ICSFORMTEXT13.060.01FORMTEXTZ16FORMTEXTDBFORMTEXT23DBFORMTEXT23/TXXXX—XXXXFORMTEXT水質(zhì)生物毒性的測(cè)定發(fā)光細(xì)菌快速測(cè)定法FORMDROPDOWNFORMTEXTFORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX發(fā)布FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX實(shí)施FORMTEXT黑龍江省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布DB23/TXXXX—XXXX前言 II引言 III1范圍 12規(guī)范性引用文件 13方法原理 14試劑和材料 15儀器設(shè)備 16測(cè)定 27結(jié)果計(jì)算與表示 38方法的精密度 4附錄A（資料性附錄）結(jié)果判定參考內(nèi)容 5前言本標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)GB/T1.1-2009給出的規(guī)則編寫。本標(biāo)準(zhǔn)由黑龍江省生態(tài)環(huán)境廳提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)參與起草單位：黑龍江省生態(tài)環(huán)境監(jiān)測(cè)中心。本標(biāo)準(zhǔn)起草人:引言為貫徹《中華人民共和國(guó)環(huán)境保護(hù)法》和《中華人民共和國(guó)水污染防治法》，保護(hù)環(huán)境，保障人體健康，制定本標(biāo)準(zhǔn)。水質(zhì)生物毒性的測(cè)定發(fā)光細(xì)菌快速測(cè)定法范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水質(zhì)生物毒性的測(cè)定發(fā)光細(xì)菌快速測(cè)定法的方法原理、試劑和材料、儀器設(shè)備、測(cè)定、結(jié)果計(jì)算和表示及方法的精密度。本標(biāo)準(zhǔn)適用于工業(yè)廢水，納污水體及實(shí)驗(yàn)室條件下可溶性化學(xué)物質(zhì)的水質(zhì)急性毒性監(jiān)測(cè)。規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB15441-1995水質(zhì)急性毒性的測(cè)試發(fā)光細(xì)菌法方法原理水樣在一定的時(shí)間和條件下與發(fā)光細(xì)菌接觸后，發(fā)光細(xì)菌的發(fā)光強(qiáng)度變化與水樣中毒性組分總濃度呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，通過生物發(fā)光光度計(jì)測(cè)定水樣與發(fā)光細(xì)菌接觸一定時(shí)間后的發(fā)光抑制率來表征水樣的急性毒性水平。試劑和材料本標(biāo)準(zhǔn)所有的試劑除另有說明外，均應(yīng)為符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的分析純?cè)噭?，蒸餾水或同等純度的水。4.1超純水，常溫保存4.2氯化汞母液（2000mg/L）4.3氯化汞工作液4.4復(fù)蘇稀釋液（0.85%的氯化鈉溶液）4.5滲透壓液（17%的氯化鈉溶液）4.6青?；【鶴67注：菌株凍干粉封裝于透明小玻璃瓶中，于-18℃至-20℃下儲(chǔ)存。使用前，添加復(fù)蘇液使發(fā)光細(xì)菌恢復(fù)活性后用于毒性測(cè)試。儀器設(shè)備生物發(fā)光度計(jì)技術(shù)規(guī)格：可探測(cè)光譜范圍：320nm～1000nm；探測(cè)結(jié)果范圍：0～65535RLU；本底計(jì)數(shù)率：0RLU；計(jì)算機(jī)接口：USB；探測(cè)元器件：高靈敏度光電二級(jí)管；智能化操作，配有專用軟件，數(shù)據(jù)可上傳；測(cè)量模式有：ISO模式、基本模式、RLU模式（可進(jìn)行ATP測(cè)試），能自動(dòng)保存3000組測(cè)量結(jié)果；最快檢測(cè)時(shí)間：5min；相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度：0-200%；可進(jìn)行ATP測(cè)試。測(cè)試試管：規(guī)格為5ml的反應(yīng)試管和10ml的測(cè)試試管。測(cè)定測(cè)定條件室溫室溫20-25℃，同一批樣品在測(cè)試過程中要求溫度波動(dòng)不超過±1℃。且所有測(cè)試器皿及試劑，溶液測(cè)前1h均置于控溫的測(cè)試室內(nèi)。pH若須測(cè)定包括pH影響在內(nèi)的急性毒性，不應(yīng)調(diào)節(jié)水樣pH。若須測(cè)定排除pH影響在內(nèi)的急性毒性，須將水樣和復(fù)蘇液（氯化鈉0.85g/100ml）pH測(cè)前調(diào)至下值：主要含銅的水樣為4.5，主要含其他金屬水樣為5.4，主要含有機(jī)化合物水樣為7.0。測(cè)定步驟試管的排列與塑料或鐵制試管架上按以下要求排列試管架：第一排，依次為反應(yīng)管01-標(biāo)準(zhǔn)品、反應(yīng)管02-陰性/陽性質(zhì)控和反應(yīng)管03-水樣；第二排，依次為測(cè)試管01-標(biāo)準(zhǔn)品、測(cè)試管02-陰性/陽性質(zhì)控和測(cè)試管03-水樣。青海弧菌Q67凍干粉劑復(fù)蘇從冷凍環(huán)境（-18℃）中取出青?；【鶴67凍干粉（含量約為0.0015-0.0018g）小瓶，在常溫環(huán)境（25℃左右）下放置15min后，啟開并輕敲小瓶，確保凍干細(xì)菌充分落在小瓶底部。移取0.5mL0.85%的復(fù)蘇液或3%的復(fù)蘇液至菌種中，搖勻，放置10min后可以使用。儀器的預(yù)熱和調(diào)零打開生物發(fā)光光度計(jì)電源，預(yù)熱15min，調(diào)零，備用。測(cè)試的步驟按下列步驟進(jìn)行測(cè)試：a） 分別往三支反應(yīng)試管中加入2ml的標(biāo)準(zhǔn)品（稀釋液），2ml（1:19-稀釋液：樣品）的陰性質(zhì)控及2ml（1:19-稀釋液：樣品）的被測(cè)水樣.b） 待凍干粉復(fù)蘇時(shí)間到后，分別往反應(yīng)管中加入50μl凍干粉復(fù)蘇試劑（注意混勻）c）混勻后，等待15min反應(yīng)時(shí)間d）分別從反應(yīng)試管中移取350μl混合液至測(cè)試管中（注意盡量不要濺到瓶壁上）e）將測(cè)試試管按順序分別放入到主機(jī)中，最終結(jié)果以RLI%發(fā)光強(qiáng)度表示。采樣前后，濾膜稱量應(yīng)使用同一臺(tái)分析天平，并保證稱重室（倉(cāng)）的空氣潔凈，恒溫恒濕。天平定期進(jìn)行檢定和校準(zhǔn)?？瞻准凹虞d濾膜同樣都需要進(jìn)行編碼（邊緣切割、二維碼識(shí)別或RFID）。結(jié)果計(jì)算與表示計(jì)算結(jié)果計(jì)算結(jié)果以發(fā)光強(qiáng)度來表示。同一相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度的表達(dá)式：(1)結(jié)果表示用氯化汞表達(dá)樣品毒性，見表1。表1氯化汞表達(dá)樣品毒性相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度（RLI）抑制率（IR%）等當(dāng)?shù)腍gCl2溶液濃度CHg（mg/L）毒性級(jí)別90%＜RLI≤110%-10＜IR≤10CHg＜0.03無毒80%≤RLIQUOTE＜＜90%10≤IRQUOTE＜＜200.03≤CHg＜0.05低毒50%≤RLIQUOTE＜QUOTE＜＜80%20≤IR＜500.05≤CHg＜0.09中毒30%≤RLIQUOTE＜＜50%50≤IRQUOTE＜＜700.09≤CHg＜0.12重毒0%≤RLIQUOTE＜＜30%70≤IRQUOTE＜＜1000.12≤CHg＜0.16高毒RLI=0IR=100CHg≥0.16劇毒原始記錄表原始記錄表，見表2。表2原始記錄表分析號(hào)加菌液時(shí)間（反應(yīng)開始，讀到秒）測(cè)定時(shí)間（反應(yīng)分鐘，讀到秒）發(fā)光量相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度備注方法的精密度樣品3