2004-03-10發(fā)布.2004-03-10實(shí)施I疫苗Vaccino免疫抗體監(jiān)測(cè)Antibodymonit3.1仔豬a)達(dá)到15日齡時(shí)，注射豬喘氣病滅活苗(弱毒苗);d)達(dá)到5月齡至7月齡時(shí)，注射豬瘟、豬丹毒、2b)每年4月份和10月份，各注射一次豬喘氣病滅活苗(弱毒苗);c)每年5月份和10月份，各注射一次口蹄疫滅活苗；d)每年11月份或12月份，注射豬傳染性胃腸炎疫苗；e)配種前1個(gè)月，注射豬乙型腦炎弱毒苗；f)產(chǎn)前40天，注射豬偽狂犬病滅活苗；d)產(chǎn)前40天和15天，各注射一次仔豬大腸桿菌三價(jià)滅活苗(弱毒苗);B)產(chǎn)前30天和15天，紅痢疫區(qū)可繁母豬各注射一次仔豬紅痢疫苗。日)每年5月份和10月份，各注射一次豬瘟、豬丹毒、豬肺疫三聯(lián)苗；b)每年4月份和10月份，各注射一次豬喘氣病滅活苗(弱毒苗)和豬偽狂犬病滅活苗；c)每年5月份和10月份，各注射一次口蹄疫滅活苗；d)每年11月份或12月份，注射豬傳染性胃腸炎疫苗。3.6商品豬a)達(dá)到15日齡時(shí)，注射豬喘氣病滅活苗(弱毒苗);b)達(dá)到20日齡時(shí)，注射豬瘟弱毒細(xì)胞苗；c)達(dá)到30日齡時(shí)，注射豬喘氣病滅活苗(弱毒苗);d)達(dá)到35日齡時(shí)，注射仔豬副傷寒弱毒苗；e)達(dá)到45日齡時(shí)，注射口蹄疫滅活苗；f)達(dá)到60日齡時(shí)，注射豬瘟、豬丹毒、豬肺疫三聯(lián)苗。4.1保定頸部耳后2cm~3cm處或臀部肌肉半富部位。先用清水將注射部位擦洗，把污物擦洗掉。再用5%的碘酊和75%的酒精，對(duì)注射部位由內(nèi)及外用消毒好的注射器(或連續(xù)注射器)將配備好的疫苗，按照疫苗使用說(shuō)明書要求的劑量注入豬體3種公豬100%,母豬50%,仔豬5%,商品豬5%。4附錄A(規(guī)范性附錄)A.1方法提要如果在豬瘟弱毒酶聯(lián)板上光密度(OD)大于或等于0.2且在強(qiáng)毒酶聯(lián)板上光密度(OD)小于0.5,A.2試劑a)碳酸鈉、碳酸氫鈉、氯化鈉、磷酸二氫鉚、磷酸氫鈉(無(wú)水)、磷酸氫二鈉(12H?O)、氯化鉀、檸檬酸、鄰苯二胺(分析純);b)吐溫-20、98%濃硫酸、30%雙氧水(分析純),蒸餾水(雙蒸),小牛血消。A.3設(shè)備和儀器b)固相96孔平底聚米乙烯專用板；f)天平(感量0.001g);A.4.1試液的配制A.4.1.1包被液稱取碳酸鈉1.59g和碳酸氫鈉2.93g放入1000mL容量瓶中，加蒸餾水完全溶解后定容，加入適A.4.1.2洗滌液a)稱取氯化鈉8.0g、磷酸二氫鉀0.2g、磷酸氫二鈉(無(wú)水)2.13g、氯化鉀0.2g放入1000mL容量瓶中，加蒸餾水完全溶解后定容，加入適量3M氫氧化鈉溶液調(diào)PHb)量取上述溶液1000mL放入1000mL燒杯中，加入吐溫-200.5mL,攪拌均勻。A.4.1.3稀釋液量取洗滌液100mL放入250mL磨口錐形瓶中，加入小牛血清5mL,充分搖勻。A.4.1.4底物液a)稱取檸檬酸21.0g放入1000mL容量瓶中，加蒸餾水完全溶解斥定容，即成0.1M檸檬酸溶5c)量取0.1M檸檬酸溶液24.3mL和0.2M磷酸氫二鈉溶液25.7mL放入100mL磨口錐形瓶中，A.4.3去孔內(nèi)液體。用洗滌液沖洗板3次，每次間隔A.4.5重復(fù)A.4.3.A.4.6用稀釋液將兔抗豬IgG辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合物作100倍稀釋，每孔加入106附錄B(規(guī)范性附錄)B.1方法提要B.2試劑B.3設(shè)備和儀器d)恒溫培養(yǎng)箱。B.4操作步驟B.4.1加稀釋液在血凝板上1排~6排的1孔~9孔；第7排的1孔~4孔和第6孔；第8排的1孔～12孔各加稀釋液50ul。B.4.2稀釋待檢血清取1號(hào)待檢血清50μL加入第1排第1孔，并將塑咀插入孔底，右手姆指輕壓彈簧1次~2次混勻(避免產(chǎn)生過(guò)多的氣泡),從該孔取出50μL移入第2孔，混勻后取出50μHL移入第3孔……直至第9孔混勻后取出50μL丟棄。此時(shí)第1排1孔~9孔待檢血消的稀釋度(稀釋倍數(shù))依次為：1:2(1)1:4(2)1:8(3)1:16(4)1:32(5)1:64(取2號(hào)待檢血清加入第2排，取3號(hào)待檢血清加入第3排……均按上述方法稀釋，注意每取一份B.4.3稀釋陰性對(duì)照血清在血凝板上的第7排第1孔加陰性血消50μL,對(duì)倍稀釋至第4孔，混勻后從該孔取出50L丟棄。此時(shí)陰性血清稀釋倍數(shù)依次為1:2(1)1:4(2)1:8(3)1:16(4)。第6孔為稀釋液對(duì)照。B.4.4稀釋陽(yáng)性對(duì)照血清在血凝板上的第8排第1孔加陽(yáng)性血消50μL,對(duì)倍稀釋至第12孔，混勻后從該孔取出50μL丟棄。此時(shí)陽(yáng)性血清稀釋倍數(shù)依次為1:2(1)1:4(2)1:8(3)1:16(4)1:32(5)1:64(6)1:128(7)B.4.6振蕩混勻?qū)⒀逯糜谖⒘空袷幤魃险袷?min~2min,如無(wú)振蕩器，用手輕輕搖勻，然后將血凝板放在白紙上觀察各孔紅血球是否混勻，不出現(xiàn)血球沉淀為合格。蓋上玻板，室溫下或37℃下靜置1.5h~B.5判定標(biāo)準(zhǔn)移去玻板，將血凝板放在白紙上，先觀察陰性對(duì)照血清1:16孔，稀釋液對(duì)照孔，均應(yīng)無(wú)凝集(血球全部沉入孔底形成邊緣整齊的小圓點(diǎn)),或僅出現(xiàn)“+”凝集(血球大部沉于孔底，邊緣稍有少量血球懸浮)。陽(yáng)性對(duì)照血清孔1:2~1:256各孔應(yīng)出現(xiàn)“+~+++”凝集為合格，(少量血球沉入孔底，大部血在對(duì)照孔合格的前提下，再觀察待檢血清各孔，以呈現(xiàn)“#”凝集的最大稀釋倍數(shù)為該份血清的抗體效價(jià)。例如1號(hào)待檢血清1孔~5孔呈現(xiàn)“++~+++”凝集，6~7孔呈現(xiàn)“#”凝集，第8孔呈現(xiàn)“+”凝集，第9孔無(wú)凝集，那么就可判定該份血消的抗體效價(jià)為1:1