DB23/T××××—××××I前??言本文件按GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的編寫規(guī)則起草。請(qǐng)注意本文件的某些部分可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由黑龍江省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出。本文件起草單位：黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院大豆研究所、黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所、黑龍江植檢植保站。本文件主要起草人：張瑞萍、王家軍、張武、于鎮(zhèn)華、高明杰、張必弦、欒曉燕、李寶英、王廣金、韓新春、劉鑫磊、王雪揚(yáng)、李鵬、吳黎。PAGE3大豆灰斑病室內(nèi)接種鑒定技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了大豆大壟滴灌栽培技術(shù)的術(shù)語和定義、灰斑菌繁殖和保存、室內(nèi)抗性鑒定、病情調(diào)查及記載標(biāo)準(zhǔn)、抗性評(píng)價(jià)和試驗(yàn)檢驗(yàn)和試驗(yàn)數(shù)據(jù)歸檔等。本標(biāo)準(zhǔn)適用于大豆灰斑病生理小種鑒定、栽培大豆（包括選育品種/系、育種親本、世代、地方品種、轉(zhuǎn)基因大豆）和野生大豆對(duì)灰斑病抗性水平評(píng)價(jià)。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T8321農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則GB4404.2糧食作物種子第2部分：豆類GB/T3543農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程N(yùn)Y/T5010無公害農(nóng)產(chǎn)品種植業(yè)產(chǎn)地環(huán)境條件NY/T3114.2大豆抗病蟲性鑒定技術(shù)規(guī)范第2部分NY/T1276農(nóng)藥安全使用規(guī)范總則

DB23/T018大豆生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1大壟滴灌指壟距110cm、壟面寬度70cm～80cm、壟高12cm～15cm，壟上種植2行，在行間鋪設(shè)滴灌帶，干旱時(shí)進(jìn)行滴灌補(bǔ)水的方式。3.1菌種純化挑取大豆灰斑病菌的單個(gè)分生孢子，將其放置于新鮮的PDA平皿上，以獲得新生菌落的方法。3.2活化培養(yǎng)將中、長(zhǎng)期低溫保存的菌種，重新在新鮮PDA平皿上培養(yǎng)的過程。3.3菌種擴(kuò)繁將活化的菌種接種在新鮮的高粱粒培養(yǎng)基上培養(yǎng)，獲得大量分生孢子的過程。3.4鑒定圃按不同試驗(yàn)設(shè)計(jì)的目的和要求設(shè)定的待接種大豆材料的供試小區(qū)。3.5抗性水平根據(jù)采用的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)判別寄主植物對(duì)特定病蟲害反應(yīng)程度和抵抗水平的定性描述。3.6病原分離物采用人工分離方法從植物發(fā)病部位獲得的病原物?；野呔敝澈捅４?.1菌種活化取4oC下保存的各生理小種的試管菌株，用接種針取小塊菌體至新PDA培養(yǎng)基平皿上，25oC培養(yǎng)7-10d，備用。4.2接種菌株擴(kuò)繁大豆灰斑病菌菌株經(jīng)活化培養(yǎng)后，接種于滅菌的高梁粒培養(yǎng)基上，在25oC～28oC的培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)，其間，間隔兩天要充分晃動(dòng)高粱粒接種瓶，保證菌絲均勻分布每個(gè)高粱粒上。15-20d后洗去高粱粒表面的菌絲，晾干后陰干處保存，備用。4.3菌種的短期保藏當(dāng)計(jì)劃在10-15d內(nèi)使用時(shí)，菌種可保存于PDA平皿中，置于0℃～5℃冰箱中即可。4.4菌種的長(zhǎng)期低溫保存當(dāng)菌種需在第二年或更長(zhǎng)時(shí)間使用時(shí)，則可采用長(zhǎng)期保藏。首先將菌種接種在適宜的固體斜面培養(yǎng)基上，待菌充分生長(zhǎng)后，棉塞部分用油紙包好，放在0℃～5℃冰箱中保存，每隔4-6個(gè)月移種1次。室內(nèi)抗性鑒定5.1鑒定場(chǎng)地的設(shè)施條件溫室、盆栽場(chǎng)地或人工氣候箱應(yīng)具有可控灌溉、光照和通風(fēng)的條件。5.2鑒定圃的試驗(yàn)設(shè)計(jì)供試品種設(shè)接種和未接種2個(gè)處理，每處理3盆，盆栽擺放采用完全隨機(jī)區(qū)組方式。鑒定圃設(shè)合豐22為感病對(duì)照品種，鋼5151為抗病對(duì)照品種。5.3播種5.3.1播種時(shí)間播種時(shí)間與大田生產(chǎn)一致，也可根據(jù)氣象預(yù)報(bào)延后5-7d播種，使植株接種期和發(fā)病期能夠與適宜的氣候條件（濕度與溫度）相遇。5.3.2播種方式及播種量采用人工穴播，選擇盆缽口徑較大的，株距3-5cm，待出苗后保苗10-20株；5.4接種鑒定5.4.1孢子懸浮液制備取晾干的擴(kuò)繁菌種，先用無菌水浸泡1~2h，再洗凈高粱粒表面的菌絲體，攤平放置在托盤中，托盤上面用6層無菌紗蓋嚴(yán)、噴灑無菌水保濕高粱粒，置25oC下培養(yǎng)48h。待高粱粒表面長(zhǎng)出灰綠色分生孢子后，用無菌水沖洗，紗布過濾得孢子懸浮液。根據(jù)鏡檢情況(10×10視野下3~5個(gè)分生孢子)，添加3%蔗糖調(diào)制成孢子懸浮接種液。5.4.3接種時(shí)期與方法大豆花前期至初花期，選擇陰天或無風(fēng)天的傍晚，進(jìn)行孢子懸浮液葉面噴霧1~2次，時(shí)間間隔為7~10d。噴霧以在葉片上形成均勻的細(xì)霧滴為宜。5.5接種前后田間管理在接種前6h要對(duì)盆栽苗灑水澆透，沖去葉片表面的灰塵；在接種后立即覆膜保濕48~72h。病情調(diào)查及記載標(biāo)準(zhǔn)6.1調(diào)查時(shí)間每次接種20-30d后，待感病對(duì)照的葉片充分顯癥后，調(diào)查葉部發(fā)病情況。6.2調(diào)查方法根據(jù)大豆抗灰斑病鑒定植株病情級(jí)別劃分，調(diào)查每份鑒定材料的全部株數(shù)的全株葉片發(fā)病情況，逐份材料進(jìn)行調(diào)查，記載病情級(jí)別，計(jì)算病情指數(shù)(DI)。大豆灰斑病的抗性鑒定標(biāo)準(zhǔn)（馬淑梅，2000；王光華，2002；丁俊杰，2006）：0級(jí)：免疫，葉部無病斑；1級(jí)：病斑面積1%以下；2級(jí)：病斑面積1%~5%；3級(jí)：病斑面積6%~20%；4級(jí)：病斑面積21%~50%；5級(jí)：病斑面積51%以上。6.3普遍率記載及標(biāo)準(zhǔn)每一鑒定材料隨機(jī)調(diào)查50片葉，計(jì)數(shù)發(fā)病葉片數(shù)、，計(jì)算普遍率。普遍率（%）＝（發(fā)病葉片數(shù)/調(diào)查總?cè)~片數(shù)）×100％抗性評(píng)價(jià)7.1播種與滴灌帶鋪設(shè)時(shí)期土壤5cm地溫穩(wěn)定通過7℃～8℃時(shí)，采用播種與滴灌帶鋪設(shè)一體機(jī)同時(shí)完成精量播種與滴灌帶鋪設(shè)作業(yè)。壟上播種2行大豆，行距40cm～50cm，行間鋪設(shè)滴灌帶。鎮(zhèn)壓后播種深度3cm～5cm，播深一致、均勻無斷條。7.2種植密度和播量根據(jù)品種特征特性、地勢(shì)、土壤條件等確定密度和播種量。7.1鑒定有效性判別當(dāng)鑒定圃中的感病/高感對(duì)照品種發(fā)病嚴(yán)重度達(dá)到60%以上，該批次抗灰斑病鑒定視為有效。7.2重復(fù)鑒定初次鑒定中表現(xiàn)為高抗、中抗的材料，次年需用相同的病原菌進(jìn)行重復(fù)鑒定。7.3抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)調(diào)查得到的大豆葉片發(fā)病結(jié)果，計(jì)算發(fā)病普遍率和病情指數(shù)。當(dāng)對(duì)照感病品種發(fā)病普遍率在60%以上時(shí)，試驗(yàn)結(jié)果真實(shí)有效，并根據(jù)病情指數(shù)進(jìn)行大豆材料的抗病性評(píng)價(jià)（表1）。表1大豆對(duì)灰斑病抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)病情指數(shù)(DI)抗性評(píng)價(jià)－免疫Immune（I）≤20%高抗HighlyResistant（HR）21－40%抗病Resistant（R）41－60%中抗Moderatelyresistant（MR）61－80%感病Susceptible（S）＞80%高感HighlySusceptible（HS）試驗(yàn)檢驗(yàn)在發(fā)病葉片上重新獲得病原分離物，證明接種試驗(yàn)有效。具體方法為：將病葉沿病健交接處將病斑剪下，分成長(zhǎng)0.5cm左右的小段，然后分別用0.1%升汞（或5%次氯酸鈉、或70%酒精）進(jìn)行表面消毒處理30s，再用滅菌蒸餾水沖洗，放在濾紙上吸干水分，,然后轉(zhuǎn)入PDA培養(yǎng)基上，放入光照培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，每皿均勻放5塊處理好的病葉小段。分離培養(yǎng)條件為25℃-28℃，光照:黑暗=12:12