基因工程考點(diǎn)概覽考點(diǎn)01重組DNA技術(shù)的基本工具考點(diǎn)02基因工程的基本操作程序考點(diǎn)03基因工程的應(yīng)用考點(diǎn)01重組DNA技術(shù)的基本工具考點(diǎn)011．（2025·湖北·二模）選擇合適的實(shí)驗(yàn)材料對科學(xué)研究至關(guān)重要。下表教材實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)材料的選擇合適的是（

）選項(xiàng)實(shí)驗(yàn)名稱實(shí)驗(yàn)材料A用高倍顯微鏡觀察葉綠體和細(xì)胞質(zhì)流動洋蔥根尖分生區(qū)細(xì)胞B探究植物細(xì)胞的吸水和失水洋蔥鱗片葉外表皮細(xì)胞CDNA的粗提取與鑒定哺乳動物成熟紅細(xì)胞D低溫誘導(dǎo)植物細(xì)胞染色體數(shù)目變化菠菜葉肉細(xì)胞A．A B．B C．C D．D【答案】B【解析】洋蔥根尖分生區(qū)細(xì)胞沒有葉綠體，A錯誤；洋蔥鱗片葉外表皮細(xì)胞有紫色的液泡，可以用來探究植物細(xì)胞的吸水和失水，B正確；哺乳動物成熟紅細(xì)胞細(xì)胞核退化消失，其中的DNA被降解，不適宜用于DNA的粗提取與鑒定，C錯誤；菠菜葉肉細(xì)胞不分裂，不適宜觀察染色體數(shù)目變化，D錯誤。2．（2025·湖北黃岡·模擬預(yù)測）“DNA粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)的基本過程是：裂解→過濾→分離→沉淀→鑒定。下列相關(guān)敘述錯誤的是（）A．以豬肝為提取材料時，將肝組織置于研磨液中，讓細(xì)胞裂解釋放內(nèi)容物B．過濾時，若用濾紙代替紗布，會因DNA吸附于濾紙而導(dǎo)致DNA的提取量減少C．根據(jù)糖類、DNA和蛋白質(zhì)在酒精中的溶解性不同，可去除混合物中的蛋白質(zhì)和糖類等雜質(zhì)D．DNA分子的電泳鑒定實(shí)驗(yàn)中，決定DNA分子遷移速率的因素是DNA分子的大小和構(gòu)象【答案】D【解析】以豬肝為提取材料時，將肝組織置于研磨液中，通過細(xì)胞吸水漲破，讓細(xì)胞裂解釋放內(nèi)容物，A正確；由于DNA會吸附于濾紙，因此若用濾紙代替紗布，會導(dǎo)致導(dǎo)致DNA的提取量減少，B正確；DNA不溶于酒精，某些蛋白質(zhì)、糖類溶于酒精，可利用這一原理初步去除蛋白質(zhì)和糖類等雜質(zhì)，C正確；DNA分子的電泳鑒定實(shí)驗(yàn)中，決定DNA分子遷移速率的因素有凝膠的濃度、DNA分子的大小和構(gòu)象等，D錯誤。3．（2025高三上·湖北·期末）CRISPR-Cas9基因編輯技術(shù)機(jī)理如圖所示，利用Cas9蛋白（一種核酸內(nèi)切酶）在向?qū)NA（sgRNA）的引導(dǎo)下，切割特定DNA序列，以實(shí)現(xiàn)基因的定點(diǎn)編輯敲除、單堿基編輯和基因片段的精準(zhǔn)替換。下列敘述正確的是（）A．基因定點(diǎn)編輯前需要設(shè)計與靶基因全部序列完全配對的sgRNAB．sgRNA與目標(biāo)DNA結(jié)合的堿基互補(bǔ)配對方式是A-U、U-A、G-C、C-GC．基因片段的精準(zhǔn)替換屬于染色體結(jié)構(gòu)變異D．Cas9蛋白斷裂DNA分子中的磷酸二酯鍵【答案】D【解析】向?qū)NA（sgRNA）只需要與靶基因的部分序列配對結(jié)合，從而引導(dǎo)Cas9蛋白到一個特定的基因位點(diǎn)并剪切DNA，實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)靶向編輯，A錯誤；sgRNA與目標(biāo)DNA結(jié)合的堿基互補(bǔ)配對方式是A-T、U-A、G-C、C-G，B錯誤；基因片段的精準(zhǔn)替換屬于基因突變，C錯誤；通常通過CRISPR/Cas9技術(shù)會斷開4個磷酸二酯鍵，D正確。4．（2025高三下·湖北·開學(xué)考試）洋蔥是高中生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常用到的實(shí)驗(yàn)材料。下列相關(guān)實(shí)驗(yàn)不能達(dá)到目的的是（）A．選用紫色洋蔥鱗片葉外表皮觀察植物細(xì)胞的質(zhì)壁分離及復(fù)原B．選用洋蔥管狀葉進(jìn)行色素的提取和分離實(shí)驗(yàn)C．選用洋蔥鱗片葉進(jìn)行DNA的粗提取與鑒定D．選用洋蔥根尖分生區(qū)在顯微鏡下觀察細(xì)胞有絲分裂的連續(xù)過程【答案】D【解析】可通過觀察紫色洋蔥外表皮中紫色液泡的大小變化來觀察質(zhì)壁分離及復(fù)原，A正確；洋蔥管狀葉細(xì)胞中含有葉綠體，可提取到光合色素，B正確；洋蔥鱗片葉DNA含量豐富，可選用洋蔥鱗片葉進(jìn)行DNA的粗提取與鑒定，C正確；在制作裝片解離時細(xì)胞已被殺死，無法觀察到有絲分裂的連續(xù)過程，D錯誤。5．（2025·湖北·一模）CRISPR-Cas9基因編輯技術(shù)，是對靶向基因進(jìn)行特定DNA修飾的技術(shù)。利用CRISPR-Cas9技術(shù)可以使紅眼基因B突變獲得果蠅突變體，如圖為技術(shù)原理圖。下列相關(guān)敘述正確的是（

）A．細(xì)胞內(nèi)的Cas9酶在配對區(qū)域定點(diǎn)剪切，引起果蠅發(fā)生染色體結(jié)構(gòu)變異B．該過程中，sgRNA和Cas9酶共同剪切DNA的作用類似于限制酶的作用C．敲除后需要DNA聚合酶對DNA上的切口進(jìn)行修復(fù)D．sgRNA與紅眼基因B的部分序列配對，不會出現(xiàn)的堿基互補(bǔ)配對方式是A-T【答案】B【解析】細(xì)胞內(nèi)的Cas9酶在配對區(qū)域定點(diǎn)剪切，引起果蠅發(fā)生基因突變，A錯誤；該過程中，sgRNA和Cas9酶共同剪切DNA，sgRNA和Cas9酶類似于限制酶的作用，B正確；敲除后需要DNA連接酶對DNA上的切口進(jìn)行修復(fù)，C錯誤；sgRNA與紅眼基因B的部分序列配對，堿基互補(bǔ)配對方式中A—T可能會出現(xiàn)，D錯誤。6．（2025·湖北武漢·二模）孟德爾說：“任何實(shí)驗(yàn)的價值和效用，取決于所使用材料對于實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡倪m合性?！毕铝袑?shí)驗(yàn)材料選擇不適合的是（

）A．利用豌豆雜交研究伴性遺傳規(guī)律B．利用菠菜進(jìn)行DNA的粗提取和鑒定C．利用傘藻探究細(xì)胞核功能D．利用小球藻研究卡爾文循環(huán)【答案】A【解析】豌豆是兩性花，雌雄同株，沒有性染色體，不能用于研究伴性遺傳規(guī)律，A錯誤；菠菜為真核生物，細(xì)胞核中富含DNA，可進(jìn)行DNA的粗提取和鑒定，B正確；傘藻分為傘帽（便于形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察）、傘柄和假根（含有細(xì)胞核），能利用傘藻探究細(xì)胞核功能，C正確；小球藻為真核生物，含有葉綠體，能利用二氧化碳和水進(jìn)行光合作用，能利用小球藻研究卡爾文循環(huán)，D正確。7．（2025·湖北·二模）信號肽是一段位于蛋白質(zhì)N-末端的肽段，它由分泌蛋白基因編碼鏈(非模板鏈)的5'端一段DNA編碼，在成熟的分泌蛋白中并不存在，其功能在于引導(dǎo)隨后產(chǎn)生的蛋白質(zhì)多肽鏈穿過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜進(jìn)入腔內(nèi)。我國科學(xué)家對釀酒酵母蛋白序列進(jìn)行信號肽分析，發(fā)現(xiàn)163個分泌蛋白的信號肽均含有SPasesI酶剪切位點(diǎn)，不同信號肽在氨基酸種類上沒有明顯差異。下列推測錯誤的是（

）A．信號肽是在游離核糖體中從蛋白質(zhì)N-末端開始合成B．不同信號肽的區(qū)別主要在于氨基酸數(shù)目和順序不相同C．SPasesI酶屬于限制酶，剪切位點(diǎn)由4-8個核苷酸組成D．作為真菌的釀酒酵母是表達(dá)真核細(xì)胞外源蛋白的合適宿主【答案】C【解析】信號肽是在游離的核糖體中以mRNA為模板翻譯合成，是蛋白質(zhì)最初合成的一段，故翻譯是從蛋白質(zhì)N-末端開始，A正確；不同信號肽在氨基酸組成及氨基酸種類上沒有明顯差異，故不同信號肽的區(qū)別主要在于氨基酸數(shù)目和順序不相同，B正確；SPasesI酶是將信號肽剪切下來的酶，屬于肽酶，剪切位點(diǎn)由氨基酸構(gòu)成，C錯誤；釀酒酵母能對外源蛋白進(jìn)行翻譯后加工和修飾，且屬于單細(xì)胞生物，繁殖速度快，故是表達(dá)真核細(xì)胞外源蛋白的合適宿主，D正確。8．（2025·湖北黃石·一模）如圖顯示了存在于4kb（1kb=1000個堿基對）長的環(huán)狀DNA片段上的限制性內(nèi)切核酸酶識別位點(diǎn)。為在分離凝膠上產(chǎn)生行進(jìn)最遠(yuǎn)的條帶，應(yīng)一起使用的兩種限制性內(nèi)切核酸酶是（

）A．NdeI和PstI B．NdeI和EcoRI C．SacI和BamHI D．EcoRI和HindⅢ【答案】D【解析】據(jù)圖分析可得，四個選項(xiàng)組合中用EcoRI和HindⅢ處理環(huán)狀DNA可產(chǎn)生長度約為0.3kb、1.8kb、1.0kb和0.7kb的DNA片段。越短的DNA片段在凝膠電泳中行進(jìn)得越遠(yuǎn)，0.3kb的片段是所有選項(xiàng)中能產(chǎn)生的最短片段，D符合題意，ABC不符合題意。9．（2025高三上·湖北武漢·期末）某種由F基因缺陷導(dǎo)致的遺傳?。撞。┗颊弑憩F(xiàn)為凝血功能障礙。回答下列問題。(1)下圖為甲病的系譜圖，I1無該遺傳病的致病基因，判斷該病的遺傳方式為，理由是。(2)F基因部分內(nèi)含子（基因中不編碼蛋白質(zhì)的序列）的限制酶切位點(diǎn)存在兩種分布形式，如圖1所示，缺陷F基因和正常F基因都可能存在這兩種分布形式的內(nèi)含子。提取分離出該家庭部分成員的F基因內(nèi)含子片段，經(jīng)限制性內(nèi)切酶（填“XbaI”或“EcoRI”或“SstI”）完全酶切后進(jìn)行電泳分離，得到DNA片段長度如圖2。結(jié)合系譜圖和電泳結(jié)果可知，I2個體中長度為kb的片段來自缺陷F基因，判斷理由為。若Ⅱ1與一位正常男性婚配，后代患有甲病的概率為。(3)甲病目前尚無根治辦法，為預(yù)防和減少出生缺陷，提高出生人口素質(zhì)，推進(jìn)健康中國建設(shè)，可以通過（至少答出兩點(diǎn)）等手段，對甲病進(jìn)行檢測和預(yù)防?！敬鸢浮?1)伴X染色體隱性遺傳I1和I2均不患病，Ⅱ4患病，說明該病為隱性遺傳病，且I1無該病的致病基因，說明該病為伴X染色體隱性遺傳病(2)XbaI9.6Ⅱ4為甲病患者，其X染色體上缺陷F基因經(jīng)酶切電泳后的片段長度為9.6kb，且Ⅱ4的X染色體來自于其母親I20(3)遺傳咨詢、產(chǎn)前診斷（或基因檢測、羊水檢查）【分析】遺傳病是指由遺傳物質(zhì)發(fā)生改變而引起的或者是由致病基因所控制的疾病。遺傳病是指完全或部分由遺傳因素決定的疾病，常為先天性的，也可后天發(fā)病?！窘馕觥浚?）I1無該遺傳病的致病基因，Ⅰ1和Ⅰ2均正常，而Ⅱ4患病，說明該病為伴X染色體隱性遺傳病，親本基因型可表示為XAY、XAXa。（2）結(jié)合圖示可知，用XbaI酶切圖1中的兩種基因，上面的基因可切出含4kb的片段，下面的基因可切出含9.6kb的片段，Ⅰ1僅含9.6kb片段，說明其含有9.6內(nèi)含子的片段為正?；?；Ⅱ4為甲病患者，其X染色體上缺陷F基因經(jīng)酶切電泳后的片段長度為9.6kb，且Ⅱ4的X染色體來自于其母親I2，故I2個體中長度為9.6kb的片段來自缺陷F基因；若Ⅱ1XAXA（長度為4.8kb的片段來自I2正?；?，長度為9.6kb的片段來自Ⅰ1的正常基因）與一位正常男性（XAY）婚配，后代患有甲病的概率為0。（3）遺傳咨詢是咨詢醫(yī)師和咨詢者就其家庭中遺傳病的病因、遺傳方式、診斷、治療、預(yù)防、復(fù)發(fā)風(fēng)險等所面臨的全部問題進(jìn)行討論和商談，最后做出恰當(dāng)?shù)膶Σ吆瓦x擇，并在咨詢醫(yī)師的幫助下付諸實(shí)施，以達(dá)到防治效果的過程，產(chǎn)前診斷是指在出生前對胚胎或胎兒的發(fā)育狀態(tài)、是否患有疾病等方面進(jìn)行檢測診斷。從而掌握先機(jī)，對可治性疾病，選擇適當(dāng)時機(jī)進(jìn)行宮內(nèi)治療；對于不可治療性疾病，能夠做到知情選擇。兩者均能對甲病進(jìn)行檢測和預(yù)防。10．（2025高三上·湖北武漢·階段練習(xí)）蚊子是多種疾病的傳播媒介，阻止蚊子傳播疾病一直是科學(xué)家研究的方向?；蚓庉嫾夹g(shù)中CRISPR/Cas9系統(tǒng)的出現(xiàn)可實(shí)現(xiàn)該目標(biāo)。該技術(shù)的發(fā)現(xiàn)源自細(xì)菌體內(nèi)的一種防止外源DNA入侵的獲得性免疫機(jī)制，如圖所示。其中細(xì)菌CRISPR序列的間隔區(qū)負(fù)責(zé)儲存入侵過細(xì)菌的外源DNA信息；gRNA（引導(dǎo)RNA）能識別外源DNA的靶序列；Cas9能對外源DNA的靶序列進(jìn)行切割?；卮鹣铝袉栴}：(1)gRNA依據(jù)原則識別外源DNA的靶序列。Cas9與基因工程中的基本工具有相似的功能。據(jù)圖推測，細(xì)菌間隔區(qū)儲存的序列越多樣，細(xì)菌的免疫能力越（填“弱”或“強(qiáng)”）。(2)降低蚊子種群數(shù)量是阻止疾病傳播的一種思路。方案1：用CRISPR/Cas9系統(tǒng)對雄蚊子進(jìn)行基因編輯，獲得不育個體。為呈現(xiàn)該方案的研究思路，將下列各項(xiàng)進(jìn)行排序：。①將gRNA和Cas9的編碼序列插入到適當(dāng)載體中②確定蚊子基因組中與生殖發(fā)育有關(guān)的目標(biāo)基因③目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，篩選出不育的雄蚊子④設(shè)計能識別目標(biāo)基因靶序列的gRNA⑤將轉(zhuǎn)基因蚊子釋放到野外發(fā)揮作用(3)讓蚊子失去傳播病原體的能力是阻止疾病傳播的另一種思路。方案2：將病原體的抗性基因A導(dǎo)入野生型蚊子，獲得轉(zhuǎn)基因個體。方案3：將病原體的抗性基因A和CRISPR/Cas9系統(tǒng)等元件組成的遺傳盒子導(dǎo)入野生型蚊子，獲得轉(zhuǎn)基因個體。分別將方案2和3中的轉(zhuǎn)基因個體與野生型（基因型aa）雜交，子代繼續(xù)與野生型雜交多代，過程及結(jié)果如下圖所示。注：黑色為具有病原體抗性的個體，白色為野生型個體①方案2中，連續(xù)雜交5代后，理論上F5中攜帶基因A的概率為。②方案3中，經(jīng)遺傳盒子改造后，無論雜交多少代，子代均為病原體抗性個體。關(guān)于該遺傳盒子的作用機(jī)制，提出一種合理的假說：。理論上講，釋放少量轉(zhuǎn)基因蚊子最終會導(dǎo)致整個物種發(fā)生變異，但并不意味著產(chǎn)生了新物種，理由是?！敬鸢浮?1)堿基互補(bǔ)配對限制酶強(qiáng)(2)②④①③⑤(3)1/32遺傳盒子可以在轉(zhuǎn)基因子代體內(nèi)自動實(shí)現(xiàn)：基因型Aa轉(zhuǎn)變?yōu)锳A(個體層次)；使含a的配子失去活性/含a的配子死亡/只產(chǎn)生含A的配子(配子層次)；基因a替換為基因A(基因?qū)哟?具有抗性基因的蚊子能與野生型雜交產(chǎn)生可育后代(具有抗性基因的蚊子與野生型之間未出現(xiàn)生殖隔離)【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。（4）目的基因的檢測與鑒定?！窘馕觥浚?）gRNA通過與外源DNA的特定的堿基序列發(fā)生堿基互補(bǔ)配對，從而識別外源DNA，進(jìn)而引導(dǎo)Cas9（Cas9蛋白）切割核苷酸之間的磷酸二酯鍵，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)了對外源DNA的切割，據(jù)此推測，Cas9與基因工程中的基本工具限制酶有相似的功能；據(jù)圖分析，間隔區(qū)儲存的序列越多樣則轉(zhuǎn)錄出的gRNA序列多樣，則其識別的外源DNA種類多樣，因而細(xì)菌免疫能力越強(qiáng)。（2）根據(jù)題意，編輯改造蚊子的步驟應(yīng)為：②蚊子的基因組進(jìn)行測序，確定與生殖發(fā)育有關(guān)的目標(biāo)基因→④合成與目標(biāo)基因能堿基互補(bǔ)配對的gRNA→①合成Cas9/gRNA復(fù)合物，對目標(biāo)基因進(jìn)行編輯→③實(shí)驗(yàn)室條件篩選出不育的轉(zhuǎn)基因蚊子→⑤將轉(zhuǎn)基因蚊子釋放到野外發(fā)揮作用。即對蚊子進(jìn)行改造的步驟為②④①③⑤。（3）①方案2將病原體的抗性基因A導(dǎo)入野生型蚊子，獲得轉(zhuǎn)基因個體，該轉(zhuǎn)基因個體基因型是Aa，結(jié)合圖示可知，每一代都是Aa×aa的類型中會出現(xiàn)Aa，每一代中Aa的比例是1/2，則連續(xù)雜交5代后，理論上F5中攜帶基因A的概率為1/25=1/32。②方案3中，經(jīng)遺傳盒子改造后，無論雜交多少代，子代均為病原體抗性個體。關(guān)于該遺傳盒子的作用機(jī)制，提出一種合理的假說為：遺傳盒子可以在轉(zhuǎn)基因子代體內(nèi)自動實(shí)現(xiàn)：基因型Aa轉(zhuǎn)變?yōu)锳A(個體層次)；使含a的配子失去活性/含a的配子死亡/只產(chǎn)生含A的配子(配子層次)；基因a替換為基因A(基因?qū)哟?；生殖隔離是在自然狀態(tài)下不能相互交配或交配后也不能產(chǎn)生可育后代的現(xiàn)象，具有抗性基因的蚊子能與野生型雜交產(chǎn)生可育后代(具有抗性基因的蚊子與野生型之間未出現(xiàn)生殖隔離)，理論上講，釋放少量轉(zhuǎn)基因蚊子最終會導(dǎo)致整個物種發(fā)生變異，但并不意味著產(chǎn)生了新物種?？键c(diǎn)02考點(diǎn)021．（2025·湖北黃岡·模擬預(yù)測）熱啟動PCR主要借助一種酶的修飾物來抑制常溫下DNA聚合酶的活性。這種修飾使得PCR反應(yīng)體系在配制階段不能形成產(chǎn)物。當(dāng)反應(yīng)體系配制好后，在反應(yīng)初始加熱步驟，酶修飾物在高溫下被釋放，使得DNA聚合酶被激活，直接在高溫下（70℃以上）進(jìn)行PCR擴(kuò)增。下列相關(guān)敘述錯誤的是（）A．熱啟動PCR利用DNA熱變性原理，通過調(diào)節(jié)DNA聚合酶活性控制進(jìn)程B．熱啟動PCR中高溫能激活DNA聚合酶，該反應(yīng)體系中無需加入Mg2+C．與常規(guī)PCR相比，熱啟動PCR可減少反應(yīng)起始階段引物錯配形成的產(chǎn)物D．熱啟動PCR可防止低溫條件下產(chǎn)物的非特異性擴(kuò)增，能提高反應(yīng)的特異性【答案】B【解析】熱啟動PCR利用的原理是DNA的熱變性，該技術(shù)通過調(diào)節(jié)DNA聚合酶活性來控制反應(yīng)進(jìn)程，A正確；Mg2+是DNA聚合酶的必需輔助因子，能夠激活DNA聚合酶的活性，該反應(yīng)體系中也要加入Mg2+，B錯誤；低溫條件下啟動PCR，易引起引物與模板中一些非靶位點(diǎn)的錯配和引物之間形成二聚體，熱啟動PCR可減少反應(yīng)起始時引物錯配形成的產(chǎn)物，C正確；熱啟動PCR可減少錯配提高反應(yīng)的特異性，D正確。2．（2025·湖北武漢·一模）PCR技術(shù)的每輪循環(huán)可以分為變性、復(fù)性、延伸三步。引物與其模板鏈形成的雜合分子的解鏈溫度稱為引物的Tm值。下列敘述正確的是（

）A．引物與模板鏈的結(jié)合屬于延伸過程B．變性過程的溫度一般要低于復(fù)性過程C．復(fù)性過程的溫度應(yīng)設(shè)置為略低于Tm值D．引物的Tm值越接近,引物之間越容易結(jié)合【答案】C【解析】PCR一般要經(jīng)歷三十多次循環(huán)，每次循環(huán)可以分為變性、復(fù)性和延伸三步，引物與模板鏈的結(jié)合屬于復(fù)性過程，A錯誤；變性過程的溫度一般要高于復(fù)性過程，變性的目的是使DNA解旋成為單鏈，B錯誤；題意顯示，引物與其模板鏈形成的雜合分子的解鏈溫度稱為引物的Tm值，復(fù)性過程的溫度應(yīng)設(shè)置為略低于Tm值，否則會導(dǎo)致解螺旋發(fā)生，C正確；PCR過程中，選用的2種引物往往Tm值是一樣的，為了讓2種引物在相同的退火溫度下都能有效結(jié)合模板。而引物之間的結(jié)合更多的是取決于序列互補(bǔ)性，而不僅僅是Tm值接近，D錯誤。3．（2025高三上·湖北武漢·期末）重疊延伸PCR技術(shù)是一種通過核苷酸鏈之間重疊的部分互相搭橋、互為模板，經(jīng)過多次PCR擴(kuò)增，從而獲得目的基因的方法。過程如下圖，下列敘述不正確的是（

）A．引物中G、C的含量越高，復(fù)性溫度越高；當(dāng)設(shè)置溫度過低時可能導(dǎo)致非特異性條帶增多B．第一階段中引物2和引物3容易發(fā)生堿基互補(bǔ)配對，因此兩者應(yīng)置于不同反應(yīng)系統(tǒng)中C．加入引物1、2的反應(yīng)系統(tǒng)和加入引物3、4的反應(yīng)系統(tǒng)中各進(jìn)行一次PCR，共產(chǎn)生4種DNAD．引物1、2組成的反應(yīng)系統(tǒng)中，經(jīng)第一階段要形成圖示雙鏈DNA，至少要經(jīng)過2次復(fù)制【答案】C【解析】G與C間形成三個氫鍵，引物中G、C的含量越高，與模板鏈形成的氫鍵越多，復(fù)性溫度可以設(shè)置得越高；當(dāng)設(shè)置溫度過低，會造成引物與模板鏈的結(jié)合位點(diǎn)增加，導(dǎo)致非特異性條帶增多，A正確；由圖可知，引物2和引物3分別與目的基因兩條鏈的對應(yīng)位置結(jié)合，因此二者之間存在互補(bǔ)配對片段，為防止擴(kuò)增時引物2與引物3之間進(jìn)行配對，需將其置于不同反應(yīng)系統(tǒng)中，B正確；引物1和2位于一個反應(yīng)系統(tǒng)中，引物3和4位于另一個反應(yīng)系統(tǒng)中，這兩個反應(yīng)系統(tǒng)均進(jìn)行1次復(fù)制，由引物1擴(kuò)增的DNA與引物4擴(kuò)增的DNA相同，因此只能產(chǎn)生3種雙鏈DNA分子，即引物1（或4）擴(kuò)增的雙鏈DNA，引物2擴(kuò)增的雙鏈DNA，引物3擴(kuò)增的雙鏈DNA，C錯誤；引物2與目的基因的相應(yīng)模板鏈結(jié)合，可形成一個雙鏈不等長的DNA分子，該DNA分子中引物2所在的那條鏈再與引物1結(jié)合即可擴(kuò)增獲得同時含有引物1和引物2的雙鏈等長的DNA分子，如圖中所示，因此至少需要經(jīng)過2次復(fù)制，D正確。4．（2025高三上·湖北武漢·期末）在生物學(xué)中，“轉(zhuǎn)化”這個術(shù)語可以有多種特定含義。下列有關(guān)“轉(zhuǎn)化”的敘述錯誤的是（

）A．光合作用合成有機(jī)物時伴隨著光能轉(zhuǎn)化為化學(xué)能B．肺炎鏈球菌轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中R型轉(zhuǎn)化為S型的原理是基因突變C．成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)入相關(guān)因子，細(xì)胞可轉(zhuǎn)化為誘導(dǎo)多能干細(xì)胞D．土壤農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法關(guān)鍵是應(yīng)用Ti質(zhì)粒上TDNA的轉(zhuǎn)移特性【答案】B【解析】光合作用合成有機(jī)物時伴隨著光能轉(zhuǎn)化為化學(xué)能，儲存在有機(jī)物中，A正確；肺炎鏈球菌轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中R型轉(zhuǎn)化為S型的原理是基因重組，B錯誤；成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)入相關(guān)因子包括特定基因、特定蛋白、小分子化合物等，細(xì)胞可轉(zhuǎn)化為誘導(dǎo)多能干細(xì)胞，C正確；土壤農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法關(guān)鍵是應(yīng)用Ti質(zhì)粒上TDNA的轉(zhuǎn)移特性，可以整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上，遺傳穩(wěn)定性好，D正確。5．（2025高三上·湖北·期末）研究人員利用基因工程技術(shù)編輯基因L，培育抗鹽堿的大豆新品系。在載體上的限制酶BsaI切點(diǎn)處插入大豆基因L的向?qū)NA序列，將載體導(dǎo)入大豆細(xì)胞后，其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可引導(dǎo)核酸酶特異性結(jié)合基因L使其定點(diǎn)突變，以獲得抗鹽堿特性。載體信息及酶切位點(diǎn)如圖所示。下列敘述錯誤的是（

）

A．BsaI酶對載體進(jìn)行酶切后，載體上產(chǎn)生的黏性末端為5'-ATTG-3'及5'-GTTT-3'B．使用含卡那霉素的培養(yǎng)基篩選導(dǎo)入重組載體的大豆細(xì)胞C．對目標(biāo)基因L進(jìn)行PCR擴(kuò)增，經(jīng)3次循環(huán)后可獲得兩條脫氧核苷酸鏈等長的DNA片段D．將轉(zhuǎn)基因大豆與普通大豆共同種植于鹽堿地，對比觀察確定是否賦予大豆抗鹽堿的特性【答案】A【解析】據(jù)圖可知，用Bsal酶對載體進(jìn)行酶切后，載體上保留的黏性末端為5'-CAAT-3'及5'-GTTT-3'，A錯誤；卡那霉素抗性基因位于T－DNA上，因此可以使用含卡那霉素的培養(yǎng)基篩選出成功導(dǎo)入的細(xì)胞，獲得重組植株，B正確；PCR擴(kuò)增經(jīng)3次循環(huán)可獲得具兩條脫氧核苷酸鏈等長DNA片段，C正確；進(jìn)行個體水平的鑒定，即檢測是否具有抗鹽堿性，即將轉(zhuǎn)基因大豆與普通大豆共同種植于鹽堿地，對比觀察確定是否賦予大豆抗鹽堿的特性，D正確。6．（2025高三上·湖北·期末）某研究小組利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，將綠色熒光蛋白基因（GFP）整合到野生型小鼠Gata3基因一端，如圖甲所示。實(shí)驗(yàn)得到能正常表達(dá)兩種蛋白質(zhì)的雜合子雌雄小鼠各1只，交配以期獲得Gata3-GFP基因純合子小鼠。為了鑒定交配獲得的4只新生小鼠的基因型，設(shè)計了引物1和引物2用于PCR擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果如圖乙所示：下列相關(guān)敘述正確的是（）A．Gata3基因?yàn)檗D(zhuǎn)基因操作中的目的基因B．翻譯起始位點(diǎn)在Gata3基因的上游啟動子區(qū)域C．2號條帶的小鼠是Gata3-GFP基因純合子，4號條帶的小鼠是野生型D．若用引物1和引物3進(jìn)行PCR，能更好地鑒定新生小鼠的雜合子和純合子情況【答案】C【解析】據(jù)題干信息可知，綠色熒光蛋白基因（GFP）為轉(zhuǎn)基因操作中的目的基因，A錯誤；Gata3基因的上游啟動子區(qū)域是轉(zhuǎn)錄起始位置，而不是翻譯起始位置，B錯誤；整合GFP基因后，核酸片段變長，2號個體只有大片段，所以是Gata3-GFP基因純合子，4號個體只有小片段，是野生型，C正確；若用引物1和引物3進(jìn)行PCR，雜合子和Gata3-GFP基因純合子都能擴(kuò)增出相應(yīng)的片段，電泳結(jié)果相同，不能區(qū)分雜合子和純合子，D錯誤。7．（2025·湖北·二模）OsCYP2基因已被證實(shí)為水稻耐鹽堿關(guān)鍵基因?？蒲腥藛T通過克隆OsCYP2基因，構(gòu)建OsCYP2基因表達(dá)載體，并將其轉(zhuǎn)化到煙草中，探討OsCYP2基因?qū)煵菽望}堿能力大小的影響?；卮鹣铝袉栴}：(1)構(gòu)建OsCYP2基因表達(dá)載體時所用Ti質(zhì)粒結(jié)構(gòu)如圖甲所示，在構(gòu)建重組質(zhì)粒時要將OsCYP2基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的T-DNA中，當(dāng)農(nóng)桿菌侵染煙草細(xì)胞時，OsCYP2基因能隨T-DNA整合到煙草細(xì)胞的上。注：Bar基因?yàn)榭共莞熟ⅲㄒ环N除草劑）基因(2)OsCYP2基因兩端堿基序列如圖乙所示，為了讓OsCYP2基因和Ti質(zhì)粒正確連接，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增OsCYP2基因時需要設(shè)計一對引物，這對引物的序列分別為。（從引物5′端開始書寫，只寫前12個堿基即可）

(3)科研人員將OsCYP2基因?qū)藷煵菁?xì)胞（煙草細(xì)胞無該基因），然后利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)將含目的基因的受體細(xì)胞培養(yǎng)為轉(zhuǎn)基因植株，利用反轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)等檢測OsCYP2基因是否轉(zhuǎn)錄，其大致步驟為：提取轉(zhuǎn)基因植株的RNA→→利用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增→對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳分析。在構(gòu)建PCR反應(yīng)體系時需加入的物質(zhì)有模板DNA、引物、緩沖液、等（答出兩種）。(4)科研人員選擇上述擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)特異性擴(kuò)增條帶（呈陽性）的轉(zhuǎn)基因植株，在個體生物學(xué)水平檢測“轉(zhuǎn)OsCYP2基因煙草的耐鹽堿性是否明顯提高”，請寫出實(shí)驗(yàn)的大致思路。(5)科研人員在研究轉(zhuǎn)OsCYP2基因煙草的遺傳穩(wěn)定性時，發(fā)現(xiàn)有少部分陽性植株的遺傳不符合孟德爾遺傳規(guī)律，這可能是因?yàn)榛虿迦氲暮蛿?shù)目是隨機(jī)的，導(dǎo)致目的基因在轉(zhuǎn)基因植株中的遺傳變得復(fù)雜。此外，科研人員還發(fā)現(xiàn)OsCYP2基因在部分陽性植株中的表達(dá)水平低下，這影響了轉(zhuǎn)基因植株從實(shí)驗(yàn)室走向農(nóng)業(yè)生產(chǎn)應(yīng)用，請分析可能的原因有（答出一點(diǎn)即可）?！敬鸢浮?1)染色體DNA(2)5'-AGATCTATGTCT-3'

5'-GCTAGCCTAGGA-3'(3)將提取的RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA熱穩(wěn)定DNA聚合酶（TagDNA聚合酶或Taq酶）、四種脫氧核苷酸（dNTP）、Mg2＋(4)將等量、長勢相同的轉(zhuǎn)OsCYP02基因煙草和非轉(zhuǎn)基因煙草分為甲、乙兩組，用一定濃度NaC1溶液+完全營養(yǎng)液進(jìn)行水培，在其他條件相同且適宜條件下培養(yǎng)一段時間，觀察并記錄兩組煙草的生長狀況(5)位點(diǎn)（或位置、部位）①OsCYP2基因插入的位置不合適會阻礙基因轉(zhuǎn)錄過程，導(dǎo)致基因表達(dá)水平低下：②OsCYP2基因發(fā)生甲基化等表觀遺傳修飾，影響OsCYP2基因的表達(dá)；③細(xì)胞內(nèi)可能存在與OsCYP2基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的mRNA互補(bǔ)的小RNA分子，抑制mRNA的翻譯過程，使基因表達(dá)水平低下；④溫度、光照等環(huán)境因素可能參與調(diào)節(jié)植物的基因表達(dá)調(diào)控，影響OsCYP2基因表達(dá)【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。（4）目的基因的檢測與鑒定?！窘馕觥浚?）Ti質(zhì)粒的T-DNA中可以將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的染色體DNA上，故，在構(gòu)建重組質(zhì)粒時要將OsCYP2基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的T-DNA中，當(dāng)農(nóng)桿菌侵染煙草細(xì)胞時，OsCYP2基因能隨T-DNA整合到煙草細(xì)胞的染色體DNA上。（2）應(yīng)將目的基因?qū)雴幼雍徒K止子之間，且為避免反向連接和自身環(huán)化，應(yīng)選擇兩種限制酶進(jìn)行切割，據(jù)圖可知，應(yīng)選擇啟動子2與終止子之間的限制酶，故應(yīng)選擇的是BglII和NheI，再結(jié)合圖乙的轉(zhuǎn)錄方向及堿基序列可知，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增OsCYP2基因時需要設(shè)計一對引物，該對引物需要與模板的3'端結(jié)合，且需要在首端加上上述兩種酶的堿基序列，故最終為5'-AGATCTATGTCT-3'和5'-GCTAGCCTAGGA-3'。（3）反轉(zhuǎn)錄是以RNA為模板合成DNA的過程，利用反轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)等檢測OsCYP2基因是否轉(zhuǎn)錄，其大致步驟為：提取轉(zhuǎn)基因植株的RNA→將提取的RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA→利用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增→對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳分析；PCR是一項(xiàng)體外擴(kuò)增DNA的技術(shù)，在構(gòu)建PCR反應(yīng)體系時需加入的物質(zhì)有模板DNA、引物、緩沖液、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（TagDNA聚合酶或Taq酶）、四種脫氧核苷酸（dNTP）、Mg2＋。（4）在個體生物學(xué)水平檢測“轉(zhuǎn)OsCYP2基因煙草的耐鹽堿性是否明顯提高”，需要將轉(zhuǎn)基因植物與非轉(zhuǎn)基因植物進(jìn)行比較，實(shí)驗(yàn)設(shè)計應(yīng)遵循對照與單一變量原則額，故可設(shè)計實(shí)驗(yàn)如下：將等量、長勢相同的轉(zhuǎn)OsCYP02基因煙草和非轉(zhuǎn)基因煙草分為甲、乙兩組，用一定濃度NaC1溶液+完全營養(yǎng)液進(jìn)行水培，在其他條件相同且適宜條件下培養(yǎng)一段時間，觀察并記錄兩組煙草的生長狀況。（5）基因工程過程中，基因插入的位置和數(shù)目是隨機(jī)的，故有少部分陽性植株的遺傳不符合孟德爾遺傳規(guī)律；基因的表達(dá)包括轉(zhuǎn)錄和翻譯過程，科研人員還發(fā)現(xiàn)OsCYP2基因在部分陽性植株中的表達(dá)水平低下，可能的原因有：①OsCYP2基因插入的位置不合適會阻礙基因轉(zhuǎn)錄過程，導(dǎo)致基因表達(dá)水平低下：②OsCYP2基因發(fā)生甲基化等表觀遺傳修飾，影響OsCYP2基因的表達(dá)；③細(xì)胞內(nèi)可能存在與OsCYP2基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的mRNA互補(bǔ)的小RNA分子，抑制mRNA的翻譯過程，使基因表達(dá)水平低下；④溫度、光照等環(huán)境因素可能參與調(diào)節(jié)植物的基因表達(dá)調(diào)控，影響OsCYP2基因表達(dá)。8．（2025高三上·湖北·期末）擬南芥是科學(xué)研究中的模式植物。科研人員欲將黃粉蟲細(xì)胞內(nèi)的抗凍蛋白基因TmAFP導(dǎo)入擬南芥細(xì)胞中培育擬南芥耐低溫（-5℃以下）新品種，為進(jìn)一步培育抗寒經(jīng)濟(jì)作物品種提供一些理論依據(jù)，圖1為TmAFP基因片段，圖2為質(zhì)粒，圖3為相關(guān)限制酶切割位點(diǎn)（箭頭表示切割位點(diǎn)）。據(jù)圖回答問題。

注：Kanr為卡那霉素抗性基因；Bar為草銨膦（一種除草劑）抗性基因；Ampf為氨芐青霉素抗性基因：農(nóng)桿菌對卡那霉素、氨芐青霉素敏感(1)對TmAFP基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，在PCR反應(yīng)體系中加入的緩沖液中含有Mg2+，Mg2+的作用是。若利用PCR技術(shù)擴(kuò)增1個TmAFP基因，共消耗了126個引物分子，則該過程DNA擴(kuò)增了次。(2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建時將質(zhì)粒與抗凍蛋白基因TmAFP連接起來可得到重組質(zhì)粒，為確保TmAFP基因正確插入質(zhì)粒，最好選用限制酶切割質(zhì)粒。(3)采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將重組質(zhì)粒導(dǎo)入擬南芥細(xì)胞，需要先用Ca2+處理農(nóng)桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞，再將含有目的基因的重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌細(xì)胞。然后利用含的培養(yǎng)基對成功導(dǎo)入含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌進(jìn)行篩選。然后將含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌與擬南芥子葉進(jìn)行共培養(yǎng)，共培養(yǎng)一段時間后，再把擬南芥子葉轉(zhuǎn)移到含有的篩選培養(yǎng)基上培養(yǎng)，以獲得轉(zhuǎn)化成功的子葉細(xì)胞。(4)將完成轉(zhuǎn)化的擬南芥細(xì)胞M（T-DNA已經(jīng)插入到擬南芥細(xì)胞1號染色體的其中一條上）接種到原理。在形成轉(zhuǎn)基因植株N培養(yǎng)基上培養(yǎng)，形成轉(zhuǎn)基因植株N，該過程利用了過程中，由于細(xì)胞M中修飾系統(tǒng)的作用，一個DNA分子單鏈上的一個C脫去氨基變?yōu)閁．脫氨基過程在細(xì)胞M中只發(fā)生一次，M在經(jīng)過4次有絲分裂后，脫氨基位點(diǎn)為A-T的細(xì)胞占，植株N自交，子一代中含T-DNA的植株占。【答案】(1)激活TaqDNA聚合酶（激活耐高溫的DNA聚合酶、激活Taq酶）6(2)SmaI、XbaI(3)卡那霉素草銨膦(4)植物細(xì)胞的全能性7/163//4【分析】基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲?。虎诨虮磉_(dá)載體的構(gòu)建；③將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞；④目的基因的檢測與表達(dá)。其中，基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心。引物是一小段能與DNA母鏈的一段堿基序列互補(bǔ)配對的短單鏈核酸。用于PCR的引物長度通常為20~30個核苷酸；轉(zhuǎn)化是指目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程?！窘馕觥浚?）對TmAFP基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，在PCR反應(yīng)體系中加入的緩沖液中含有Mg2+，Mg2+是酶的激活劑，Mg2+的作用是激活TaqDNA聚合酶。PCR技術(shù)中DNA的合成方向總是從子鏈的5'末端向3'末端延伸，若擴(kuò)增過程中消耗引物分子126個，說明通過DNA復(fù)制產(chǎn)生(126+2)÷2=64個DNA分子，因此DNA擴(kuò)增了6次。（2）據(jù)圖1可知，為了目的基因能表達(dá)出蛋白質(zhì)，目的基因應(yīng)插入啟動子和終止子之間，該位置有三種酶（SmaⅠ、XbaⅠ和HindⅢ）識別序列，據(jù)圖2可知，SmaⅠ和EcoRV切割產(chǎn)生平末端，XbaⅠ和SpeⅠ產(chǎn)生相同的黏性末端，因此根據(jù)目的基因兩端的序列，為了成功得到重組質(zhì)粒，確保TmAFP基因插入載體中的方向正確，最好選用限制酶SmaⅠ、XbaⅠ切割質(zhì)粒。（3）質(zhì)粒上有兩個抗性基因，Kanr為卡那霉素抗性基因和Ampf為氨芐青霉素抗性基因，在構(gòu)建表達(dá)載體的過程中，TmAFP基因的插入破壞了Ampf為氨芐青霉素抗性基因，故利用含卡那霉素的培養(yǎng)基對成功導(dǎo)入含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌進(jìn)行篩選。然后將含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌與擬南芥子葉進(jìn)行共培養(yǎng)，共培養(yǎng)一段時間后，再把擬南芥子葉轉(zhuǎn)移到含有草銨膦的篩選培養(yǎng)基上培養(yǎng)，以獲得轉(zhuǎn)化成功的子葉細(xì)胞。（4）在形成轉(zhuǎn)基因植株N培養(yǎng)基上培養(yǎng)，形成轉(zhuǎn)基因植株N，該過程利用了植物細(xì)胞的全能性過程。由于M細(xì)胞DNA分子單鏈上的一個C脫去氨基變?yōu)閁，即親代DNA的此位點(diǎn)由C-G變成了U-G，所以復(fù)制4次后，有8個細(xì)胞脫氨基位點(diǎn)為C-G，7個細(xì)胞脫氮基位點(diǎn)為A-T，1個細(xì)胞脫氨基位點(diǎn)為U-A，因此脫氨基位點(diǎn)為A-T的細(xì)胞占7/16；T-DNA插入到細(xì)胞M的一條染色體上，可以記為+，因此N植株關(guān)于是否含有T-DNA的基因型記為+-，如果自交，則子代中相關(guān)的基因型為++：+-：--=1：2：1，故植株N自交，子代含有T-DNA的植株占3/4。9．（2025·湖北·一模）普通二倍體矮牽牛因缺乏藍(lán)色色素合成所需的轉(zhuǎn)座酶而不能開藍(lán)色花，研究人員嘗試把從薔薇花瓣細(xì)胞中分離提取的轉(zhuǎn)座酶基因F35H轉(zhuǎn)入普通的矮牽牛，培育藍(lán)色矮牽牛新品種?；卮鹣铝袉栴}：(1)提取薔薇花瓣細(xì)胞中的DNA，能利用PCR技術(shù)擴(kuò)增出目的基因F35H的前提是。擴(kuò)增目的基因3次需要消耗對引物。PCR中需要引物的原因是。(2)農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒上的T-DNA序列，可以從農(nóng)桿菌中轉(zhuǎn)移并隨機(jī)插入到矮牽牛的中。(3)經(jīng)篩選培養(yǎng)后獲得了一株含2個基因F35H的藍(lán)色矮牽?；ㄖ仓闍．經(jīng)驗(yàn)證確定基因F35H已成功整合，為探究2個基因F35H在染色體上的位置，研究人員利用植株A自交：①若2個基因F35H位于非同源染色體上，則子代的表型及比例為；②若2個基因F35H位于同源染色體上，則子代的表型及比例為；③若2個基因F35H位于，則子代的表型及比例為藍(lán)花：紅花=3：1.(4)經(jīng)驗(yàn)證A中的2個基因F35H位于非同源染色體上，為獲得能穩(wěn)定遺傳的藍(lán)花矮牽牛，科研人員利用單倍體育種的方法，獲得了純合的藍(lán)花矮牽牛，單倍體育種的優(yōu)點(diǎn)是。育種過程中A產(chǎn)生種類型的花粉（不考慮其他基因），所得的純合二倍體藍(lán)花矮牽牛細(xì)胞中含有個基因F35H（填基因數(shù)量）?！敬鸢浮?1)已知基因F35H的一段核苷酸（堿基）序列7/七使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸(2)染色體DNA(3)藍(lán)花：紅花=15：1全為藍(lán)花1條染色體上(4)縮短育種年限4/四4個或2個【分析】1、基因的分離定律的實(shí)質(zhì)：在雜合體的細(xì)胞中，位于一對同源染色體上的等位基因，具有一定的獨(dú)立性；在減數(shù)分裂形成配子的過程中，等位基因會隨同源染色體的分開而分離，分別進(jìn)入兩個配子中，獨(dú)立地隨配子遺傳給后代。2、基因的自由組合定律的實(shí)質(zhì)：位于非同源染色體上的非等位基因的分離或組合是互不干擾的；在減數(shù)分裂過程中，同源染色體上的等位基因彼此分離的同時，非同源染色體上的非等位基因自由組合?！窘馕觥浚?）運(yùn)用PCR技術(shù)擴(kuò)增出目的基因F35H的前提是已知基因F35H的一段核苷酸（堿基）序列。擴(kuò)增目的基因3次可得到23=8個DNA分子，每合成1個新DNA需要消耗1對引物，有1個DNA為模板，7個DNA是新合成的，因此需要消耗7對引物。引物使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸，因此PCR中需要引物。（2）將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，農(nóng)桿菌是一種在土壤中生活的微生物，能在自然條件下感染雙子葉植物和裸子植物，并將其中的Ti質(zhì)上的T-DNA轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞并整合到受體細(xì)胞的染色體的DNA上。因此本研究中農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒上的T-DNA序列，可以從農(nóng)桿菌中轉(zhuǎn)移并隨機(jī)插入到矮牽牛的染色體DNA中。（3）①將2個基因F35H分別用A、B表示，不含基因F35H的則用a、b表示，則植株A的基因型為AaBb。若2個基因F35H位于非同源染色體上，A/a、B/b遵循自由組合定律，含A或B的個體呈藍(lán)色，植株A自交，子代基因型及比例為A_B_：A_bb：aaB_：aabb=9:3:3:1，則表型及比例為藍(lán)花：紅花=15:1。②若2個基因F35H位于一對同源染色體上，則產(chǎn)生的配子中都含有基因F35H，因此植株A自交，后代全為藍(lán)花。③若子代的表型及比例為藍(lán)花：紅花=3：1.，說明其遵循分離定律，則2個基因F35H位于1條染色體上。（4）經(jīng)驗(yàn)證A中的2個基因F35H位于非同源染色體上，則植株A的基因型可用AaBb表示，為獲得能穩(wěn)定遺傳的藍(lán)花矮牽牛，科研人員利用單倍體育種的方法，單倍體育種的優(yōu)點(diǎn)是能明顯縮短育種年限。由于遵循基因的自由組合定律，植株A可以產(chǎn)生4種類型配子，所得的純合二倍體藍(lán)花矮牽?；蛐涂蔀锳ABB、AAbb、aaBB，因此細(xì)胞中含有4個或2個個基因F35H。10．（2025·湖北·一模）“鳳凰蟲”是一種重要的藥用昆蟲，其H基因編碼的抗菌肽HI—3具有良好的抗菌、抗癌作用。科研人員開展了利用酵母菌生產(chǎn)抗菌肽HI—3的一系列研究。(1)通過基因工程培養(yǎng)轉(zhuǎn)H基因的酵母菌，其核心工作是。(2)利用PCR技術(shù)從“鳳凰蟲”基因組中擴(kuò)增H基因時發(fā)現(xiàn)，引物長度越短，擴(kuò)增得到的DNA片段種類越（填“單一”或“復(fù)雜”），原因是。(3)已知H基因編碼鏈序列：5′—GGATCCTCTAGA……TCGAGATGCTGCTG—3′，PCR擴(kuò)增H基因時，結(jié)合到編碼鏈上的引物序列是（要求：按照5′→3′方向?qū)懗?′端的前8個堿基）。(4)由于抗菌肽HI—3會損傷酵母細(xì)胞，組成型表達(dá)（持續(xù)表達(dá)）H基因的酵母菌最大種群數(shù)量偏低，限制了最終產(chǎn)量?？蒲腥藛T通過構(gòu)建誘導(dǎo)型啟動子來降低抗菌肽HI—3對酵母菌的傷害。在酵母菌基因組DNA中插入P基因（指導(dǎo)合成P蛋白）和S基因（指導(dǎo)合成S蛋白），使質(zhì)粒上H基因的表達(dá)受紅光控制。紅光調(diào)控H基因表達(dá)的原理如下圖所示。由圖可知，S蛋白與啟動子Jub結(jié)合后可能抑制酶發(fā)揮作用，導(dǎo)致H基因無法轉(zhuǎn)錄；紅光下，P蛋白能夠，解除S蛋白的抑制作用，從而啟動H基因的表達(dá)?！敬鸢浮?1)構(gòu)建基因表達(dá)載體(2)復(fù)雜引物長度越短，特異性越差，基因組中能與引物結(jié)合的位點(diǎn)越多(3)5'-CAGCAGCA-3'(4)RNA聚合（酶）與結(jié)合在啟動子上的S蛋白結(jié)合【分析】引物是一小段能與DNA母鏈的一段堿基序列互補(bǔ)配對的短單鏈核酸，用于PCR的引物長度通常為20?30個核苷酸，引物使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸。一般來說，引物越短，其非特異性越強(qiáng)，PCR擴(kuò)增后產(chǎn)物的種類越多?！窘馕觥浚?）獲取了足夠量的目的后，下一步就是要讓基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且遺傳給下一代；同時，使目的能夠表達(dá)和發(fā)揮作用，這就需要構(gòu)建基因表達(dá)載體。這一步是基因工程的核心工作。（2）引物長度會影響PCR擴(kuò)增的特異性強(qiáng)度，一般來說，引物長度越短，引物的特異性強(qiáng)度越低，基因組中能與引物結(jié)合的堿基序列位點(diǎn)越多，因此，引物長度越短，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物DNA片段種類越復(fù)雜。（3）引物是一小段能與DNA母鏈的一段堿基序列互補(bǔ)配對的短單鏈核酸，已知H基因編碼鏈的編碼區(qū)序列是：5'-GGATCCTCTAGA??????TCGAGATGCTGCTG-3'，根據(jù)DNA分子的反向平行結(jié)構(gòu)以及引物與模板鏈的堿基互補(bǔ)配對原則可推知，擴(kuò)增H基因的編碼區(qū)段時，結(jié)合到編碼鏈上的引物序列是5'-CAGCAGCA-3'。（4）啟動子是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，RNA聚合酶識別并結(jié)合啟動子后開始轉(zhuǎn)錄，圖中S蛋白與Jub結(jié)合后，導(dǎo)致RNA聚合酶無法正常結(jié)合該啟動子，抑制了RNA聚合酶發(fā)揮作用；由圖可知，紅光下，P蛋白與S蛋白結(jié)合了，解除S蛋白的抑制作用，從而啟動H基因的表達(dá)?？键c(diǎn)03考點(diǎn)031．（2025·湖北·二模）我國是香蕉的主產(chǎn)地之一，大多數(shù)栽培香蕉是三倍體品種。傳統(tǒng)生產(chǎn)采用吸芽繁殖方式，不僅周期長、產(chǎn)率低、果品不佳，還易積累病毒。下列措施無法達(dá)到改良目的的是（

）A．通過基因工程轉(zhuǎn)入外源基因提高果實(shí)品質(zhì)B．用香蕉頂端分生區(qū)作為外植體獲得脫毒苗C．利用單倍體育種對栽培香蕉進(jìn)行品種選育D．用香蕉葉鞘進(jìn)行植物組織培養(yǎng)以提高產(chǎn)率【答案】C【解析】通過基因工程轉(zhuǎn)入外源基因可以改變香蕉的基因組成，從而有可能提高果實(shí)品質(zhì)，達(dá)到改良香蕉的目的，可以達(dá)到改良目的，A不符合題意；用香蕉頂端分生區(qū)作為外植體進(jìn)行植物組織培養(yǎng)可以獲得脫毒苗。因?yàn)橹参镯敹朔稚鷧^(qū)附近的病毒含量很低或者幾乎沒有病毒，通過這種方式可以減少香蕉積累的病毒，提高香蕉的品質(zhì)和產(chǎn)量，可以達(dá)到改良目的，B不符合題意；大多數(shù)栽培香蕉是三倍體品種，在減數(shù)分裂過程中會出現(xiàn)聯(lián)會紊亂，無法正常產(chǎn)生配子，難以進(jìn)行單倍體育種，無法達(dá)到改良目的，C符合題意；用香蕉葉鞘進(jìn)行植物組織培養(yǎng)可以在短時間內(nèi)獲得大量的香蕉植株，縮短培養(yǎng)周期，從而提高產(chǎn)率，達(dá)到改良香蕉繁殖方式的目的，可以達(dá)到改良目的，D不符合題意。2．（2025高三上·湖北·期中）我國科學(xué)家將外源生長激素（GH）基因?qū)膈庺~的受精卵，培育出了生長速率更快的轉(zhuǎn)基因鯉魚。下列說法錯誤的是（

）A．導(dǎo)入的GH基因是一個DNA分子，磷酸與核糖交替連接構(gòu)成其基本骨架B．轉(zhuǎn)基因鯉魚的體細(xì)胞中均含有GH基因，但只有特定細(xì)胞能合成生長激素C．GH基因在鯉魚體內(nèi)復(fù)制時，DNA聚合酶催化子鏈沿著5'→3'的方向延伸D．GH基因在鯉魚體內(nèi)的表達(dá)過程體現(xiàn)了生命是物質(zhì)、能量和信息的統(tǒng)一體【答案】A【解析】基因是有遺傳效應(yīng)的DNA片段，故導(dǎo)入的GH基因是一個DNA片段，磷酸與脫氧核糖交替連接構(gòu)成其基本骨架，A錯誤；GH基因?qū)膈庺~的受精卵，轉(zhuǎn)基因鯉魚的體細(xì)胞均由受精卵通過有絲分裂形成，故轉(zhuǎn)基因鯉魚的體細(xì)胞中均含有GH基因。GH基因只會在垂體細(xì)胞中表達(dá)，故生長激素只會在垂體細(xì)胞合成和分泌，B正確；DNA復(fù)制時，從子鏈來看，復(fù)制的方向是子鏈沿著5'→3'的方向延伸。因此，GH基因在鯉魚體內(nèi)復(fù)制時，DNA聚合酶催化子鏈沿著5'→3'的方向延伸，C正確；GH基因在鯉魚體內(nèi)的表達(dá)時，遺傳信息由DNA傳遞至mRNA，再傳遞至蛋白質(zhì)。信息在傳遞過程消耗了細(xì)胞呼吸過程中有機(jī)物氧化分解釋放的能量，因此，GH基因在鯉魚體內(nèi)的表達(dá)過程體現(xiàn)了生命是物質(zhì)、能量和信息的統(tǒng)一體，D正確。3．（2025·湖北·一模）天然蝦青素具有強(qiáng)大的清除氧自由基的能力，還具有著色、提高免疫力等特性，被廣泛應(yīng)用在化妝品、飼料添加劑和醫(yī)藥等行業(yè)中。常用微生物發(fā)酵合成蝦青素，已知紅法夫酵母能夠生產(chǎn)蝦青素，但存在產(chǎn)量低、成本高等弊端，大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)蝦青素存在諸多挑戰(zhàn)。下列敘述錯誤的是（

）A．蝦青素可能具有延緩衰老、抑制腫瘤發(fā)生等生理作用B．培養(yǎng)基中碳氮源比例可能會影響到菌株發(fā)酵合成蝦青素C．可通過基因工程改造野生型紅法夫酵母提高蝦青素產(chǎn)量D．工業(yè)化生產(chǎn)蝦青素不需要考慮pH、溶氧量等對產(chǎn)量的影響【答案】D【解析】蝦青素具有強(qiáng)大的清除氧自由基的能力，而氧自由基是導(dǎo)致衰老和癌癥的重要因素之一，因此蝦青素可能具有延緩衰老、抑制腫瘤發(fā)生等生理作用，A正確；碳氮源是微生物生長和代謝的重要營養(yǎng)物質(zhì)，其比例會影響微生物的生長速度、代謝途徑和產(chǎn)物合成，因此培養(yǎng)基中碳氮源比例可能會影響到菌株發(fā)酵合成蝦青素，B正確；基因工程技術(shù)可以對微生物的基因進(jìn)行定向改造，從而改變其代謝途徑和產(chǎn)物合成，提高目標(biāo)產(chǎn)物的產(chǎn)量，因此可通過基因工程改造野生型紅法夫酵母提高蝦青素產(chǎn)量，C正確；pH和溶氧量是影響微生物生長和代謝的重要環(huán)境因素，其變化會影微生物的生長速度、代謝途徑和產(chǎn)物合成，因此在工業(yè)化生產(chǎn)蝦青素的過程中，需要嚴(yán)格控制pH和溶氧量等環(huán)境因素，以確保微生物的正常生長和代謝，從而提高蝦青素的產(chǎn)量，D錯誤。4．（2025·湖北襄陽·一模）噬菌體展示技術(shù)是將外源蛋白基因插入到噬菌體外殼蛋白基因的適當(dāng)位置，使外源基因隨外殼蛋白基因的表達(dá)而表達(dá)，外源蛋白隨噬菌體的重新組裝而展示到噬菌體表面的生物技術(shù)（如圖所示）。下列敘述錯誤的是（

）A．噬菌體抗體展示過程，抗體的合成場所一定是受體細(xì)胞的核糖體B．噬菌體展示庫的構(gòu)建需將特定的基因片段拼接重組在噬菌體載體上并轉(zhuǎn)染受體細(xì)胞C．建立噬菌體展示庫需要的工具酶有限制酶、DNA聚合酶和RNA聚合酶D．通過圖中誘變處理及篩選，最終可能篩選出與某種抗原親和力更強(qiáng)的抗體及其基因【答案】C【解析】噬菌體作為病毒不具有獨(dú)立的代謝功能，為專性寄生物，因此，噬菌體抗體展示過程中抗體作為蛋白質(zhì)，其合成場所一定是受體細(xì)胞的核糖體，A正確；噬菌體展示庫的構(gòu)建需將特定的基因片段拼接重組在噬菌體載體上并轉(zhuǎn)染到受體細(xì)胞中，隨著受體細(xì)胞DNA復(fù)制而復(fù)制，B正確；建立噬菌體展示庫需要切割目的基因和病毒載體，然后將二者連接起來，需限制酶和DNA連接酶等，該過程中不需要RNA聚合酶，C錯誤；誘變的原理是基因突變，具有不定向性，所以通過圖中誘變處理及篩選最終可獲得與抗原親和力更強(qiáng)的抗體及其基因，D正確。5．（2025·湖北·二模）多年生野生大豆(S)具有遺傳多樣性豐富、抗逆性強(qiáng)等優(yōu)勢，其豐富的可遺傳變異為重要農(nóng)藝性狀的挖掘和育種提供了寶貴資源。下列敘述正確的是（

）A．用秋水仙素處理S的花粉可獲得多倍體植株B．利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)可將S的優(yōu)良基因轉(zhuǎn)移到其他植物體內(nèi)C．通過射線照射S的幼苗一定能獲得具有更優(yōu)良性狀的植株D．用一定濃度的生長素類似物處理未授粉的S，可避免連續(xù)陰雨天氣造成的減產(chǎn)【答案】B【解析】用秋水仙素處理多年生野生大豆的種子或幼苗可得到多倍體植株，A錯誤；不同植物的DNA具有相同的結(jié)構(gòu)，利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)可將多年生野生大豆的基因轉(zhuǎn)移到其他植物中，B正確；因基因突變具有隨機(jī)性以及不定向性，通過射線進(jìn)行誘變不一定能獲得更優(yōu)良的個體，C錯誤；大豆需要的是種子，必需要受粉才能獲得種子，通過一定濃度的生長素處理不能避免大豆減產(chǎn)，可通過人工授粉避免連續(xù)陰雨天氣造成的減產(chǎn)，D錯誤。6．（2025·湖北·一模）人乳鐵蛋白（hLF）是乳汁中一種重要的非血紅素鐵結(jié)合糖蛋白，具有抑菌、抗腫瘤等多種生理功能，被認(rèn)為是一種極具開發(fā)潛力的食品添加劑。某科研團(tuán)隊(duì)將人乳鐵蛋白（hLF）基因轉(zhuǎn)入到山羊體內(nèi)，從山羊的乳液中獲得hLF，可以解決天然乳鐵蛋白資源短缺的問題，下列有關(guān)敘述錯誤的是（

）A．可用PCR直接擴(kuò)增乳鐵蛋白的基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物B．重組載體中人乳鐵蛋白基因的啟動子是乳腺蛋白基因啟動子C．將目的基因?qū)肷窖蚴芫阎幸话銘?yīng)用的技術(shù)是顯微注射法D．檢測人乳鐵蛋白基因是否成功翻譯常采用抗原—抗體雜交技術(shù)【答案】A【解析】不可以直接用PCR擴(kuò)增mRNA，需將mRNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA再進(jìn)行擴(kuò)增，A錯誤；為保證在供體山羊的乳汁中提取到人乳鐵蛋白，需要將人乳鐵蛋白基因與山羊乳腺蛋白基因的啟動子等調(diào)控元件重組在一起，B正確；一般用顯微注射法將目的基因?qū)肷窖蚴芫阎校珻正確；為檢測人乳鐵蛋白基因是否成功翻譯成蛋白質(zhì)，檢測方法是從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原—抗體雜交，若出現(xiàn)相應(yīng)現(xiàn)象，則表明目的基因已翻譯形成蛋白質(zhì)，D正確。7．（2025·湖北武漢·二模）水中物質(zhì)污染會導(dǎo)致魚類雌性化異常。將綠色熒光蛋白（GFP）基因、Ga14蛋白基因等轉(zhuǎn)入斑馬魚，可用于監(jiān)測水體物質(zhì)，下圖中ERE和UAS是兩種誘導(dǎo)型啟動子，分別被物質(zhì)-受體復(fù)合物和蛋白特異性激活，啟動下游基因表達(dá)。下列敘述錯誤的是（

）A．根據(jù)題意可知斑馬魚的某些細(xì)胞存在物質(zhì)的受體B．用ERE直接驅(qū)動GFP基因表達(dá)可提高監(jiān)測的靈敏度C．用于監(jiān)測物質(zhì)污染的轉(zhuǎn)基因斑馬魚最好是不育的D．基因表達(dá)載體最好以顯微注射法導(dǎo)入斑馬魚受精卵【答案】B【解析】將綠色熒光蛋白（GFP）基因、Ga14蛋白基因等轉(zhuǎn)入斑馬魚，可用于監(jiān)測水體E物質(zhì)，推測斑馬魚的某些細(xì)胞存在E物質(zhì)的受體，A正確；結(jié)合題圖，ERE誘導(dǎo)Gal4轉(zhuǎn)錄，其翻譯產(chǎn)物Gal4蛋白與USA結(jié)合驅(qū)動GFP基因表達(dá)可提高監(jiān)測的靈敏度，這是一個間接驅(qū)動而非直接驅(qū)動的過程，B錯誤；用于監(jiān)測E物質(zhì)污染的轉(zhuǎn)基因斑馬魚最好是不育的，避免因有性生殖帶來的基因污染，C正確；基因表達(dá)載體最好以顯微注射法導(dǎo)入斑馬魚受精卵，受精卵全能性高，基因成功表達(dá)的概率大，D正確。8．（2025·湖北·一模）促紅細(xì)胞生成素能有效促進(jìn)紅細(xì)胞的產(chǎn)生、提升血液攜氧能力。第一代重組人促紅細(xì)胞生成素（rhEPO）的部分流程如圖所示。第二代rhEPO的生產(chǎn)通過改造第一代rhEPO的5個氨基酸位點(diǎn)，增加2個糖基化位點(diǎn)，使其穩(wěn)定性大大提升。下列敘述錯誤的是（

）A．①需設(shè)計一對特異性引物，②原理是基因重組，③利用顯微注射技術(shù)B．第二代rhEPO的生產(chǎn)運(yùn)用了蛋白質(zhì)工程技術(shù)，本質(zhì)是改造基因C．用大腸桿菌代替CHO，經(jīng)篩選后可更高效的量產(chǎn)高活性rhEPOD．rhEPO被列入興奮劑名錄，禁止運(yùn)動員使用以保證比賽公平性【答案】C【解析】①是利用PCR技術(shù)短時間內(nèi)擴(kuò)增目的基因，PCR過程需要一對引物，②是構(gòu)建人EPO基因的表達(dá)載體，②原理是基因重組，③是將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，利用顯微注射技術(shù)將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞，A正確；蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過改造或合成基因，來改造現(xiàn)有的蛋白質(zhì)，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿足人類生產(chǎn)和生活的需求。第二代rhEPO的生產(chǎn)運(yùn)用了蛋白質(zhì)工程技術(shù)，本質(zhì)是改造基因，B正確；大腸桿菌是原核生物，沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，不能加工促紅細(xì)胞生成素，用大腸桿菌代替CHO，不能得到高活性rhEPO，C錯誤；促紅細(xì)胞生成素能有效促進(jìn)紅細(xì)胞的產(chǎn)生、提升血液攜氧能力，rhEPO被列入興奮劑名錄，禁止運(yùn)動員使用以保證比賽公平性，D正確。9．（2025高三上·湖北襄陽·階段練習(xí)）研究表明羊乳中的β-乳球蛋白（BLG）是人體主要過敏源，圖為研究人員利用基因編輯技術(shù)敲除山羊中BLG基因同時敲入人乳鐵蛋白（hLF）基因并獲得轉(zhuǎn)基因山羊的操作過程。圖中sgBLG/Cas9復(fù)合物中，sgBLG為能準(zhǔn)確識別圖中山羊DNA特定序列的RNA，并引導(dǎo)Cas9蛋白對DNA進(jìn)行切割。檢測發(fā)現(xiàn)過程②中，hLF基因成功插入在母羊乙成纖維細(xì)胞中的一條常染色體上。(1)Cas9蛋白類似于基因工程中常用到的酶，但Cas9蛋白與該酶的主要區(qū)別是。(2)圖中復(fù)合物1所識別的DNA序列為5'-TATACTGGC-3'，則sgBLG的序列為5′--3′。(3)下列技術(shù)中，過程①②可能運(yùn)用的技術(shù)有，過程③④⑤中，運(yùn)用到的技術(shù)有。（編號選填）a.顯微注射技術(shù)b.動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)c.胚胎移植技術(shù)d.DNA重組技術(shù)e.動物細(xì)胞融合技術(shù)f.細(xì)胞核移植技術(shù)(4)科研團(tuán)隊(duì)想進(jìn)一步獲得純合能穩(wěn)定遺傳“人乳鐵蛋白基因”的轉(zhuǎn)基因山羊，其技術(shù)路線的設(shè)計思路是?！敬鸢浮?1)限制性內(nèi)切核酸酶Cas9蛋白沒有限制性內(nèi)切核酸酶具有專一識別DNA分子特定核苷酸序列的特性(2)5’-GCCAGUAUA-3’(3)adabcf(4)用圖中獲得的轉(zhuǎn)基因山羊與普通山羊進(jìn)行雜交得到子代，通過基因檢測，篩選出帶有目的基因的雌雄子代進(jìn)行雜交獲得含人乳鐵蛋白基因的純合子代；或者通過圖相關(guān)流程，分別選擇雌雄個體作為目的基因受體細(xì)胞的供體，從而獲得含有人乳鐵蛋白基因雌、雄轉(zhuǎn)基因山羊，然后進(jìn)行雜交來獲得含人乳鐵蛋白基因的純合子代?！痉治觥炕蚬こ碳夹g(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、