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白酒微生物培菌工安全技術(shù)操作規(guī)程工種:白酒微生物培菌工時(shí)間:2023年10月27日一、崗位職責(zé)與安全要求1.崗位職責(zé)-負(fù)責(zé)白酒生產(chǎn)中微生物菌種的培養(yǎng)、保藏及管理。-確保培養(yǎng)基的制備、滅菌、接種及培養(yǎng)過程符合衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。-監(jiān)控培養(yǎng)環(huán)境(溫度、濕度、無菌條件),防止雜菌污染。-記錄培養(yǎng)數(shù)據(jù),包括菌種生長(zhǎng)曲線、培養(yǎng)時(shí)間、污染情況等。2.安全要求-必須經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn),持證上崗,熟悉微生物操作規(guī)范。-操作時(shí)需穿戴潔凈工作服、口罩、手套,必要時(shí)佩戴護(hù)目鏡。-嚴(yán)禁在培養(yǎng)區(qū)域內(nèi)飲食、吸煙,禁止觸摸口鼻。-使用高壓滅菌鍋、離心機(jī)等設(shè)備時(shí),嚴(yán)格遵守設(shè)備操作手冊(cè)。二、培養(yǎng)基制備與滅菌1.培養(yǎng)基配方-基礎(chǔ)培養(yǎng)基:酵母浸出粉(5g/L)、蛋白胨(10g/L)、牛肉提取物(3g/L)、葡萄糖(20g/L)。-根據(jù)菌種需求添加特殊成分(如玉米漿、麥芽汁等)。-調(diào)節(jié)pH值6.0-6.5,凝固劑使用瓊脂1.5-2.0g/L(固體培養(yǎng)基)。2.制備步驟-稱量各成分,依次加入蒸餾水,攪拌溶解。-用玻璃棒攪拌,防止沉淀,避免使用金屬器械。-檢查無氣泡后,分裝至滅菌容器(三角瓶、試管等),塞緊棉塞或使用螺旋蓋。3.滅菌操作-高壓滅菌:-溫度121℃、壓力1.05kg/cm2,滅菌15-20分鐘(固體培養(yǎng)基)。-液體培養(yǎng)基可延長(zhǎng)至20分鐘,防止瓊脂降解。-滅菌前將滅菌鍋排空冷空氣,避免溫度驟降導(dǎo)致壓力波動(dòng)。-滅菌后處理:-自然冷卻至50℃以下,避免培養(yǎng)基沸騰導(dǎo)致容器破裂。-冷卻后及時(shí)儲(chǔ)存于4℃冰箱備用。三、菌種保藏與活化1.菌種保藏-斜面保藏:將菌種接種于試管斜面,35℃培養(yǎng)24-48小時(shí),干燥后放于-20℃冷凍保存。-凍干保藏:-菌懸液加入保護(hù)劑(如甘露醇、甘油),分裝于凍干管。-真空冷凍干燥,-80℃保存,有效期可達(dá)3年。2.菌種活化-斜面復(fù)蘇:取凍干管或斜面菌種,劃線接種于新鮮培養(yǎng)基,30℃培養(yǎng)48小時(shí)。-純化檢查:挑取單菌落,涂片染色(革蘭氏染色),確保無雜菌污染。四、無菌操作與培養(yǎng)環(huán)境控制1.無菌操作-超凈工作臺(tái)使用:-操作前開啟紫外燈照射30分鐘,關(guān)閉后用70%酒精消毒臺(tái)面。-手臂消毒后伸入工作臺(tái),避免觸碰工作臺(tái)邊緣。-接種時(shí)使用無菌鑷子、接種環(huán),避免培養(yǎng)基濺出。-無菌容器處理:-滅菌后容器口用酒精燈火焰燒灼,冷卻后再進(jìn)行接種。-接種環(huán)需預(yù)熱至紅熱狀態(tài),避免殺死菌種。2.培養(yǎng)環(huán)境控制-溫度控制:酵母菌35℃、細(xì)菌37℃、霉菌28℃,恒溫培養(yǎng)箱誤差≤0.5℃。-濕度控制:培養(yǎng)室內(nèi)濕度保持在50%-60%,防止培養(yǎng)基表面干燥。-空氣過濾:培養(yǎng)室需安裝HEPA過濾器,換氣次數(shù)≥12次/小時(shí)。五、培養(yǎng)過程監(jiān)控與污染處理1.生長(zhǎng)觀察-每日觀察菌落形態(tài)、顏色、透明度,記錄生長(zhǎng)速度。-注意是否有渾濁、氣泡等異?,F(xiàn)象,及時(shí)取樣檢測(cè)。2.污染處理-輕微污染:挑取未污染部分轉(zhuǎn)種,加強(qiáng)無菌操作。-嚴(yán)重污染:廢棄培養(yǎng)物,徹底清潔培養(yǎng)設(shè)備,重新滅菌。-污染源追溯:檢查培養(yǎng)基、菌種、操作環(huán)節(jié),分析污染原因。六、記錄與廢棄物處理1.培養(yǎng)記錄-記錄菌種名稱、培養(yǎng)基配方、滅菌參數(shù)、接種量、培養(yǎng)時(shí)間等。-生長(zhǎng)曲線數(shù)據(jù)需繪制圖表,分析菌種性能。2.廢棄物處理-培養(yǎng)廢棄物需經(jīng)高壓滅菌后,方可倒入指定垃圾桶。-污染培養(yǎng)基用10%漂白水浸泡1小時(shí),滅菌后處理。七、應(yīng)急處理措施1.燙傷處理-高壓滅菌后燙傷,立即用流動(dòng)冷水沖洗15分鐘,涂燙傷膏。-嚴(yán)重燙傷需就醫(yī),并報(bào)告主管。2.菌種泄漏-立即用70%酒精擦拭污染區(qū)域,污染衣物需焚燒處理。-漏出菌種需用10%漂白水消毒,并上報(bào)實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人。3.火災(zāi)應(yīng)急-禁止在培養(yǎng)室使用明火,配備滅火器,定期檢查消防設(shè)施。-小火用濕布覆蓋,大火立即疏散并報(bào)警。八、設(shè)備維護(hù)與清潔1.設(shè)備維護(hù)-高壓滅菌鍋每月校準(zhǔn)壓力表,檢查密封圈。-超凈工作臺(tái)每季度更換HEPA濾網(wǎng),記錄更換時(shí)間。2.清潔流程-每日操作后用酒精擦拭工作臺(tái)、設(shè)備表面。-每周用消毒液(如0.5%過氧乙酸)全面清潔培養(yǎng)室。九、培訓(xùn)與考核1.崗前培訓(xùn)-微生物基礎(chǔ)、無菌操作、設(shè)備使用、安全規(guī)范。-實(shí)操考核,合格后方可獨(dú)立操作。2.定期考核-每季度考核培養(yǎng)基制備、污染處理等技能,不合格需補(bǔ)訓(xùn)。十、附則
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