BCA法定量蛋白質(zhì)濃度BCA法是近來廣為應(yīng)用的蛋白定量方法。操作簡便，快速，靈敏度高，準確，試劑穩(wěn)定性好，經(jīng)濟實用，抗干擾能力強【原理】：堿性條件下，蛋白將Cu2+還原為Cu+，Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡(luò)合物，測定其在562nm處的吸收值，并與標準曲線對比，即可計算待測蛋白的濃度。

【原理】：操作步驟1.先將solutionA搖晃混勻，根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積solutionA加1體積solutionB試劑（50:1）配制成BCA工作液，充分混勻。BCA工作液在24小時內(nèi)穩(wěn)定。

2、蛋白質(zhì)標準液：用結(jié)晶牛血清白蛋白(BSA)根據(jù)其純度用生理鹽水配制成1.5mg/ml的蛋白質(zhì)標準液。（純度可經(jīng)凱氏定氮法測定蛋白質(zhì)含量而確定）

3.繪制標準曲線：

取6支試管，編號后分別加入0mL、0.02mL、0.04mL、0.06mL、0.08mL、0.1mL標準蛋白質(zhì)溶液(BSA)，然后各管分別用去離子水補充到0.1mL，最后各試管中分別加入2.0mLBCA工作液，每加完一管，立即在漩渦混合器上混合（注意不要太劇烈，以免產(chǎn)生大量氣泡而難于消除），以蛋白質(zhì)的蛋白含量為橫坐標、吸光度A為縱坐標繪制標準曲線。4.樣品測定：同繪制標準曲線方法，在一支試管中加入待測樣品0.1mL代替標準蛋白質(zhì)溶液，然后加入2.0mLBCA工作液后，立即在漩渦混合器上混合，測吸光度A，查標準曲線，求出待測樣品中蛋白質(zhì)濃度（g/L）?！緝?yōu)缺點】(一)操作簡單，快速，45分鐘內(nèi)完成測定，比經(jīng)典的Lowary法快4倍且更加方便；(二)準確靈敏，試劑穩(wěn)定性好，BCA試劑的蛋白質(zhì)測定范圍是20-200μg/ml，微量BCA測定范圍在0.5-10μg/ml。(三)經(jīng)濟實用，除試管外，測定可在微板孔中就進行，大大節(jié)約樣品和試劑用量；(四)抗試劑干擾能力比較強，如去垢劑，尿素等均無影響此法測定蛋白質(zhì)濃度，近些年被科研工作者廣泛選用。目前BCA法的試劑盒市面有售。

BCA蛋白濃度測定試劑盒(BCAProteinAssayKit)是根據(jù)目前世界上最常用蛋白濃度檢測方法之一BCA法研制而成，實現(xiàn)了蛋白濃度測定的簡單，高穩(wěn)定性，高靈敏度和高兼容性。檢測濃度下限達到25微克/毫升，最小檢測蛋白量達到0.5微克，待測樣品體積為1～20微升。試劑盒組成2.稀釋標準品：完全溶解蛋白質(zhì)標準品（5mg/mlBSA(牛血清白蛋白),-20℃保存）取10微升用PBS(pH7.4的等滲磷酸鹽緩沖液)稀釋至100微升（樣品一般可用PBS稀釋），使終濃度為0.5mg/ml。將稀釋后的標準品（0.5mg/ml）按0,2,4，6，8,12,16,20微升分別加到96孔板的蛋白標準品孔中，加標準品稀釋液補足到20微升。

體積(ul)02468121620終濃度（ug/ul)00.050.10.150.20.30.40.5pH7.4的等滲磷酸鹽緩沖液（PBS）的配制pH7.4的等滲磷酸鹽緩沖液（0.01mol/L，pH7.4,PBS）:NaCI

8.0gKH2PO4

0.2gNa2HPO4·12H2O

2.9gKCI

0.2g將上列試劑按次序加入定量容器中，加適量蒸餾水溶解后，再定容至1000mL，調(diào)pH值至7.4,高壓消毒滅菌112Kpa20min，冷卻后，保存于4℃冰箱中備用。6孔板底面積9.6cm2,加培養(yǎng)液的量2.5ml,12孔板底面積4.5cm2,加培養(yǎng)液的量2ml,24孔板底面積2cm2,加培養(yǎng)液的量1ml,96孔板底面積0.32cm2,加培養(yǎng)液的量0.1ml,摘自司徒鎮(zhèn)強的《細胞培養(yǎng)》實驗步驟實驗步驟3、待測樣品：用雙縮脲測定法的樣品稀釋而成。此法測定蛋白質(zhì)濃度，近些年被科研工作者廣泛選用。目前BCA法的試劑盒市面有售?？傊?，雖然蛋白質(zhì)含量的測定方法很多，但是，還沒有一個完美的方法。在選擇測定方法時，可根據(jù)實驗要求和實驗室條件決定?！驹噭?、試劑A：1％BCA二鈉鹽2％無水碳酸鈉0.16%酒石酸鈉0.4％氫氧化鈉0.95％碳酸氫鈉混合調(diào)PH值至11.25。2、試劑B：4％硫酸銅。3、BCA工作液：試劑A100ml＋試劑B2ml混合。4、蛋白質(zhì)標準液：用結(jié)晶牛血清白蛋白根據(jù)其純度用生理鹽水配制成1.5mg/ml的蛋白質(zhì)標準液。（純度可經(jīng)凱氏定氮法測定蛋白質(zhì)含量而確定）5、待測樣品：用雙縮脲測定法的樣品稀釋而成。此法測定蛋白質(zhì)濃度，近些年被科研工作者廣泛選用。目前BCA法的試劑盒市面有售。總之，雖然蛋白質(zhì)含量的測定方法很多，但是，還沒有一個完美的方法。在選擇測定方法時，可根據(jù)實驗要求和實驗室條件決定。實驗步驟

加適當體積樣品到96孔板的樣品孔中，加標準品稀釋液不足道20ul。即：將蛋白質(zhì)樣品作適當稀釋（最好多做幾個梯度，如作2倍、4倍、8倍稀釋4.

各孔加入200微升BCA工作液，用加樣槍輕輕吹打混勻（注意：不要弄出氣泡影響讀數(shù)），37℃放置30-60分鐘。冷卻到室溫后，用酶標儀測定A562nm，或540-590n