本章要求掌握ELISA、帶現(xiàn)象、前帶現(xiàn)象、后帶現(xiàn)象的概念。了解血清學(xué)反應(yīng)的原理、分類及應(yīng)用。了解常用細(xì)胞免疫檢測技術(shù)的種類及原理。嘗試?yán)盟鶎W(xué)免疫學(xué)技術(shù)設(shè)計新型免疫學(xué)檢測技術(shù)?，F(xiàn)在是1頁\一共有45頁\編輯于星期五目錄基于抗原-抗體反應(yīng)的檢測方法免疫細(xì)胞檢測免疫分子檢測免疫學(xué)診斷與監(jiān)測現(xiàn)在是2頁\一共有45頁\編輯于星期五第一節(jié)基于抗原-抗體反應(yīng)的檢測方法抗原與抗體在體內(nèi)體外均能發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)，因抗體主要來自血清，因此在體外進行的抗原抗體反應(yīng)又稱為血清學(xué)反應(yīng)或免疫血清學(xué)技術(shù)?，F(xiàn)在是3頁\一共有45頁\編輯于星期五一、抗原-抗體反應(yīng)的特點1.特異性與交叉性交叉反應(yīng)是區(qū)分血清型和亞型的重要依據(jù)?。‖F(xiàn)在是4頁\一共有45頁\編輯于星期五2.抗原-抗體結(jié)合的帶現(xiàn)象與可見性現(xiàn)在是5頁\一共有45頁\編輯于星期五3.可逆性現(xiàn)在是6頁\一共有45頁\編輯于星期五4.反應(yīng)階段性第一階段：特異性結(jié)合階段

特點：反應(yīng)快（數(shù)秒至數(shù)分鐘）、無可見反應(yīng)第二階段：反應(yīng)的可見階段

特點：反應(yīng)慢（數(shù)分鐘至數(shù)小時）、表現(xiàn)為凝集、沉淀、補體結(jié)合等反應(yīng)，所受影響因素較多。現(xiàn)在是7頁\一共有45頁\編輯于星期五二、影響抗原抗體結(jié)合的因素電解質(zhì)：生理鹽水、緩沖液溫度：37或4攝氏度酸堿度：pH值在6~8抗原和抗體的性質(zhì)（抗體特異性和親和力）振蕩：適當(dāng)雜物和異物現(xiàn)在是8頁\一共有45頁\編輯于星期五三、抗原-抗體反應(yīng)檢測方法反應(yīng)類型及試驗名稱反應(yīng)類型及試驗名稱凝集試驗直接凝集試驗標(biāo)記抗體技術(shù)免疫熒光抗體技術(shù)間接凝集試驗免疫酶標(biāo)記技術(shù)乳膠凝集試驗放射免疫測定技術(shù)沉淀試驗絮狀沉淀試驗化學(xué)發(fā)光標(biāo)記技術(shù)瓊脂免疫擴散試驗免疫復(fù)合物散射反應(yīng)免疫電泳血清學(xué)新技術(shù)免疫傳感技術(shù)火箭免疫電泳免疫印記技術(shù)補體參與的試驗補體結(jié)合試驗、補體依賴性細(xì)胞毒試驗、免疫黏附血凝試驗免疫膠體金技術(shù)免疫沉淀技術(shù)免疫核酸探針技術(shù)中和試驗病毒中和試驗免疫電鏡技術(shù)毒素中和試驗免疫蛋白芯片技術(shù)現(xiàn)在是9頁\一共有45頁\編輯于星期五1.凝集反應(yīng)

直接凝集

現(xiàn)在是10頁\一共有45頁\編輯于星期五間接凝集現(xiàn)在是11頁\一共有45頁\編輯于星期五間接凝集抑制試驗現(xiàn)在是12頁\一共有45頁\編輯于星期五

協(xié)同凝集試驗

人血清IgG可與葡萄球菌A蛋白（SPA）結(jié)合，將已知特異性抗體IgG結(jié)合至SPA,IgGFab暴露在金黃色葡萄球菌菌體表面，其與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合，導(dǎo)致金黃色葡萄球菌凝集。

現(xiàn)在是13頁\一共有45頁\編輯于星期五2.沉淀反應(yīng)單向免疫擴散雙向免疫擴散現(xiàn)在是14頁\一共有45頁\編輯于星期五

雙向雙擴散沉淀線與抗原成分的關(guān)系現(xiàn)在是15頁\一共有45頁\編輯于星期五免疫電泳現(xiàn)在是16頁\一共有45頁\編輯于星期五3.補體參與的反應(yīng)溶血空斑試驗現(xiàn)在是17頁\一共有45頁\編輯于星期五4.免疫標(biāo)記技術(shù)（1）免疫熒光法現(xiàn)在是18頁\一共有45頁\編輯于星期五唾液腺中的狂犬病毒單純皰疹病毒

現(xiàn)在是19頁\一共有45頁\編輯于星期五（2）酶免疫測定用酶標(biāo)記的抗體進行抗原抗體反應(yīng)。一般用酶標(biāo)儀測定光密度值（OD值）以反應(yīng)抗原或抗體含量。靈敏度可達ng~pg/ml水平。常用標(biāo)記的酶為辣根過氧化物酶（HRP）、堿性磷酸酶（AP）等。現(xiàn)在是20頁\一共有45頁\編輯于星期五酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzymelinked-immunosorbentassay,ELISA）:將已知抗原或抗體吸附在固相載體表面，在固相表面經(jīng)行抗原抗體反應(yīng)，通過洗滌固相表面抗原抗體復(fù)合物與液相中游離成分分離。現(xiàn)在是21頁\一共有45頁\編輯于星期五酶標(biāo)儀現(xiàn)在是22頁\一共有45頁\編輯于星期五現(xiàn)在是23頁\一共有45頁\編輯于星期五現(xiàn)在是24頁\一共有45頁\編輯于星期五酶聯(lián)免疫斑點試驗（enzymelinkedimmunospotassay,ELISPOT）現(xiàn)在是25頁\一共有45頁\編輯于星期五BAS-ELISA（生物素-親和素系統(tǒng)ELISA）現(xiàn)在是26頁\一共有45頁\編輯于星期五免疫組化技術(shù)現(xiàn)在是27頁\一共有45頁\編輯于星期五免疫膠體金技術(shù)現(xiàn)在是28頁\一共有45頁\編輯于星期五現(xiàn)在是29頁\一共有45頁\編輯于星期五免疫膠體金檢測技術(shù)用于懷孕診斷（懷孕）（未懷孕）現(xiàn)在是30頁\一共有45頁\編輯于星期五現(xiàn)在是31頁\一共有45頁\編輯于星期五免疫印跡現(xiàn)在是32頁\一共有45頁\編輯于星期五現(xiàn)在是33頁\一共有45頁\編輯于星期五5.血凝抑制試驗血凝試驗：檢測抗原（新城疫、流感病毒等）血凝抑制試驗：檢測抗體現(xiàn)在是34頁\一共有45頁\編輯于星期五第二節(jié)免疫細(xì)胞檢測外周血單個核細(xì)胞的分離：

用淋巴細(xì)胞分離液（葡聚糖-泛影葡酸）密度梯度離心法。淋巴細(xì)胞亞群分離或計數(shù)：

流式細(xì)胞術(shù)、磁分離技術(shù)、花環(huán)試驗等。樹突狀細(xì)胞誘生和分離：

誘生：IL-4、GM-CSF鑒定：CD1a和CD83一、免疫細(xì)胞及其亞類計數(shù)現(xiàn)在是35頁\一共有45頁\編輯于星期五流式細(xì)胞技術(shù)的一般過程現(xiàn)在是36頁\一共有45頁\編輯于星期五E玫瑰花環(huán)試驗現(xiàn)在是37頁\一共有45頁\編輯于星期五二、淋巴細(xì)胞功能測定1.T細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗（T細(xì)胞增殖試驗）

現(xiàn)在是38頁\一共有45頁\編輯于星期五2.溶血空斑形成試驗現(xiàn)在是39頁\一共有45頁\編輯于星期五3.巨噬細(xì)胞吞噬功能的檢測1234現(xiàn)在是40頁\一共有45頁\編輯于星期五5現(xiàn)在是41頁\一共有45頁\編輯于星期五4.測定淋巴細(xì)胞功能的體內(nèi)試驗機體對特定抗原產(chǎn)生初次細(xì)胞免疫應(yīng)答，再用相同抗原做皮膚試驗，出現(xiàn)以局部紅腫為特征的遲發(fā)型超敏反應(yīng)。結(jié)核桿菌、免疫缺陷病等現(xiàn)在是42頁\一共有45頁\編輯于星期五第三節(jié)免疫分子檢測免疫球蛋白測定補體測定

血清總補體采用50%補體溶血法。細(xì)胞因子檢測

免疫學(xué)測定法分泌性細(xì)胞因子檢測：EL