pcr上崗證考試試題及答案

一、單項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的中文名稱是（）A.聚合酶鏈反應(yīng)B.基因測序反應(yīng)C.核酸雜交反應(yīng)D.基因轉(zhuǎn)錄反應(yīng)答案：A2.PCR反應(yīng)中，起到催化合成新DNA鏈作用的酶是（）A.限制酶B.DNA連接酶C.TaqDNA聚合酶D.逆轉(zhuǎn)錄酶答案：C3.在PCR反應(yīng)體系中，dNTPs的作用是（）A.作為引物B.提供能量C.作為合成DNA的原料D.穩(wěn)定反應(yīng)體系答案：C4.PCR反應(yīng)的變性步驟的溫度一般是（）A.50-55℃B.72℃C.94-95℃D.60-65℃答案：C5.以下哪種物質(zhì)不是PCR反應(yīng)的必需成分（）A.模板DNAB.RNA酶C.引物D.緩沖液答案：B6.引物在PCR反應(yīng)中的主要作用是（）A.提供3'-OH末端供DNA聚合酶延伸B.切割模板DNAC.連接兩段DNA鏈D.識別特定的基因序列答案：A7.PCR反應(yīng)中，退火溫度主要取決于（）A.模板DNA的長度B.引物的長度和序列C.Taq酶的活性D.dNTPs的濃度答案：B8.在定量PCR中，常用的檢測熒光信號的方法不包括（）A.SYBRGreenI法B.TaqMan探針法C.質(zhì)譜法D.分子信標(biāo)法答案：C9.PCR產(chǎn)物的特異性主要取決于（）A.模板DNA的純度B.引物的特異性C.Taq酶的特異性D.反應(yīng)體系的pH值答案：B10.如果PCR反應(yīng)沒有得到預(yù)期的產(chǎn)物，以下哪項不是可能的原因（）A.引物設(shè)計錯誤B.模板DNA量過多C.反應(yīng)體系中存在抑制物D.退火溫度過低答案：D二、多項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)可應(yīng)用于以下哪些領(lǐng)域（）A.疾病診斷B.基因克隆C.法醫(yī)學(xué)鑒定D.物種進(jìn)化研究E.轉(zhuǎn)基因檢測答案：ABCDE2.以下哪些因素會影響PCR反應(yīng)的效率（）A.引物濃度B.模板DNA的質(zhì)量C.Taq酶的活性D.退火溫度E.反應(yīng)體系的體積答案：ABCDE3.以下關(guān)于引物設(shè)計的原則正確的是（）A.引物長度一般為15-30bpB.引物的GC含量應(yīng)在40%-60%C.引物內(nèi)部不應(yīng)有互補(bǔ)序列D.引物3'端不能有連續(xù)3個以上的G或CE.引物與模板序列應(yīng)完全互補(bǔ)答案：ABCD4.在PCR反應(yīng)中，防止污染的措施包括（）A.嚴(yán)格分區(qū)操作B.使用一次性耗材C.定期進(jìn)行實驗室清潔和消毒D.在反應(yīng)體系中加入UNG酶E.操作人員嚴(yán)格遵守操作規(guī)程答案：ABCDE5.定量PCR的類型包括（）A.絕對定量PCRB.相對定量PCRC.終點定量PCRD.實時定量PCRE.多重定量PCR答案：AB6.以下哪些是PCR反應(yīng)中可能出現(xiàn)的非特異性擴(kuò)增的原因（）A.引物特異性差B.退火溫度過低C.模板DNA不純D.引物濃度過高E.Taq酶量過多答案：ABCDE7.PCR反應(yīng)的循環(huán)次數(shù)過多可能會導(dǎo)致（）A.非特異性擴(kuò)增增加B.產(chǎn)物量不再增加C.引物耗盡D.Taq酶失活E.出現(xiàn)彌散狀條帶答案：ABE8.以下關(guān)于TaqDNA聚合酶的特性正確的是（）A.熱穩(wěn)定性高B.缺乏3'-5'外切酶活性C.催化活性依賴于Mg2+D.可以以RNA為模板合成DNAE.反應(yīng)速度快答案：ABCE9.以下哪些屬于PCR反應(yīng)體系優(yōu)化的內(nèi)容（）A.調(diào)整引物濃度B.改變退火溫度C.優(yōu)化模板DNA的用量D.調(diào)整Taq酶的用量E.改變dNTPs的濃度答案：ABCDE10.在PCR-反向點雜交技術(shù)中，涉及到的步驟包括（）A.PCR擴(kuò)增B.雜交反應(yīng)C.點樣D.顯色反應(yīng)E.電泳答案：ABCD三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)只能用于擴(kuò)增DNA，不能用于擴(kuò)增RNA。（）答案：錯誤2.引物的長度越長越好。（）答案：錯誤3.在PCR反應(yīng)中，Taq酶的用量越多，反應(yīng)效果越好。（）答案：錯誤4.所有的DNA聚合酶都可以用于PCR反應(yīng)。（）答案：錯誤5.定量PCR可以準(zhǔn)確測定樣品中目的基因的起始拷貝數(shù)。（）答案：正確6.PCR反應(yīng)中，只要有模板DNA和引物就可以進(jìn)行反應(yīng)。（）答案：錯誤7.提高退火溫度可以提高PCR反應(yīng)的特異性。（）答案：正確8.在PCR反應(yīng)體系中，dNTPs的濃度越高越好。（）答案：錯誤9.多重PCR是指在一個反應(yīng)體系中同時擴(kuò)增多個不同的基因片段。（）答案：正確10.PCR產(chǎn)物可以直接用于基因克隆。（）答案：正確四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述PCR反應(yīng)的基本步驟。答案：PCR反應(yīng)的基本步驟包括變性、退火和延伸。變性是將模板DNA加熱至94-95℃，使雙鏈DNA解開為單鏈；退火是將溫度降低至引物的退火溫度（一般為50-65℃），使引物與模板單鏈DNA特異性結(jié)合；延伸是在72℃下，TaqDNA聚合酶以引物為起點，以dNTPs為原料合成新的DNA鏈。2.如何提高PCR反應(yīng)的特異性？答案：可通過以下方法提高特異性：設(shè)計特異性好的引物；提高退火溫度；優(yōu)化模板DNA質(zhì)量；降低引物濃度；減少Taq酶用量；減少PCR循環(huán)次數(shù)等。3.簡述定量PCR與普通PCR的區(qū)別。答案：普通PCR主要用于擴(kuò)增目的基因片段，終點檢測產(chǎn)物量。定量PCR可實時監(jiān)測PCR反應(yīng)過程中的熒光信號，能對起始模板進(jìn)行定量分析，在準(zhǔn)確性、靈敏度和可重復(fù)性方面優(yōu)于普通PCR。4.簡述PCR反應(yīng)中引物設(shè)計的重要性。答案：引物設(shè)計至關(guān)重要。引物決定了PCR反應(yīng)擴(kuò)增的特異性，合適的引物能準(zhǔn)確與模板結(jié)合，引導(dǎo)Taq酶合成目標(biāo)DNA片段。引物設(shè)計不當(dāng)會導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增、無擴(kuò)增產(chǎn)物等問題。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論在PCR實驗中如何避免假陽性結(jié)果的出現(xiàn)。答案：避免假陽性結(jié)果可從多方面入手。首先要嚴(yán)格防止污染，如分區(qū)操作、使用一次性耗材等。在反應(yīng)體系中加入UNG酶防止殘留的PCR產(chǎn)物污染。操作過程中人員要嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，對實驗室定期清潔消毒。2.請討論引物二聚體形成的原因及解決方法。答案：引物二聚體形成原因包括引物濃度過高、引物自身存在互補(bǔ)序列等。解決方法有降低引物濃度、重新設(shè)計引物避免自身互補(bǔ)序列等。3.討論P(yáng)CR技術(shù)在新型冠狀病毒檢測中的應(yīng)用及意義。答案：PCR技術(shù)可快速檢