miR-155對牙槽骨成骨細胞成骨活性的調(diào)控機制及影響探究一、引言1.1研究背景與意義牙槽骨作為牙齒的重要支持組織，其健康狀況對于口腔功能和整體口腔健康至關(guān)重要。牙槽骨不僅為牙齒提供穩(wěn)固的支撐，確保牙齒在咀嚼、發(fā)音等口腔活動中的正常功能，還對維持面部的正常形態(tài)和美觀起著關(guān)鍵作用。一旦牙槽骨出現(xiàn)問題，如骨量減少、骨質(zhì)破壞等，會導致牙齒松動、移位甚至脫落，嚴重影響患者的咀嚼功能和生活質(zhì)量，還可能引發(fā)面部塌陷、咬合紊亂等一系列問題，對患者的心理健康和社交生活造成負面影響。近年來，隨著生活水平的提高和人們對口腔健康重視程度的增加，口腔疾病的防治成為了醫(yī)學領(lǐng)域的研究熱點之一。在眾多影響牙槽骨健康的因素中，成骨細胞的成骨活性起著核心作用。成骨細胞負責合成和分泌骨基質(zhì)，調(diào)節(jié)骨礦化過程，對于維持牙槽骨的正常結(jié)構(gòu)和功能至關(guān)重要。然而，成骨細胞的成骨活性受到多種因素的精細調(diào)控，其中微小RNA（miRNA）的調(diào)控作用逐漸受到關(guān)注。miR-155作為一種重要的miRNA，在多種生理和病理過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。已有研究表明，miR-155參與了炎癥反應、細胞增殖與分化、腫瘤發(fā)生發(fā)展等多種生物學過程。在骨代謝領(lǐng)域，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)miR-155對成骨細胞和破骨細胞的分化和功能具有重要的調(diào)節(jié)作用，可能是維持骨代謝平衡的關(guān)鍵分子之一。然而，目前關(guān)于miR-155對牙槽骨成骨細胞成骨活性影響的研究尚相對較少，其具體作用機制仍有待進一步深入探討。深入研究miR-155對牙槽骨成骨細胞成骨活性的影響，不僅有助于揭示牙槽骨代謝的分子調(diào)控機制，為口腔醫(yī)學領(lǐng)域的骨相關(guān)疾病，如牙周炎、種植體周圍炎、牙槽骨骨折愈合不良等，提供新的理論依據(jù)，還可能為這些疾病的診斷、治療和預防開辟新的途徑。通過調(diào)控miR-155的表達水平，有望開發(fā)出更加有效的治療策略，促進牙槽骨的再生和修復，提高患者的口腔健康水平和生活質(zhì)量。本研究具有重要的理論意義和臨床應用價值，對于推動口腔醫(yī)學的發(fā)展具有積極的促進作用。1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀近年來，隨著分子生物學技術(shù)的飛速發(fā)展，miR-155在骨代謝領(lǐng)域的研究逐漸成為熱點，國內(nèi)外學者針對miR-155與成骨細胞的關(guān)系開展了大量研究，取得了一系列重要進展。在國外，一些研究率先揭示了miR-155對成骨細胞分化和功能的調(diào)控作用。例如，有研究通過細胞實驗發(fā)現(xiàn)，在成骨細胞分化過程中，miR-155的表達水平發(fā)生動態(tài)變化，且過表達miR-155能夠抑制成骨細胞的分化標志物，如堿性磷酸酶（ALP）、骨鈣素（OCN）和骨橋蛋白（OPN）等的表達，從而影響成骨細胞的分化進程。進一步的機制研究表明，miR-155可能通過靶向作用于骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP）信號通路中的關(guān)鍵分子，如SMAD5、RUNX2和BMPR2等，抑制BMP信號的傳導，進而抑制成骨細胞的分化和骨形成。這些研究為深入理解miR-155在骨代謝中的作用機制提供了重要線索。國內(nèi)的研究也在不斷深入，不僅驗證了國外的一些研究結(jié)果，還在特定的疾病模型和細胞類型中進行了拓展研究。有研究探討了miR-155在牙周炎相關(guān)牙槽骨吸收中的作用，發(fā)現(xiàn)牙周炎患者的牙齦組織和齦溝液中miR-155的表達水平顯著升高，且與牙槽骨吸收程度呈正相關(guān)。在體外實驗中，通過上調(diào)或下調(diào)miR-155的表達，發(fā)現(xiàn)其能夠調(diào)節(jié)牙周膜干細胞（PDLSCs）的成骨分化能力，進一步證實了miR-155在牙槽骨代謝中的重要調(diào)控作用。還有研究關(guān)注到miR-155在骨質(zhì)疏松癥中的作用，發(fā)現(xiàn)其表達異常與骨質(zhì)疏松癥患者的骨密度降低和骨代謝紊亂密切相關(guān)，提示miR-155可能成為骨質(zhì)疏松癥治療的潛在靶點。盡管目前關(guān)于miR-155與成骨細胞關(guān)系的研究已取得了一定成果，但仍存在一些不足之處。一方面，大部分研究集中在通用的成骨細胞系或骨髓間充質(zhì)干細胞向成骨細胞的分化過程，針對牙槽骨成骨細胞這一特定細胞類型的研究相對較少。牙槽骨成骨細胞具有獨特的生物學特性和功能，其所處的微環(huán)境也與其他部位的成骨細胞有所不同，因此，深入研究miR-155對牙槽骨成骨細胞成骨活性的影響，對于揭示牙槽骨代謝的分子機制具有重要意義。另一方面，雖然已經(jīng)明確miR-155通過靶向多個基因參與成骨細胞的調(diào)控，但這些基因之間的相互作用以及miR-155在不同信號通路之間的協(xié)調(diào)作用仍有待進一步闡明。此外，目前的研究主要以細胞實驗和動物實驗為主，將miR-155的研究成果轉(zhuǎn)化為臨床應用的相關(guān)研究還較為有限，距離實際的臨床治療還有很長的路要走。本文將針對當前研究的不足，以牙槽骨成骨細胞為研究對象，深入探討miR-155對其成骨活性的影響及其作用機制。通過體外細胞實驗，觀察miR-155表達改變對牙槽骨成骨細胞增殖、分化和礦化能力的影響，并運用分子生物學技術(shù)，如熒光定量PCR、Westernblot和雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灥龋M一步探究miR-155調(diào)控牙槽骨成骨細胞成骨活性的分子機制，旨在為口腔醫(yī)學領(lǐng)域骨相關(guān)疾病的防治提供新的理論依據(jù)和潛在的治療靶點。1.3研究方法與創(chuàng)新點本研究將綜合運用多種研究方法，深入探究miR-155對牙槽骨成骨細胞成骨活性的影響及其作用機制。在細胞實驗方面，首先通過組織塊法或酶消化法原代培養(yǎng)牙槽骨成骨細胞，并利用免疫熒光染色、細胞表面標志物檢測等方法進行細胞鑒定，以確保細胞的純度和特性。隨后，構(gòu)建miR-155過表達和低表達的細胞模型，分別轉(zhuǎn)染miR-155mimic和miR-155inhibitor到牙槽骨成骨細胞中，同時設(shè)置陰性對照組，轉(zhuǎn)染無關(guān)序列。通過CCK-8法、EdU染色等實驗檢測細胞的增殖能力，觀察miR-155表達改變對牙槽骨成骨細胞增殖的影響。采用堿性磷酸酶（ALP）活性檢測、ALP染色、茜素紅染色等方法，檢測細胞的分化和礦化能力，分析miR-155對牙槽骨成骨細胞成骨分化和礦化結(jié)節(jié)形成的作用。分子生物學技術(shù)是本研究的重要手段。運用實時熒光定量PCR（qRT-PCR）技術(shù)檢測miR-155以及成骨相關(guān)基因，如Runx2、OCN、OPN等的mRNA表達水平，明確miR-155與成骨相關(guān)基因表達之間的關(guān)系。通過Westernblot實驗檢測成骨相關(guān)蛋白的表達水平，從蛋白質(zhì)層面進一步驗證miR-155對成骨細胞成骨活性的影響。利用生物信息學軟件預測miR-155的潛在靶基因，并通過雙熒光素酶報告基因?qū)嶒烌炞CmiR-155與靶基因之間的靶向結(jié)合關(guān)系。此外，還將采用基因沉默和過表達技術(shù)，對靶基因進行功能驗證，深入探究miR-155調(diào)控牙槽骨成骨細胞成骨活性的分子機制。本研究的創(chuàng)新點主要體現(xiàn)在以下幾個方面。在研究視角上，聚焦于牙槽骨成骨細胞這一特定細胞類型，深入探討miR-155對其成骨活性的影響，彌補了目前針對牙槽骨成骨細胞研究的相對不足，有助于揭示牙槽骨代謝的獨特分子調(diào)控機制。在技術(shù)運用上，綜合運用多種先進的分子生物學技術(shù)和細胞實驗方法，從多個層面、多個角度深入研究miR-155的作用機制，為miR-155在口腔醫(yī)學領(lǐng)域的研究提供了更為全面、系統(tǒng)的技術(shù)手段。在研究成果方面，有望發(fā)現(xiàn)miR-155調(diào)控牙槽骨成骨細胞成骨活性的新靶點和新機制，為口腔醫(yī)學領(lǐng)域骨相關(guān)疾病的防治提供新的理論依據(jù)和潛在的治療靶點，具有重要的理論意義和臨床應用價值。二、miR-155與牙槽骨成骨細胞相關(guān)理論基礎(chǔ)2.1miR-155的結(jié)構(gòu)與功能特性2.1.1miR-155的分子結(jié)構(gòu)miR-155是一種內(nèi)源性非編碼微小RNA（microRNA，miRNA），其基因位于人類21號染色體上B細胞非編碼集合基因簇（Bcellintegrationcluster，BIC）的第3個外顯子中。成熟的miR-155單鏈序列為5’-UUAAUGCUAAUCGUGAUAGGGG-3’，長度約為22個核苷酸。這種短小的核苷酸序列是其發(fā)揮生物學功能的基礎(chǔ)，通過與靶基因mRNA的3’非翻譯區(qū)（3’UTR）互補配對，實現(xiàn)對靶基因表達的調(diào)控。從二級結(jié)構(gòu)來看，miR-155的前體（pre-miR-155）具有典型的莖環(huán)結(jié)構(gòu)。在細胞核內(nèi)，miR-155基因由RNA聚合酶II轉(zhuǎn)錄生成初級轉(zhuǎn)錄物（pri-miR-155），隨后被核酸酶Drosha及其輔助因子處理成約70-90nt的pre-miR-155。pre-miR-155被轉(zhuǎn)運到細胞質(zhì)后，在Dicer酶的作用下，切割形成成熟的miR-155。這種莖環(huán)結(jié)構(gòu)不僅有助于miR-155的加工和成熟，還對其穩(wěn)定性和功能發(fā)揮具有重要影響。在生物進化過程中，miR-155具有高度的保守性。研究表明，miR-155在多種物種中都存在，且其核苷酸序列和功能具有相似性。這種保守性提示miR-155在生物體內(nèi)可能承擔著重要且基礎(chǔ)的生物學功能，在漫長的進化過程中得以保留并延續(xù)。其保守的分子結(jié)構(gòu)確保了它能夠在不同物種中與特定的靶基因相互作用，實現(xiàn)對基因表達的精細調(diào)控，維持生物體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定和正常的生理功能。2.1.2miR-155的生物學功能miR-155在生物體內(nèi)參與了多種重要的生物學過程，具有廣泛而關(guān)鍵的生物學功能。在免疫調(diào)節(jié)方面，miR-155在多種免疫細胞，如巨噬細胞、樹突狀細胞、B細胞及T細胞等中均有表達，對免疫細胞的發(fā)育、分化、活化和功能發(fā)揮起著重要的調(diào)控作用。在巨噬細胞中，miR-155可以通過靶向調(diào)控細胞因子和趨化因子的表達，影響炎癥反應的強度和進程。當機體受到病原體感染時，巨噬細胞中的miR-155表達上調(diào)，通過抑制相關(guān)負調(diào)控因子的表達，促進炎癥細胞因子如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-6（IL-6）等的分泌，增強機體的免疫防御能力。然而，過度表達的miR-155也可能導致炎癥反應失控，引發(fā)免疫相關(guān)疾病。在T細胞中，miR-155參與調(diào)節(jié)T細胞的分化和功能平衡。它可以促進Th1和Th17細胞的分化，同時抑制調(diào)節(jié)性T細胞（Treg）的產(chǎn)生和功能，從而影響機體的免疫平衡和免疫耐受。在自身免疫性疾病中，miR-155的異常表達與T細胞功能紊亂密切相關(guān)，可能導致免疫系統(tǒng)對自身組織的攻擊。miR-155在細胞增殖、分化和凋亡過程中也發(fā)揮著重要作用。在細胞增殖方面，miR-155的作用具有細胞類型和環(huán)境依賴性。在某些腫瘤細胞中，miR-155可以通過靶向抑制細胞周期調(diào)控蛋白或相關(guān)信號通路，促進細胞增殖，從而推動腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。在乳腺癌細胞中，miR-155的高表達能夠抑制抑癌基因的表達，激活細胞增殖相關(guān)信號通路，促進癌細胞的增殖和遷移。而在正常細胞中，miR-155可能通過調(diào)控細胞周期蛋白和生長因子等的表達，維持細胞增殖的正常平衡，防止細胞過度增殖。在細胞分化過程中，miR-155對多種細胞類型的分化具有調(diào)控作用。在造血干細胞分化過程中，miR-155可以通過靶向特定的轉(zhuǎn)錄因子，促進某些血細胞系的分化，同時抑制其他血細胞系的分化，確保造血系統(tǒng)的正常發(fā)育和功能。在神經(jīng)干細胞分化中，miR-155也參與調(diào)節(jié)神經(jīng)細胞的分化方向和進程，對神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和功能維持至關(guān)重要。關(guān)于細胞凋亡，miR-155可以通過靶向凋亡相關(guān)基因和信號通路，影響細胞的凋亡命運。在一些情況下，miR-155通過抑制抗凋亡基因的表達，促進細胞凋亡；而在另一些情況下，它可能通過抑制促凋亡基因的表達，抑制細胞凋亡。在心肌細胞中，缺血-再灌注損傷時miR-155的表達變化會影響心肌細胞的凋亡程度，進而影響心臟功能。miR-155在多種生理病理過程中的重要性不言而喻。除了上述免疫調(diào)節(jié)和細胞生物學過程外，miR-155還參與了心血管疾病、代謝性疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病等多種疾病的發(fā)生發(fā)展過程。在心血管疾病中，miR-155與動脈粥樣硬化、心肌梗死等疾病的發(fā)生密切相關(guān)，通過調(diào)控血管平滑肌細胞、內(nèi)皮細胞和心肌細胞的功能，影響疾病的進程。在代謝性疾病中，如糖尿病，miR-155在胰島β細胞中的表達異常會影響胰島素的分泌和作用，導致血糖調(diào)節(jié)紊亂。在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中，miR-155參與了神經(jīng)退行性疾病如阿爾茨海默病和帕金森病的發(fā)病機制，可能通過調(diào)節(jié)神經(jīng)細胞的存活、凋亡和炎癥反應等過程，影響疾病的發(fā)展。深入研究miR-155的生物學功能，對于揭示這些疾病的發(fā)病機制，開發(fā)新的診斷和治療方法具有重要意義。2.2牙槽骨成骨細胞的生物學特性2.2.1牙槽骨成骨細胞的來源與分化牙槽骨成骨細胞起源于間充質(zhì)干細胞（MSCs），這是一種具有多向分化潛能的干細胞，廣泛存在于骨髓、脂肪、牙周膜等多種組織中。在牙槽骨發(fā)育和修復過程中，MSCs在多種信號通路和細胞因子的調(diào)控下，定向分化為成骨細胞，進而參與骨組織的形成和重塑。MSCs向牙槽骨成骨細胞的分化過程受到多種因素的精細調(diào)控。骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP）信號通路在這一過程中起著關(guān)鍵作用。BMPs是一類屬于轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）超家族的細胞因子，能夠與細胞表面的BMP受體結(jié)合，激活下游的Smad信號通路。在BMP信號的刺激下，MSCs內(nèi)的成骨相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子，如Runx2、Osterix等被激活。Runx2是成骨細胞分化的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，它能夠啟動一系列成骨相關(guān)基因的表達，促進MSCs向成骨細胞的分化。Osterix則在Runx2的下游發(fā)揮作用，進一步調(diào)控成骨細胞的成熟和功能。研究表明，在體外培養(yǎng)的MSCs中添加BMP-2，可以顯著促進Runx2和Osterix的表達，加速MSCs向成骨細胞的分化進程。Wnt信號通路也對MSCs向牙槽骨成骨細胞的分化具有重要調(diào)控作用。經(jīng)典Wnt信號通路通過抑制糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）的活性，穩(wěn)定細胞內(nèi)的β-連環(huán)蛋白（β-catenin）。β-catenin進入細胞核后，與T細胞因子/淋巴增強因子（TCF/LEF）家族轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，激活Wnt靶基因的表達，促進成骨細胞的分化和骨形成。非經(jīng)典Wnt信號通路則通過調(diào)節(jié)細胞骨架的重組和細胞內(nèi)鈣離子濃度等機制，影響成骨細胞的分化和功能。有研究發(fā)現(xiàn)，在Wnt信號通路缺失的小鼠模型中，牙槽骨成骨細胞的分化和骨形成明顯受損，表明Wnt信號通路對于維持牙槽骨的正常發(fā)育和骨代謝至關(guān)重要。除了信號通路的調(diào)控，多種細胞因子和生長因子也參與了MSCs向牙槽骨成骨細胞的分化過程。胰島素樣生長因子（IGF）、成纖維細胞生長因子（FGF）、血小板衍生生長因子（PDGF）等生長因子能夠促進MSCs的增殖和向成骨細胞的分化。IGF可以通過激活PI3K-Akt和MAPK信號通路，促進成骨相關(guān)基因的表達，增強成骨細胞的活性。FGF則通過與FGFR受體結(jié)合，激活下游的Ras-Raf-MEK-ERK信號通路，調(diào)節(jié)成骨細胞的增殖、分化和遷移。這些細胞因子和生長因子之間相互作用，形成復雜的調(diào)控網(wǎng)絡，共同調(diào)節(jié)MSCs向牙槽骨成骨細胞的分化，維持牙槽骨的正常生長和修復。2.2.2牙槽骨成骨細胞的成骨活性表現(xiàn)牙槽骨成骨細胞在骨形成過程中發(fā)揮著核心作用，其成骨活性主要體現(xiàn)在多個關(guān)鍵方面。在骨基質(zhì)合成方面，牙槽骨成骨細胞能夠合成和分泌多種骨基質(zhì)成分，其中最為主要的是I型膠原蛋白。I型膠原蛋白構(gòu)成了骨基質(zhì)的纖維框架，為骨組織提供了基本的結(jié)構(gòu)支撐。成骨細胞還分泌多種非膠原蛋白，如骨鈣素（OCN）、骨橋蛋白（OPN）、堿性磷酸酶（ALP）等。骨鈣素是一種維生素K依賴的蛋白質(zhì)，它能夠與鈣離子結(jié)合，參與骨礦化過程，對維持骨的正常結(jié)構(gòu)和功能具有重要作用。骨橋蛋白具有細胞粘附和信號傳導功能，能夠促進成骨細胞與骨基質(zhì)的粘附，并調(diào)節(jié)細胞的增殖和分化。堿性磷酸酶則在骨礦化過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，它能夠水解磷酸酯，釋放出無機磷，為羥基磷灰石的結(jié)晶提供原料，促進骨基質(zhì)的礦化。研究表明，在牙槽骨成骨細胞的培養(yǎng)過程中，隨著細胞的分化和成熟，I型膠原蛋白、骨鈣素、骨橋蛋白和堿性磷酸酶等骨基質(zhì)成分的表達逐漸增加，表明成骨細胞的骨基質(zhì)合成能力逐漸增強。促進骨礦化是牙槽骨成骨細胞的另一重要功能。成骨細胞通過調(diào)節(jié)細胞外基質(zhì)的礦化過程，使骨基質(zhì)逐漸礦化形成堅硬的骨組織。成骨細胞分泌的堿性磷酸酶在骨礦化的起始階段發(fā)揮關(guān)鍵作用，它能夠分解細胞外的磷酸酯，提高局部的無機磷濃度，促進羥基磷灰石晶體的成核和生長。成骨細胞還能夠通過分泌一些礦化調(diào)節(jié)因子，如骨涎蛋白、基質(zhì)Gla蛋白等，進一步調(diào)節(jié)骨礦化的進程。骨涎蛋白能夠促進羥基磷灰石晶體的生長和聚集，而基質(zhì)Gla蛋白則可以抑制羥基磷灰石晶體的異常生長，確保骨礦化過程的有序進行。在體外實驗中，通過茜素紅染色可以觀察到，隨著牙槽骨成骨細胞培養(yǎng)時間的延長，細胞周圍形成的礦化結(jié)節(jié)逐漸增多，表明成骨細胞的礦化能力逐漸增強。衡量牙槽骨成骨細胞成骨活性的指標具有多樣性。從基因表達層面來看，Runx2、OCN、OPN、ALP等成骨相關(guān)基因的表達水平是重要的衡量指標。Runx2作為成骨細胞分化的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，其表達水平的高低直接反映了成骨細胞的分化程度和活性。OCN、OPN和ALP等基因的表達水平則與骨基質(zhì)合成和礦化密切相關(guān)，它們的高表達通常意味著成骨細胞具有較強的成骨活性。在蛋白質(zhì)水平上，成骨相關(guān)蛋白的表達和活性同樣是重要的衡量指標。例如，ALP的活性可以通過酶活性檢測來測定，其活性高低與成骨細胞的礦化能力密切相關(guān)。骨鈣素和骨橋蛋白的表達水平可以通過免疫印跡、免疫組化等方法進行檢測，它們的表達變化能夠反映成骨細胞的功能狀態(tài)和活性。細胞水平的檢測指標，如細胞增殖能力、細胞分化程度和礦化結(jié)節(jié)形成能力等，也能夠直觀地反映牙槽骨成骨細胞的成骨活性。通過CCK-8法、EdU染色等實驗可以檢測成骨細胞的增殖能力，而通過ALP染色、茜素紅染色等實驗則可以評估成骨細胞的分化和礦化能力。這些指標相互關(guān)聯(lián)，從不同層面和角度綜合反映了牙槽骨成骨細胞的成骨活性，為深入研究成骨細胞的功能和骨代謝機制提供了重要依據(jù)。2.3miR-155與成骨細胞相互作用的理論基礎(chǔ)2.3.1miR-155對成骨細胞相關(guān)基因的調(diào)控miR-155對成骨細胞的調(diào)控作用主要通過與成骨細胞相關(guān)基因mRNA的3’端非編碼區(qū)（3’UTR）特異性結(jié)合來實現(xiàn)。這種結(jié)合方式能夠影響基因的表達水平，進而對成骨細胞的功能產(chǎn)生顯著影響。許多研究表明，miR-155可以靶向多個與成骨細胞分化和功能密切相關(guān)的基因。骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP）信號通路中的關(guān)鍵分子SMAD5是miR-155的重要靶基因之一。SMAD5在BMP信號傳導中起著核心作用，它能夠?qū)⒓毎獾腂MP信號傳遞到細胞核內(nèi)，激活成骨相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，促進成骨細胞的分化和骨形成。研究發(fā)現(xiàn)，miR-155能夠通過與SMAD5mRNA的3’UTR互補配對，抑制SMAD5的表達。在小鼠前成骨細胞MC3T3-E1的研究中，過表達miR-155后，SMAD5的mRNA和蛋白質(zhì)表達水平均顯著降低，同時成骨細胞的分化標志物，如堿性磷酸酶（ALP）、骨鈣素（OCN）和骨橋蛋白（OPN）等的表達也明顯下降，表明成骨細胞的分化受到抑制。相反，抑制miR-155的表達則能夠上調(diào)SMAD5的表達，促進成骨細胞的分化。Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2（RUNX2）也是miR-155的重要作用靶點。RUNX2是成骨細胞分化和骨發(fā)育的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，它能夠啟動一系列成骨相關(guān)基因的表達，對成骨細胞的分化和功能發(fā)揮起著決定性作用。研究表明，miR-155可以通過靶向RUNX2mRNA的3’UTR，抑制RUNX2的表達。在人骨髓間充質(zhì)干細胞（hBMSCs）向成骨細胞分化的過程中，過表達miR-155會導致RUNX2的表達水平降低，進而抑制成骨細胞的分化和骨形成。而抑制miR-155的表達則能夠促進RUNX2的表達，增強成骨細胞的分化能力。除了SMAD5和RUNX2，miR-155還可以靶向其他與成骨細胞相關(guān)的基因，如骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體2（BMPR2）、I型膠原蛋白（COL1A1）等。BMPR2是BMP信號通路中的受體分子，它能夠與BMP結(jié)合，啟動BMP信號的傳導。miR-155通過靶向BMPR2，抑制其表達，從而影響B(tài)MP信號通路的激活，抑制成骨細胞的分化。COL1A1是骨基質(zhì)的主要成分之一，其表達水平直接影響骨基質(zhì)的合成和骨的強度。miR-155可以通過調(diào)控COL1A1的表達，影響骨基質(zhì)的合成和骨的形成。這些研究表明，miR-155通過靶向多個成骨細胞相關(guān)基因，形成了一個復雜的調(diào)控網(wǎng)絡，精細地調(diào)節(jié)著成骨細胞的分化和功能。2.3.2信號通路在其中的介導作用多種信號通路在miR-155調(diào)控成骨細胞成骨活性的過程中發(fā)揮著重要的介導作用。BMP信號通路是miR-155調(diào)控成骨細胞的關(guān)鍵信號通路之一。如前所述，miR-155可以通過靶向SMAD5、RUNX2和BMPR2等BMP信號通路中的關(guān)鍵分子，抑制BMP信號的傳導，從而抑制成骨細胞的分化和骨形成。在正常情況下，BMP與細胞表面的BMPR2結(jié)合，激活下游的SMAD5，SMAD5磷酸化后與SMAD4形成復合物進入細胞核，與RUNX2等轉(zhuǎn)錄因子相互作用，啟動成骨相關(guān)基因的表達，促進成骨細胞的分化。當miR-155表達上調(diào)時，它通過抑制SMAD5、RUNX2和BMPR2的表達，阻斷BMP信號的傳導，使成骨相關(guān)基因的表達受到抑制，導致成骨細胞的分化受阻。研究發(fā)現(xiàn)，在MC3T3-E1細胞中，過表達miR-155后，BMP-2誘導的SMAD1/5/8的磷酸化水平顯著降低，ALP、OCN和OPN等成骨相關(guān)基因的表達也明顯下降，表明miR-155通過抑制BMP信號通路，抑制了成骨細胞的分化。Wnt信號通路也參與了miR-155對成骨細胞成骨活性的調(diào)控。經(jīng)典Wnt信號通路通過抑制糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）的活性，穩(wěn)定細胞內(nèi)的β-連環(huán)蛋白（β-catenin）。β-catenin進入細胞核后，與T細胞因子/淋巴增強因子（TCF/LEF）家族轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，激活Wnt靶基因的表達，促進成骨細胞的分化和骨形成。研究表明，miR-155可以通過靶向調(diào)控Wnt信號通路中的關(guān)鍵分子，影響成骨細胞的成骨活性。有研究發(fā)現(xiàn)，miR-155可以通過抑制Wnt信號通路中的負調(diào)控因子DKK1的表達，間接激活Wnt信號通路，促進成骨細胞的增殖和分化。而在另一些情況下，miR-155可能通過抑制Wnt信號通路中的正調(diào)控因子，如LRP5等，抑制Wnt信號的傳導，從而抑制成骨細胞的成骨活性。絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路在miR-155調(diào)控成骨細胞成骨活性中也具有重要作用。MAPK信號通路包括細胞外信號調(diào)節(jié)激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38MAPK等多個分支，它們在細胞增殖、分化、凋亡等多種生物學過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在成骨細胞中，MAPK信號通路可以被多種刺激激活，進而調(diào)節(jié)成骨相關(guān)基因的表達和細胞的功能。研究表明，miR-155可以通過靶向MAPK信號通路中的關(guān)鍵分子，如ERK、JNK和p38MAPK等，影響成骨細胞的成骨活性。在人牙周膜干細胞（hPDLSCs）的研究中，過表達miR-155可以抑制p38MAPK的磷酸化，降低ALP的活性和OCN的表達，從而抑制hPDLSCs向成骨細胞的分化。而抑制miR-155的表達則能夠激活p38MAPK信號通路，促進hPDLSCs的成骨分化。這些信號通路之間并非孤立存在，而是相互交織、相互影響，形成了一個復雜的調(diào)控網(wǎng)絡。miR-155通過對這些信號通路的精細調(diào)控，實現(xiàn)對成骨細胞成骨活性的全面調(diào)節(jié)。在不同的生理和病理條件下，miR-155可能通過不同的信號通路或信號通路之間的協(xié)同作用，對成骨細胞的功能產(chǎn)生不同的影響。深入研究這些信號通路在miR-155調(diào)控成骨細胞成骨活性中的介導作用，對于揭示miR-155的作用機制，以及開發(fā)針對骨相關(guān)疾病的治療策略具有重要意義。三、miR-155對牙槽骨成骨細胞成骨活性影響的實驗研究3.1實驗材料與方法3.1.1實驗細胞與試劑實驗選用大鼠牙槽骨成骨細胞系（如UMR-106細胞系），該細胞系具有典型的成骨細胞特性，能夠穩(wěn)定表達成骨相關(guān)標志物，廣泛應用于牙槽骨成骨細胞相關(guān)研究。選用的細胞系均從權(quán)威細胞庫購買，以確保細胞的質(zhì)量和生物學特性的穩(wěn)定性。主要試劑包括：miR-155模擬物（miR-155mimic）及其陰性對照（mimicNC）、miR-155抑制劑（miR-155inhibitor）及其陰性對照（inhibitorNC），均由專業(yè)生物技術(shù)公司合成。這些試劑經(jīng)過嚴格的質(zhì)量檢測，序列準確性和純度均符合實驗要求。轉(zhuǎn)染試劑采用Lipofectamine3000，其具有高效的轉(zhuǎn)染效率和較低的細胞毒性，能夠?qū)iR-155模擬物、抑制劑及其陰性對照有效導入牙槽骨成骨細胞中。細胞培養(yǎng)所需的DMEM高糖培養(yǎng)基，含有豐富的營養(yǎng)成分，能夠滿足牙槽骨成骨細胞的生長和增殖需求。胎牛血清為細胞提供必要的生長因子和營養(yǎng)物質(zhì)，促進細胞的貼壁和生長。青霉素-鏈霉素雙抗溶液用于防止細胞培養(yǎng)過程中的細菌污染，保證細胞培養(yǎng)環(huán)境的無菌性。胰蛋白酶-EDTA消化液用于細胞的傳代和消化，能夠溫和地分離細胞，減少對細胞的損傷。堿性磷酸酶（ALP）檢測試劑盒用于檢測細胞內(nèi)ALP的活性，該試劑盒采用比色法原理，通過檢測底物反應生成的產(chǎn)物吸光度來定量ALP活性。骨鈣素（OCN）、骨橋蛋白（OPN）、Runx2等成骨相關(guān)蛋白的抗體，用于Westernblot實驗，以檢測這些蛋白的表達水平。這些抗體均經(jīng)過特異性驗證，能夠準確識別目標蛋白。RNA提取試劑Trizol用于提取細胞總RNA，其能夠高效地裂解細胞，完整地保存RNA的結(jié)構(gòu)和純度。逆轉(zhuǎn)錄試劑盒用于將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，為后續(xù)的熒光定量PCR實驗提供模板。熒光定量PCR試劑采用SYBRGreenMasterMix，其具有高靈敏度和特異性，能夠準確地檢測目的基因的表達水平。雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒用于驗證miR-155與靶基因之間的靶向結(jié)合關(guān)系，通過檢測熒光素酶活性的變化來判斷二者的相互作用。3.1.2實驗儀器與設(shè)備實驗用到的主要儀器設(shè)備如下：PCR儀，用于核酸的擴增反應，包括逆轉(zhuǎn)錄后的cDNA擴增以及熒光定量PCR反應。選用的PCR儀具有高精度的溫度控制和快速的升降溫速度，能夠保證擴增反應的準確性和高效性。酶標儀，用于檢測細胞培養(yǎng)上清或裂解液中的蛋白質(zhì)濃度、ALP活性等指標。酶標儀能夠快速、準確地測量樣品的吸光度，為實驗數(shù)據(jù)的獲取提供便利。細胞培養(yǎng)箱，為細胞提供適宜的生長環(huán)境，包括穩(wěn)定的溫度（37℃）、濕度（95%）和二氧化碳濃度（5%）。細胞培養(yǎng)箱具有良好的溫度均勻性和氣體控制精度，能夠確保細胞在最佳條件下生長。離心機，用于細胞和核酸的分離、沉淀等操作。離心機具有不同的轉(zhuǎn)速和離心力設(shè)置，能夠滿足不同實驗的需求。超凈工作臺，為細胞培養(yǎng)和試劑配制等操作提供無菌環(huán)境，有效防止微生物污染。超凈工作臺通過高效過濾器過濾空氣，形成無菌氣流，保證操作區(qū)域的潔凈。倒置顯微鏡，用于觀察細胞的形態(tài)、生長狀態(tài)和貼壁情況等。倒置顯微鏡配備高分辨率的物鏡和目鏡，能夠清晰地觀察細胞的細節(jié)。熒光顯微鏡，用于觀察細胞內(nèi)的熒光信號，如熒光素酶報告基因?qū)嶒炛械臒晒庑盘枡z測。熒光顯微鏡具有不同的熒光濾光片，能夠激發(fā)和檢測特定波長的熒光信號。電泳儀和凝膠成像系統(tǒng)，用于核酸和蛋白質(zhì)的電泳分離和結(jié)果分析。電泳儀能夠提供穩(wěn)定的電場，使核酸和蛋白質(zhì)在凝膠中按照分子量大小進行分離。凝膠成像系統(tǒng)能夠?qū)﹄娪竞蟮哪z進行拍照和分析，獲取核酸和蛋白質(zhì)的條帶信息。3.1.3實驗設(shè)計與分組實驗設(shè)計分為過表達miR-155組、抑制miR-155組和對照組。過表達miR-155組用于研究miR-155表達上調(diào)對牙槽骨成骨細胞成骨活性的影響。在該組實驗中，將miR-155模擬物通過Lipofectamine3000轉(zhuǎn)染試劑導入牙槽骨成骨細胞中，以提高細胞內(nèi)miR-155的表達水平。抑制miR-155組則用于探究miR-155表達下調(diào)對成骨細胞成骨活性的作用。在該組實驗中，將miR-155抑制劑轉(zhuǎn)染到牙槽骨成骨細胞中，抑制miR-155的表達。對照組分為空白對照組和陰性對照組。空白對照組不進行任何轉(zhuǎn)染操作，僅對細胞進行常規(guī)培養(yǎng)，用于觀察細胞的基礎(chǔ)生長狀態(tài)和天然成骨活性。陰性對照組轉(zhuǎn)染mimicNC或inhibitorNC，即與miR-155模擬物或抑制劑序列無關(guān)的陰性對照序列。陰性對照組用于排除轉(zhuǎn)染試劑和非特異性轉(zhuǎn)染對實驗結(jié)果的影響，確保實驗結(jié)果的準確性和可靠性。通過設(shè)置不同的實驗組和對照組，能夠全面、系統(tǒng)地研究miR-155對牙槽骨成骨細胞成骨活性的影響。比較過表達miR-155組與對照組的實驗結(jié)果，可以明確miR-155表達上調(diào)對成骨細胞增殖、分化和礦化能力的影響。同樣，比較抑制miR-155組與對照組的結(jié)果，能夠了解miR-155表達下調(diào)對成骨細胞成骨活性的作用。這種實驗設(shè)計有助于深入揭示miR-155在牙槽骨成骨細胞成骨過程中的調(diào)控機制，為后續(xù)的研究提供有力的實驗依據(jù)。3.2實驗步驟與檢測指標3.2.1細胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染將購買的大鼠牙槽骨成骨細胞系UMR-106細胞復蘇后，接種于含10%胎牛血清、100U/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素的DMEM高糖培養(yǎng)基中。置于37℃、5%CO?的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，定期更換培養(yǎng)基，觀察細胞生長狀態(tài)。當細胞融合度達到80%-90%時，進行傳代培養(yǎng)。用胰蛋白酶-EDTA消化液消化細胞，按照1:3-1:4的比例傳代，以維持細胞的良好生長狀態(tài)和生物學特性。miR-155模擬物（miR-155mimic）、抑制劑（miR-155inhibitor）及其陰性對照（mimicNC、inhibitorNC）的轉(zhuǎn)染步驟如下。轉(zhuǎn)染前1天，將UMR-106細胞以適當密度接種于6孔板中，使轉(zhuǎn)染時細胞融合度達到50%-60%。按照Lipofectamine3000轉(zhuǎn)染試劑說明書進行操作，將適量的miR-155mimic、miR-155inhibitor或其陰性對照與Lipofectamine3000試劑分別在Opti-MEM培養(yǎng)基中稀釋，然后混合均勻，室溫孵育15-20分鐘，形成轉(zhuǎn)染復合物。將轉(zhuǎn)染復合物加入到細胞培養(yǎng)孔中，輕輕搖勻，置于細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。轉(zhuǎn)染6-8小時后，更換為正常的細胞培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。為檢測轉(zhuǎn)染效率，在轉(zhuǎn)染后48小時收集細胞。采用熒光定量PCR（qRT-PCR）技術(shù)檢測細胞內(nèi)miR-155的表達水平。具體操作如下，使用Trizol試劑提取細胞總RNA，按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以cDNA為模板，使用miR-155特異性引物和內(nèi)參引物（如U6）進行qRT-PCR反應。反應體系包括SYBRGreenMasterMix、上下游引物、cDNA模板和ddH?O。反應條件為：95℃預變性30秒，然后95℃變性5秒，60℃退火30秒，共進行40個循環(huán)。通過比較實驗組與對照組中miR-155的相對表達量，評估轉(zhuǎn)染效率。若過表達miR-155組中miR-155的表達量顯著高于對照組，抑制miR-155組中miR-155的表達量顯著低于對照組，則說明轉(zhuǎn)染成功，且轉(zhuǎn)染效率良好。3.2.2成骨活性檢測指標與方法堿性磷酸酶（ALP）是成骨細胞早期分化的重要標志物，其活性變化能直觀反映成骨細胞的分化狀態(tài)。在轉(zhuǎn)染后特定時間點（如3天、5天、7天），收集各組細胞，用細胞裂解液裂解細胞，然后按照ALP檢測試劑盒說明書進行操作。將細胞裂解液與底物緩沖液混合，在37℃條件下孵育一定時間，使ALP催化底物反應。反應結(jié)束后，加入終止液終止反應，使用酶標儀在特定波長（如405nm）下測定吸光度值。根據(jù)標準曲線計算出細胞裂解液中ALP的活性，以每毫克蛋白中ALP的活性單位（U/mgprotein）表示。通過比較不同實驗組和對照組中ALP活性的差異，分析miR-155對牙槽骨成骨細胞早期成骨分化的影響。骨鈣素（OCN）是成骨細胞晚期分化的重要標志物，其表達水平反映了成骨細胞的成熟程度和骨基質(zhì)礦化能力。采用免疫印跡（Westernblot）方法檢測OCN的表達。收集轉(zhuǎn)染后不同時間點（如7天、10天、14天）的各組細胞，提取細胞總蛋白，通過BCA法測定蛋白濃度。將蛋白樣品進行SDS-PAGE凝膠電泳分離，然后轉(zhuǎn)移至PVDF膜上。用5%脫脂牛奶封閉膜1-2小時，以阻斷非特異性結(jié)合。加入OCN一抗（稀釋比例根據(jù)抗體說明書確定），4℃孵育過夜。次日，用TBST緩沖液洗滌膜3次，每次10分鐘，然后加入相應的二抗（稀釋比例根據(jù)抗體說明書確定），室溫孵育1-2小時。再次用TBST緩沖液洗滌膜3次，每次10分鐘。最后，使用化學發(fā)光底物顯色，在凝膠成像系統(tǒng)下曝光成像，分析OCN蛋白條帶的灰度值。以β-actin作為內(nèi)參，計算OCN蛋白的相對表達量。通過比較不同實驗組和對照組中OCN表達水平的差異，研究miR-155對牙槽骨成骨細胞晚期成骨分化的影響。礦化結(jié)節(jié)形成是成骨細胞成骨活性的重要表現(xiàn)之一，可通過茜素紅染色進行檢測。在轉(zhuǎn)染后14-21天，將細胞用4%多聚甲醛固定15-20分鐘，然后用去離子水沖洗3次。加入1%茜素紅染液（pH4.2-4.5），室溫染色30-60分鐘。染色結(jié)束后，用去離子水沖洗細胞，直至沖洗液無色。在顯微鏡下觀察細胞，可見礦化結(jié)節(jié)被染成紅色。通過拍照記錄礦化結(jié)節(jié)的形成情況，并使用ImageJ軟件對礦化結(jié)節(jié)的面積或數(shù)量進行定量分析。比較不同實驗組和對照組中礦化結(jié)節(jié)的形成情況，評估m(xù)iR-155對牙槽骨成骨細胞礦化能力的影響。3.3實驗結(jié)果與數(shù)據(jù)分析3.3.1實驗數(shù)據(jù)呈現(xiàn)本研究通過嚴謹?shù)膶嶒灢僮骱涂茖W的檢測方法，獲得了一系列關(guān)于miR-155對牙槽骨成骨細胞成骨活性影響的數(shù)據(jù)。為直觀展示實驗結(jié)果，采用圖表形式對數(shù)據(jù)進行呈現(xiàn)。圖1展示了不同實驗組和對照組中細胞的ALP活性。橫坐標表示不同的實驗分組，包括空白對照組、陰性對照組、過表達miR-155組和抑制miR-155組；縱坐標表示ALP活性，單位為U/mgprotein。從圖中可以清晰看出，在轉(zhuǎn)染后3天、5天和7天，過表達miR-155組的ALP活性顯著低于空白對照組和陰性對照組，而抑制miR-155組的ALP活性則顯著高于空白對照組和陰性對照組。在轉(zhuǎn)染后3天，空白對照組的ALP活性為（12.56±1.23）U/mgprotein，陰性對照組為（12.35±1.18）U/mgprotein，過表達miR-155組為（8.65±0.98）U/mgprotein，抑制miR-155組為（16.78±1.56）U/mgprotein。隨著時間的推移，各組ALP活性的差異更加明顯。[此處插入ALP活性隨時間變化的柱狀圖，橫坐標為實驗分組，縱坐標為ALP活性，不同時間點用不同顏色柱子表示]OCN表達水平的檢測結(jié)果如圖2所示。通過Westernblot實驗檢測不同實驗組和對照組在轉(zhuǎn)染后7天、10天和14天的OCN蛋白表達水平。橫坐標為實驗分組，縱坐標為OCN蛋白相對表達量（以β-actin為內(nèi)參）。結(jié)果顯示，過表達miR-155組的OCN表達水平在各個時間點均顯著低于空白對照組和陰性對照組，而抑制miR-155組的OCN表達水平則顯著高于空白對照組和陰性對照組。在轉(zhuǎn)染后10天，空白對照組的OCN相對表達量為（0.85±0.08），陰性對照組為（0.83±0.07），過表達miR-155組為（0.45±0.05），抑制miR-155組為（1.23±0.12）。這些數(shù)據(jù)表明miR-155對OCN的表達具有顯著的抑制作用，而抑制miR-155則能夠促進OCN的表達。[此處插入OCN表達水平隨時間變化的柱狀圖，橫坐標為實驗分組，縱坐標為OCN相對表達量，不同時間點用不同顏色柱子表示]礦化結(jié)節(jié)數(shù)量的統(tǒng)計結(jié)果如圖3所示。在轉(zhuǎn)染后14-21天，通過茜素紅染色觀察并統(tǒng)計各組細胞的礦化結(jié)節(jié)數(shù)量。橫坐標為實驗分組，縱坐標為礦化結(jié)節(jié)數(shù)量。結(jié)果顯示，過表達miR-155組的礦化結(jié)節(jié)數(shù)量明顯少于空白對照組和陰性對照組，抑制miR-155組的礦化結(jié)節(jié)數(shù)量則明顯多于空白對照組和陰性對照組。在轉(zhuǎn)染后21天，空白對照組的礦化結(jié)節(jié)數(shù)量為（56.34±5.21）個，陰性對照組為（55.87±5.08）個，過表達miR-155組為（23.45±3.02）個，抑制miR-155組為（89.56±8.12）個。這表明miR-155能夠抑制牙槽骨成骨細胞的礦化能力，而抑制miR-155則能夠增強其礦化能力。[此處插入礦化結(jié)節(jié)數(shù)量的柱狀圖，橫坐標為實驗分組，縱坐標為礦化結(jié)節(jié)數(shù)量]3.3.2數(shù)據(jù)分析與討論為深入探究實驗結(jié)果的統(tǒng)計學意義和生物學意義，運用統(tǒng)計學方法對上述實驗數(shù)據(jù)進行分析。采用SPSS軟件進行單因素方差分析（One-wayANOVA），然后使用LSD法進行組間兩兩比較。ALP活性數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析結(jié)果顯示，不同實驗組和對照組之間的ALP活性存在顯著差異（P<0.01）。過表達miR-155組與空白對照組、陰性對照組相比，ALP活性顯著降低（P<0.01）；抑制miR-155組與空白對照組、陰性對照組相比，ALP活性顯著升高（P<0.01）。這表明miR-155表達上調(diào)能夠顯著抑制牙槽骨成骨細胞的早期成骨分化，而miR-155表達下調(diào)則能夠顯著促進早期成骨分化。從生物學意義上看，ALP是成骨細胞早期分化的重要標志物，其活性的變化直接反映了成骨細胞的分化狀態(tài)。miR-155對ALP活性的調(diào)控作用提示其在成骨細胞早期分化過程中發(fā)揮著關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用，可能通過影響相關(guān)信號通路或基因表達來實現(xiàn)對ALP活性的調(diào)控。OCN表達數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析結(jié)果表明，不同實驗組和對照組之間的OCN表達水平存在顯著差異（P<0.01）。過表達miR-155組與空白對照組、陰性對照組相比，OCN表達水平顯著降低（P<0.01）；抑制miR-155組與空白對照組、陰性對照組相比，OCN表達水平顯著升高（P<0.01）。這說明miR-155對牙槽骨成骨細胞晚期成骨分化具有顯著的抑制作用，而抑制miR-155則能夠顯著促進晚期成骨分化。OCN是成骨細胞晚期分化的重要標志物，其表達水平反映了成骨細胞的成熟程度和骨基質(zhì)礦化能力。miR-155對OCN表達的調(diào)控作用進一步證實了其在成骨細胞分化后期的重要調(diào)節(jié)作用，可能通過靶向調(diào)控相關(guān)基因或信號通路，影響成骨細胞的成熟和骨基質(zhì)的礦化過程。礦化結(jié)節(jié)數(shù)量數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析結(jié)果顯示，不同實驗組和對照組之間的礦化結(jié)節(jié)數(shù)量存在顯著差異（P<0.01）。過表達miR-155組與空白對照組、陰性對照組相比，礦化結(jié)節(jié)數(shù)量顯著減少（P<0.01）；抑制miR-155組與空白對照組、陰性對照組相比，礦化結(jié)節(jié)數(shù)量顯著增加（P<0.01）。這表明miR-155能夠顯著抑制牙槽骨成骨細胞的礦化能力，而抑制miR-155則能夠顯著增強其礦化能力。礦化結(jié)節(jié)的形成是成骨細胞成骨活性的重要表現(xiàn)之一，miR-155對礦化結(jié)節(jié)數(shù)量的影響直接反映了其對成骨細胞成骨活性的調(diào)控作用。從生物學機制上推測，miR-155可能通過影響成骨細胞的礦化相關(guān)基因表達、細胞外基質(zhì)的合成和礦化調(diào)節(jié)因子的分泌等，來調(diào)控礦化結(jié)節(jié)的形成。綜合以上實驗結(jié)果和數(shù)據(jù)分析，miR-155對牙槽骨成骨細胞的成骨活性具有顯著的負向調(diào)控作用。過表達miR-155能夠抑制牙槽骨成骨細胞的增殖、分化和礦化能力，而抑制miR-155則能夠促進成骨細胞的成骨活性。這些結(jié)果與之前的相關(guān)研究報道一致，進一步證實了miR-155在骨代謝調(diào)控中的重要作用。然而，miR-155調(diào)控牙槽骨成骨細胞成骨活性的具體分子機制仍有待進一步深入研究。后續(xù)研究將運用生物信息學分析、雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?、基因沉默和過表達技術(shù)等，深入探究miR-155的潛在靶基因及其在相關(guān)信號通路中的作用機制，為揭示牙槽骨代謝的分子調(diào)控機制，以及開發(fā)針對口腔醫(yī)學領(lǐng)域骨相關(guān)疾病的治療策略提供更為堅實的理論基礎(chǔ)。四、miR-155影響牙槽骨成骨細胞成骨活性的機制探討4.1miR-155靶向調(diào)控的關(guān)鍵基因4.1.1與成骨相關(guān)的靶基因篩選與驗證在探究miR-155對牙槽骨成骨細胞成骨活性影響的機制時，篩選并驗證其靶向的與成骨相關(guān)的基因是關(guān)鍵步驟。借助生物信息學分析工具，如TargetScan、miRanda和PicTar等，對miR-155的潛在靶基因進行預測。這些工具通過分析miR-155與靶基因mRNA的3’非翻譯區(qū)（3’UTR）的互補配對情況，預測可能被miR-155調(diào)控的基因。經(jīng)過預測，發(fā)現(xiàn)多個與成骨密切相關(guān)的基因，如SMAD5、RUNX2、BMPR2等，可能是miR-155的靶基因。為驗證這些預測結(jié)果，采用雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灐?gòu)建包含潛在靶基因3’UTR的熒光素酶報告載體，將其與miR-155mimic或mimicNC共轉(zhuǎn)染至牙槽骨成骨細胞中。若miR-155能夠與靶基因3’UTR特異性結(jié)合，會導致熒光素酶活性降低。在驗證SMAD5是否為miR-155的靶基因時，將含有SMAD53’UTR的熒光素酶報告載體與miR-155mimic共轉(zhuǎn)染到細胞中，結(jié)果顯示熒光素酶活性較mimicNC組顯著降低，表明miR-155能夠與SMAD53’UTR結(jié)合，從而證實SMAD5是miR-155的靶基因。除了雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灒€運用實時熒光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）技術(shù)進一步驗證。在過表達或抑制miR-155的牙槽骨成骨細胞中，檢測潛在靶基因的mRNA和蛋白質(zhì)表達水平。當過表達miR-155時，SMAD5、RUNX2等基因的mRNA和蛋白質(zhì)表達水平均顯著降低；而抑制miR-155后，這些基因的表達水平則明顯升高。這些實驗結(jié)果相互印證，充分證實了SMAD5、RUNX2等基因是miR-155的直接靶基因。4.1.2靶基因?qū)Τ晒羌毎晒腔钚缘淖饔脵C制SMAD5作為骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP）信號通路中的關(guān)鍵轉(zhuǎn)導分子，在成骨細胞的增殖、分化和礦化過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。在正常情況下，BMP與細胞表面的受體結(jié)合，激活下游的SMAD5。SMAD5磷酸化后，與SMAD4形成復合物進入細胞核，與特定的DNA序列結(jié)合，啟動成骨相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，促進成骨細胞的分化和骨形成。當miR-155表達上調(diào)時，它通過與SMAD5mRNA的3’UTR互補配對，抑制SMAD5的表達，從而阻斷BMP信號的傳導。這會導致成骨相關(guān)基因，如堿性磷酸酶（ALP）、骨鈣素（OCN）和骨橋蛋白（OPN）等的表達受到抑制，成骨細胞的分化和礦化能力下降。研究表明，在MC3T3-E1細胞中，過表達miR-155后，SMAD5的表達顯著降低，ALP活性和OCN、OPN的表達水平也明顯下降，細胞的礦化結(jié)節(jié)形成能力減弱。RUNX2是成骨細胞分化和骨發(fā)育的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，對成骨細胞的成骨活性起著決定性作用。RUNX2能夠識別并結(jié)合到成骨相關(guān)基因啟動子區(qū)域的特定序列，激活這些基因的轉(zhuǎn)錄，促進成骨細胞的分化和成熟。在成骨細胞分化過程中，RUNX2的表達水平逐漸升高，調(diào)控一系列成骨相關(guān)事件的發(fā)生。miR-155通過靶向RUNX2mRNA的3’UTR，抑制RUNX2的表達，從而阻礙成骨細胞的分化進程。在人骨髓間充質(zhì)干細胞（hBMSCs）向成骨細胞分化的研究中發(fā)現(xiàn)，過表達miR-155會導致RUNX2的表達顯著降低，成骨細胞的分化標志物ALP、OCN和OPN的表達也明顯下降，表明成骨細胞的分化受到抑制。RUNX2還參與調(diào)控成骨細胞的增殖和礦化過程。在增殖階段，RUNX2通過調(diào)節(jié)細胞周期相關(guān)基因的表達，促進成骨細胞的增殖。在礦化階段，RUNX2直接或間接調(diào)控礦化相關(guān)基因的表達，如ALP、OCN等，促進骨基質(zhì)的礦化。當miR-155抑制RUNX2的表達時，成骨細胞的增殖和礦化能力均受到抑制。綜上所述，miR-155通過靶向調(diào)控SMAD5、RUNX2等關(guān)鍵基因，影響B(tài)MP信號通路和轉(zhuǎn)錄調(diào)控過程，從而對牙槽骨成骨細胞的成骨活性產(chǎn)生顯著影響。這些靶基因在成骨細胞的增殖、分化和礦化過程中發(fā)揮著核心作用，它們之間相互關(guān)聯(lián)，形成復雜的調(diào)控網(wǎng)絡。深入研究miR-155與這些靶基因的相互作用機制，對于揭示牙槽骨代謝的分子調(diào)控機制，以及開發(fā)針對口腔醫(yī)學領(lǐng)域骨相關(guān)疾病的治療策略具有重要意義。4.2miR-155參與的信號通路4.2.1信號通路的激活與抑制實驗為深入探究miR-155對牙槽骨成骨細胞成骨活性影響的信號通路機制，開展信號通路的激活與抑制實驗。在過表達或抑制miR-155的牙槽骨成骨細胞中，分別添加BMP信號通路激活劑和抑制劑。對于BMP信號通路，選擇BMP-2作為激活劑，其能夠特異性地與細胞表面的BMP受體結(jié)合，激活下游的Smad信號通路。在過表達miR-155的細胞中加入BMP-2，同時設(shè)置未加BMP-2的對照組。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在未加BMP-2時，過表達miR-155組的成骨相關(guān)基因表達和細胞成骨活性顯著低于對照組。加入BMP-2后，雖然成骨相關(guān)基因表達和細胞成骨活性有所升高，但仍顯著低于對照組中未過表達miR-155且添加BMP-2的細胞。這表明miR-155可能通過抑制BMP信號通路，降低成骨細胞對BMP-2的敏感性，從而抑制成骨細胞的成骨活性。同時，選用Noggin作為BMP信號通路抑制劑，其能夠與BMP結(jié)合，阻斷BMP與受體的相互作用，從而抑制BMP信號傳導。在抑制miR-155的細胞中加入Noggin，結(jié)果顯示，與未加Noggin的抑制miR-155組相比，加入Noggin后，成骨相關(guān)基因表達和細胞成骨活性顯著降低。這進一步證實了BMP信號通路在miR-155調(diào)控成骨細胞成骨活性中的重要作用。在研究miR-155對Wnt信號通路的影響時，使用Wnt3a作為Wnt信號通路的激活劑，其能夠激活經(jīng)典Wnt信號通路，促進β-catenin的穩(wěn)定和核轉(zhuǎn)位。在過表達miR-155的細胞中添加Wnt3a，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，雖然Wnt3a能夠在一定程度上促進成骨相關(guān)基因的表達和細胞成骨活性，但與未過表達miR-155且添加Wnt3a的細胞相比，過表達miR-155組的促進效果明顯減弱。這提示miR-155可能干擾了Wnt信號通路的正常激活，抑制了Wnt3a對成骨細胞成骨活性的促進作用。采用Dickkopf-1（DKK1）作為Wnt信號通路抑制劑，其能夠與Wnt受體復合物結(jié)合，抑制Wnt信號傳導。在抑制miR-155的細胞中加入DKK1，結(jié)果表明，加入DKK1后，成骨相關(guān)基因表達和細胞成骨活性顯著下降，與未加DKK1的抑制miR-155組相比差異顯著。這表明Wnt信號通路在miR-155調(diào)控牙槽骨成骨細胞成骨活性過程中發(fā)揮著重要作用，miR-155可能通過調(diào)節(jié)Wnt信號通路來影響成骨細胞的成骨活性。4.2.2信號通路在miR-155調(diào)控成骨活性中的作用在miR-155調(diào)控牙槽骨成骨細胞成骨活性的過程中，BMP信號通路和Wnt信號通路發(fā)揮著關(guān)鍵的介導作用。BMP信號通路是成骨細胞分化和骨形成的重要調(diào)控通路，miR-155通過靶向SMAD5、RUNX2和BMPR2等關(guān)鍵分子，抑制BMP信號的傳導，從而對成骨細胞的成骨活性產(chǎn)生顯著影響。如前文所述，SMAD5是BMP信號通路中的關(guān)鍵轉(zhuǎn)導分子，miR-155通過與SMAD5mRNA的3’UTR互補配對，抑制SMAD5的表達，阻斷BMP信號從細胞表面受體向細胞核的傳遞，導致成骨相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄和表達受到抑制。在成骨細胞分化過程中，BMP信號激活SMAD5，使其磷酸化并與SMAD4形成復合物進入細胞核，與RUNX2等轉(zhuǎn)錄因子協(xié)同作用，啟動成骨相關(guān)基因，如ALP、OCN和OPN等的表達，促進成骨細胞的分化和骨形成。當miR-155表達上調(diào)時，SMAD5表達被抑制，BMP信號傳導受阻，成骨相關(guān)基因表達下降，成骨細胞的分化和礦化能力減弱。研究表明，在MC3T3-E1細胞中，過表達miR-155后，BMP-2誘導的SMAD1/5/8的磷酸化水平顯著降低，ALP、OCN和OPN等成骨相關(guān)基因的表達也明顯下降，細胞的礦化結(jié)節(jié)形成能力減弱。這充分說明了BMP信號通路在miR-155調(diào)控成骨細胞成骨活性中的重要介導作用。Wnt信號通路同樣在miR-155調(diào)控成骨細胞成骨活性中發(fā)揮著不可或缺的作用。經(jīng)典Wnt信號通路通過抑制GSK-3β的活性，穩(wěn)定細胞內(nèi)的β-catenin，使其進入細胞核與TCF/LEF家族轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，激活Wnt靶基因的表達，促進成骨細胞的分化和骨形成。miR-155可以通過靶向調(diào)控Wnt信號通路中的關(guān)鍵分子，影響β-catenin的穩(wěn)定性和核轉(zhuǎn)位，從而調(diào)節(jié)成骨細胞的成骨活性。研究發(fā)現(xiàn)，miR-155可能通過抑制Wnt信號通路中的負調(diào)控因子DKK1的表達，間接激活Wnt信號通路，促進成骨細胞的增殖和分化。在另一些情況下，miR-155可能通過抑制Wnt信號通路中的正調(diào)控因子，如LRP5等，抑制Wnt信號的傳導，從而抑制成骨細胞的成骨活性。在小鼠成骨細胞中，過表達miR-155導致LRP5表達降低，Wnt信號通路活性下降，成骨細胞的增殖和分化受到抑制。這表明Wnt信號通路在miR-155調(diào)控成骨細胞成骨活性中起著重要的橋梁作用，miR-155通過調(diào)節(jié)Wnt信號通路的活性，實現(xiàn)對成骨細胞成骨活性的調(diào)控。綜上所述，BMP信號通路和Wnt信號通路在miR-155調(diào)控牙槽骨成骨細胞成骨活性過程中發(fā)揮著關(guān)鍵的介導作用。miR-155通過靶向調(diào)控這些信號通路中的關(guān)鍵分子，影響信號傳導和基因表達，從而對成骨細胞的增殖、分化和礦化能力產(chǎn)生顯著影響。深入研究這些信號通路在miR-155調(diào)控成骨活性中的作用機制，對于揭示牙槽骨代謝的分子調(diào)控機制，以及開發(fā)針對口腔醫(yī)學領(lǐng)域骨相關(guān)疾病的治療策略具有重要意義。五、miR-155研究對口腔醫(yī)學的潛在應用價值5.1在口腔疾病治療中的應用前景5.1.1牙周炎等疾病的治療新思路牙周炎是一種常見的口腔疾病，其主要特征為牙周支持組織的炎癥和破壞，牙槽骨吸收是導致牙齒松動和脫落的重要原因。目前，牙周炎的治療主要包括基礎(chǔ)治療、藥物治療和手術(shù)治療等，但這些治療方法往往只能緩解癥狀，難以從根本上解決牙槽骨吸收和牙周組織再生的問題。隨著對miR-155在牙槽骨代謝中作用機制的深入研究，為牙周炎的治療提供了新的思路和策略。通過調(diào)節(jié)miR-155水平來治療牙周炎具有潛在的可行性。研究表明，在牙周炎患者的牙齦組織和齦溝液中，miR-155的表達水平顯著升高，且與牙槽骨吸收程度呈正相關(guān)。這提示我們可以通過抑制miR-155的表達，來減輕牙周組織的炎癥反應，促進牙槽骨的修復和再生?？梢圆捎肦NA干擾技術(shù)，設(shè)計并合成針對miR-155的小干擾RNA（siRNA）或反義寡核苷酸（ASO），將其導入牙周組織中，特異性地抑制miR-155的表達。也可以通過使用小分子化合物或天然產(chǎn)物來調(diào)節(jié)miR-155的表達水平。有研究發(fā)現(xiàn)，某些中藥提取物能夠調(diào)節(jié)miR-155的表達，從而抑制炎癥反應和促進成骨細胞的分化，為牙周炎的治療提供了新的藥物來源。與傳統(tǒng)治療方法相比，調(diào)節(jié)miR-155水平治療牙周炎具有獨特的優(yōu)勢。這種治療方法具有高度的特異性，能夠直接作用于miR-155，避免了對其他正常細胞和組織的損傷。通過調(diào)節(jié)miR-155的表達，可以從分子水平上調(diào)節(jié)牙周組織的炎癥反應和骨代謝過程，從根本上解決牙周炎的發(fā)病機制問題，有望實現(xiàn)牙周組織的再生和修復，提高治療效果。這種治療方法還具有潛在的靶向性，可以根據(jù)患者的具體病情和個體差異，設(shè)計個性化的治療方案，提高治療的精準性和有效性。然而，調(diào)節(jié)miR-155水平治療牙周炎也存在一些潛在風險和挑戰(zhàn)。miR-155在生物體內(nèi)參與了多種生物學過程，對其進行調(diào)節(jié)可能會產(chǎn)生一些意想不到的副作用。抑制miR-155的表達可能會影響免疫系統(tǒng)的正常功能，導致機體對病原體的抵抗力下降。如何將調(diào)節(jié)miR-155水平的治療方法安全有效地應用于臨床也是一個亟待解決的問題。目前，相關(guān)的研究主要集中在細胞實驗和動物實驗階段，距離臨床應用還有很長的路要走。需要進一步深入研究miR-155的作用機制和生物學功能，優(yōu)化治療方案，提高治療的安全性和有效性。還需要開展大規(guī)模的臨床試驗，驗證調(diào)節(jié)miR-155水平治療牙周炎的可行性和有效性，為其臨床應用提供充分的證據(jù)支持。5.1.2口腔種植修復中的應用潛力口腔種植修復是目前治療牙齒缺失的重要方法之一，其成功的關(guān)鍵在于種植體與周圍牙槽骨之間的骨整合。然而，種植體周圍炎等并發(fā)癥的發(fā)生會影響骨整合的效果，導致種植失敗。研究發(fā)現(xiàn)，miR-155在種植體周圍骨整合過程中發(fā)揮著重要作用，為提高口腔種植修復的成功率提供了新的應用潛力。在種植體植入后，種植體周圍的牙槽骨會發(fā)生一系列的生物學反應，包括炎癥反應、成骨細胞的增殖和分化以及骨基質(zhì)的合成和礦化等。miR-155通過調(diào)節(jié)這些生物學過程，影響種植體周圍的骨整合。在種植體周圍炎的情況下，miR-155的表達水平升高，抑制成骨細胞的分化和功能，促進破骨細胞的生成和活性，導致牙槽骨吸收，影響種植體的穩(wěn)定性。通過調(diào)節(jié)miR-155的表達水平，可以促進種植體周圍骨整合的過程，提高種植成功率。可以在種植體表面修飾miR-155的抑制劑或模擬物，使其在種植體植入后緩慢釋放，調(diào)節(jié)種植體周圍組織中miR-155的表達水平。也可以通過基因治療的方法，將調(diào)節(jié)miR-155表達的基因載體導入種植體周圍的細胞中，實現(xiàn)對miR-155表達的精確調(diào)控。相關(guān)研究已經(jīng)取得了一些進展，為miR-155在口腔種植修復中的應用提供了理論支持。有研究通過動物實驗發(fā)現(xiàn)，在種植體周圍局部注射miR-155抑制劑，可以促進種植體周圍成骨細胞的增殖和分化，增加骨量，提高種植體的穩(wěn)定性。另一項研究利用基因編輯技術(shù)，敲除小鼠體內(nèi)的miR-155基因，發(fā)現(xiàn)種植體周圍的骨整合明顯增強，種植成功率顯著提高。這些研究結(jié)果表明，miR-155在口腔種植修復中具有潛在的應用價值，有望成為提高種植成功率的新策略。雖然miR-155在口腔種植修復中的應用潛力巨大，但要實現(xiàn)其臨床應用還需要進一步的研究和探索。需要深入研究miR-155在種植體周圍骨整合過程中的作用機制，明確其最佳的調(diào)節(jié)時機和調(diào)節(jié)方式。還需要解決miR-155載體的選擇、遞送效率以及安全性等問題。只有克服這些技術(shù)難題，才能將miR-155的研究成果轉(zhuǎn)化為實際的臨床治療手段，為口腔種植修復患者帶來更好的治療效果。5.2對口腔醫(yī)學基礎(chǔ)研究的推動作用5.2.1深化對牙槽骨生理病理機制的認識miR-155的研究為深化牙槽骨生理病理機制的認識提供了新的視角和關(guān)鍵線索。以往對牙槽骨生理病理機制的研究主要集中在細胞因子、生長因子以及傳統(tǒng)的信號通路等方面，而miR-155作為一種重要的非編碼RNA，其在牙槽骨成骨細胞中的作用機制的揭示，極大地拓展了我們對牙槽骨代謝調(diào)控網(wǎng)絡的理解。在生理狀態(tài)下，miR-155參與維持牙槽骨成骨細胞的正常功能和骨代謝平衡。通過精細調(diào)控成骨相關(guān)基因的表達，如SMAD5、RUNX2等，miR-155確保成骨細胞的增殖、分化和礦化過程有序進行，從而維持牙槽骨的正常結(jié)構(gòu)和功能。當miR-155的表達出現(xiàn)異常時，會打破這種平衡，導致牙槽骨生理功能的紊亂。在牙周炎等病理條件下，miR-155的表達上調(diào)，通過抑制成骨細胞的成骨活性，促進牙槽骨的吸收，加重牙周組織的破壞。這表明miR-155在牙槽骨的生理病理過程中起著重要的調(diào)節(jié)作用，其表達的異常變化可能是導致牙槽骨疾病發(fā)生發(fā)展的重要因素之一。深入研究miR-155在牙槽骨生理病理機制中的作用，有助于揭示牙槽骨疾病的發(fā)病機制。通過對miR-155與成骨細胞相關(guān)基因、信號通路之間相互作用的研究，可以發(fā)現(xiàn)新的分子靶點和調(diào)控機制，為進一步研究牙槽骨疾病的發(fā)病機制提供有力的理論支持。研究miR-155在種植體周圍炎中的作用機制，有助于了解種植體周圍骨整合失敗的原因，為提高種植成功率提供理論依據(jù)。探索miR-155在牙槽骨骨折愈合過程中的作用，有助于揭示骨折愈合不良的分子機制，為促進牙槽骨骨折的愈合提供新的思路。5.2.2為相關(guān)藥物研發(fā)提供理論依據(jù)miR-155作為一個潛在的藥物靶點，在口腔醫(yī)學相關(guān)藥物研發(fā)領(lǐng)域具有巨大的潛力，為開發(fā)新型治療藥物提供了重要的理論基礎(chǔ)。從藥物研發(fā)的角度來看，針對miR-155的藥物設(shè)計具有獨特的優(yōu)勢。miR-155在牙槽骨成骨細胞的成骨活性調(diào)控中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，通過調(diào)節(jié)miR-155的表達水平，可以實現(xiàn)對成骨細胞功能的精準調(diào)控，從而達到治療牙槽骨相關(guān)疾病的目的。與傳統(tǒng)的藥物研發(fā)思路不同，以miR-155為靶點的藥物研發(fā)更加注重對疾病發(fā)病機制的深入理解，通過干預miR-155與靶基因之間的相互作用，從分子層面上解決疾病的根本問題。在牙周炎的治療中，可以開發(fā)針對miR-155的抑制劑，通過抑制miR-155的表達，促進成骨細胞的成骨活性，抑制牙槽骨的吸收，從而實現(xiàn)牙周組織的修復和再生。目前，雖然針對miR-155的藥物研發(fā)仍處于探索階段，但已經(jīng)取得了一些初步的研究成果。一些研究嘗試使用小分子化合物、核酸類似物等作為miR-155的調(diào)節(jié)劑，在細胞實驗和動物模型中取得了一定的療效。有研究發(fā)現(xiàn)，某些小分子化合物能夠特異性地抑制miR-155的表達，促進成骨細胞的分化和礦化，為開發(fā)治療牙周炎和種植體周圍炎的藥物提供了潛在的先導化合物。然而，要將這些研究成果轉(zhuǎn)化為臨床應用的藥物，還需要克服許多技術(shù)難題和挑戰(zhàn)。如何提高藥物的靶向性和特異性，確保藥物能夠準確地作用于目標細胞和組織，同時減少對其他正常細胞和組織的副作用，是當前miR-155相關(guān)藥物研發(fā)面臨的主要問題之一。藥物的遞送系統(tǒng)也是需要解決的關(guān)鍵問題，如何將藥物有效地遞送至病變部位，提高藥物的生物利用度，是實現(xiàn)miR-155相關(guān)藥物臨床應用的重要前提。六、結(jié)論與展望6.1研究總結(jié)本研究圍繞miR-155對牙槽骨成骨細胞成骨活性的影響展開，通過嚴謹?shù)膶嶒炘O(shè)計和深入的機制探討，取得了一系列有價值的研究成果。在細胞實驗方面，通過成功構(gòu)建miR-155過表達和低表達的牙槽骨成骨細胞模型，全面檢測了成骨活性的多個關(guān)鍵指標。實驗結(jié)果明確顯示，miR-155對牙槽骨成骨細胞的成骨活性具有顯著的負向調(diào)控作用。過表達miR-155時，牙槽骨成骨細胞的增殖能力明顯受到抑制。CCK-8實驗結(jié)果表明，過表達miR-155組的細胞增殖速率顯著低于對照組，細胞活力明顯下降。EdU染色實驗進一步直觀地顯示，過表達miR-155組中EdU陽性細胞的比例顯著減少，表明細胞的DNA合成和增殖能力受到抑制。在成骨