土壤質(zhì)量 土壤微生物多樣性的測(cè)定 第2部分:磷脂脂肪酸分析法 編制說(shuō)明_第1頁(yè)
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一、工作簡(jiǎn)況,包括任務(wù)來(lái)源、制定背景、起草過(guò)程等 (一)任務(wù)來(lái)源 (二)制定背景 (三)起草過(guò)程 21預(yù)研階段 22立項(xiàng)階段 23起草階段 24征求意見(jiàn)階段 3二、國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)編制原則、主要內(nèi)容及其確定依據(jù) 3(一)編制原則 3(二)主要內(nèi)容 3三、試驗(yàn)驗(yàn)證的分析、綜述報(bào)告,技術(shù)經(jīng)濟(jì)論證,預(yù)期的經(jīng)濟(jì)效益、社會(huì)效益和生態(tài)效益 7四、與國(guó)際、國(guó)外同類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)內(nèi)容的對(duì)比情況 9五、以國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)為基礎(chǔ)的起草情況,以及是否合規(guī)引用或者采用國(guó)際國(guó)外標(biāo)準(zhǔn) 10六、與有關(guān)法律、行政法規(guī)及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系 10七、重大分歧意見(jiàn)的處理經(jīng)過(guò)和依據(jù) 八、涉及專(zhuān)利的有關(guān)說(shuō)明 九、實(shí)施國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的要求,以及組織措施、技術(shù)措施、過(guò)渡期和實(shí)施日期的建議等措施建議錯(cuò)誤!未定義書(shū)十、其他應(yīng)當(dāng)說(shuō)明的事項(xiàng) 術(shù)文件項(xiàng)目《土壤質(zhì)量土壤微生物多樣性的測(cè)定第2部分:磷脂脂肪酸分析單位為全國(guó)土壤質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì),由中國(guó)科學(xué)院南京土壤研究所等單位本文件借鑒ISO國(guó)際標(biāo)準(zhǔn),規(guī)范我國(guó)土壤微生物多樣性的磷脂脂肪酸測(cè)試方法,可以為我國(guó)磷脂脂肪酸法研究微生物多樣性的數(shù)據(jù)與國(guó)際互認(rèn)提供有利條件,進(jìn)而為我國(guó)在土壤學(xué)、微生物學(xué)和生態(tài)學(xué)等領(lǐng)域的相關(guān)研究工作提高重會(huì)提出本標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)建議書(shū)和標(biāo)準(zhǔn)草案。同時(shí)開(kāi)始查閱文獻(xiàn),收集國(guó)際、國(guó)家性的測(cè)定磷脂脂肪酸分析法》獲得批準(zhǔn)成為2024年第三批國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化指導(dǎo)性技術(shù)文件項(xiàng)目,計(jì)劃編號(hào)20241644-Z全國(guó)土壤質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)就《土壤質(zhì)量土壤微生物多樣性的測(cè)定磷脂本標(biāo)準(zhǔn)為修改采用《土壤質(zhì)量土壤微生物多樣性的測(cè)定第2部分:使用簡(jiǎn)單PLFA提取法的磷脂脂肪酸(PLFA)分析法》(ISO/TS29843-2:20),即《Soilquality—Determinationofsoilmicrobialdiversity—Part2:Methodby為基礎(chǔ)的標(biāo)準(zhǔn)化文件起草規(guī)則》的規(guī)定起草。標(biāo)準(zhǔn)編制遵循“實(shí)用性、統(tǒng)一性、規(guī)范性”的原則,并注重標(biāo)準(zhǔn)的通用性和適用性。提取物分離為中性脂質(zhì)、糖脂和磷脂。磷脂通過(guò)溫和的堿性水解反應(yīng)轉(zhuǎn)化為脂檸檬酸鹽緩沖液的體積。22);ww——土壤水分含量的質(zhì)量分?jǐn)?shù),單位為每克干用渦旋儀將樣品混勻,在超聲波儀中超聲30min后放入冰箱,4℃下靜置刻度燒瓶中。向含土壤懸浮液的試管中加入5mLBligh-Dyer溶液。再次在渦棄去樣品的上層(水相)。在50℃下氮?dú)?N2)吹干下層。樣品的吹干提),下保持至少30min。重蒸水,以停止反應(yīng)。在超聲波儀中振搖30min,然后以1300r/min離心5min。),提取下層(水相包括振搖和以1300r/用50μL內(nèi)標(biāo)溶液將提取物溶解后待測(cè)。氣相色譜的參考條件為:進(jìn)樣量Rf×k×m1Ri×m2×Mc——土壤中目標(biāo)化合物的濃度,單位為納摩爾Rf,Ri——目標(biāo)化合物和內(nèi)標(biāo)的平均響應(yīng);););M——目標(biāo)化合物的摩爾質(zhì)量,單位為克每摩爾(g/mol)。結(jié)合上述三種載氣各自的優(yōu)缺點(diǎn)以及磷脂脂肪酸分析對(duì)分離效率要求較高的特點(diǎn),ISO標(biāo)準(zhǔn)采用氦氣作為載氣??紤]到氦氣的使用成本太高,本方法增加了氫氣作為載氣的選項(xiàng),通過(guò)使用氫氣發(fā)生器代替氫氣鋼瓶來(lái)降低風(fēng)險(xiǎn)。為此我們考察了氦氣和氫氣分別作為氣相色譜的載氣對(duì)脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)樣品的分離效果。由如下兩張色譜圖可以看出,氫氣作為載氣可以在更短的時(shí)間內(nèi)對(duì)脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)樣品實(shí)現(xiàn)很好的分離,滿(mǎn)足磷脂脂肪酸的分析要求。因此本方法pA555045403530252026783080389740414288426783080389740414288443748295994645273768930926997442.557.51012.51517.520minpA20008060402023712073283623712073283628723455376647975877625969406997773279808452898442682468件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,可以鑒定出64種脂肪酸。pA5040302007933469552708852698374246844648746336648045457206007933469552708852698374246844648746336648045457206036704045474448645209655565256965773282298453892890649528 . 53852468際標(biāo)準(zhǔn)化組織已經(jīng)建立了土壤中微生物多樣性測(cè)定的磷脂脂肪酸分析法。其中Determinationofsoilmicrobialdiversity—Part2:Methodby本標(biāo)準(zhǔn)的制定過(guò)程嚴(yán)格遵循現(xiàn)行的法律法規(guī),確保標(biāo)準(zhǔn)的適用性和無(wú)沖突酸分析法,擴(kuò)大其應(yīng)用范圍,為標(biāo)準(zhǔn)化指導(dǎo)性技術(shù)文件,與現(xiàn)行的法律、法規(guī)礎(chǔ)性標(biāo)準(zhǔn)。標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施后,對(duì)土壤學(xué)研究具有重要指導(dǎo)意義。建議標(biāo)準(zhǔn)編制組組本文件修改

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