操作步驟為研磨→去雜→析出→鑒定。某研究組欲探究不同去雜方法對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響(如下表)。下列敘述不正確的是()去雜質(zhì)方式沉淀質(zhì)量(g)DNA濃度(ng·μL－1)OD260/OD280二苯胺鑒定離心0.068081.501.53藍(lán)色4℃0.1028336.41.41藍(lán)色注：OD260與OD280的比值可檢查DNA純度；純DNA的OD260/OD280為1.8，當(dāng)存在蛋白質(zhì)污染時(shí)，這一比值會(huì)明顯降低。A．豬肝、菜花、草莓均可作為提取DNA的材料B．對(duì)研磨液進(jìn)行離心的目的是加速DNA的沉淀C．離心法可以獲得更高純度的DNAD．析出時(shí)的離心轉(zhuǎn)速明顯高于去雜質(zhì)時(shí)答案：B解析：DNA粗提取與鑒定的實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)選擇富含DNA的材料，豬肝、菜花、草莓均可作為提取DNA的材料，A正確；離心研磨液的目的是加速沉淀，離心能夠加速細(xì)胞膜、細(xì)胞器、一些較大雜質(zhì)的沉淀，離心法可以獲得更高純度的DNA，B錯(cuò)誤，C正確；據(jù)表可知，離心時(shí)DNA濃度是81.5ng·μL－1,4℃冰箱靜置時(shí)是336.4ng·μL－1，說明靜置時(shí)蛋白質(zhì)含量較多，沉淀質(zhì)量離心時(shí)是0.068g,4℃冰箱靜置時(shí)是0.102二、非選擇題8．(2025·湖南九校聯(lián)盟)在未斷奶的小牛胃中存在一種凝乳酶，被廣泛應(yīng)用于奶酪和酸奶的生產(chǎn)?？茖W(xué)家將編碼牛凝乳酶的基因(長度1.5kb)導(dǎo)入大腸桿菌獲得工程菌，再通過工業(yè)發(fā)酵批量生產(chǎn)凝乳酶。(1)提取小牛胃黏膜組織中的mRNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA，選擇合適的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR引物堿基數(shù)一般在20～30個(gè)之間，過短則導(dǎo)致________________________。(2)如表為操作過程中可能用到的限制酶，圖1為獲得的目的基因及末端(除黏性末端序列外，其他堿基序列省略)，圖2為要使用的質(zhì)粒，其中的Tetr、Ampr分別為四環(huán)素抗性基因和氨芐青霉素抗性基因。對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行切割時(shí)，選用的兩種限制酶為____________。目的基因和質(zhì)粒能連接成重組質(zhì)粒的原因是__________________________，導(dǎo)入的目的基因在受體細(xì)胞中能成功表達(dá)的理論基礎(chǔ)是__________________________________。限制酶BamHⅠBclⅠSmaⅠSau3AⅠ識(shí)別位點(diǎn)及切割位點(diǎn)—G↓GATCC——T↓GATCA——CCC↓GGG——↓GATC—(3)將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌接種在含________的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，隨機(jī)挑取菌落(分別編號(hào)為1、2、3、4)培養(yǎng)并提取質(zhì)粒，用(2)中選用的兩種限制酶進(jìn)行酶切，酶切產(chǎn)物經(jīng)電泳分離，結(jié)果如下圖，________號(hào)菌落的質(zhì)粒很可能是含目的基因的重組質(zhì)粒。注：M為指示分子大小的標(biāo)準(zhǔn)參照物；小于0.2kb的DNA分子條帶未出現(xiàn)在圖中(4)已知凝乳酶第20、24位氨基酸變成半胱氨酸，其活性可顯著提高。科研人員希望運(yùn)用蛋白質(zhì)工程技術(shù)獲得活性更強(qiáng)的凝乳酶，請(qǐng)選用合適的措施編號(hào)并排序：________________。(用箭頭表示)①重組DNA分子導(dǎo)入大腸桿菌②隨機(jī)改變凝乳酶基因的序列③分析突變蛋白功能，設(shè)計(jì)結(jié)構(gòu)④改變凝乳酶基因的特定序列⑤培養(yǎng)細(xì)胞后提純突變蛋白⑥將改變后的凝乳酶基因與質(zhì)粒重組答案：(1)特異性降低(2)BclⅠ和SmaⅠ有相同的黏性末端可發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)遺傳信息的傳遞都遵循中心法則或生物界共用一套遺傳密碼(3)四環(huán)素2(4)③→④→⑥→①→⑤解析：(1)引物與模板之間遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，若引物太短則特異性降低。(2)基因表達(dá)載體構(gòu)建時(shí)，需要將目的基因和載體切出相同的黏性末端，圖示BamHⅠ會(huì)破壞目的基因，故對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行切割時(shí)，選用的兩種酶為BclⅠ和SmaⅠ。目的基因和質(zhì)粒能連接成重組質(zhì)粒的原因是有相同的黏性末端可發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)，導(dǎo)入的目的基因在受體細(xì)胞中能成功表達(dá)的理論基礎(chǔ)是遺傳信息的傳遞都遵循中心法則或生物界共用一套遺傳密碼。(3)圖中構(gòu)建目的基因表達(dá)載體時(shí)，氨芐青霉素抗性基因被限制酶破壞，故將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌接種在四環(huán)素的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)及篩選；如果用BclⅠ和SmaⅠ兩種酶切割重組質(zhì)粒，電泳后將獲得分別含有質(zhì)粒和目的基因的兩條條帶，2、3含有兩條條帶，2中其中一條條帶為1.5kb,3中其中一條條帶為1kb，由于牛凝乳酶的基因大小為1.5kb，所以對(duì)應(yīng)電泳圖是菌落2很可能是含目的基因的重組質(zhì)粒。(4)蛋白質(zhì)工程的過程為：預(yù)期蛋白質(zhì)功能→設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測(cè)應(yīng)有氨基酸序列→找到對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列(基因)，其前提是基因工程，故運(yùn)用蛋白質(zhì)工程技術(shù)從大腸桿菌中獲得活性更強(qiáng)的凝乳酶，具體過程為：③分析突變蛋白功能，設(shè)計(jì)結(jié)構(gòu)→④改變凝乳酶基因的特定序列→⑥將改變后的凝乳酶基因與質(zhì)粒重組→①重組DNA分子導(dǎo)入大腸桿菌→⑤培養(yǎng)細(xì)胞后提純突變蛋白。C組一、選擇題1．(2025·北師大附中模擬)限制性內(nèi)切酶介導(dǎo)的整合技術(shù)(REMI)是一種研究基因的新方法。用限制酶切得到的線性質(zhì)粒與該酶組成的轉(zhuǎn)化混合物進(jìn)入并轉(zhuǎn)化細(xì)胞時(shí)，會(huì)切割受體細(xì)胞基因組，產(chǎn)生與線性質(zhì)?；パa(bǔ)的黏性末端，線性質(zhì)粒通過堿基配對(duì)插入基因組。如果插入發(fā)生在一個(gè)已知基因的內(nèi)部，則該基因的功能可能改變或喪失，即發(fā)生了基因突變。下列相關(guān)敘述，不正確的是()A．當(dāng)外源質(zhì)粒帶有抗性基因時(shí)，可根據(jù)其在受體細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)情況篩選轉(zhuǎn)化細(xì)胞B．REMI技術(shù)使基因突變具有隨機(jī)性，且限制酶識(shí)別序列越長，隨機(jī)性越大C．所有的限制酶都具有專一性D．限制酶、DNA連接酶、載體是REMI技術(shù)的三種分子工具答案：B解析：抗性基因?qū)儆跇?biāo)記基因，標(biāo)記基因可將含有目的基因的重組質(zhì)粒篩選出來，故當(dāng)外源質(zhì)粒帶有抗性基因時(shí)，可根據(jù)其在受體細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)情況篩選轉(zhuǎn)化細(xì)胞，A正確；分析題意可知，REMI技術(shù)是一種切割基因的方法，其本質(zhì)是基因工程，該技術(shù)可引發(fā)基因突變；由于限制酶能夠識(shí)別特定序列，并在特定位點(diǎn)進(jìn)行切割，故限制酶識(shí)別序列越長，隨機(jī)性越小，B錯(cuò)誤；限制酶能識(shí)別特定的核苷酸序列，并在特定位點(diǎn)進(jìn)行切割，即所有的限制酶都具有專一性，C正確；結(jié)合題意可知，REMI技術(shù)需要用限制酶切割質(zhì)粒，且需要進(jìn)入受體細(xì)胞發(fā)揮作用，則其本質(zhì)是基因工程技術(shù)，基因工程中需要用到限制酶、DNA連接酶、載體三種工具，D正確。2．CRISPR－Cas9是近年來生物學(xué)科研的熱門技術(shù)，該技術(shù)是細(xì)菌的一種防御機(jī)制。如圖所示，當(dāng)細(xì)菌感知到噬菌體侵入時(shí)，會(huì)通過gRNA識(shí)別噬菌體DNA，并通過Cas9蛋白切斷目標(biāo)DNA，從而起到防御作用。下列關(guān)于該機(jī)制的敘述正確的是()A．噬菌體DNA的變化體現(xiàn)了基因突變的不定向性B．gRNA與目標(biāo)DNA結(jié)合片段中最多含有5種核苷酸C．Cas9蛋白可破壞DNA分子的磷酸二酯鍵D．高倍光學(xué)顯微鏡可觀察到該現(xiàn)象答案：C解析：噬菌體被細(xì)菌gRNA識(shí)別并被Cas9蛋白切割屬于特定位點(diǎn)的切割，不是基因突變，不能體現(xiàn)基因突變的不定向性，A錯(cuò)誤；gRNA為RNA，最多含有4種核糖核苷酸，DNA含有4種脫氧核苷酸，故gRNA與目標(biāo)DNA結(jié)合片段中最多含有8種核苷酸，B錯(cuò)誤；Cas9蛋白可切斷目標(biāo)DNA，該過程破壞的是DNA分子的磷酸二酯鍵，C正確；該過程屬于分子水平的改變，光學(xué)顯微鏡下無法觀察到該現(xiàn)象，D錯(cuò)誤。3．(2025·山東濰坊安丘一中模擬)大腸桿菌經(jīng)溶菌酶和洗滌劑處理后，擬核DNA就會(huì)纏繞在細(xì)胞壁碎片上，靜置一段時(shí)間，質(zhì)粒分布在上清液中，利用上述原理可初步獲得質(zhì)粒DNA。用三種限制酶處理提取的產(chǎn)物，電泳結(jié)果如圖所示。下列關(guān)于質(zhì)粒的粗提取和鑒定的敘述錯(cuò)誤的是()A．提取DNA時(shí)可加入酒精，使溶于酒精的蛋白質(zhì)等物質(zhì)溶解B．將提取的DNA溶于2mol/LNaCl溶液后可用二苯胺試劑進(jìn)行鑒定C．電泳鑒定DNA利用了DNA在電場(chǎng)中會(huì)向著它所帶電荷相反的電極移動(dòng)的原理D．根據(jù)電泳結(jié)果，質(zhì)粒上一定沒有限制酶Ⅰ和Ⅱ的切割位點(diǎn)，而有限制酶Ⅲ的切割位點(diǎn)答案：D解析：由于蛋白質(zhì)可溶于酒精，而DNA在冷酒精中溶解度很低，所以在提取DNA時(shí)加入酒精，使溶于酒精的蛋白質(zhì)等物質(zhì)溶解，而讓DNA析出，A正確；由于DNA在2mol/LNaCl溶液中溶解度較大，DNA遇二苯胺試劑會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)色，所以將提取的DNA溶于2mol/LNaCl溶液后，可用二苯胺試劑在沸水浴條件下進(jìn)行鑒定，B正確；DNA帶負(fù)電，電泳鑒定DNA利用了DNA在電場(chǎng)中會(huì)向著它所帶電荷相反的電極移動(dòng)的原理，C正確；因?yàn)橘|(zhì)粒的本質(zhì)是環(huán)狀的DNA，限制酶Ⅰ和Ⅱ處理后電泳只有一條條帶，可能是該質(zhì)粒上有一個(gè)切割位點(diǎn)，也可能沒有切割位點(diǎn)，D錯(cuò)誤。4．(2024·沈陽第120中學(xué)第十次質(zhì)量監(jiān)測(cè))菊花是兩性花，LFY基因是控制植物花分生組織形成的基因。過量表達(dá)LFY導(dǎo)致植物提早開花。為使菊花花期提前，科學(xué)家制備了含有過量表達(dá)的LFY基因的轉(zhuǎn)基因菊花。重組Ti質(zhì)粒的部分信息及實(shí)驗(yàn)流程如下圖所示，其中啟動(dòng)子均為真核細(xì)胞啟動(dòng)子。下列敘述正確的是()A．在含潮霉素的培養(yǎng)基上存活的農(nóng)桿菌才可用于侵染菊花葉片B．過程①②③所使用的培養(yǎng)基中植物激素的濃度和配比可以相同C．I是一團(tuán)具有一定組織結(jié)構(gòu)松散的薄壁細(xì)胞團(tuán)，具有較強(qiáng)的分裂和分化能力D．誘導(dǎo)出芽和根的試管苗要先煉苗以適應(yīng)外界的低濕強(qiáng)光環(huán)境才可進(jìn)行移栽答案：D解析：重組質(zhì)粒中含有潮霉素抗性基因，能表達(dá)出潮霉素抗性物質(zhì)，在含潮霉素的培養(yǎng)基上存活的農(nóng)桿菌不一定是導(dǎo)入LFY基因的農(nóng)桿菌，還有可能是只導(dǎo)入質(zhì)粒的農(nóng)桿菌，因此只有在含潮霉素的培養(yǎng)基上存活并導(dǎo)入LFY基因的農(nóng)桿菌才可用于侵染菊花葉片，A錯(cuò)誤；植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基中的生長素和細(xì)胞分裂素的含量和比例會(huì)影響愈傷組織的生長和分化，在脫分化形成愈傷組織的過程中要求生長素和細(xì)胞分裂素的比例相當(dāng)，而在再分化過程中生長素和細(xì)胞分裂素比例高有利于根的分化，比例低有利于芽的分化，B錯(cuò)誤；愈傷組織是一團(tuán)排列疏松而無規(guī)則、高度液泡化的、呈無定形狀態(tài)的、具有分生能力的薄壁細(xì)胞，不具有特定的結(jié)構(gòu)和功能，C錯(cuò)誤；誘導(dǎo)出芽和根的試管苗要先煉苗有助于試管苗逐漸適應(yīng)室外環(huán)境，并減少在移栽后因氣候和土壤變化而造成的傷害，適應(yīng)外界的低濕強(qiáng)光環(huán)境才可進(jìn)行移栽，D正確。5．(2024·山東省實(shí)驗(yàn)中學(xué)二模)由于PCR擴(kuò)增出的目的基因末端為平末端，且無合適的限制酶識(shí)別序列，需借助中間載體P將目的基因接入載體E。下圖為兩種載體的結(jié)構(gòu)和相關(guān)限制酶的識(shí)別序列，下列敘述正確的是()A．構(gòu)建重組載體P時(shí)，應(yīng)選擇EcoRⅤ進(jìn)行酶切，再用T4DNA連接酶連接B．為了便于該目的基因接入載體E，可用限制酶EcoRⅤ或SmaⅠ切割載體PC．載體P不能作為基因表達(dá)載體，是因?yàn)樗缓鹗济艽a子和終止密碼子D．若受體細(xì)胞表現(xiàn)出抗性基因的相應(yīng)性狀，表明重組載體成功導(dǎo)入受體細(xì)胞答案：A解析：由于載體E只有產(chǎn)生黏性末端的酶切位點(diǎn)，要使中間載體P接入載體E，同時(shí)防止載體E自身環(huán)化，需要用兩種限制酶分別切割載體E和中間載體P，據(jù)圖可知，中間載體P和載體E均含有XhoⅠ和PstⅠ酶識(shí)別序列，故可選用XhoⅠ和PstⅠ酶進(jìn)行酶切，載體P的這兩種酶識(shí)別序列中含有EcoRⅤ識(shí)別位點(diǎn)，并且其切割的為平末端，可以用于連接目的基因，SmaⅠ酶雖然也能切割得到平末端，但是其識(shí)別位點(diǎn)沒有位于XhoⅠ和PstⅠ酶識(shí)別位點(diǎn)之間，故不能選擇其對(duì)中間載體P進(jìn)行切割，連接平末端只能用T4DNA連接酶，A正確，B錯(cuò)誤；由圖可知，不直接選擇P構(gòu)建表達(dá)載體是因?yàn)樗缓瑔?dòng)子與終止子，C錯(cuò)誤；受體細(xì)胞表現(xiàn)出抗性基因的相應(yīng)性狀，可能是導(dǎo)入了重組質(zhì)粒，也可能只導(dǎo)入了空質(zhì)粒(不含目的基因的質(zhì)粒)，D錯(cuò)誤。6．(2024·東北三省三校第二次聯(lián)考)熒光定量PCR是通過在PCR體系中添加熒光染料來記錄PCR產(chǎn)物的累積情況，從而達(dá)到對(duì)PCR過程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控的目的。CT值表示每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的熒光閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。通常情況下將已知濃度的DNA標(biāo)準(zhǔn)樣品經(jīng)過梯度稀釋后分別取樣進(jìn)行熒光定量PCR，得到一系列的CT值，以梯度稀釋后的濃度對(duì)數(shù)值作為橫坐標(biāo)，濃度所對(duì)應(yīng)的CT值為縱坐標(biāo)繪制曲線，即可得到一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線，如下圖所示，下列敘述錯(cuò)誤的是()A．熒光定量PCR反應(yīng)體系中需要添加耐高溫的DNA聚合酶B．熒光定量PCR可以用于檢測(cè)樣品中待測(cè)病毒核酸的濃度C．若兩組樣品中待測(cè)病毒核酸的濃度差了10倍，則兩組CT值的差異在3與4之間D．若標(biāo)準(zhǔn)樣品的DNA出現(xiàn)降解，則利用所得的標(biāo)準(zhǔn)曲線分析，待測(cè)樣品所測(cè)CT值偏低答案：D解析：PCR的過程包括變性、退火和延伸。DNA的雙鏈主要是靠氫鍵聯(lián)系在一起，高溫時(shí)，氫鍵很容易就被斷開了，雙鏈變成了單鏈，提供了PCR的模板。熒光定量PCR是反復(fù)多次進(jìn)行PCR，所以需要添加耐高溫的DNA聚合酶，A正確；根據(jù)題意和圖示可知，熒光定量PCR的CT值與病毒核酸濃度有關(guān)，病毒核酸濃度越高，循環(huán)數(shù)越少，CT值越小，B正確；根據(jù)圖中CT值與梯度稀釋后的濃度對(duì)數(shù)值之間的關(guān)系可知，如果PCR產(chǎn)物的濃度增加10倍，其熒光強(qiáng)度也會(huì)增加10倍，但是CT值會(huì)減少大約3.3個(gè)單位(即1個(gè)對(duì)數(shù)單位)，C正確；據(jù)圖所示，DNA標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度越高，達(dá)到設(shè)定的熒光閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)越少，CT值越小，所以，若標(biāo)準(zhǔn)樣品的DNA出現(xiàn)降解，DNA濃度下降，則標(biāo)準(zhǔn)曲線值偏高，待測(cè)樣品所測(cè)CT值偏高，D錯(cuò)誤。7．(2024·福建三校聯(lián)考)20世紀(jì)70年代，F(xiàn)redsanger發(fā)明了雙脫氧終止法對(duì)DNA進(jìn)行測(cè)序。其原理如圖，在4個(gè)試管中分別加入4種脫氧核苷三磷酸(dNTP)和1種雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP)；ddNTP可以與dNTP競(jìng)爭核苷酸鏈延長位點(diǎn)，并終止DNA片段的延伸。在4個(gè)試管中DNA鏈將會(huì)分別在A、G、C及T位置中止，并形成不同長度的DNA片段。這些片段隨后可被電泳分開并顯示出來。下列說法中正確的是()A．這種測(cè)序方法需要引物和耐高溫的DNA連接酶B．電泳圖譜中的箭頭所指的DNA片段以鳥嘌呤結(jié)尾C．測(cè)得未知DNA的序列為5′－GATTCGAGCTGA－3′D．ddNTP與dNTP競(jìng)爭的延長位點(diǎn)是核苷酸鏈的5′末端答案：B解析：這種測(cè)序方法需要引物和耐高溫的DNA聚合酶，A錯(cuò)誤；電泳圖譜中的箭頭所指的DNA片段以鳥嘌呤結(jié)尾，B正確；測(cè)得未知DNA的序列為5′－TCAGCTCGAATC－3′，C錯(cuò)誤；ddNTP與dNTP競(jìng)爭的延長位點(diǎn)是核苷酸鏈的3′末端，D錯(cuò)誤。二、非選擇題8．(2025·山東師大附中適應(yīng)性測(cè)試)P·pastoris(某種能以甲醇為唯一碳源的酵母菌)可作為生產(chǎn)抗原蛋白的工程菌。研究人員以圖1所示質(zhì)粒為載體，構(gòu)建含乙型肝炎病毒表面抗原蛋白(HBsAg)基因的重組質(zhì)粒，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入組氨酸缺陷型大腸桿菌(在缺失組氨酸的培養(yǎng)基中無法生存)中進(jìn)行擴(kuò)增，再經(jīng)酶切后導(dǎo)入酵母菌，經(jīng)同源重組整合到其染色體DNA上。請(qǐng)回答下列問題：(1)科研人員構(gòu)建HBsAg基因表達(dá)載體時(shí)，應(yīng)選用________酶對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行酶切處理，并使用E.coliDNA連接酶將擴(kuò)增后的HBsAg基因正確插入圖1所示質(zhì)粒。目的基因一般插入啟動(dòng)子的________(填“上游”或“下游”)，啟動(dòng)