PAGEPAGE2作業(yè)要求以高效液相色譜法的特點為著眼點，分別闡述高效液相色譜法在藥物分析的鑒別、檢查、含量測定中的應用與發(fā)展。淺析高效液相色譜在藥物分析中的應用

摘要：高效液相色譜技術是現在檢測防腐劑的常用技術，通過此技術同時檢測多種防腐劑，不僅省時而且省力。本實驗的難點就是確定流動相的組成、配比、流速以及檢測波長，以求同時檢測出以上四種防腐劑。確定方案之后，本實驗的重點就是樣品的前處理，樣品的檢測，檢測方法的穩(wěn)定性與準確性。本論文的目的旨在準確測定防腐劑的含量，并希望引起廣大消費者的關注。

關鍵詞：液相色譜；氣相色譜；藥物分析

引言HPLC近年來在食品分析檢測上應用后，擴大了分析檢測范圍，提高了分析水平，尤其對食品中殘留的微量，痕量有毒有害物質，能快速，準確的分析出來，進一步提高了食品衛(wèi)生質量，保障了食品安全和人民身體健康，促進了食品出口。HPLC法在食品分析檢測中有廣泛的應用前景。

1高效液相色譜的簡介高效液相色譜簡稱HPLC，又稱高速或高壓液相色譜。該法吸收了普通液相層析和氣相色譜的優(yōu)點，經過適當改進發(fā)展起來的，既有普通液相層析的功能，又有氣相色譜的特點（即高壓，高速，高分辨和高靈敏度）。1.1HPLC與氣相柱色譜法(GC)相比較，主要有以下幾點優(yōu)勢：(1)GC的分析對象僅限于蒸汽壓低、沸點低的樣品(僅占有機物總數的20%)，不適于分析高沸點有機物、高分子化合物、熱穩(wěn)定性差的有機物及生物活性物質。而HPLC不受此限制，能對80%的有機物進行分離與分析。(2)GC流動相為惰性氣體，不能與待測組分發(fā)生作用。HPLC流動相選擇余地大，可與待測組分發(fā)生作用，而且通過改變流動相的組成，可改善分離的選擇性(相當于增加了一個控制和改進分離條件的參數)。(3)GC通常在高溫下進行，HPLC可以室溫下進行分離與分析。(4)非破壞性檢測器在HPLC中的使用，可使樣品回收(特別是少量珍貴樣品)或樣品的純化制備成為可能。1.2HPLC的特點?(1)分離效能高。由于高效微粒固定相的使用，使理論塔板數可達到103～104塊/m，遠遠高于GC的103左右(填充柱)。(2)選擇性高。因為流動相可與樣品組分發(fā)生相互作用，所以，通過改變流動相的組成，可以達到控制和改善分離過程選擇性的目的。因此，HPLC不僅可以分析不同類型的有機物及其同分異構體，而且已在合成藥物和生化藥物的生產與控制分析中發(fā)揮了重要作用。(3)檢測靈敏度高。HPLC中應用的檢測器大多數都有較高的靈敏度。高壓輸液泵的使用，使HPLC分析一個樣品僅需幾分鐘至幾十分鐘。1.3HPLC的局限性(1)在HPLC中，所用流動相不止一種(多種)，因此其分析成本高，且易起環(huán)境污染；當進行“梯度洗脫”操作時(相當于GC中的程序升溫技術)，比GC的程度升溫操作要復雜的多；(2)HPLC目前還缺少像GC中的通用型檢測器(如TCD、FID);(3)HPLC不能替代GC。當要求柱效高達10萬塊理論塔板數以上時，只能用GC中的毛細管色譜柱；(4)在200kPa～1Mpa柱壓下易分解、變性的生物活性的生化樣品，不易用HPLC分析。1.4高效液相色譜儀HPLC儀器的工作過程為：高壓泵將貯液器(或槽、罐)中的流動相溶劑經進樣器送入色譜柱，然后從控制器的出口流出(通常要回收)。當注入待測樣品時，流經進樣器的流動相將樣品各組分帶入色譜柱中進行分離，分離后的各組分依一定的順序進入檢測器，檢測器產生的信號由記錄儀記錄下來，最后形成液相色譜圖。1.4.1高壓輸液泵這是HPLC儀器中的著急部件之一。它一般由貯液器、高壓輸液泵、過濾器等組成。高壓輸液泵應該具備密封性好、輸出流量恒定、壓力平穩(wěn)、可調范圍寬、便于更換溶劑及耐腐蝕等條件。常用的輸液泵有恒流泵和恒壓泵兩種，而恒流泵用的較多(因為它的輸出流量能始終保持恒定，與色譜柱引起的阻力大小無關)，而恒壓泵用的較少。恒流泵又分為機械注射泵和機械往復泵，后者用的最多。1.4.2進樣系統(tǒng)由于HPLC色譜柱比GC色譜柱短的多(約5～750px)，所以，引起色譜峰峰形變寬的因素以柱外因素為主(即：進樣系統(tǒng)、連接管道及檢測器中存在的死體積)。而柱外展寬(色譜柱外因素引起的峰形變寬)又分柱前和柱后展寬，以進樣系統(tǒng)所引起的柱前展寬為主要因素1.4.3分離系統(tǒng)色譜柱是其核心部件之一。通常用φ4～5mm，5～30cm長度的不銹鋼管作高壓色譜柱，內裝5～10μm的全多孔型高效微粒固定相。1.4.4檢測系統(tǒng)用于HPLC儀的檢測器有兩類，一類是溶質型檢測器，它僅對被測組分的物理或化學特性有響應，屬于此類的有：紫外、熒光及電化學檢測器等。另一類是總體檢測器，它是對試樣及洗脫液總的物理或化學性質有響應，屬于此類的有：示差折光、電導等檢測器。在實際工作中,應根據具體情況來選擇適宜的檢測器。而在HPLC儀器的常規(guī)分析中，紫外檢測器用的最多。除了這四大部分之外，還有一些附屬的(有的甚至是不可缺少的)部件，如：脫氣、梯度淋洗、自動進樣、恒溫、餾分收集及數據處理等裝置。2高效液相色譜在藥物分析中的應用

高效液相色譜在藥物分析中的應用范圍越來越廣，高效液相色譜由于具有高選擇性、高靈敏度，并可同時用于有關物質檢查與含量測定的特點，已成為醫(yī)藥研究的有力工具。如在中草藥有效成分的分離和純度測定、人工合成藥物成分的定性和定量測定、新型高效手性藥物中手性對映體含量的測定以及藥物代謝物的測定等方面都需要用到HPLC的不同測定方法予以解決。而目前高效液相色譜的蒸發(fā)光散射檢測器的應用更體現了它在藥物分析中的重要地位。

2.1天然藥物分析

天然藥物的來源有動物、植物和礦物之分，其中以植物類為主。由于天然藥物的化學成分復雜，其有效成分，可能有一個，也可以有多個，這對于控制藥品質量，建立質量標準來說比較困難，HPLC可通過對天然藥物的有效成分進行分離鑒定，再測定有效成分的含量；通過指紋圖譜建立識別模式，可以判定藥材的質量高低。

2.2天然藥物及復方成藥分析

復方制劑、雜質或輔料干擾因素多的品種多采用高效液相色譜法。增免扶正片系由當歸、黨參、黃芪等十幾味天然藥物精制而成，具有益氣生津、活血養(yǎng)血、滋補肝腎、健脾開胃之功效，主要用于抗缺氧、抗疲勞、抗衰老，長期服用可扶正祛邪，提高機體免疫功能，健身強體，益壽延年。該藥對心、肝、脾、腎虛、納差、心腦血管疾病、神經衰弱、慢性肝炎、脂肪肝等都有較好的防治作用。

由于化學藥品的開發(fā)費用昂貴，而且毒副作用大，近年來人們已把目光轉向自然、民族傳統(tǒng)醫(yī)藥、草藥、植物藥等天然藥物，據世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，當前全世界60多億人口中80％的人使用過天然醫(yī)藥。在全世界藥品市場中，天然物質制成的藥品已占30％，國際上植物藥市場份額已達300億美元，且每年以20％

以上的速度增長。HPLC分析必定能為我國傳統(tǒng)中醫(yī)藥實現現代化，走向世界提供強有力的技術支持。

2.3抗生素分析

抗生素是由微生物或其他方法產生的化學物質，在高度稀釋的情況下仍具有抑制或殺滅其他微生物的性能?？股氐姆蛛x、分析和定量測定是藥物分析中較困難的領域。采用較多的方法是微生物法、分光光度法和化學方法，但所需時間較長、專一性較差。

HPLC分析技術近年來在抗生素的質量控制中已廣泛應用。對結構、組分等較清楚的藥物，HPLC分析將逐步取代傳統(tǒng)的生物測定。目前，各國藥典中應用HPLC技術對抗生素進行質量控制的項目包括鑒別、組分分析、含量測定和相關物質測定等。

2.4手性藥物分析

在生物體內，幾乎所有具有重要生理意義的有機生物分子都有手性(chirality)，絕大多數都是旋光性物質。兩種化學組成、分子式完全相同的化合物，但因組成化合物的原子在空間取向不同，而成為鏡像的化合物，稱為手性化合物。由于對映體的物理、化學性質相同，實現它們的分離就比較困難，如大多數氨基酸都有右旋體和左旋體，但往往只能獲得右旋體和左旋體的混合物。手性藥物往往呈現一種對映體具有強的生物活性和藥效，而另一種卻無效。近年來，對手性藥物的拆分定量分析進行了廣泛深入的研究。其中，對生物體液中藥物對映體的分離分析，有利于了解各種對映體的藥代動力學、體內代謝過程和生物利用度。因此對手性藥物對映體的拆分也是HPLC分析的熱點。手性HPLC拆分法是以現代HPLC技術為基礎引入手性環(huán)境使對映異構體間呈現物理特征的差異而進行分離。HPLC法拆分手性藥物對映體可分為直接法和間接法。前者是將不對稱中心引入分子間，可分為手性流動相添加劑(CMP)法和手性固定相(CSP)法；后者又稱為手性試劑衍生化(CDR)法，它是將不對稱中心引入分子內。

2.5在藥物鑒別中的應用

在HPLC法中,保留時間與組分的結構和性質有關,是定性的參數,可用于藥物的鑒別.如中國藥典收載的藥物頭孢羥氨芐的鑒別項下規(guī)定:在含量測定項下記錄的色譜圖中,供試品主峰的保留時間應與對照品主峰的保留時間一致.頭抱拉定,頭孢噻酚鈉等頭孢類藥物以及地西泮注射液,曲安奈德注射液等多種藥物均采用HPLC法進行鑒別.

2.6在雜質檢查中的應用

HPLC分離效能高,靈敏,在藥物的雜質檢查中應用廣泛.主要用于藥物中有關物質的檢查.“有關物質”是指藥物中存在的合成原料,中間體,副產物,降解產物等物質,這些物質的結構和性質與藥物相似,含量很低,只有采用色譜的方法才能將其分離并檢測.若雜質是已知的,又有雜質的對照品,可用雜質對照品做對照進行檢查.若雜質是未知的,可以采用主成分自身對照法或峰面積歸一化法進行檢查.

2.7在含量測定中的應用

用高效液相色譜法側定含量可以消除藥物中的雜質,制劑中的附加劑及共存的藥物對測定的干擾.中藥材及其制劑組成復雜,基中不少有效成分的含量測定也越來越多地采用了高效液相色譜法.

2.8在體內藥物分析中的應用

HPLC由于測定迅速準確，流動相選擇范圍廣，靈敏度高(10-12

g／mL以上)，填充柱種類多，且可供選擇的檢測器也多。所以是實驗室研究中一種很好的體內分析方法。在國內外都很受重視．大多數藥物都有紫外吸收，所以最常用的檢測器是紫外檢測器。多數藥物及內

源性物質極性均較大，利用其極性差，可以采用RP-HPLC色譜柱，可獲得良好分離效果。

結論

高效液相色譜法在體內藥物分析中具有樣品處理簡便、快速，標準曲線的線性較好，精密度和靈敏度均能夠符合藥動學研究和治療藥物監(jiān)測的需要的優(yōu)點。而且，ＨＰＬＣ能同時進行分離和定量測定，這在治療藥物監(jiān)測和藥代動力學中應用極為廣泛。近年來，ＨＰＬＣ在儀器、檢測器、固定相等方面都有很大的發(fā)展，這大大促進了在中、西藥的藥物分析應用。但每一種分析技術均有其使用范圍和方法的局限性，因此色譜技術聯用變得越來越普遍。現在主要是色譜－色譜聯用、色譜－光譜聯用、高效液相色譜－質譜聯用，還有柱切換技術以及高效液相色譜－傅立葉變換紅外吸收光譜聯用等。高效液相色譜與其他技術的聯用是高效液相色譜今后的主要發(fā)展方向。

參考文獻[1]

成都科學技術大學分析化學教