ICS13.080Z18DB23地方標準DB23/T2488—2019土壤硝基芳烴的測定高效液相色譜法（報批稿）黑龍江省市場監(jiān)督管理局發(fā)布DB23/T2488—2019目??次前言.....................................................................................................................................................................II1范圍.................................................................................................................................................................12規(guī)范性引用文件.............................................................................................................................................13方法原理.........................................................................................................................................................14試劑和材料.....................................................................................................................................................15儀器和設備.....................................................................................................................................................26樣品.................................................................................................................................................................27分析步驟.........................................................................................................................................................3結果計算和表示.............................................................................................................................................3精密度和準確度.............................................................................................................................................4質量保證與質量控制...................................................................................................................................5891011注意事項.......................................................................................................................................................5附錄A（規(guī)范性附錄）方法的檢出限和測定下限.......................................................................................6附錄B（資料性附錄）目標物的基本信息和保留時間...............................................................................7附錄C（資料性附錄）方法的精密度和準確度...........................................................................................8IDB23/T2488—2019前??言本標準依據(jù)GB/T1.1-2009給出的規(guī)則編寫。本標準由黑龍江省生態(tài)環(huán)境廳提出并歸口。本標準參與起草單位：哈爾濱市環(huán)境監(jiān)測中心站，黑龍江科瑞檢測技術有限公司。本標準起草人:王偉華、陳瑩、王娜、劉蕊、張萬峰、白昕、騰世長、陳姝蓉、張京、孟冰冰、張景欣、王雅輝、屈紅艷、張立彬。IIDB23/T2488—2019土壤硝基芳烴的測定高效液相色譜法1范圍本標準規(guī)定了測定土壤中硝基芳烴的高效液相色譜法。本標準適用于土壤中硝基苯（NB）、1,3-二硝基苯（1,3-DNB）、1,3,5三硝基苯（1,3,5-TNB）、鄰硝基甲苯（2-NT）、間硝基甲苯（3-NT）、對硝基甲苯（4-NT）、2,4-二硝基甲苯（2,4-DNT）、2,6-二硝基甲苯（2,6-DNT）、4-氨基-2,6-二硝基甲苯（4-Am-DNT）、2-氨基-4,6-二硝基甲苯（2-Am-DNT）等10種硝基芳烴的測定。本標準中，當取樣量為20.0g時，10種硝基芳烴的方法檢出限為0.01mg/kg～0.06mg/kg，測定下限為0.04mg/kg～0.24mg/kg，具體結果詳見附錄A。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。HJ/T166土壤環(huán)境監(jiān)測技術規(guī)范HJ613土壤干物質和水分的測定重量法土壤中的硝基芳烴用乙腈或甲醇萃取后，取上清液用高效液相色譜分離，紫外檢測器檢測，根據(jù)保留時間定性，外標法定量。4.3硝基芳烴標準貯備液：ρ=1000mg/L。使用有證標準溶液（硝基苯、1,3-二硝基苯、1,3,5三硝基苯、鄰硝基甲苯、間硝基甲苯、對硝基甲苯、2,4-二硝基甲苯、2,6-二硝基甲苯、4-氨基-2,6-二硝基甲苯、2-氨基-4,6-二硝基甲苯），于-10℃下冷藏、避光保存，或參照標準溶液證書進行保存。使用時應恢復至室溫并搖勻。4.4硝基芳烴標準使用液：ρ=10.0mg/L。4.5石英砂：300～830μm（50～20目）。1DB23/T2488—2019在馬弗爐中400℃下灼燒4h，置于干燥器中冷卻至室溫，轉移至磨口玻璃瓶中保存。5儀器和設備5.1高效液相色譜儀：配套紫外檢測器，具有梯度洗脫功能。5.2色譜柱：填料為ODS（十八烷基硅烷鍵合硅膠），填料粒徑5μm，柱長250mm，內(nèi)徑4.6mm的反相色譜柱或其它性能相近的色譜柱。5.3采樣瓶：具聚四氟乙烯內(nèi)襯蓋的250ml螺紋棕色玻璃瓶。5.4提取瓶：100ml，具聚四氟乙烯-硅膠襯墊螺旋蓋的玻璃瓶。5.5水平振蕩器：振蕩頻率50～250次/min左右。5.6超聲波提取器：35Hz，有效高頻功率至少為140W，水浴溫度能控制在30℃±5℃及50℃±5℃。5.75.8玻璃注射器：可裝0.45μm濾膜。離心機：轉速1000～3000r/min。5.9便攜式冷藏箱：控溫4℃以下。5.10天平：感量為0.01g。5.11一般實驗室常用儀器和設備。按照HJ/T166的相關規(guī)定進行土壤樣品的采集和保存。用鐵鏟或不銹鋼勺將樣品盡快采集至采樣瓶（5.3）中，并填滿?？焖偾宄魳悠菲柯菁y及外表面上黏附的樣品，密封樣品瓶，避光保存。如不能及時分析，于4℃以下冷藏，避光保存，在5d內(nèi)完成提取。除去樣品中的枝棒、葉片、石子等異物，稱取20g（準確至0.1g）均質化土壤鮮樣于提取瓶（5.4）中，加入40ml乙腈（4.1）或甲醇（4.2）后，蓋上蓋子，密封。經(jīng)短暫手搖后，將提取瓶置于水平振蕩器（5.5）上，振蕩18h后，靜止沉降30min，取上層清液待測。如有必要，上層清液可經(jīng)0.45μm濾膜（5.7）過濾或離心機（5.8）離心后待測。也可以采用超聲波（5.6）提取，在30℃±5℃下超聲提取18h，或在50℃±5℃下超聲提取5h，靜止沉降30min，取上層清液待測。在提取過程中，水浴的水位應至少比提取瓶中的溶劑位高出1cm。提取后的目標物如不能及時分析，可于4℃條件下暗處冷藏存放，保存7d。6.4干物質含量的測定2DB23/T2488—2019按照HJ613測定土壤樣品干物質含量。7分析步驟7.1色譜參考條件進樣量：10μl；柱溫：30℃；流速：1.0ml/min；流動相A：甲醇；流動相B：水；檢測波長：254nm。梯度洗脫程序見表1。表1梯度洗脫程序時間（min）A%58B%4252400030353840454860100584242587.2標準曲線的建立分別量取5μl、10μl、20μl、50μl、100μl的硝基芳烴標準使用液（4.4），用乙腈（4.1）或甲醇（4.2）稀釋，制備5個濃度點的標準系列，硝基芳烴的質量濃度分別為0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml、0.50μg/ml和1.00μg/ml（此為參考濃度），由低濃度到高濃度依次對標準系列溶液進樣，以標準系列溶液中目標物組分濃度為橫坐標，以其對應的峰面積（峰高）為縱坐標，建立標準曲線。在推薦的儀器條件下，10種硝基芳烴目標物在C18柱上的色譜圖保留時間見附錄B。按照與標準曲線的建立（7.2）相同的步驟進行試樣（6.2）的測定。根據(jù)樣品中目標物與標準系列中目標物的保留時間進行定性，可采用標準添加法、不同波長下的吸收比或掃描紫外吸收光譜等方法輔助定性。土壤樣品中硝基芳烴的含量（mg/kg），按照公式（1）進行計算。................................................................................(1)3DB23/T2488—2019式中：i—樣品中組分i的含量，mg/kg；i—標準曲線中所得組分i的濃度，μg/ml；v—提取液體積（乙腈或甲醇體積+樣品含水量），ml；m—樣品量（濕重），g；wdm—土壤樣品干物質含量，%。wdm和w土壤樣品中干物質含量2，分別按照式（2）和（3）進行計算：(m2m0)100........................................................................(2)wdm(mm)10(m1m2)100.......................................................................(3)w2(mm)20式中：wdm—土壤樣品中的干物質含量，%；w2—土壤樣品中的含水量，%；m0—帶蓋容器的質量，g；m1—帶蓋容器及新鮮土壤試樣的總質量，g；m2—帶蓋容器及烘干土壤的總質量，g。測定結果精確至0.1%。測定結果小數(shù)位數(shù)與方法檢出限保持一致，最多保留三位有效數(shù)字。9.1六家實驗室的精密度統(tǒng)計結果對濃度為0.50mg/kg、40.0mg/kg的實際土壤加標樣品進行6次平行測定，目標物的實驗室內(nèi)相對標準偏差分別為：2.6%～10%，2.2%～10%；實驗室間相對標準偏差分別為：7.7%～16%，5.1%～16%；重復性限范圍分別為：0.09mg/kg～0.12mg/kg，5.45mg/kg～8.12mg/kg；再現(xiàn)性限范圍分別為：0.12mg/kg～0.22mg/kg，7.93mg/kg～17.4mg/kg，具體結果詳見附錄C。9.2六家實驗室的準確度統(tǒng)計結果對濃度為0.50mg/kg、40.0mg/kg的實際土壤加標樣品進行6次平行測定，目標物的加標回收率分別為：74.0%～115%，74.2%～115%，具體結果詳見附錄C。4DB23/T2488—201910質量保證與質量控制空白測定10.1本標準規(guī)定每20個樣品或每批次（少于20個樣品/批）應至少測定一個實驗室空白樣品，目標物濃度應小于方法檢出限。如果目標物有檢出，需查找原因。10.2校準本標準規(guī)定標準曲線至少需5個濃度點，校準曲線的相關系數(shù)應大于等于0.995，每20個樣品或每批次（少于20個樣品/批）分析1次標準曲線中間點，其測定結果與標準曲線相應點標準值的相對誤差不超過20%，否則應查找原因或重新繪制標準曲線。10.3平行樣測定本標準規(guī)定每20個樣品或每批次（少于20個樣品/批）至少分析一個平行樣，單次平行樣測定結果相對偏差應小于等于30%。10.4加標樣測定每20個樣品或每批次（少于20個樣品/批）至少分析1個基體加標樣，樣品中目標物加標回收率應在60%～120%之間。11注意事項11.2為了防止采樣工具污染，在使用前要用甲醇、純凈水充分洗凈。在采集其它樣品時，要注意更換采樣工具和清洗采樣工具，以防止交叉污染。在分析過程中必要的器具、材料、藥品等應事先分析測定有無干擾目標物測定的物質。器具、材料可采用甲醇清洗，盡可能除去干擾。5DB23/T2488—2019AA附錄A（規(guī)范性附錄）方法的檢出限和測定下限A.1目標物的檢出限和測定下限當土壤取樣量為20.0g時，10種目標物的方法檢出限和測定下限見表A.1。表A.1方法的檢出限和測定下限序號1目標物中文名稱檢出限（mg/kg）測定下限（mg/kg）硝基苯0.010.020.020.060.050.060.020.020.020.020.040.080.080.240.200.240.080.080.080.0821,3-二硝基苯31,3,5-三硝基苯2-硝基甲苯453-硝基甲苯64-硝基甲苯72,4-二硝基甲苯2,6-二硝基甲苯4-氨基-2,6-二硝基甲苯2-氨基-4,6-二硝基甲苯86DB23/T2488—2019BB附錄B（資料性附錄）目標物的基本信息和保留時間B.1目標物的基本信息和保留時間目標物的CAS號、英文名稱、簡稱及保留時間見表B.1。表B.1目標物的CAS號、英文名稱、簡稱及保留時間中文名稱1,3,5-三硝基苯1,3-二硝基苯CAS號99-35-4英文名稱1,3,5-Trinitrobenzene1,3-Dinitrobenzene4-Amino-2,6-dinitrotoluene2-Amino-4,6-dinitrotolueneNitrobenzene簡稱1,3,5-TNB1,3-DNB4-Am-DNT2-Am-DNTNB保留時間（min）6.43999-65-08.6414-氨基-2,6-二硝基甲苯2-氨基-4,6-二硝基甲苯硝基苯19406-51-035572-78-298-95-39.1719.59510.73911.5062,6-二硝基甲苯2,4-二硝基甲苯2-硝基甲苯606-20-2121-14-288-72-22,6-Dinitrotoluene2,4-Dinitrotoluene2-Nitrotoluene2,6-DNT2,4-DNT2-NT11.75614.13215.79417.0927DB23/T2488—2019CC附錄C（資料性附錄）方法的精密度和準確度C.1方法的精密度和準確度方法的實驗室內(nèi)相對標準偏差、實驗室間相對標準偏差、重復性限、再現(xiàn)性限和加標回收率等精密度和準確度指標見表C.1。表C.1實際土壤樣品加標精密度和準確度匯總表加標回收率加標濃度