GA/TXXXX-XXXX

法庭科學(xué)生物檢材中MDMB-4en-PINACA等42種合成大麻素及代

謝物檢驗(yàn)液相色譜-質(zhì)譜法

1范圍

本文件規(guī)定了法庭科學(xué)生物檢材（血液、尿液和唾液）中MDMB-4en-PINACA等42種合成大麻素及

代謝物的液相色譜-質(zhì)譜（LC-MS）檢驗(yàn)方法。

本文件適用于法庭科學(xué)生物檢材（血液、尿液和唾液）中MDMB-4en-PINACA等42種合成大麻素及

代謝物的定性分析和定量分析。其他檢材可參照使用。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GA/T122毒物分析名詞術(shù)語

3術(shù)語和定義

GA/T122界定的術(shù)語和定義適用于本文件。

4原理

以空白樣品和添加樣品作對照，按平行操作的要求，對生物檢材（血液、尿液和唾液）中42種合成

大麻素及代謝物（化合物信息見附錄A）進(jìn)行提取、凈化及濃縮。采用液相色譜-質(zhì)譜法檢測，以保留

時(shí)間、質(zhì)譜特征離子對和離子對豐度比作為定性判斷依據(jù)；以色譜峰面積作為定量依據(jù)，用外標(biāo)-單點(diǎn)

校正法或外標(biāo)-校準(zhǔn)曲線法進(jìn)行定量分析。

5試劑和材料

5.1試劑

實(shí)驗(yàn)用水應(yīng)符合GB/T6682中規(guī)定的一級水。除非另有說明，在分析中使用的試劑均為色譜純，試

劑包括：

a)乙腈；

b)1.0mol/L氫氧化鈉溶液（以配制100mL為例）：稱取4.0g氫氧化鈉（分析純），用水溶解并

定容至100mL：

c)磷酸鹽緩沖液（以配制500mL為例）：稱取6.0g磷酸二氫鈉（分析純），加入450mL水溶解，

用1.0mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至（6.0±0.1），再加水定容至500mL；

d)5%甲醇溶液（以配制100mL為例）：量取5mL甲醇和95mL水，混勻；

e)50%甲醇溶液（以配制100mL為例）：量取50mL甲醇和50mL水，混勻；

1

GA/TXXXX-XXXX

f)0.1%甲酸甲醇溶液（以配制1000mL為例）：移取甲酸1.0mL，用甲醇稀釋并定容至1000mL，

混勻；

g)含0.1%甲酸的10mmol/L甲酸銨溶液（以配制1000mL為例）：稱取0.63g甲酸銨，用水溶解，

加入1mL甲酸，用水稀釋并定容至1000mL，混勻；

h)0.1%甲酸乙腈溶液（以配制1000mL為例）：移取甲酸1.0mL，用乙腈稀釋并定容至1000mL，

混勻；

i)標(biāo)準(zhǔn)溶液：

1)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)儲備液：根據(jù)MDMB-4en-PINACA等42種合成大麻素及代謝物的純度和鹽型換

算后，各稱取適量，分別用甲醇配制成1.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)儲備液，密封，-18℃以下

保存，有效期12個(gè)月?；虿捎檬惺蹣?biāo)準(zhǔn)溶液；

2)單一標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：移取MDMB-4en-PINACA等42種合成大麻素及代謝物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)儲備

液，分別用甲醇配制成濃度為1.0μg/mL單一標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，密封，0℃~4℃保存，有效

期6個(gè)月。實(shí)驗(yàn)中所用其他濃度的單一標(biāo)準(zhǔn)工作溶液均由1.0μg/mL標(biāo)準(zhǔn)工作溶液用甲醇

配制得到；

3)1.0μg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別移取MDMB-4en-PINACA等42種合成大麻素及代謝

物的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)儲備溶液，用甲醇配制成濃度為1.0μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)工作溶液，密封，

0℃~4℃保存，有效期6個(gè)月。實(shí)驗(yàn)中所用其他濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液均由標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)儲

備液配制得到。

注：混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中所含物質(zhì)種類可根據(jù)實(shí)際需要選擇。

5.2材料

材料包括：

a)具蓋離心管；

b)具塞玻璃試管；

c)容量瓶；

d)有機(jī)系微孔濾膜：0.22μm；

e)固相萃取柱：Oasis?HLB柱（3cc，60mg）或等效固相萃取柱。

注：Oasis?HLB柱是Waters公司產(chǎn)品的商品名稱，給出這一信息是為了方便本標(biāo)準(zhǔn)的使用者，并不是表示對該產(chǎn)

品的認(rèn)可。如果其他等效產(chǎn)品具有相同的效果，則可使用這些等效產(chǎn)品。

6儀器和設(shè)備

儀器和設(shè)備包括：

a)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源（ESI）；

b)電子天平：實(shí)際分度值（d）小于或等于0.01mg；

c)振蕩器；

d)超聲波清洗器；

e)離心機(jī)；

f)移液器；

g)氮吹濃縮器。

7操作方法

7.1定性分析

2

GA/TXXXX-XXXX

7.1.1樣品前處理

7.1.1.1檢材樣品

蛋白沉淀法：移取血液、尿液或唾液等檢材樣品0.5mL于具蓋離心管中，加入2mL乙腈，振蕩10min，

以不低于8000r/min離心10min，取上清液經(jīng)有機(jī)系微孔濾膜過濾，作為檢材樣品提取液，供儀器檢測。

固相萃取法：移取血液、尿液或唾液等檢材樣品0.5mL于具蓋離心管中，加入1mL磷酸鹽緩沖溶

液，混勻，以不低于8000r/min離心10min，取上清液轉(zhuǎn)移至固相萃取柱（使用前根據(jù)需要進(jìn)行活化）

中，上清液過柱流速不超過0.5mL/min，用5%甲醇溶液3mL淋洗，用0.1%甲酸甲醇溶液3mL洗脫，

洗脫液過柱流速不超過2.0mL/min，收集洗脫液，置于濃縮器上40℃以下濃縮至干，殘留物用50%甲

醇溶液200μL溶解，經(jīng)有機(jī)系微孔濾膜過濾，作為檢材樣品提取液，供儀器檢測。

注：檢材樣品取樣量、乙腈體積、緩沖溶液體積及定容體積可根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整。

7.1.1.2質(zhì)控樣品

取等量相似基質(zhì)的空白樣品兩份于具蓋離心管中，一份作為空白樣品，一份添加標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，使

目標(biāo)物濃度為5ng/mL（蛋白沉淀法）或0.5ng/mL（固相萃取法），作為添加樣品，與檢材樣品平行操

作，得到空白樣品提取液和添加樣品提取液，供儀器檢測。

注：添加樣品中目標(biāo)物的種類可根據(jù)實(shí)際需要選擇。

7.1.2儀器檢測

7.1.2.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀條件

參考條件1（可根據(jù)不同品牌儀器和不同樣品等實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整）：

a)色譜柱：HypersilGOLDC18(2.1mm×100mm，1.9μm)或其他等效色譜柱；

注：HypersilGOLDC18為Thermo公司產(chǎn)品的商品名稱，給出這一信息是為了方便本標(biāo)準(zhǔn)的使用者，并不是表示

對該產(chǎn)品的認(rèn)可。如果其他等效產(chǎn)品具有相同的效果，則可使用這些等效產(chǎn)品。

b)柱溫：30℃；

c)流動(dòng)相A：含0.1%甲酸的10mmol/L甲酸銨溶液；

d)流動(dòng)相B：0.1%甲酸甲醇溶液；

e)流速：0.3mL/min；

f)進(jìn)樣體積：5μL；

g)洗脫：梯度洗脫，條件見表1；

表1梯度洗脫條件

時(shí)間

流動(dòng)相A流動(dòng)相B

min

0.090%10%

0.590%10%

3.025%75%

5.025%75%

5.55%95%

9.05%95%

9.0190%10%

12.090%10%

3

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h)掃描方式：正離子掃描；

i)檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；

j)鞘氣壓力：38Arb；

k)輔助氣壓力：10Arb；

l)電噴霧電壓：3.8kV；

m)離子源溫度：350℃；

n)離子傳輸管溫度：350℃；

o)碰撞氣：氬氣（Ar）；

p)定性、定量離子對和保留時(shí)間、射頻透鏡壓力和碰撞能量等條件見表2。

表2定性、定量離子對和保留時(shí)間、射頻透鏡壓力、碰撞能量條件

保留時(shí)間射頻透鏡壓力碰撞能量

目標(biāo)物定量離子對定性離子對

minVeV

331.2>201.124

ADB-BUTINACA331.2>201.15.3878

331.2>286.214

331.2>215.123

AB-PINACA331.2>215.15.4274

331.2>286.214

343.2>213.125

ADB-4en-PINACA343.2>213.15.4759

343.2>298.111

MDMB-4en-PINACA344.2>213.121

344.2>213.15.7175

butanoicacidmetabolite344.2>298.113

344.3>214.220

ADBICA344.3>214.25.7877

344.3>327.210

345.2>215.124

ADB-PINACA345.2>215.15.8978

345.2>300.215

ADB-BUTINACA347.2>217.023

N-(4-hydroxybutyl)347.2>302.14.4865

347.2>302.115

metabolite

348.3>232.119

5F-ABICA348.3>232.14.7581

348.3>331.210

4F-MDMB-BUTICA349.2>144.137

349.2>218.04.9070

butanoicacidmetabolite349.2>218.010

349.2>233.123

5F-AB-PINACA349.2>304.14.7982

349.2>304.115

350.2>219.121

4F-MMB-BUTINACA350.2>219.15.12111

350.2>290.214

357.2>144.137

MDMB-4en-PICA357.2>212.16.0897

357.2>212.115

358.2>213.123

MDMB-4en-PINACA358.2>213.16.5678

358.2>298.115

ADB-BUTINACA361.2>231.123

361.2>231.14.4664

N-butanoicacidmetabolite361.2>316.115

4

GA/TXXXX-XXXX

表2定性、定量離子對和保留時(shí)間、射頻透鏡壓力、碰撞能量條件（續(xù)）

保留時(shí)間射頻透鏡壓力碰撞能量

目標(biāo)物定量離子對定性離子對

minVeV

4F-MDMB-BUTICA361.2>144.132

361.2>216.14.8177

N-(4-hydroxybutyl)metabolite361.2>216.115

362.2>144.140

5F-ADBICA362.2>232.15.0168

362.2>232.121

5F-MDMB-PICAbutanoicacid363.2>144.137

363.3>232.15.0899

metabolite363.2>232.115

363.3>144.140

4F-MDMB-BUTICA363.3>218.15.26105

363.3>218.115

364.2>233.120

5F-AMB364.2>233.15.38117

364.2>304.215

365.2>135.227

APICA365.2>135.27.32158

365.2>214.121

366.3>107.238

APINACA366.3>135.27.67110

366.3>135.220

367.2>206.124

5F-CUMYL-PICA367.2>249.15.61113

367.2>249.114

368.3>233.118

5F-CUMYL-PINACA368.3>233.16.1591

368.3>250.110

370.0>107.236

4F-ABUTINACA370.2>135.37.0884

370.0>135.322

AMB-FUBINACAbutanoic370.2>253.020

370.2>253.05.14106

acidmetabolite370.2>324.113

5F-EMB-PICA375.1>230.116

N-(5-hydroxypentyl)375.1>230.14.92102

375.1>144.135

metabolite

377.2>144.139

5F-MDMB-PICA377.2>144.15.5076

377.2>232.117

377.2>144.138

5F-EMB-PICA377.2>232.15.4985

377.2>232.115

378.2>233.223

5F-ADB378.2>233.25.8176

378.2>318.215

MDMB-4en-PINACA378.2>247.120

pentanediolbutanoicacid378.2>247.14.46119

metabolite378.2>332.215

378.2>243.119

CUMYL-THPINACA378.2>243.15.5691

378.2>260.110

378.3>233.123

5F-EMB-PINACA378.3>304.15.79117

378.3>304.116

ADB-FUBINACA383.2>253.0383.2>253.05.237624

5

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383.2>338.014

表2定性、定量離子對和保留時(shí)間、射頻透鏡壓力、碰撞能量條件（續(xù)）

保留時(shí)間射頻透鏡壓力碰撞能量

目標(biāo)物定量離子對定性離子對

minVeV

383.2>252.013

AMB-FUBICA383.2>252.05.32100

383.2>109.234

384.2>253.020

AMB-FUBINACA384.2>324.15.6475

384.2>324.114

384.2>93.243

5F-APINACA384.2>135.27.22114

384.2>135.220

386.2>241.124

MDMB-CHMINACA386.2>241.17.18103

286.2>326.216

391.2>144.139

5F-EDMB-PICA391.2>232.15.9476

391.2>232.118

397.2>233.022

PX-2397.2>233.04.9776

397.2>352.114

397.2>109.235

MDMB-FUBICA397.2>252.05.7696

397.2>252.014

398.2>253.124

MDMB-FUBINACA398.2>253.16.15115

398.2>338.116

AMB-FUBINACA400.2>269.121

400.2>269.15.05127

5-hydroxypentylmetabolite400.2>340.115

5F-MDMB-PICA和5F-EMB-PICA為同分異構(gòu)體，在上述條件下，保留時(shí)間接近，定性離子對相同，

離子對豐度比接近。當(dāng)目標(biāo)物中存在5F-MDMB-PICA和5F-EMB-PICA時(shí)，可通過參考條件2分析。

參考條件2（可根據(jù)不同品牌儀器和不同樣品等實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整）：

a）色譜柱：ACQUITYUPLCBEHC18(2.1mm×100mm，1.7μm)或其他等效色譜柱；

注：ACQUITYUPLCBEHC18為Waters公司產(chǎn)品的商品名稱，給出這一信息是為了方便本標(biāo)準(zhǔn)的使用者，并不是

表示對該產(chǎn)品的認(rèn)可。如果其他等效產(chǎn)品具有相同的效果，則可使用這些等效產(chǎn)品。

b）柱溫：40℃；

c）流動(dòng)相A相：0.1%甲酸溶液；

d）流動(dòng)相B相：0.1%甲酸乙腈溶液；

e）流速：0.4mL/min；

f）進(jìn)樣體積：5μL；

g）洗脫：梯度洗脫，條件見表3；

h）掃描方式：正離子掃描；

i）檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；

j）鞘氣壓力：38Arb；

k）輔助氣壓力：10Arb；

l）電噴霧電壓：3.8kV；

6

GA/TXXXX-XXXX

m）離子源溫度：350℃；

n）離子傳輸管溫度：350℃；

o）碰撞氣：氬氣（Ar）；

p）定性、定量離子對和保留時(shí)間、射頻透鏡壓力、碰撞能量條件見表4。

表3梯度洗脫條件

時(shí)間

流動(dòng)相A流動(dòng)相B

min

0.050%50%

6.350%50%

6.45%95%

7.45%95%

7.550%50%

9.050%50%

表4定性、定量離子對和保留時(shí)間、射頻透鏡壓力、碰撞能量

保留時(shí)間射頻透鏡壓力碰撞能量

目標(biāo)物定量離子對定性離子對

minVeV

377.2>144.139

5F-MDMB-PICA377.2>144.14.2676

377.2>232.117

377.2>144.138

5F-EMB-PICA377.2>232.14.0985

377.2>232.115

7.1.2.2進(jìn)樣

分別吸取空白樣品提取液、添加樣品提取液、檢材樣品提取液、標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，按7.1.2.1儀器條件

進(jìn)行分析。進(jìn)樣順序和進(jìn)樣次數(shù)應(yīng)確保結(jié)果有效。

7.2定量分析

7.2.1樣品前處理

移取血液、尿液或唾液等液體檢材樣品0.5mL兩份，按7.1.1進(jìn)行操作，得到檢材樣品提取液，供儀

器檢測。

取與檢材樣品等量的相似基質(zhì)空白樣品，與檢材樣品平行操作，得到空白樣品提取液，供儀器檢測。

采用外標(biāo)-單點(diǎn)校正法定量時(shí)，取與檢材樣品等量的相似基質(zhì)空白樣品兩份，添加目標(biāo)物標(biāo)準(zhǔn)工作

溶液，與檢材樣品平行操作，得到添加樣品提取液，供儀器檢測。檢材樣品中目標(biāo)物含量應(yīng)為添加樣品

中目標(biāo)物含量的（100±50）%。

采用外標(biāo)-校準(zhǔn)曲線法定量時(shí)，取與檢材樣品等量的相似基質(zhì)空白樣品，添加目標(biāo)物標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，

配制成目標(biāo)物濃度在1.0ng/mL~100ng/mL（蛋白沉淀法）或0.5ng/mL~50ng/mL（固相萃取法）范圍內(nèi)的

添加樣品，與檢材樣品平行操作，得到添加樣品提取液，供儀器檢測。校準(zhǔn)曲線應(yīng)不少于6個(gè)濃度點(diǎn)（包

括空白樣品）。檢材樣品中目標(biāo)物的含量應(yīng)在校準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)。

7.2.2儀器檢測

7.2.2.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀條件

7

GA/TXXXX-XXXX

同7.1.2.1。

7.2.2.2進(jìn)樣

分別吸取空白樣品提取液、添加樣品提取液、檢材樣品提取液、標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，按7.1.2.1儀器條件

進(jìn)樣分析。每份檢材樣品提取液和添加樣品提取液各進(jìn)樣分析2～3次。

7.2.3計(jì)算

7.2.3.1含量計(jì)算

7.2.3.1.1外標(biāo)-校準(zhǔn)曲線法

記錄檢材樣品提取液和添加樣品提取液中目標(biāo)物的保留時(shí)間和峰面積值，以添加樣品提取液中目標(biāo)

物的峰面積的平均值為縱坐標(biāo)、添加樣品中目標(biāo)物的含量為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得到線性方程。根據(jù)

檢材樣品提取液中目標(biāo)物的峰面積值，按公式(1)計(jì)算出檢材樣品中目標(biāo)物的含量。

y-b

...........................................................................（1）

a

式中：

ω—檢材樣品中目標(biāo)物的含量；

y—檢材樣品提取液中目標(biāo)物的峰面積的平均值；

a—線性方程的斜率；

b—線性方程的截距。

7.2.3.1.2外標(biāo)-單點(diǎn)校正法

記錄檢材樣品提取液和添加樣品提取液中目標(biāo)物的保留時(shí)間和峰面積值，按公式（2）計(jì)算檢材樣

品中目標(biāo)物的含量。

A×'

=............................................................................（2）

A'

式中：

ω—檢材樣品中目標(biāo)物的含量；

A—檢材樣品提取液中目標(biāo)物的峰面積的平均值；

A′—添加樣品提取液中目標(biāo)物的峰面積的平均值；

ω′—添加樣品中目標(biāo)物的含量。

7.2.3.2相對相差計(jì)算

記錄7.2.3.1中計(jì)算得到的檢材樣品中目標(biāo)物的含量，按公式（3）計(jì)算相對相差：

-

RD=×100%...............................................................（3）

式中：

RD—相對相差；

ω1、ω2—兩份檢材樣品中目標(biāo)物的含量；

Xω—兩份檢材樣品中目標(biāo)物含量的平均值。

8

GA/TXXXX-XXXX

8結(jié)果評價(jià)

8.1定性結(jié)果評價(jià)

8.1.1陽性結(jié)果評價(jià)

在相同條件下進(jìn)行樣品測定時(shí)，檢材樣品中目標(biāo)物的色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)工作溶液一致（相對誤

差在±2.5%之內(nèi)）、目標(biāo)物的定性離子對（至少兩對）與標(biāo)準(zhǔn)工作溶液一致，且離子對豐度比與濃度

接近的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液相比，相對偏差不超過表3規(guī)定的范圍，空白樣品無干擾，則可判斷檢材樣品中檢

出目標(biāo)物。

表3離子對相對豐度比的最大允許相對偏差范圍

離子豐度比＞50%＞20%～50%≤＞10%～20%≤10%

最大允許相對偏差±20%±25%±30%±50%

8.1.2陰性結(jié)果評價(jià)

檢材樣品未出現(xiàn)與目標(biāo)物標(biāo)準(zhǔn)工作溶液一致的色譜峰，且添加樣品中出現(xiàn)與目標(biāo)物標(biāo)準(zhǔn)工作溶液一

致的色譜峰，空白樣品無干擾，則可判斷檢材樣品中未檢出目標(biāo)物。

8.2定量結(jié)果評價(jià)

如果檢材樣品中目標(biāo)物含量的RD小于或等于20%，定量數(shù)據(jù)可靠，其含量按兩份檢材的平均值計(jì)

算。如果檢材樣品中目標(biāo)物含量的RD大于20%，定量數(shù)據(jù)不可靠。應(yīng)按7.2重新提取檢驗(yàn)。

方法檢出限參見附錄B。

9

GA/TXXXX-XXXX

附錄A

（資料性）

化合物基本信息

42種合成大麻素及代謝物的基本信息見表A.1。

表A.142種合成大麻素及代謝物的基本信息

簡稱中文名稱化學(xué)式結(jié)構(gòu)式CAS編號

N-(1-氨基-3,3-二甲基

ADB-BUTINACA-1-氧代丁-2-基)-1-丁C18H26N4O22682867-55-4

基-1H-吲唑-3-甲酰胺

N-(1-氨甲?；?2-甲基

AB-PINACA丙基)-1-戊基吲唑-3-甲C18H26N4O21445752-09-9

酰胺

N-(1-氨基-3,3-二甲基

-1-氧代丁-2-基)-1-(4-

ADB-4en-PINACAC19H26N4O22659308-44-6

戊烯-1-基)-1H-吲唑-3-

甲酰胺

3,3-二甲基-2-[1-(4-戊

MDMB-4en-PINACA

烯-1-基)-1H-吲唑-3-甲C19H25N3O3暫無

butanoicacidmetabolite

酰氨基]丁酸

N-(1-氨甲?；?2,2-二

ADBICA甲基丙基)-1-戊基吲哚C20H29N3O21445583-48-1

-3-甲酰胺

10

GA/TXXXX-XXXX

簡稱中文名稱化學(xué)式結(jié)構(gòu)式CAS編號

表A.142種合成大麻素及代謝物的基本信息（續(xù)）

簡稱中文名稱化學(xué)式結(jié)構(gòu)式CAS編號

N-(1-氨甲酰基-2,2-二

ADB-PINACA甲基丙基)-1-戊基吲唑C19H28N4O21633766-73-0