紙片集中法藥物敏感試驗假設(shè)只依據(jù)是否消滅抑菌環(huán)而不考慮抑菌環(huán)的直徑大小來推斷細(xì)的。WHOK-B法，其目的在于技術(shù)的簡潔和可重復(fù)性。本法特別他細(xì)菌，如嗜血桿菌、奈瑟菌、專性厭氧菌及酵母樣菌等。的細(xì)菌，可不必做敏感試驗，只有那些被認(rèn)為引起感染的微生物，應(yīng)先分別提純、鑒定菌種后再做敏感試驗。試驗方法：一、試驗材料：(一)培育基：Kirby-BauerMueller-Hinton瓊脂。多年大量的有關(guān)敏感試驗的方法學(xué)爭論，均承受該培育基；維持細(xì)菌正常發(fā)育，絕大多數(shù)5％的脫纖維羊血，制成血平板。測嗜血桿菌及淋病奈瑟菌的敏感性時，在培育基中須參與1％血紅素和2.5mg/ml輔酶IpH7.2～7.4。MH90cm4mm，允許誤差為土1mm。瓊脂凝固后，應(yīng)測一下pH。瓊47日內(nèi)用完。假設(shè)當(dāng)天不用，用塑料袋密封包裝貯藏于冰箱℃。30-5024h或更長時間檢查是否被感染。MH瓊脂培育基配方(1L)：BeefExtract2.0gAcidHydrolysisofCasein17.5gStarchFinalPH7.31.5gat25℃Agar17.0g45-50℃。(二)藥物紙片6.00～6.35mm20μl。承受K-B藥物紙片可以購置，也可自制，用前必需做質(zhì)量鑒定。用以下兩個指標(biāo)判定紙片的質(zhì)量：1、片間差：是衡量不同紙片含藥是否均一的指標(biāo)。M-H6張一樣的紙片。35C6個抑菌環(huán)直徑，其最大和最小之1～2mm。2、準(zhǔn)確度:判定紙片的實際含藥量與標(biāo)量是否全都。紙片的合理保存格外重要。藥物紙片必需在有枯燥劑的容器內(nèi)低溫(-10℃以下)4℃?zhèn)淙粘９ぷ饔?。裝紙片的容l0分鐘以上才可翻開。如馬上翻開，空氣中的水分會冷凝在紙片上，簡潔潮解。(三)質(zhì)控菌株K—BATCC25923、ATCC25922ATCC27853。測定MH瓊脂ATCC29212331861次。質(zhì)控菌株簡便保存方法：將得到的凍干菌株接種含血的M-H10支高層瓊脂管，放置冰箱保存。每11M-H抗生素，以防變異。(四)菌液比濁管1.5×l08／m111／2。比濁管配法如下：0.048mol／LBaCl2 0.5ml0.18mol／LH2SO4 99.5ml將二液置冰水浴中冷卻后混合，置螺口試管中，放室溫暗處保存。6個月。二、操作方法制備接種菌液：臨床標(biāo)本中分別的細(xì)菌做藥敏試驗，應(yīng)挑取4～5個制備菌懸液。制備菌液的方法是選擇瓊脂平板上、形態(tài)一樣的菌落移種于M—H354環(huán)挑取菌落，懸浮于生理鹽水中，振蕩混勻后與標(biāo)準(zhǔn)比濁管比濁，以用于任何細(xì)菌。15min內(nèi)使用。用滅菌的棉拭子蘸取菌液；在管壁上旋轉(zhuǎn)擠壓幾次，去掉過多的菌液。60°，最終沿平板周邊繞兩圈，保證涂布均勻。貼紙片：須待平板上的水分被瓊脂完全吸取后再貼紙片〔開蓋晾—。用鑷子取一張紙片，貼在瓊脂平板外表，用鑷尖壓瓊脂中。每張紙片間距不少于24mm，紙片中心距平皿邊緣不少于15mm。直徑為90mm6150mm的平板15張。15min35℃孵箱培育。不行放在CO2環(huán)境中。35℃孵箱，平板在孵箱內(nèi)最好單獨擺放，不超18～24h后，讀取結(jié)果。判定結(jié)果：培育后取出平板，測量抑菌環(huán)的直徑。抑菌環(huán)應(yīng)為正圓形，且包括紙片直徑〔測量垂直方向取平均值。抑菌環(huán)的邊邊緣。影響因素:臨床中藥物敏感性試驗主要受到抗菌藥物、培育基、細(xì)菌、試紙片以及培育條件等因素的影響。1、藥物因素紙片法藥敏試驗的結(jié)果主要受到藥物理化性質(zhì)以及其作用特點等因素的直接影響。解性、穩(wěn)定性等。藥物溶解性：藥物的溶解性從易溶到極微溶于水不等，微溶于水的藥物制成藥敏片后在培育基上很難完全溶解于培育基中果的真實性，極微溶于水的藥物的抑菌環(huán)可能低于其真實抑菌效果。常用溶解度較高的藥物有：氨基糖苷類藥物的鹽類〔硫酸阿米卡星、慶大、鏈霉素等、頭孢霉素鹽類〔頭孢曲松鈉、頭孢氨芐、頭孢噻肟鈉等、青霉素鹽類、喹諾酮類等；而常用的低溶解度的藥物有：氟苯尼考、紅霉素、桿菌肽鋅、北里霉素、呋喃托因、兩性霉素等。藥物穩(wěn)定性的影響：臨床中常用的藥物試紙片一般是事到其穩(wěn)定性的影響。有些藥物如：青霉素類、紅霉素以及局部頭孢菌PHPH值都會造成藥物效價PH6時紅霉素會很快分解，導(dǎo)致藥間等多種因素的影響而導(dǎo)致抗菌效價降低。藥物作用特點PH值、藥物有效部位以及各種離子的影響也是不行無視的因素。藥物抗菌作用機理：臨床中的抗菌藥物可以簡潔的分成生的抑菌環(huán)〔帶的邊沿是不一樣的。殺菌藥物產(chǎn)生的抑菌環(huán)邊沿一〔或者使細(xì)菌形成L型，在邊沿處細(xì)菌的不同形態(tài)形成了模糊的過渡帶。所以在藥〔帶大小很難確定，并且隨著培育時間的延長和藥物的失效，抑菌藥物抑菌環(huán)〔帶〕邊沿未被殺死的細(xì)菌有可能又恢復(fù)生長，從而導(dǎo)致抑菌環(huán)〔帶〕的進(jìn)一步臨床中常用的抑菌藥物有：青霉素類、頭孢類、磺胺類、紅霉素類、〔鋅〔〔氟苯尼考〔、喹諾酮類〔氧氟沙星、恩諾沙星等〕等。PHPHPH值的轉(zhuǎn)變而加強或減PH值。固然這類藥物的試紙片PH<3>在弱堿狀況下下殺菌作用強〔PH5PH8100倍、800倍。藥物有效部位：有些藥物的抗菌作用是不能通過體外藥〔穿心蓮內(nèi)酯等，內(nèi)進(jìn)一步分解〔或轉(zhuǎn)化〕后才能表現(xiàn)出抗菌作用，所以檢測這類藥物連素、金蕎麥等。離子的影響：常用的很多藥物可以受到各種離子的影響而導(dǎo)致抗菌作用降低甚至喪失。如：喹諾酮類藥物、氨基糖苷類、土Ca2+、Mg2+、Al3+等陽離子的作用下〔一般是形成不溶性絡(luò)合物〕抗菌作用降低或喪失；很多重金屬離子〔銅、鋅、汞〕等可以破壞青霉素鈉(或鉀)的活性，可以直接導(dǎo)致以上藥物的抑菌環(huán)〔帶〕減小甚至消逝，所以在進(jìn)展藥物敏感性試驗時應(yīng)中選用無離子水和高質(zhì)量的養(yǎng)分瓊脂。其他因素：藥物自身性質(zhì)影響因素還包括藥物蛋白結(jié)合蛋白質(zhì)的結(jié)合必定降低藥物的抑菌環(huán)〔帶〕的大小。同樣，培育溫度也在確定程度上影響著藥物敏感性試驗的結(jié)果推斷。2、培育基藥敏試驗的結(jié)果在很大程度上也受到培育基厚度、用水的質(zhì)量、PH值以及培育基成分的影響。培育基厚度：紙片法藥物敏感性試驗主要是利用藥物集中原5mm左右，而在培育基厚度越大藥物的抑菌環(huán)越小。用水的質(zhì)量：制作藥物敏感性試驗的培育基用水在很大程度上也影響著藥敏試驗的結(jié)果。用水的影響主要是礦物質(zhì)離子的影響，如Ca2+、Mg2+、Al3+等離子，它們對藥物的影響機理參見與本文的1.3.4節(jié)。PHPH值也是影響藥敏試驗結(jié)果的重要因素之一。PHPH值對藥物穩(wěn)定性和活性的影1.3.2節(jié)。培育基成分：培育基的配制、養(yǎng)分成分以及雜質(zhì)的種類等都青霉素≧50%、鹽酸多西環(huán)素≧75%〔犬、紅霉素≧70%；而氨基糖苷類藥物結(jié)合率卻很低〔20%左右。培育基中的雜質(zhì)的種類也可能在某些方面影響藥敏試驗的結(jié)果。3、細(xì)菌因素〔或涂菌的多少和細(xì)菌生長的特性是影響藥敏生長時會發(fā)生移動〔鞭毛運動，當(dāng)藥物失效或培育時間太長，這類4、試紙片因素藥敏試紙片中藥物含量多少和試紙片材質(zhì)是影響藥敏試驗的主要因素。藥物含量的多少：試紙片上藥物含量的多少應(yīng)當(dāng)是影響藥敏細(xì)菌對不同藥物的敏感性是不嚴(yán)謹(jǐn)?shù)摹Ｔ嚰埰馁|(zhì)：試紙材質(zhì)對藥敏試