脂聯(lián)素基因多態(tài)性與漢族人群肥胖易感性的關(guān)系

肥胖是一種常見、明顯、復(fù)雜的代謝失調(diào)癥。它既是一種疾病,又是引發(fā)心腦血管和其他疾病的重要危險(xiǎn)因素之一。脂肪組織分泌的脂聯(lián)素有調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的作用,能增加胰島素的敏感性,降低血糖水平,逆轉(zhuǎn)胰島素抵抗,同時(shí)也有抗動(dòng)脈粥樣硬化和抗炎作用。肥胖程度與血漿脂聯(lián)素水平呈明顯的負(fù)相關(guān)。人體的脂聯(lián)素基因單核甘酸多態(tài)性(SNP)可能通過影響脂聯(lián)素分泌水平而與肥胖發(fā)生聯(lián)系。本研究以病例對照研究探討脂聯(lián)素基因兩位點(diǎn)(rs2241767,rs12495941)多態(tài)性與中國漢族人群肥胖易感性的關(guān)系。數(shù)據(jù)和方法一、基本判定標(biāo)準(zhǔn)2008年3月～2009年11月,在我院健康體檢者中,經(jīng)排除糖尿病患者后,根據(jù)中國肥胖工作組推薦的中心性肥胖判定標(biāo)準(zhǔn):男性腰圍≥85cm,女性腰圍≥80cm。分為肥胖組483例,對照組517例。兩組均為漢族人群。二、般人口學(xué)調(diào)查使用統(tǒng)一的調(diào)查表,由經(jīng)過培訓(xùn)的專職醫(yī)師對全部對象進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查,主要內(nèi)容包括一般人口學(xué)特征、慢性病史、吸煙史、飲酒史,測量腰圍、血壓,檢測空腹血糖、血脂和血清脂聯(lián)素(ELISA)等。上述調(diào)查和采樣均獲得被調(diào)查者同意并簽署知情同意書。三、脂聯(lián)素基因分型r2≥0.80,MAF≥0.05),本文選取其中2個(gè)SNP位點(diǎn)(rs2241767,rs12495941)進(jìn)行分析,這兩位點(diǎn)為課題組前期研究中已發(fā)現(xiàn)與2型糖尿病有關(guān)的位點(diǎn)。抽取研究對象外周血5ml,采用酚-氯仿提取乙醇沉淀的方法提取白細(xì)胞中的基因組DNA并作為PCR模板。利用Real-timePCR聯(lián)合TaqMan-MGB探針對脂聯(lián)素基因的位點(diǎn)進(jìn)行基因分型。使用的引物和探針序列見表1。按5μl反應(yīng)體系:0.5μlDNA模板,2.5μlTaqMan探針熒光定量PCR反應(yīng)優(yōu)化體系、0.25μl順式/反式引物、0.125μl探針和1.25μlddH2O。反應(yīng)條件:2min50℃、10min95℃,15s95℃,1min60℃,40個(gè)循環(huán)。利用SDS2.0軟件(ABI)觀察結(jié)果。每塊384孔板包括2個(gè)來自同一樣本的陽性對照和2個(gè)空白樣本的陰性對照。本研究檢測1000份DNA樣本,成功率98%以上,抽取5%樣本重復(fù)檢測,一致性100%。四、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用EpiData3.1軟件兩人雙份錄入全部數(shù)據(jù),采用一致性檢驗(yàn)查錯(cuò)。采用SPSS12.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。兩組的一般資料和基因型及等位基因頻率比較用χ2檢驗(yàn)、Student-t檢驗(yàn),多因素Logistic回歸分析計(jì)算調(diào)整年齡和性別后的OR及95%CI;分層分析用于控制潛在的混雜因素影響;擬合優(yōu)度χ2檢驗(yàn)用于對照組的基因型分布的Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)。計(jì)量數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(xˉ±s)(xˉ±s)表示。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果一、血糖及飲酒和吸煙比例肥胖組平均年齡、收縮壓、甘油三脂、空腹血糖及飲酒和吸煙比例高于對照組(P均<0.05);肥胖組血清脂聯(lián)素平均水平低于對照組(P<0.05,表2)。二、對人群代表性的檢驗(yàn)對照組rs2241767,rs12495941兩位點(diǎn)三種基因型頻率的遺傳平衡檢驗(yàn),顯示實(shí)際頻數(shù)與理論頻數(shù)分布的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2112=0.023P1=0.98,χ2222=0.278P2=0.87),說明該對照組具有人群代表性。三、基因型攜帶體重風(fēng)險(xiǎn)增加脂聯(lián)素基因rs2241767位點(diǎn),多因素Logistic回歸分析調(diào)整年齡和性別后,與攜帶AA基因型者相比,AG基因型攜帶者肥胖風(fēng)險(xiǎn)增加了46%,調(diào)整OR為1.46(95%CI:1.02,2.07);將AG型和GG型合并,則AG/GG基因型攜帶者肥胖風(fēng)險(xiǎn)增加了48%,調(diào)整OR為1.48(95%CI:1.06,2.06)。對于rs12495941位點(diǎn),與GG基因型相比,GT/TT基因型者可增加肥胖發(fā)病風(fēng)險(xiǎn),但未發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表3)。四、男性[調(diào)整or]5.324.323.263.264.323.263.264.264.263.264.263.263.264.264.264.264.263.4患基肥的風(fēng)險(xiǎn)增加分別以性別、年齡、血壓、血脂、飲酒、吸煙特征分層,進(jìn)一步探討脂聯(lián)素基因兩位點(diǎn)多態(tài)性與肥胖易感性的關(guān)系。與rs2241767位點(diǎn)AA基因型相比,攜帶AG/GG基因型的男性[調(diào)整OR(95%CI):1.70(1.02,2.84)]、小于50歲[調(diào)整OR(95%CI):13.07(2.43,70.18)]、高血脂[調(diào)整OR(95%CI):1.97(1.27,3.06)]以及已戒煙或不吸煙的群體[調(diào)整OR(95%CI):1.49(1.01,2.20)]患肥胖的風(fēng)險(xiǎn)增加。與rs12495941位點(diǎn)GG基因型相比,僅發(fā)現(xiàn)攜帶GT/TT基因型的女性患肥胖的風(fēng)險(xiǎn)增加[調(diào)整OR(95%CI):1.68(1.00,2.81)]。脂聯(lián)素基因與基肥的關(guān)系脂聯(lián)素是脂肪組織特異性分泌的一種膠原樣細(xì)胞因子。Scheres等首先從幼鼠脂肪細(xì)胞中克隆出脂聯(lián)素的cDNA,并將脂聯(lián)素稱為30KDa脂肪補(bǔ)體相關(guān)蛋白(Acrp30),后又稱脂聯(lián)素、28KDa凝膠結(jié)合蛋白(GBP28)、脂肪組織最豐富的基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物(apM1)。人脂聯(lián)素由244個(gè)氨基酸組成,脂聯(lián)素在血漿中含量豐富。本文肥胖組脂聯(lián)素平均水平低于對照組,與文獻(xiàn)報(bào)道一致。人脂聯(lián)素基因定位于3q27,大小為17kb,由3個(gè)外顯子和2個(gè)內(nèi)含子組成。有文獻(xiàn)報(bào)道脂聯(lián)素基因rs2241767位點(diǎn)和rs12495941位點(diǎn)多態(tài)性與糖尿病有關(guān),但其與肥胖的關(guān)系國內(nèi)少見報(bào)道。本文研究這兩位點(diǎn)多態(tài)性與肥胖的關(guān)系,結(jié)果顯示2個(gè)位點(diǎn)的等位基因頻率與美國生物技術(shù)信息中心(NCBI)和HapMap數(shù)據(jù)庫所提供的中國漢族頻率(rs2241767A為72.2%,rs12495941G為62.5%)近似。本文發(fā)現(xiàn)脂聯(lián)素基因rs2241767AG或AG/GG基因型者發(fā)生肥胖風(fēng)險(xiǎn)較AA型者均有所增加,說明rs2241767位點(diǎn)的變異可以顯著增加漢族人群發(fā)生肥胖的危險(xiǎn)。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)男性、小于50歲、高血脂、已經(jīng)戒煙或不吸煙群體中攜帶AG/GG基因型者患肥胖的風(fēng)險(xiǎn)升高。僅發(fā)現(xiàn)女性群體攜帶rs12495941GT/TT基