生物實驗員筆試試題一、填空題（每題2分，共20分）根據(jù)《實驗室生物安全通用要求》（GB19489-2008），二級生物安全實驗室適用于操作________危害程度的微生物。在PCR實驗中，引物設(shè)計時上下游引物的Tm值差異應(yīng)控制在______℃以內(nèi)。細胞培養(yǎng)時，常用的胰蛋白酶消化液濃度一般為________。依據(jù)《中華人民共和國計量法》，實驗室用于檢測的計量器具必須定期進行________。SDS電泳中，SDS的主要作用是使蛋白質(zhì)________。無菌操作時，超凈工作臺的紫外燈應(yīng)在操作前至少照射______分鐘進行滅菌。生物樣本保存時，-80℃冰箱長期保存樣本的標(biāo)準操作流程中，凍存管需使用________封口。質(zhì)粒提取實驗中，溶液I的主要成分是葡萄糖、EDTA和________。酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）中，封閉液常用________來防止非特異性吸附?；蚓庉嫾夹g(shù)CRISPR-Cas9系統(tǒng)中，Cas9蛋白的作用是________。二、選擇題（每題3分，共30分）以下關(guān)于生物安全柜的使用，錯誤的是（）A.操作前需開啟風(fēng)機運行10-15分鐘B.安全柜內(nèi)可使用明火C.工作前后需對安全柜進行清潔消毒D.手臂應(yīng)緩慢進出安全柜在進行Westernblot實驗時，轉(zhuǎn)膜效率最高的方法是（）A.半干轉(zhuǎn)膜法B.濕轉(zhuǎn)膜法C.干轉(zhuǎn)膜法D.真空轉(zhuǎn)膜法下列哪種物質(zhì)不能用于細胞培養(yǎng)的凍存保護劑（）A.二甲基亞砜（DMSO）B.甘油C.乙醇D.血清根據(jù)《病原微生物實驗室生物安全管理條例》，高致病性病原微生物是指（）A.第一類和第二類病原微生物B.第二類和第三類病原微生物C.第三類和第四類病原微生物D.僅指第一類病原微生物下列關(guān)于限制性內(nèi)切酶的說法，正確的是（）A.識別的序列均為回文序列B.切割DNA后均產(chǎn)生黏性末端C.不同的限制性內(nèi)切酶可以識別相同的序列D.只能切割雙鏈DNA細胞周期中，DNA復(fù)制發(fā)生在（）A.G1期B.S期C.G2期D.M期蛋白質(zhì)純化過程中，離子交換層析的原理是利用蛋白質(zhì)的（）A.分子量大小差異B.電荷差異C.疏水性差異D.等電點差異下列哪種方法不能用于檢測基因突變（）A.聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）B.基因芯片技術(shù)C.酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）D.測序技術(shù)在微生物培養(yǎng)中，倒平板時培養(yǎng)基的溫度一般冷卻至（）A.30-35℃B.45-50℃C.55-60℃D.65-70℃關(guān)于RNA提取，下列說法錯誤的是（）A.實驗過程需佩戴口罩和手套防止RNase污染B.氯仿可用于抽提去除蛋白質(zhì)C.RNA沉淀可用75%乙醇洗滌D.提取的RNA可長期保存在4℃三、判斷題（每題2分，共10分）實驗室產(chǎn)生的化學(xué)性廢棄物可以和生物性廢棄物混合收集處理。（）熒光定量PCR實驗中，SYBRGreen法只能檢測已知序列的基因。（）革蘭氏染色中，乙醇脫色時間過長會導(dǎo)致革蘭氏陽性菌被染成陰性菌。（）細胞培養(yǎng)過程中，支原體污染可以通過增加抗生素濃度徹底清除。（）實驗室的生物安全等級越高，對實驗人員的防護要求也越高。（）四、簡答題（每題10分，共20分）簡述核酸電泳實驗中，影響DNA遷移率的因素有哪些？闡述生物實驗室廢棄物處理的基本原則和流程。五、論述題（20分）結(jié)合現(xiàn)行標(biāo)準和規(guī)范，詳細論述基因工程實驗操作過程中的生物安全風(fēng)險及防控措施。答案一、填空題第二類2.23.0.25%4.檢定5.解聚成單鏈并帶上負電荷6.307.封口膜8.Tris-HCl9.5%脫脂奶粉或BSA10.切割DNA二、選擇題1.B2.B3.C4.A5.C6.B7.B8.C9.B10.D三、判斷題1.×2.×3.√4.×5.√四、簡答題影響DNA遷移率的因素包括：①DNA分子大?。悍肿釉酱?，遷移率越慢；②DNA分子構(gòu)象：超螺旋DNA遷移速度最快，線性DNA次之，開環(huán)DNA最慢；③瓊脂糖凝膠濃度：濃度越高，對DNA分子的阻力越大，遷移越慢；④電泳緩沖液：緩沖液的離子強度、pH值等影響DNA的遷移；⑤電場強度：在一定范圍內(nèi)，電場強度越大，遷移速度越快，但過高會導(dǎo)致DNA變性；⑥嵌入染料的存在：如溴化乙錠可與DNA結(jié)合，影響其遷移率。生物實驗室廢棄物處理的基本原則：①分類收集原則，將生物性、化學(xué)性、放射性等廢棄物分開收集；②安全處理原則，確保處理過程不對人員和環(huán)境造成危害；③減量化原則，盡量減少廢棄物產(chǎn)生量；④無害化原則，使廢棄物達到安全排放或處置標(biāo)準。流程：首先進行分類收集，貼上相應(yīng)標(biāo)簽；然后進行預(yù)處理，如生物性廢棄物進行高溫高壓滅菌等；接著交由有資質(zhì)的單位進行最終處置，如化學(xué)性廢棄物由專業(yè)危廢處理公司處理。五、論述題基因工程實驗操作過程中的生物安全風(fēng)險主要包括：①基因載體和受體生物的擴散風(fēng)險，如重組DNA可能從實驗室逃逸到環(huán)境中，與自然界生物發(fā)生基因交流；②基因工程產(chǎn)物的潛在風(fēng)險，新合成的蛋白質(zhì)或代謝產(chǎn)物可能具有毒性、致敏性等；③實驗操作過程中的風(fēng)險，如樣本的操作、基因的擴增和導(dǎo)入等環(huán)節(jié)，若防護不當(dāng)可能導(dǎo)致操作人員接觸到有害生物材料。防控措施：①遵循《基因工程安全管理辦法》等相關(guān)法規(guī)，對基因工程實驗進行嚴格的申報和審批；②實驗操作在相應(yīng)生物安全等級的實驗室進行，如涉及高風(fēng)險操作需在生物安全柜中進行；③對基因載體和受體