天然藥物化學成分的提取分離和鑒定方法第一節(jié)提取分離方法提取前的準備

系統(tǒng)的文獻調(diào)研原材料的處理保留憑證標本提取分離一般原則

已知物或已知結(jié)構(gòu)類型——文獻方法未知物——活性跟蹤（定向分離）2一、中草藥有效成分的提取溶劑提取法：最常用水蒸氣蒸餾法：揮發(fā)性升華法：升華性

31.溶劑提取法

（1）選擇溶劑考慮因素溶劑盡可能多地溶出有效成分，雜質(zhì)少溶或不溶。依據(jù)有效成分、雜質(zhì)、溶劑的極性：相似相溶原理。溶劑的安全性、價廉易得、回收方便等4

（2）常見溶劑的種類及其特點石油醚，苯，氯仿，乙醚，乙酸乙酯，正丁醇，丙酮，乙醇，甲醇，水極性：親脂性：親水性：與水可以以任意比例混溶的有機溶劑：與水分層的有機溶劑：能與水分層的極性最大的有機溶劑：溶解范圍最廣的有機溶劑：5

（3）

常用溶劑提取方法浸漬法：

水或稀醇，常溫或低熱優(yōu)：簡單易行，適用于有效成分遇熱易破壞者或含大量淀粉、樹膠的藥材的提取；缺：提取效率低（靜態(tài)），水溶液易發(fā)霉變質(zhì)。滲漉法：

滲漉筒優(yōu)：提取效率相對較高（動態(tài)）；缺：溶劑用量大煎煮法：水優(yōu)：簡便易行，藥材中大部分成分可不同程度地提出；缺：受熱時間長，不宜用于有效成分遇熱易破壞和具有揮發(fā)性有效成分的天然藥物的提取。

6回流提取法：有機溶劑優(yōu)：提取效率高；缺：熱不穩(wěn)定成分不宜，溶劑用量消耗量大，操作麻煩。連續(xù)回流提?。核魇咸崛∑鲀?yōu)：減少溶劑消耗量，操作簡便；缺：受熱時間長，提取一般要4-5小時。超聲波提?。撼暡ㄝo助溶劑進行提取優(yōu)：提取時間短，提取效率高，對成分的破壞少；缺：需要特定的設備。7超臨界流體萃取技術(shù)法（SFE）：

超臨界流體

處于臨界溫度和臨界壓力以上，介于氣體和液體之間的物質(zhì)。具有液體和氣體的雙重特性如：密度與液體近似，粘度與氣體近似，擴散系數(shù)是液體的100倍，對很多物質(zhì)有很強的溶解能力。

優(yōu)：提取效率高；不殘留有機溶劑；萃取溫度低，對成分的破壞少；缺：對水溶性成分的溶解能力弱，需加入夾帶劑；設備較為昂貴，清洗較困難。8（4）影響溶劑提取效率的因素粉碎度溫度時間92.水蒸氣蒸餾法具有揮發(fā)性；能隨水蒸氣蒸餾而不被破壞，難溶或不溶于水；沸點在100℃以上，并在100℃左右有一定的蒸氣壓。103.升華法具有升華性的固體物質(zhì)，如茶葉中的咖啡因。11第二節(jié)天然藥物有效成分的分離與精制分離依據(jù)：共存成分的性質(zhì)差異

1.溶解度差異2.分配比不同3.吸附性差異4．分子大小差異5．離解程度不同121.根據(jù)物質(zhì)的溶解度差異進行分離

調(diào)節(jié)溫度改變混合溶劑的極性調(diào)節(jié)PH加入某種沉淀試劑13（1）調(diào)節(jié)溫度

溫度不同，導致溶解度改變，如結(jié)晶、重結(jié)晶。待純化物A+雜質(zhì)B、C加適宜溶劑熱溶趁熱過濾殘渣（C）濾液（A+B）冷置析晶母液（B）結(jié)晶（A）14結(jié)晶法

分離和精制固體成分的重要方法之一；用結(jié)晶法分離化學成分，關鍵在于選擇合適的溶劑：

A.對欲純化的物質(zhì)熱時溶解度大，冷時溶解度小，對雜質(zhì)冷熱均溶或均不溶；B.沸點不宜太高或太低，宜在30-150℃。15

加另一種極性相差較大的溶劑，混合溶劑極性改變，部分物質(zhì)沉淀析出。如水/醇法、醇/水法、醇/醚法。

（2）改變混合溶劑極性16A．水/醇法：除去水提液中的水溶性雜質(zhì)中藥水提取液加數(shù)倍量濃醇靜置過夜母液（目標成分）沉淀（水溶性雜質(zhì)

如蛋白質(zhì)、多糖）17B．醇/水法：除去醇提液中的脂溶性雜質(zhì)母液（目標成分）中藥醇提取液加數(shù)倍水靜置過夜沉淀（脂溶性雜質(zhì)如油脂、葉綠素等）18C．醇/醚法（醇/丙酮法）：純化皂苷皂苷的醇溶液加數(shù)倍量乙醚，靜置母液（脂溶性雜質(zhì)）沉淀（皂苷）19適用于酸、堿、兩性成分；通過調(diào)節(jié)PH改變的分子存在狀態(tài)，從而改變?nèi)芙舛取?/p>

（3）調(diào)節(jié)PH解離型/離子態(tài)游離型/分子態(tài)H+BH+BOH-H+A-HAOH-脂溶性水溶性20A．酸/堿法（酸提堿沉法）——生物堿的提取、純化

H+BH+BOH-（水溶性雜質(zhì)）（B）醇提物浸膏（B）藥渣酸水提取液稀酸水提取（BH+）堿化沉淀堿水液（脂溶性雜質(zhì)）21（水溶性雜質(zhì)）藥材（HA）藥渣堿水提取液堿水提?。ˋ-）酸化沉淀（HA）酸水液（脂溶性雜質(zhì)）B．堿/酸法（堿提酸沉法）——黃酮、蒽醌等酚性成分的提取、純化A-H+HAOH-22C.調(diào)節(jié)PH至等電點，沉淀蛋白

23

成分中加入某種沉淀試劑，生成水不溶性鹽。如生物堿類成分加入苦味酸、磷鎢酸、雷氏鹽等生成沉淀，與其他組分相分離。（4）加沉淀劑24二、天然藥物有效成分的分離與精制分離依據(jù)：共存成分的性質(zhì)差異

1.溶解度差異2.分配比不同3.吸附性差異4．分子大小差異5．離解程度不同252.根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同進行分離

(1)分配比K

K=CU/CL

(2)分離因子ββ=KA/KB

（KA

KB）

β

1001次萃取，基本分離10

β

10010

12次

β

2100次以上

β

1無法分離上層下層26(3)分配比與PHA-+H3O+HA+H2O酸性物質(zhì)pKa值越小，酸性越強堿性物質(zhì)，用其共軛酸的pKa值示B

+H3O+BH+

+H2OpKa值越小，堿性越弱27（1）簡單液液萃取法β

50有機溶劑/水（酸、堿水）28（2）逆流分溶法（CCD，countercurrentdistribution）β＜50工作原理：多次、連續(xù)的液液萃取逆流分溶儀萃取單元及工作過程優(yōu)點：避免手工操作缺點：溶劑用量大機械操作導致破損、漏液乳化293031（3）紙色譜（paperchromatography,PC）固定相：紙纖維上吸附的水分離原理：

Rf值與展開劑的種類相關如果展開劑極性大于水：極性越大的物質(zhì)，Rf值越大；極性越小的物質(zhì)，Rf值越小。反之亦然。32固定相涂覆于硅膠等多孔載體上，裝柱；流動相通過色譜柱進行洗脫；物質(zhì)在兩相溶劑中作逆流移動；

——分配比不同，被洗脫速度不同。（4）液液分配柱色譜

33正相色譜與反相色譜34二、天然藥物有效成分的分離與精制分離依據(jù)：共存成分的性質(zhì)差異

1.溶解度差異2.分配比不同3.吸附性差異4．分子大小差異5．離解程度不同35（1）吸附的類型

物理吸附：

分子間力，無選擇性，可逆。

如硅膠、氧化鋁、活性炭化學吸附：化學鍵，選擇性較強，常不可逆。如硅膠——生物堿堿性氧化鋁——黃酮、蒽醌等半化學吸附：氫鍵，選擇性較弱，多可逆。

如聚酰胺36（2）物理吸附的基本規(guī)律

極性相似者易于吸附

非極性吸附劑：活性炭對非極性成分吸附強；溶劑極性

吸附劑對溶質(zhì)的吸附力；溶質(zhì)可被極性弱的溶劑洗脫。極性吸附劑：硅膠、氧化鋁

對極性物質(zhì)親和力強；溶劑極性

吸附劑對溶質(zhì)的吸附力；溶質(zhì)可被極性強的溶劑洗脫。

37（3）簡單吸附法用于物質(zhì)的濃縮與精制

活性炭吸附法結(jié)晶、重結(jié)晶中脫色、脫臭；從大量稀水液中濃縮微量物質(zhì)——一葉秋堿的濃縮、精制。38（4）吸附柱色譜法用于物質(zhì)的分離

硅膠吸附柱色譜氧化鋁吸附柱色譜

A．吸附劑：30～60倍，難分離時提高到100～200倍；

B．裝柱：

干法裝柱/濕法裝柱；

C．上樣：干法上樣/濕法上樣；

D．洗脫：等度/梯度（洗脫劑極性遞增）；

E．洗脫系統(tǒng)的選擇：TLCRf=0.2～0.3。

39（5）聚酰胺柱色譜

高分子聚合物不溶于常見有機溶劑對堿穩(wěn)定對酸特別是無機酸穩(wěn)定性差可溶于濃鹽酸、冰乙酸、甲酸中聚酰胺性質(zhì)40分子間氫鍵——半化學吸附吸附原理41化合物在含水溶劑中大致有以下規(guī)律：1.形成氫鍵的基團數(shù)目：越多，越強。2.形成氫鍵的基團所處的位置：處于易形成分子內(nèi)氫鍵者，減弱。3.分子中芳香化程度：高，增強。影響吸附力的因素42434.各種溶劑在聚酰胺柱上的洗脫能力

水甲醇乙醇氫氧化鈉水溶液甲酰胺

二甲基甲酰胺

尿素水溶液

弱強影響吸附力的因素常以濃度漸高的含水醇梯度洗脫，如EtOH-H2O44二、天然藥物有效成分的分離與精制分離依據(jù)：共存成分的性質(zhì)差異

1.溶解度差異2.分配比不同3.吸附性差異4．分子大小差異5．離解程度不同454．根據(jù)物質(zhì)分子大小差異進行分離透析法超濾法超速離心法凝膠濾過法：也稱為凝膠滲透色譜、分子篩濾過46凝膠濾過法凝膠三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的分子篩作用；按分子量由大到小的順序分離。原理常用凝膠種類為葡聚糖凝膠47二、天然藥物有效成分的分離與精制分離依據(jù)：共存成分的性質(zhì)差異

1.溶解度差異2.分配比不同3.吸附性差異4．分子大小差異5．離解程度不同48離子交換法

1.步驟及原理離子交換樹脂為固定相，用水、或含水溶劑裝柱；含水流動相通過樹脂；可交換離子與樹脂上的交換基團交換，吸附到樹脂上；中性及無交換離子的成分流出；用適當溶劑將吸附到柱上的成分洗脫下來。49球形顆粒，不溶于水，可在水中溶脹；母核（苯乙烯通過二乙烯苯交聯(lián)而成的大分子網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)）離子交換基團由兩個部分組成：2.離子交換樹脂的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)50陽離子交換樹脂：強酸性（-SO3-H+）弱酸性（-COO-H+）

陰離子交換樹脂：強堿性（-N+（CH3）3Cl-）